WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

                                                                         На правах рукописи

НАЗАРОВА ЛЮБОВЬ ЕФИМОВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ

КИСЛОТЫ ФЕРУЛОВОЙ

14.03.06 ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ

ДОКТОРА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Пятигорск 2011

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный консультант: засл.деятель науки РФ, доктор медицинских наук,

профессор Гаевый Михаил Дмитриевич

Официальные оппоненты:

1. Доктор фармацевтических наук, профессор Бунятян Наталья Дмитриевна

2. Доктор медицинских наук, профессор Болиева Лаура Зелимхановна

3. Доктор биологических наук, профессор Сергиенко Аэлита Валерьевна

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства Здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится « » марта 2012 г. в часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.069.01 ГБОУ ВПО Пятигорская ГФА Минздравсоцразвития России (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Пятигорская ГФА Минздравсоцразвития России

Автореферат разослан « » января 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

профессор                                                                Е.В. Компанцева



Актуальность проблемы

Одной из наиболее важных проблем современной биологии и медицины является защита организма от повреждающих факторов различного происхождения. Природа повреждающих факторов, оказывающих цитотоксическое воздействие, многообразна: ионизирующая радиация, воздействие химиотерапевтических лекарственных средств, интоксикация продуктами химических производств, ишемия и др.

В связи с этим, важнейшей задачей является поиск универсальных механизмов протекции, позволяющих защитить клетку от гибели с целью сохранения ее структурной целостности и функциональной активности [Барабой В.А., 1996; Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001; Микуляк Н.И., 2011].

Клетки организма характеризуются индивидуальной реакцией на повреждающие агенты. Так, при облучении и воздействии цитостатиков быстрее всего поражаются лабильные клетки с высокой скоростью регенерации – клетки «критических» систем (красный костный мозг, кишечник, лимфоидные органы, гонады). Стабильные клетки, например, гепатоциты, подвергаются поражению при значительных химических интоксикациях. Клетки головного мозга (статические) наиболее устойчивы к повреждающим факторам, но могут поражаться при нарушении целостности гематоэнцефалического барьера, различных видах ишемии.

Одним из механизмов повреждения клеток является процесс образования активных форм кислорода, индуцирующих свободнорадикальное перекисное окисление липидов мембран клеток с развитием оксидантного стресса.

Антиоксидантная система клетки, ткани и организма в целом обеспечивает связывание и модификацию свободных радикалов, предупреждение разрушения биомолекул. Дефект в любом из звеньев системы антиоксидантной защиты приводит к активации перекисного окисления. Увеличение мощности антиоксидантной защиты, обусловленное введением естественных или синтетических антиоксидантов, создает определённую гарантию против активации перекисного окисления.

Лекарственных средств, обладающих высокой цитопротекторной активностью, низкой токсичностью и предохраняющих клетки организма от вредного воздействия вышеперечисленных факторов, в арсенале медицинской практики недостаточно. Поэтому актуальной проблемой является поиск новых цитопротекторов для их применения в комплексной терапии заболеваний различной этиологии.

В настоящее время большое внимание исследователей привлекают синтетические производные коричной кислоты, многие из которых обладают антиоксидантной активностью и низкой токсичностью [Симонян А.В., 1995].

Несмотря на это, до настоящего времени не была изучена зависимость между антоксидантной и цитопротекторной активностью синтетических производных коричной кислоты,  не исследовано антиоксидантное и цитопротекторное действие наиболее активных соединений по отношению к клеткам с различной скоростью регенерации после воздействия адекватных повреждающих агентов. В связи с этим, поиск новых антиоксидантов, обладающих высокой цитопротекторной активностью и низкой токсичностью, и создание на их основе высокоэффективных полифункциональных лекарственных препаратов является одной из актуальных проблем  современной медицины и фармации.

Цель работы

Выявить в ряду синтетических производных коричной кислоты соединение с наиболее выраженной антиоксидантной активностью и оценить его цитопротекторные свойства на различных моделях повреждения.

Задачи исследования

1. Провести первичный скрининг 27 синтетических производных коричной кислоты для выявления наиболее активного антиоксиданта; оценить цитопротекторную активность выбранного соединения на разных моделях (in vitro).

2. Изучить острую и хроническую токсичность выбранного соединения и некоторые параметры фармакокинетики.

3. Изучить влияние выбранного соединения на цитостатическую активность циклофосфамида и 5-фторурацила (in vitro).

4. Определить выбор эффективных доз соединения по оценке выживаемости животных при радиационном поражении, поражении цитостатиками, тетрахлорметаном и ишемии головного мозга.

5. Исследовать радиопротекторную активность выбранного соединения на клетки «критических» систем организма (костный мозг, кровь, тонкий кишечник, селезенка, семенники) при воздействии ионизирующей радиацией.

6. Исследовать цитопротекторные свойства выбранного соединения на клетки «критических» систем организма (костный мозг, кровь, тонкий кишечник, селезенка, тимус, семенники) для снижения побочных токсических эффектов цитостатиков.

7. Изучить  гепатопротекторную активность выбранного соединения при  экспериментальном токсическом поражении печени тетрахлорметаном.

8. Изучить нейропротекторную активность выбранного соединения при различных видах ишемии головного мозга.

Научная новизна

В работе впервые:

-  сформулировано положение о том, что при различных поражениях организма (облучение, интоксикация химическими веществами, ишемия) в составе комбинированной терапии должны применяться антиоксидантные соединения, обладающие цитопротекторным и мембраностабилизирующим действием, защищающие генетический аппарат клеток и улучшающие внутриклеточный метаболизм;

       - проведено сравнительное изучение 27 синтетических производных коричной кислоты по видам действия и выявлена корреляционная взаимосвязь между их структурой, антиоксидантной и цитопротекторной активностью;

- установлено, что наиболее выраженные антиоксидантные и цитопротекторные свойства проявляет соединение, имеющее в положении  4 бензольного ядра группу НО- , а в положении 3 группу СН3О-: транс – 4-гидрокси-3-метоксифенилпропеновая кислота – кислота феруловая (ФК);

- определена зависимость «доза-эффект» ФК на четырех моделях повреждения: -облучении, введении цитостатиков, тетрахлорметана и ишемии мозга;

- установлено, что ФК относится к практически нетоксичным веществам;

- изучена хроническая токсичность ФК и установлено, что она не вызывает нарушений физиологической нормы клинических и биохимических показателей крови;

- выявлено, что ФК не снижает цитостатическую активность циклофосфамида и 5-фторурацила по отношению к культуре опухолевых клеток линий лимфосаркомы Плисса и карциномы шейки матки, сублинии Hela (in vitro);

- установлено, что ФК при однократном общем -облучении животных защищает клетки тканей «критических» систем и усиливает компенсаторно-приспособительные реакции клеток организма облученных животных;

- выявлено, что ФК снижает побочные токсические эффекты циклофосфамида и 5-фторурацила в отношении клеток тканей «критических» систем;

- экспериментально установлено, что при облучении и поражении цитостатиками ФК способствует регенерации красного костного мозга, тимуса, селезенки, тонкого кишечника, семенников, нормализации гематологических, биохимических, цитогенетических показателей;

- установлено, что ФК в условиях экспериментального тетрахлорметанового поражения печени способствует нормализации её функционального состояния и гистологической картины;

- доказана способность ФК ускорять восстановление функционального состояния мозга на двух моделях ишемии, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий и гравитационными перегрузками в кранио-каудальном направлении;

- установлено, что ФК уменьшает отек, подавляет интенсивность перекисного окисления и активирует каталазу в ткани мозга при реперфузионном повреждении;

- экспериментально доказано, что ФК увеличивает потребление глюкозы мозгом, активируя окисление молочной кислоты на модели фокальной ишемии, вызванной окклюзией средней мозговой артерии;

- доказано, что при фокальной ишемии мозга ФК уменьшает зону некроза в 3 раза по сравнению с контролем.

Теоретическая и практическая значимость работы

Проведенные исследования позволяют систематизировать знания о наличии прямой зависимости между антиоксидантной и антигемолитической активностью в ряду производных коричной кислоты с различными заместителями в ароматическом ядре. Методологически обосновано использование ФК в качестве  цитопротекторного средства на органы-мишени и образующие их клетки. Установлена зависимость антиоксидантного и цитопротекторного действия от дозы ФК и степени моделируемого повреждения. Неизбирательность действия ФК свидетельствует о единстве механизма развития повреждения при различных моделях цитотоксического воздействия, следствием которого является индукция свободнорадикального перекисного окисления мембран клеток.

Экспериментальные исследования подтвердили перспективность дальнейшего доклинического углубленного изучения ФК при радиационных и химических поражениях организма, нарушениях мозгового кровообращения.

Учитывая то, что многие радиопротекторы обладают значительной токсичностью, ФК (практически нетоксичное вещество) может быть рекомендована в качестве радиопротекторного средства при лучевых поражениях. ФК можно рекомендовать при поражениях печени, сопровождающихся воспалением и цитолизом, для снижения побочных токсических эффектов при химиотерапии цитостатическими лекарственными препаратами циклофосфамидом и 5-фторурацилом, в качестве нейропротекторного средства при различных ишемических повреждениях головного мозга.

В результате проведенных исследований теоретически обоснована и экспериментально подтверждена целесообразность создания различных лекарственных форм на основе ФК и их более глубокое доклиническое и клиническое тестирование.

Уровень внедрения результатов исследования

По результатам фармакологических исследований составлены и утверждены в ГБОУ ВПО Пятигорской ГФА Минздравсоцразвития России информационные письма: «Исследование цитопротекторной активности кислоты феруловой при радиационном поражении», «Фармакологическая коррекция побочных токсических эффектов циклофосфамида и 5-фторурацила с помощью кислоты феруловой», «Исследование церебропротекторной активности кислоты феруловой в условиях ишемии мозга».

На основании информационных писем ГБОУ ВПО ВолГМУ Минздравсоцразвития России и НИИ фармакологии при ГБОУ ВПО ВолГМУ Минздравсоцразвития России дали заключение о большой теоретической и практической ценности представленного материала и необходимости создания лекарственных препаратов на основе кислоты феруловой на базе Российских фармацевтических предприятий с целью расширения ассортимента отечественных оригинальных лекарственных средств.

На основании материалов информационного письма «Фармакологическая коррекция побочных токсических эффектов циклофосфамида и 5-фторурацила с помощью кислоты феруловой» в лаборатории биологических испытаний филиала ИБХ РАН г. Пущино проводятся доклинические  исследования при изучении влияния кислоты феруловой на развитие токсических эффектов противоопухолевых лекарственных препаратов на животных с моделированными опухолями.

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс (лекции и практические занятия)  ряда кафедр Московского государственного медико-стоматологического университета, Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии, Ижевской государственной медицинской академии, Оренбургской государственной медицинской академия, Северного государственного медицинского университета (г. Архангельск).

Личный вклад автора

Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведено планирование исследований, анализ и статистическая обработка, обобщение полученных результатов, принято участие в экспериментальных исследованиях. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач и их реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и их внедрения в практику.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология, конкретно пунктам 1,  2 и 3 паспорта специальности фармакология, клиническая фармакология.

Апробация полученных результатов

Основные результаты работы доложены  на 56-66 региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров Пятигорской ГФА (Пятигорск, 2001-2011 гг.), XIX съезде физиологического общества им. И.П.Павлова (М., 2004 г.), 1-м (Сочи, 2005 г.) съезде физиологов СНГ, международной научной конференции, посвященной 75-летию Ереванского гос.мед.ун-та (Ереван, Армения, 2005 г.).

Положения, выдвигаемые на защиту

  1. Сравнительная оценка антиоксидантной активности и цитопротекторного действия 27 синтетических производных коричной кислоты выявила корреляционную зависимость между этими двумя видами фармакологических эффектов.
  2. Анализ взаимосвязи «структура-активность» показал, что антиоксидантная и цитопротекторная активность изучаемых веществ зависят от характера и местоположения заместителей в ароматическом ядре.
  3. Наиболее выраженные антиоксидантные и цитопротекторные свойства  проявила кислота феруловая (ФК): 4-гидрокси-3-метокси-фенилпропеновая кислота.
  4. ФК не изменяет цитостатической активности циклофосфамида и 5-фторурацила в отношении опухолевых клеток лимфосаркомы Плисса и карциномы шейки матки, сублинии HeLa (in vitro).
  5. ФК проявляет радиопротекторное действие по отношению к «критическим» системам в условиях поражения -лучами.
  6. ФК проявляет цитопротекторное действие по отношению к «критическим» системам, снижая побочные токсические эффекты циклофосфамида и 5-фторурацила.
  7. ФК оказывает гепатопротекторное действие в условиях экспериментального поражения гепатоцитов тетрахлорметаном.
  8. ФК обладает нейропротекторной активностью на моделях глобальной (постоянной и преходящей) и фокальной ишемий мозга.

Публикации: по теме диссертации опубликовано 79 научных работ; из них монография – 1, статей в журналах, рекомендованных ВАК, 15. Общий объем научных работ -  12,415 п.л. (авторских – 9,335 п.л.).

Структура и объём диссертации

Диссертационная работа изложена на 300 страницах компьютерного текста и  состоит из введения, обзора литературы (1-2 главы), описания материалов и методов исследования (3 глава), результатов собственных исследований (4-9 главы), заключения, общих выводов и списка цитируемой литературы. Работа иллюстрирована  27 таблицами и 82 рисунками. Библиографический список включает 370 источников, из которых 198 отечественных и  172 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования явились 27 производных коричной кислоты, синтезированных на кафедре органической химии (зав. кафедрой, доктор фармацевтических наук, профессор Э.Т.Оганесян); ФК, синтезированная профессором Э.Т.Оганесяном, а также полученная от Sigma-Aldrich Chemie GmbH – 99%.

Раствор ФК для внутрибрюшинных инъекций готовили ex tempore. ФК растворяли в воде очищенной с добавлением натрия гидрокарбоната в эквивалентных количествах и при нагревании раствора до 40С. После её растворения контролировали рН раствора, который равнялся 7,4-7,8.

Эксперименты выполнены на 456 мышах, 442 беспородных крысах-самцах и 1206 крысах обоего пола линии Wistar.

Экспериментальные модели повреждения

1. Радиопротекторную активность ФК изучали на модели поражения животных -лучами. Воспроизведение острой лучевой болезни проводили общим облучением мышей и крыс на стандартной -терапевтической установке типа «АГАТ-С» (мощность 0,0171, поле 20х20, РИП 75 мм, источник Со60) на базе Пятигорского онкологического центра. Дозы радиации в различных сериях экспериментов составляли от 2,0 до 9,0 Гр. Летальные дозы радиации (LD16, LD50, LD84 и LD100) исследовали по методу Литчфилда и Уилкоксона [Сернов Л.Н., Гацура В.В, 2000]. Рассчитанные значения составили LD16= 3.4 Гр; LD50=5,5 Гр; LD84=7,7 Гр; LD100=8,8 Гр.

2. Токсическое повреждение «критических» органов животных вызывали противоопухолевыми лекарственными препаратами: ЦФ (200 мг/кг) и 5-ФУ (125 мг/кг). Цитостатики вводили в дозах, обеспечивающих оптимальную выживаемость животных. Выбор препаратов основан на широком применении во многих схемах полихимиотерапии, их принадлежностью к двум основным группам (ЦФ – к алкилирующим средствам, 5-ФУ – к антиметаболитам) и широким спектром и выраженностью побочных эффектов [Машковский М.Д., 2002].

3. На модели CCI4  поражения печени определяли гепатопротекторную активность ФК [Рук-во /под ред. Р.У. Хабриева, 2005]. Токсическое поражение печени вызывали путем введения per os с помощью зонда 50% масляного раствора ССI4  в дозе 0,15-0,20 мл/100 г массы тела животного 1 раз в сутки в течение четырех дней.

4. Изучение нейропротекторной активности ФК проводили на следующих моделях ишемии мозга: билатеральной окклюзии общих сонных артерий [Сернов Л.Н., Гацура В.В., 2000]; гравитационными перегрузками с помощью специальной центрифуги при кранио-каудальном положении (g=13.52 в течение 12 минут) [Гаевый М.Д., 1986]; окклюзии правой средней мозговой артерии [Bederso J.M.D. et al., 1986; рук-во /под ред. Р.У. Хабриева, 2005].

Антиоксидантную активность  синтетических производных коричной кислоты изучали  на модели железоаскорбатзависимого перекисного окисления липидов [Благородов С.Г. и др., 1987]; цитопротекторную активность – на модели УФ-индуцированного гемолиза [Баджинян С.А., 1995] и эритроцитарной радиомиметической модели [Гончаренко Е.Н., Кудряшов Ю.Б., 1985]. Острую токсичность ФК определяли классическим методом [Измеров И.И., Соноцкий И.В., Сидоров К.К., 1997]. Определение максимальной концентрации ФК в крови устанавливали методом газожидкостной хроматографии.

Для изучения цитотоксичности ЦФ и 5-ФУ в присутствии ФК использовали культуры опухолевых клеток лимфосаркомы Плисса (ЛСП) (г. Санкт-Петербург, Тихорецкий проспект 4) и опухолевой клеточной линии HeLa (коллекция НИИ вирусологии РАМН, г. Москва). Исследования проводили на базе лаборатории биологических испытаний филиала ИБХ РАН г. Пущино в соответствии с общими лабораторными правилами и правилами работы в клеточном боксе, регламентирующими обращение с тестируемым и контрольными веществами [Рук-во /под ред. Р.У. Хабриева, 2005].

Для оценки состояния костного мозга при лучевом и цитостатическом поражении проводили подсчет миелокариоцитов [Кост Е.А., 1975] и микроядер [Суворов Н.Н., Шашков В.С., 1975]. В периферической крови подсчитывали общее количество лейкоцитов и определяли кислотную резистентность эритроцитов [Меньшиков В.В., 1987, Кост Е.А., 1975]. Биохимическими тестами определяли концентрацию МСМ [Габриэлян Н.И. и др., 1985], МДА [Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977], активность АлАт [Колб В.Г., Камышников В.С., 1982], каталазы [Королюк М.А. и др., 1988]. Гистоморфологические исследования тонкого кишечника, селезенки, тимуса, семенников проводили по методике Меркулова Н.В. (1962). Зону некроза оценивали трифенилтетразолиевым методом [Сернов Л.Н., Гацура В.В., 2000]. Размер зоны некроза мозга рассчитывали в процентах к общей массе полушарий. Влияние ФК на функциональное состояние мозга ишемизированных крыс изучали на моделях постоянной ишемии мозга и в постреперфузионном периоде. Показатели неврологического статуса определяли в тестах «открытое поле», «экстраполяционное избавление», «УРПИ», «вращающийся стержень» [Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д., 1991; Воронина Т.А., Островская Р.У., 2000]. Регистрацию объемной скорости мозгового кровотока проводили методами водородного клиренса [Демченко И.Т., 1981] и доплерографии (доплерограф «Минимакс-Допплер-К»). Для измерения использовался датчик 25 МГц, позволяющий регистрировать объёмный мозговой кровоток микроциркуляторного русла.





Препараты сравнения: при скрининге – эмоксипин 1% 1 мл № 10, обладает антиоксидантным, антигипоксическим и ангиопротекторным действием;  при лучевом поражении - цистамин (100 мг/кг), применяется в клинике как радиопротектор; при поражении цитостатиками – мексидол (50 мг/кг), сходный с ФК механизмом действия (антиоксидант, ловушка свободных радикалов); при токсическом поражении печени - силибор (30 мг/кг), как аналог ФК по действию; при ишемиях - кавинтон (3,2 мг/кг) - как аналог по действию и циннаризин (5,2 мг/кг), содержащий в структуре виниленовый фрагмент, аналогичный ФК.

Методом дисперсионного анализа проводили проверку нулевой гипотезы о равенстве средних для нескольких групп животных в каждой серии экспериментов. Для проверки достоверности различия средних применяли критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони. Наблюдаемое значение критерия Стьюдента сравнивали с критическим значением. Критическое значение определяли по таблице критерия Стьюдента при уровне значимости  0,05 [ Стентон Гланц, 1999]. Для проведения статистического анализа применяли пакет данных MS Excel.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1 Первичный скрининг синтетических производных коричной кислоты для выявления наиболее активного антиоксиданта  и цитопротектора (in vitro)

В первой серии экспериментов проведён скрининг 27 производных коричной (3-фенилпропеновой кислоты) с различными заместителями в ароматическом ядре на наличие у этих соединений антиоксидантных свойств. В качестве модельной системы использовали железоаскорбатзависимое перекисное окисление липидов в составе Твина-80, окислителем служил кислород воздуха.

В следующей серии экспериментов проведено изучение влияния тех же производных коричной кислоты на интенсивность гемолиза эритроцитов, вызванного облучением клеток ультрафиолетовыми лучами (таблица 1).

Результаты показали, что существует корреляционная зависимость между антиоксидантной и антигемолитической активностью соединений. Это означает, что механизм протекторного действия производных коричной кислоты при лучевом ультрафиолетовом повреждении клеток связан с их антиоксидантными свойствами. Расчётный коэффициент корреляции составляет 0,796, что указывает на вероятность безошибочного прогноза (99%).

Анализ взаимосвязи «структура-активность» показал, что                в ряду производных  коричной  кислоты  антиоксидантная и        антигемолитическая

Таблица 1 – Антиоксидантная и антигемолитическая активность синтетических производных коричной кислоты

вещества

R1

R2

R3

Концентрация, снижающая липоперокси-дацию на 50%

(в М·10-4)

І серия опытов

% гемолизированных эритроцитов относит. контроля (100%) при УФ – индуцированном гемолизе

ІІ серия опытов

1

H-

H-

H-

>10

106

2

CH3O-

H-

H-

>10

96

3

CH3O-

CH3O-

H-

>10

111

4

H-

H-

CH3O-

>10

102

5

HО-

H-

H-

6,51±0,06

59

6

NaО-

H-

H-

6,10±0,09

63

7

HО-

CH3O-

H-

0,63±0,02

6

8

NaO-

CH3O-

H-

1,54±0,06

22

9

CH3O-

HО-

H-

2,83±0,07

19

10

CH3O-

NaO-

H-

2,64±0,09

21

11

H-

H-

Cl-

>10

116

12

H-

Cl-

H-

>10

97

13

O2N-

H-

H-

>10

96

14

H-

-NO2

H-

>10

114

15

CH3COO-

H-

H-

7,66±0,10

53

16

CH3O-

CH3COO-

H-

3,41±0,08

41

17

H-

CH3O-

CH3O-

>10

89

18

HО-

HО-

H-

0,95±0,01

22

19

HО-

-COONa

H-

7,70±0,09

63

20

-O-CH2-O-

-O-CH2-O-

H-

>10

12

21

-N(CH3)2

H-

H-

0,92±0.01

62

22

OCH3COO-

COO-

H-

3,54±0,05

39

23

CH3O-

OCH2COO-

H-

3,41±0,05

46

24

OCH2COO-

H-

H-

3,82±0,06

40

25

CH3O-

OCH2COO-

H-

3,81±0,08

38

26

H-

-NH2

H-

5,01±0,09

53

27

OCH2COO-

OCH2COO-

H-

8,91±0,07

71

активность веществ зависят от характера и местоположения заместителей в ароматическом ядре. Введение в положение 4 бензольного ядра диметиламиногруппы (№ 21), а в положении 2, 3 или 4 бензольного ядра групп: HO-, NaO-, CH3COO-, CH2OCOO- (№№ 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 16, 18, 19, 22, 23, 24, 25, 27) придаёт соединениям антиоксидантные и антигемолитические свойства. 

Наиболее выраженные антиоксидантные и антигемолитические свойства проявило соединение № 7, имеющее в положении 4 бензольного ядра группу HO-, а в положении 3 группу CH3O-: транс – 4-гидрокси-3-метокси фенилпропеновая кислота – кислота феруловая (ФК).

С учетом результатов скрининга провели оценку влияния ФК на гемолиз эритроцитов, вызванный модельными липидными радиотоксинами (in vitro). В качестве модельного радиотоксина использовали окисленную олеиновую кислоту (ООК). Показателем устойчивости эритроцитов к действию гемолизина служило время разрушения 50% эритроцитов в пробе (рисунок 1).

Рисунок 1 – Влияние кислоты феруловой и препарата сравнения эмоксипина на течение гемолиза эритроцитов, вызванного ООК

Установлено, что ФК снижала степень гемолиза эритроцитов в 4 раза относительно контроля и в 2 раза относительно эмоксипина, проявив более выраженный цитопротекторный эффект. Для дальнейших исследований в качестве цитопротектора на различных моделях поражений была выбрана ФК.

2 Изучение общетоксического действия и некоторых аспектов фармакокинетики кислоты феруловой

Исследование острой токсичности показало, что LD50 для ФК составила 1520 мг/кг, что позволило по классификации Сидорова К.К. отнести ее к практически нетоксичным веществам. Хроническую токсичность ФК изучали для оценки системности действия и возможности ее использования в практической фармакологии. Установлено, что 30-дневное применение ФК в дозах 30 мг/кг и 100 мг/кг не вызывает нарушений физиологической нормы клинических и биохимических показателей крови. Максимальная концентрация ФК в крови после ее внутрибрюшинного введения наступает через 30 минут.

При коррекции побочных токсических эффектов ЦФ и 5-ФУ с помощью ФК возник вопрос о взаимодействии исследуемого соединения и цитостатиков. Изучая собственную противоопухолевую активность ФК, установили, что исследуемое соединение в концентрации 0,1 мг/мл (IC95) на выживаемость опухолевых клеток фактически не влияет. Результаты показали, что ФК в дозе 0,1 мг/мл  при совместном присутствии не снижает лечебный эффект ЦФ и 5-ФУ (in vitro). Значения IC50 ЦФ и 5-ФУ в присутствии ФК достоверно не изменяются в эксперименте на культурах опухолевых линий лимфосаркомы Плисса и карциномы шейки матки, сублинии HeLa.

3 Выбор эффективных доз кислоты феруловой при поражении -лучами, цитостатиками, тетрахлорметаном и ишемии головного мозга

Для выявления эффективных доз ФК и препаратов сравнения были проведены скрининговые исследования, основанные на оценке выживаемости

животных (таблица 2). При облучении и введении цитостатиков ФК проявляет цитопротекторные свойства в дозах 50-200 мг/кг, но наиболее эффективной при облучении  оказалась доза 200 мг/кг, при поражении цитостатиками – 100 мг/кг.

Таблица 2 – Выбор эффективных доз кислоты феруловой и препаратов сравнения при различных способах повреждения

Клетки тканей

Способ повреждения

Доза кислоты феруловой

Препарат сравнения

и его доза

лабильные

облучение

-лучами

200 мг/кг

цистамин 100 мг/кг

лабильные

циклофосфамид

5-фторурацил

100 мг/кг

100 мг/кг

мексидол 50 мг/кг

мексидол 50 мг/кг

стабильные

тетрахлорметан

30 мг/кг

силибор 30 мг/кг

статические

ишемия

головного мозга

30 мг/кг

кавинтон 3,2 мг/кг

циннаризин 5,2 мг/кг

Эффективность ФК при интоксикации CCI4 и ишемии мозга наблюдается в дозах 10-60 мг/кг. При остром поражении печени CCI4 и билатеральной окклюзии общих сонных артерий ФК проявляет наиболее выраженную активность в дозе 30 мг/кг (таблица 2).

4 Изучение цитопротекторной активности кислоты феруловой на клетки «критических» систем организма при воздействии ионизирующей радиацией и цитостатиками

При облучении и воздействии цитостатиками в первую очередь повреждаются клетки тканей с высокой скоростью пролиферации – клетки «критических» систем организма (костный мозг, кровь, тонкий кишечник, половые железы), а также лимфоидные органы (селезенка и тимус).

Динамика изменения массы тела животных. При цитотоксических поражениях, вызванных физическими и химическими факторами, происходит резкое падение массы тела животных. На фоне облучения и действия цитостатиков ФК способствовала увеличению массы животных во все дни наблюдений. К 28-му дню эти показатели  превышали контрольные значения: на фоне облучения – на 5,17%, ЦФ– на  30,8%, 5-ФУ – на 28,1% (результаты достоверны относительно контрольных значений) (рисунки 2, 3 и 4).

Рисунок 2 – Динамика изменения массы тела животных при лучевом поражении (5,5 Гр) на фоне кислоты феруловой

Рисунок 3 – Динамика изменения массы тела животных при введении циклофосфамида (200 мг/кг) на фоне кислоты феруловой

Полученные результаты позволяют предположить, что ФК на фоне лучевого поражения и действия цитостатиков обладает выраженным цитопротекторным действием в отношении эпителия тонкого кишечника, что подтверждается гистоморфологическими исследованиями.

Рисунок 4 – Динамика изменения массы тела животных при введении

5-фторурацила (125 мг/кг) на фоне кислоты феруловой

Облучение (рисунок 5) и цитостатики (ЦФ и 5-ФУ) приводят к разрушению эпителиальной выстилки тонкого кишечника, многочисленному разрушению ворсинок, которые часто сливаются в общую бесструктурную массу. В клетках наблюдается кариолизис.

                       А                                                        Б

Рисунок 5– Цитопротекторная активность кислоты феруловой в отношении слизистой тонкого кишечника на примере лучевого поражения: А – поражение -лучами, Б – кислота феруловая на фоне облучения

Профилактическое введение ФК препятствует  деструктивным процессам в кишечнике. Кишечные ворсинки несколько расширены, но сохранены по всей поверхности. Признаки кариолизиса единичны.

Влияние ФК на степень эндогенной интоксикации. Универсальным маркером эндогенной интоксикации, обусловленной массированной гибелью клеток под влиянием цитотоксических агентов, является содержание МСМ – продуктов протеолиза белков – пептидов с молекулярной массой 300-500 Да. ФК препятствует накоплению МСМ. В группе облученного контроля на 21-й день их количество повысилось до 155% (по отношению к  биологическому контролю). На фоне ФК количество МСМ снизилось до 68% (по отношению к облученному контролю). Различия результатов с облученным контролем и группой, получавшей цистамин, были достоверны. Уровень МСМ в контрольной группе, получавшей ЦФ, достоверно увеличился относительно группы биологического контроля на 21,4%. В опытной группе наблюдается полная нормализация показателя: содержание МСМ было достоверно ниже контрольных значений, а от результатов, полученных в группе биологического контроля, достоверно не отличалось. Уровень МСМ в группе, получавшей мексидол, не имел достоверных отличий от контрольных значений.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что ФК эффективно предотвращает развитие синдрома эндогенной интоксикации, снижая интенсивность протеолиза белков и накопления среднемолекулярных пептидов.

Состояние процессов перекисного окисления липидов можно оценить по уровню МДА (рисунки 6 и 7).

Результаты экспериментов показали, что облучение животных -лучами даже в малых дозах (рисунок 6) приводит к достоверному повышению МДА относительно биологического контроля. ФК снижает содержание МДА на 49,4% относительно контроля и препятствует развитию процессов ПОЛ у облучённых животных.

Рисунок 6 – Влияние кислоты феруловой на содержание МДА при лучевом поражении (2 Гр)

Рисунок 7 – Влияние кислоты феруловой на содержание МДА при поражении циклофосфамидом (200 мг/кг)

Максимальное накопление МДА при введении ЦФ (на 10-й день) в контрольной группе повысилось на 50% по сравнению с биологическим контролем. В группе с ФК содержание МДА снизилось на 35,7% по сравнению с контролем (рисунок 7).

Таким образом, ФК способствует достоверному снижению содержания МДА, что свидетельствует о стимуляции антиоксидантной защиты клеток. По данным показателям ФК превосходит препараты сравнения как при облучении, так и при воздействии ЦФ.

Изучение влияния кислоты феруловой на гематологические и цитогенетические показатели. Оценку состояния красного костного мозга при облучении и введении цитостатиков проводили методом подсчета общего количества миелокариоцитов и полихроматофилов с микроядрами.

Цитотоксическое повреждение приводит к значительному повышению в костном мозге количества полихроматофилов с микроядрами, которые появляются в клетках при  деструктивных изменениях в генетическом аппарате. При применении ФК на фоне ЦФ и облучения (2 Гр) содержание полихроматофилов с микроядрами в костном мозге снизилось на 68,5% и 59,7%, соответственно (относительно контроля), что свидетельствует о выраженной антимутагенной активности изучаемого соединения, позволяющего предотвратить нарушение хода клеточного деления и накопление клеток с патологическими митозами.

При облучении и введении цитостатиков значительно уменьшается количество миелокариоцитов в костном мозге. ФК способствует увеличению содержания миелокариоцитов на всех моделях поражения, но наибольший эффект наблюдается при введении ФК на фоне ЦФ (в 1,85 раза по сравнению с контролем) (рисунок 8).

Критерием оценки влияния ФК на лейкоцитарное и эритроцитарное звенья гемопоэза служило изменение картины периферической крови. На фоне действия ФК общее количество лейкоцитов достоверно превышает контрольные значения при воздействии радиации и цитостатиков (рисунок 9).

Рисунок 8 – Влияние кислоты феруловой на содержание миелокариоцитов при воздействии циклофосфамида (200 мг/кг) и облучении

Рисунок 9 – Антилейкопеническое действие кислоты феруловой на примере анализа изменения содержания лейкоцитов периферической крови при облучении -лучами (2 Гр)

ФК при облучении (2 Гр) достоверно превосходит антилейкопеническое действие цистамина. При повышении дозы облучения до 5,5 Гр этот эффект нивелируется. При действии ЦФ и 5-ФУ на фоне ФК общее количество лейкоцитов увеличилось на 20,8% и 27,0%, соответственно (по сравнению контролем). По степени коррекции лейкопенического действия ФК превосходит мексидол.

Облучение и цитостатики приводят к подавлению эритропоэза и снижению общей резистентности за счёт уменьшения процента высокоустойчивых эритроцитов. Об этом свидетельствует сдвиг пика эритрограммы влево в контрольной группе (рисунок 10).

Рисунок 10 – Влияние кислоты феруловой на кислотную резистентность эритроцитов на примере токсического повреждения циклофосфамидом

На фоне действия ФК наблюдается сдвиг пика эритрограммы вправо, что является показателем активации процессов регенерации эритроидного ростка гемопоэза и повышения содержания в крови эритроцитов с высокой резистентностью.

Объективным показателем интенсивности регенерации эритроидного ростка костного мозга является изменение количества РТ периферической крови. Наблюдение за динамикой изменения содержания РТ проводили при введении цитостатиков.

       В контрольных группах с ЦФ и 5-ФУ на 7-й день эксперимента количество РТ снизилось до 7,6% и 8,3% от биологического контроля, соответственно. В группе с ФК на фоне ЦФ  количество РТ возросло на 56,8% , а на фоне 5-ФУ – на  62,0% относительно контроля.

Приведенные данные показывают, что ФК способствует регенерации эритроидного ростка кроветворения, о чем свидетельствует повышение содержания в крови РТ. Динамика восстановления эритроидного ростка кроветворения под влиянием мексидола не отличалась от таковой в контроле.

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что ФК оказывает выраженное стимулирующее действие на процесс регенерации как эритроцитарного, так и лейкоцитарного звеньев гемопоэза, превосходя по данному показателю активность препаратов сравнения цистамина и мексидола. Предполагаемый механизм цитопротекторного действия связан как с непосредственным блокированием перекисных процессов мембран в условиях массированной свободнорадикальной атаки при облучении, так и с более долгосрочными эффектами, направленными на стимуляцию регенерации за счет сохранения стволовых структур обновления.

Влияние кислоты феруловой на гистоморфологическую структуру тимуса и селезенки. При облучении и поражении цитостатиками падает масса лимфоидных органов и угнетается их работа. В селезенке наблюдается клеточное опустошение красной пульпы. Размер фолликулов белой пульпы уменьшается, Т- и В-зоны в ней не дифференцируются. При облучении размер белой пульпы уменьшается на 62,8% относительно биологического контроля. В тимусе наблюдается значительное клеточное опустошение, корковое и мозговое вещество слабо дифференцированы. Лимфоциты немногочисленны и расположены отдельными очаговыми скоплениями.

ФК способствует ускорению регенерации селезенки и тимуса, сохранению их массы и морфологической структуры. Применение ФК на фоне лучевого поражения достоверно относительно контроля увеличивает размер белой пульпы селезенки на 32%. Цитопротекторный эффект ФК не уступает таковому препаратам сравнения: цистамину и мексидолу.

Полученные результаты гистоморфологических исследований подтверждают высокую степень цитопротекторной активности ФК по отношению к лимфоидным органам.

Влияние кислоты феруловой на гистоморфологическую структуру семенников. Весьма чувствительны к воздействию цитотоксических агентов половые железы. Облучение животных в дозе  5,5 Гр или введение цитостатиков приводит к истончению стенок семенных канальцев, исчезновению базофилии клеток, что свидетельствует о разрушении хромосомного аппарата ядер. Уменьшается клеточная плотность сперматогенного эпителия, зрелые сперматозоиды отсутствуют полностью  (рисунок 11).

А                                        Б

Рисунок 11 – Цитопротекторная активность кислоты феруловой в отношении сперматогенного эпителия на примере поражения циклофосфамидом: А – ЦФ, Б – ФК на фоне ЦФ

Анализ гистоморфологической структуры семенников крыс, получавших ФК на фоне облучения и поражения цитостатиками, показал, что в семенниках сохранен сперматогенный слой. В нем различимы клетки на всех стадиях дифференцировки: сперматогонии, сперматоциты, сперматиды. В центральной зоне среза семенного канальца содержатся зрелые сперматозоиды (рисунок 11).

Таким образом, ФК препятствует деструктивным изменениям в семенниках, способствует сохранению их гистологической структуры, сохраняя репродуктивную функцию у животных.

5 Изучение гепатопротекторной активности кислоты феруловой при экспериментальном токсическом поражении печени тетрахлорметаном

Активность АлАт является чувствительным показателем, отражающим функциональное состояние печени. Поэтому при поражении печени CCI4 определяли активность АлАт, а также ЩФ, содержание билирубина, глюкозы, холестерина. При CCI4-поражении печени в контрольной группе наблюдается повышение активности АлАт по сравнению с интактным контролем на 194%, что свидетельствует о развитии цитолитического синдрома. Развитие холестаза подтверждается значительным повышением активности ЩФ (на 675%) и содержанием в крови билирубина (на 42%). Наблюдается также повышение общего холестерина на 179% и снижение содержания глюкозы на 28%.

Профилактическое применение ФК привело к достоверному по сравнению с контролем снижению активности АлАт в сыворотке крови на 12%, ЩФ – на 36%, содержания холестерина – на 44%, повышению уровня глюкозы –  на 39%. Уровень летальности в группе животных, получавших ФК, был снижен на 19,6%.

Таким образом, применение ФК на фоне воспроизведения модели острого поражения печени CCI4 привело к нормализации биохимических показателей, что позволяет предполагать наличие гепатопротекторных свойств у изучаемого соединения.

Для подтверждения антиоксидантных свойств ФК определяли ее влияние на процессы ПОЛ в тканях печени. Под действием CCI4 содержание МДА увеличилось на 73,3% от биологического контроля. Содержание МДА в гомогенате печени крыс, получавших силибор, снизилось по сравнению с контролем на 8,5%, в группе ФК – на 29,3%, что достоверно относительно контроля и значений группы, получавшей препарат сравнения.

Снижение  содержания МДА в группе животных с ФК свидетельствует о торможении перекисных процессов в гепатоцитах, индуцированных введением CCI4, и подтверждает, что в механизме защитного действия ФК имеют место антирадикальные процессы.

Цитопротекторная активность ФК по отношению к гепатоцитам отражается на морфологической картине печени. В группе животных, отравленных CCI4 и не получавших лечения, наблюдается крупнокапельная жировая дистрофия гепатоцитов с образованием жировых кист (рисунок 12). Ядра клеток смещены на периферию и находятся в фазе кариорексиса и кариолизиса. Часть гепатоцитов некротизирована. Признаков развития цирротических изменений на данном этапе токсического поражения не наблюдается.

На гистологических срезах печени крыс, леченных ФК, крупнокапельная жировая дистрофия и жировые кисты отсутствуют. Ядра в гепатоцитах округлой формы (рисунок 12).

                       А                                        Б

Рисунок 12 – Гистологическая картина печени: А - на фоне тетрахлорметана, Б - на фоне кислоты феруловой

Подсчет некротизированных гепатоцитов показал, что профилактическое применение силибора и ФК значительно снижает  процесс разрушения гепатоцитов. В группе животных, отравленных CCI4,  на фоне ФК количество некротизированных гепатоцитов снизилось на 27,4%. Данные достоверны относительно контрольных значений (таблица 2).

Таблица 2 - Морфологический подсчет некротизированных гепатоцитов

Группы

% некротизированных

гепатоцитов

СС14 (контроль)

37,6 ±3,21

ССl4+ силибор (30 мг/кг)

16,8 ±2,93&

ССl4+ФК (30 мг/кг)

10,2±1,54&

Примечание: &- достоверность относительно контроля

Приведенные данные свидетельствуют о том, что ФК оказывает гепатопротекторный эффект в условиях цитотоксического повреждения CCI4.

6 Изучение нейропротекторной активности кислоты феруловой в условиях ишемического повреждения головного мозга

Влияние кислоты феруловой на мозговой кровоток и сопротивление сосудов. С целью изучения одного из механизмов нейропротекторного действия ФК было проведено исследование влияния данного соединения на мозговой кровоток и сопротивление сосудов методами водородного клиренса и доплерографии. Изучение мозгового кровотока показало, что изменение средней объемной скорости в контрольной группе не имело достоверных отличий от исходных значений. В опытной группе наблюдалось недостоверное повышение мозгового кровотока относительно исходных значений.

При определении сосудистого сопротивления статистически достоверных отличий между контрольной и опытной группами не выявлено. Поэтому можно сделать заключение, что ФК не оказывает выраженного влияния на объемный мозговой кровоток и сопротивление сосудов мозга.

Влияние кислоты феруловой на скорость свёртывания крови. Активация агрегации тромбоцитов является пусковым механизмом в микротромбообразовании в условиях ишемии, что приводит к нарушению микроциркуляции в ткани мозга [Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001]. ФК обладает способностью снижать образование проагрегантных факторов путем подавления цикла арахидоновой кислоты в тромбоцитах [L.N. Xu et al., 1990], поэтому можно предположить, что ФК может оказывать ингибирующее влияние на процессы свертывания крови. Скорость свертывания крови под влиянием ФК изучали на крысах in vitro. Установлено, что в группе, получавшей ФК, начало свертывания крови отодвигается на 21,67 сек, а продолжительность свертывания продлевается на 41,55 сек., что на 26,59% дольше относительно контроля. В опытах с препаратом сравнения кавинтоном достоверных изменений не наблюдалось. Таким образом, ФК отодвигает начало свертывания и увеличивает время свертывания крови достоверно относительно контроля, что снижает  риск, связанный с тромбообразованием  при острых и хронических формах ишемии.

Развитие постишемического отека мозга и активность антиоксидантной системы при ишемии мозга. Одним из механизмов реперфузионного повреждения ткани мозга в постишемическом периоде является развитие цитотоксического отека, связанного с накоплением осмотически активных веществ и лактатацидозом. Феномен «невосстановленного кровотока» поддерживается за счет изменения реологических свойств крови, накопления провоспалительных факторов, развития оксидантного стресса, сдавления капилляров отечными астроцитами, формирования отечности эндотелия сосудов. Мы предположили, что исследуемое вещество, снижая активность процессов свободнорадикального окисления и увеличивая активность кислородного окисления глюкозы, способно уменьшить отек в постишемическом периоде.

Определение влияния ФК на процессы свободнорадикального окисления в ткани мозга проводили на модели ишемии мозга, вызванной гравитационными перегрузками в кранио-каудальном направлении, в которой присутствует этап реперфузионного повреждения. Введение ФК за час до глобальной преходящей ишемии мозга достоверно относительно контроля и препаратов сравнения препятствует развитию отека (рисунок 13).

Рисунок 13 - Показатель отека мозга крыс (в процентах) в норме и при ишемии

При ишемических повреждениях мозга резко возрастает интенсивность свободнорадикального окисления, что проявляется на активности антиоксидантных ферментов, в частности, каталазы. В контроле активность каталазы была достоверно ниже, чем в группах с ФК и препаратами сравнения (рисунок 14).

При профилактическом и особенно лечебном применении ФК активность каталазы значительно повысилась, что достоверно по отношению к контролю и группам сравнения.

Содержание МДА в контрольной группе повысилось на 132% относительно биологического контроля. Профилактическое и лечебное применение ФК уменьшает содержание МДА. При лечебном применении ФК этот показатель достоверно снизился на 88%, но не имел достоверных отличий от групп, получавших ФК профилактически, и препараты сравнения – кавинтон и циннаризин (рисунок 15).

Рисунок 14 - Активность каталазы  в мозге ишемизированных крыс

Рисунок 15 - Содержание малонового диальдегида (в процентах) в мозге ишемизированных крыс

Из проведенных исследований следует, что при ишемии, созданной гравитационными перегрузками, введение ФК подавляет ПОЛ, что подтверждено уменьшением отека мозга, повышением уровня каталазы и уменьшением содержания МДА. В то же время развитие отека зависит не только от процессов свободнорадикального окисления.

Вероятно, профилактическое введение ФК уменьшает развитие отека вследствие активации окисления лактата. Поэтому введение ФК за один час до создания глобальной ишемии мозга эффективно предотвращает развитие цитотоксического отека. Введение ФК через  час после ишемии в реперфузионном периоде не оказывает подобного действия.        

Метаболизм глюкозы в ткани мозга при фокальной ишемии и в норме. Ишемия головного мозга приводит к угнетению кислородного этапа окисления глюкозы и развитию энергодефицита нервной ткани. В результате происходит накопление лактата, что является причиной лактатацидоза и одним из механизмов повреждения ишемизированной ткани. Исследуемые вещества вводили через час после окклюзии правой средней мозговой артерии, затем вечером того же дня и утром следующего. Результаты исследования влияния ФК на обмен глюкозы и молочной кислоты в мозге крыс в условиях фокальной ишемии мозга и нормы  представлены в таблице 4.

Таблица 4 – Влияние кислоты феруловой на метаболизм глюкозы и молочной кислоты в ткани мозга крыс при фокальной ишемии мозга и в норме

Группы

Потребление глюкозы

ммоль/100г в мин

(х10-3)

Образование лактата

ммоль/100г в мин

(х10-3)

Биологический контроль (физ. раствор)

2,17±0,06

0,18±0,05

Контроль (ишемия)

3,26±0,22*

7,45±0,52*

Кислота феруловая

7,54±0,84&

1,56±1,81&

Кавинтон

11,43±1,01&

1,24±2,26&

Циннаризин

1,83±0,89&

-15,01±3,30&

Примечание – достоверно относительно: биологического контроля (*), контроля (&), кавинтона (), циннаризина ()

Введение ФК животным на модели фокальной ишемии увеличивает потребление мозгом глюкозы в условиях эксперимента относительно контроля в 2,3 раза, уступая кавинтону и превосходя циннаризин. ФК уменьшает образование молочной кислоты достоверно по отношению к контрольной группе в 4,8 раза. По влиянию на окисление молочной кислоты эффект ФК сопоставим с кавинтоном, но уступает циннаризину.

Таким образом, при фокальной ишемии мозга через сутки после окклюзии средней мозговой артерии, наблюдается повышение потребления глюкозы тканью мозга и увеличение образования молочной кислоты. Введение ФК и кавинтона увеличивает потребление глюкозы и уменьшает образование лактата. Введение циннаризина не приводит к достоверному изменению потребления глюкозы, однако интенсифицирует окисление лактата, образовавшегося в мозге и поступающего с артериальной кровью.

Влияние кислоты феруловой на объем зоны некроза при фокальной ишемии мозга. Антиоксидантные и цитопротекторные свойства ФК дают основание предполагать у неё способность уменьшать зону некроза при фокальной ишемии мозга, которую создавали методом постоянной окклюзии средней мозговой артерии. Кавинтон способствовал уменьшению зоны некроза в сравнении с контрольной группой в два раза. При введении ФК зона некроза уменьшалась в три раза по сравнению с контролем (рисунок 16).

Рисунок 16 – Влияние кислоты феруловой, кавинтона и циннаризина на объем зоны некроза мозга в процентах к массе полушарий

В результате исследований выявлено, что ФК значительно уменьшает зону некроза при фокальной ишемии мозга, вызванной окклюзией средней мозговой артерии. Это позволяет отнести данное соединение к группе веществ, обладающих церебропротекторной активностью.        

Влияние кислоты феруловой на функциональное состояние мозга при ишемии. В результате ишемии мозга у животных изменяется поведение, нарушается память, координация движений, процессы обучения и воспроизведения навыков, что можно трактовать как проявления неврологического дефицита. Проведено исследование влияния ФК на поведение белых крыс линии Вистар на двух моделях ишемии головного мозга в тестах «открытое поле», «экстраполяционное избавление», «УРПИ» и «вращающийся стержень».

При билатеральной окклюзии общих сонных артерий введение ФК за час до ишемии повышает двигательную и исследовательскую активность достоверно по отношению к циннаризину. При ишемии мозга, вызванной гравитационными перегрузками, ФК, не уступая циннаризину, оказывает влияние только при введении её через час после ишемии. Кавинтон на двигательную и исследовательскую активность животных влияния не оказывает. ФК на модели билатеральной окклюзии общих сонных артерий способствует снижению времени экстраполяционного избавления, повышает способность животных удерживать в памяти и воспроизводить условный рефлекс в тесте УРПИ, а также скорость восстановления координации движений и равновесия в тесте «Вращающийся стержень». В тестах «УРПИ» и «вращающийся стержень» ФК по действию превышала препараты сравнения.

Заключение

Опыт широкого применения антиоксидантов в медицинской практике ставит новые вопросы о механизмах действия и адекватности их применения для профилактики и лечения заболеваний.

Анализ патогенеза различных заболеваний однозначно свидетельствует о наличии единого механизма цитотоксического повреждения, который заключается в инициации свободнорадикального перекисного окисления липидов мембран, приводящей к гибели клеток.

Воздействуя на ключевой этап патогенеза, антиоксиданты способны в одних случаях предотвратить деструкцию тканей, сохраняя структурную и функциональную активность системы, а в других, способствуя ускорению последующей регенерации, защитить стволовые структуры, обеспечивающие обновление тканей. Эти свойства позволяют значительно корректировать сдвиги параметров тканевого гомеостаза в условиях цитотоксического воздействия.

Производные коричной кислоты изучаются уже на протяжении длительного времени. Для них обнаружен широкий спектр биологической активности, в том числе и антиоксидантного характера. Как показали исследования, цитопротекторная активность производных коричной кислоты находится в прямой пропорциональной зависимости от степени их антиоксидантной активности, а антиоксидантная - зависит от структуры молекулы. По результатам экспериментальных исследований наиболее выраженную антиоксидантную и цитопротекторную активность проявила ФК. Структурная формула ФК определяет ее способность выступать в качестве ловушки свободных радикалов и ингибировать свободнорадикальное ПОЛ.

При массированной деструкции тканей, вызванной воздействием ионизирующей радиации и цитостатиков на фоне ФК, наблюдалось общее защитное действие, позволяющее повысить выживаемость животных и способствующее регенерации наиболее чувствительных систем. Гистоморфологический анализ показал высокую степень протекции, способствующей ускорению регенерации «критических органов»: эпителия тонкого кишечника, селезенки, тимуса, семенников и подтвердил достоверность проведенных исследований. Результаты экспериментальной работы показали, что ФК активно снижала степень эндогенной интоксикации (накопление МСМ и МДА в плазме крови), что подтвердило антиоксидантый характер механизма её действия.

ФК по отношению к стабильным тканям проявила высокую степень гепатопротекторной активности в условиях экспериментального поражения печени CCI4. Это выразилось в достоверном уменьшении по сравнению с контролем активности АлАт, щелочной фосфатазы, содержания МДА. Гистоморфологические исследования печени показали, что количество некротизированных гепатоцитов при применении ФК на фоне тетрахлорметанового гепатитогепатоза снизилось на 27,4% по сравнению с контрольной группой.

ФК проявила нейропротекторную активность при различных видах ишемий. Это выразилось в стабилизации неврологического статуса животных, уменьшении содержания МДА, отека мозга, зоны некроза, увеличении окисления глюкозы ткани мозга и увеличении активности каталазы.

Неизбирательность действия ФК свидетельствует о единстве механизма развития повреждения при разных моделях цитотоксического воздействия, следствием которого является индукция свободнорадикального перекисного окисления мембран клеток.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

  1. Установлена корреляционная зависимость между структурой, антиоксидантной и антигемолитической активностью 27 синтетических производных коричной кислоты (in vitro); выявлено наиболее активное соединение, проявляющее антиоксидантные и цитопротекторные свойства – кислота феруловая: 4-гидрокси 3-метокси фенилпропеновая кислота.
  2. Выявлено, что кислота феруловая относится к практически нетоксичным веществам (5-й класс по классификации К.К.Сидорова, LD50 1520 мг/кг). Изучение хронической токсичности показало, что 30-дневное применение кислоты феруловой в дозах 30 мг/кг и 100 мг/кг не вызывает нарушений физиологической нормы клинических и биохимических показателей крови.
  3. Определена зависимость «доза-эффект» кислоты феруловой на четырех моделях повреждения: при однократном общем облучении – 200 мг/кг, действии цитостатиков – 100 мг/кг, остром поражении печени  CCI4 – 30 мг/кг, ишемии мозга – 30 мг/ кг.
  4. Кислота феруловая не снижает противоопухолевый эффект циклофосфамида и 5-фторурацила на культурах опухолевых линий лимфосаркомы Плисса и карциномы шейки матки, сублинии HeLa (in vitro).
  5. Кислота феруловая оказывает стимулирующее действие на процесс регенерации лейкоцитарного и эритроцитарного звеньев гемопоэза. На фоне лучевого и цитостатического повреждения кислота феруловая  достоверно по отношению к контрольным группам увеличивает количество миелокариоцитов в костном мозге и ретикулоцитов в периферической крови. По степени протекторного действия на стволовые клетки кислота феруловая не уступает цистамину и мексидолу.
  6. При профилактическом применении кислоты феруловой  на фоне облучения и введения циклофосфамида содержание полихроматофилов с микроядрами в костном мозге снизилось относительно контроля  на 59,7% и  68,5%, соответственно, что свидетельствует о выраженной антимутагенной активности изучаемого соединения.
  7. Кислота феруловая при лучевом поражении и действии цитостатиков достоверно относительно контроля и препаратов сравнения способствует снижению содержания МСМ  (продуктов протеолиза белков), предотвращая развитие синдрома эндогенной интоксикации, и МДА, способствуя стимуляции антиоксидантной защиты клеток.
  8. Кислота феруловая на фоне  воспроизведения острого поражения печени CCI4 способствует нормализации биохимических показателей крови: снижает активность АлАт, щелочной фосфатазы, содержание холестерина, повышает уровень глюкозы. Все показатели достоверны по отношению к контрольной группе животных.
  9. При остром CCI4 поражении печени кислота феруловая  уменьшает количество некротизированных гепатоцитов на 27,4% относительно контроля. Уровень летальности в группе животных, пораженных CCI4 и получавших профилактически кислоту феруловую, снижен на 19,6%.
  10. Кислота феруловая способствует сохранению гистоморфологической структуры органов, наиболее чувствительных к физическим и химическим повреждающим факторам: тонкого кишечника, тимуса, селезенки, семенников (при облучении и введении цитостатиков), печени (при введении CCI4).
  11. Кислота феруловая улучшает неврологический статус животных в тестах «открытое поле», «экстраполяционное избавление», «УРПИ» и «вращающийся стержень» на моделях глобальной ишемии мозга (билатеральная окклюзия общих сонных артерий и с помощью гравитационных перегрузок в кранио-каудальном направлении), превосходя по этому показателю кавинтон и циннаризин.
  12. Кислота феруловая (in vitro) отодвигает начало свертывания, увеличивает время свертывания крови  на 26,59%  достоверно относительно контроля, что снижает  риск, связанный с тромбообразованием  при острых и хронических формах ишемии.
  13. На модели глобальной преходящей ишемии мозга кислота феруловая (достоверно по отношению к контролю и препаратам сравнения) уменьшает отек мозга, снижает уровень МДА, повышает активность каталазы,  тормозя свободнорадикальное окисление и активируя  антиоксидантную защиту в постишемическом периоде.
  14. На модели фокальной ишемии мозга, вызванной окклюзией средней мозговой артерии, кислота феруловая увеличивает потребление глюкозы мозгом, активируя окисление молочной кислоты, и уменьшает зону некроза в 3 раза по сравнению с контролем.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

- монография:

  1. Назарова, Л.Е. Активность кислоты феруловой в условиях цитотоксического повреждения / Л.Е.Назарова, М.А.Оганова, И.Л. Абисалова // Пятигорск: ООО РИА на КМВ, 2010. – 115 с.

- работы, опубликованные в журналах, рекомендованных ВАК:

  1. Назарова, Л.Е. Влияние кислоты феруловой на систему крови у облученных крыс / Л.Е.Назарова, И.Л. Абисалова // Вестн. Воронеж. гос. ун-та. Серия: Химия. Биология. Фармация. – 2006. - № 2. – С. 325-326.
  2. Оганова, М.А. Динамика изменения общего количества лейкоцитов периферической крови при введении циклофосфамида на фоне действия кислоты феруловой / М.А. Оганова, Л.Е. Назарова // Вестн. Воронеж. гос. ун-та. Серия: Химия. Биология. Фармация. – 2006. - № 2. – С. 330-331.
  3. Дьякова, И.Н. Влияние кислоты феруловой на неврологический статус крыс в норме и при ишемии, вызванной билатеральной перевязкой общих сонных артерий / И.Н.Дьякова, Л.Е.Назарова // Изв. вузов Сев. Кавк.регион. Естественные науки.- Фармакология. – 2006. - Спецвып.– С. 70-72.
  4. Назарова, Л.Е. Влияние новых производных коричной кислоты на содержание белковых фракций в сыворотке крови крыс с экспериментальным токсическим гепатитом / Л.Е.Назарова, Ю.А. Огурцов // Изв. вузов Сев. Кавк.регион. Естественные науки.- Фармакология. – 2006. - Спецвып.– С. 72-74.
  5. Назарова, Л.Е. Влияние кислоты феруловой на развитие ишемического отека, активность каталазы и содержание малонового диальдегида в мозге крыс / Л.Е.Назарова, И.Н Дьякова // Изв. вузов Сев. Кавк.регион. Естественные науки.- Фармакология. – 2006. - Спецвып.– С. 74-76.
  6. Огурцов, Ю.А. Влияние новых производных коричной кислоты на антитоксическую и экскреторную функцию печени с экспериментальным токсическим гепатитом / Ю.А.Огурцов, Л.Е. Назарова // Изв. вузов Сев. Кавк.регион. Естественные науки.- Фармакология. – 2006. - Спецвып.– С. 76-77.
  7. Назарова, Л.Е. Динамика изменения общего количества лейкоцитов периферической крови у крыс при введении 5-фторурацила на фоне действия кислоты феруловой / Л.Е.Назарова, М.А. Оганова // Мед.науки. - 2007. - № 5. – С. 21-23.
  8. Оганова, М.А. Экспериментальное изучение динамики изменения содержания ретикулоцитов и гемоглобина периферической крови при введении 5-фторурацила на фоне действия кислоты феруловой / М.А.Оганова, Л.Е. Назарова // Науч. обозрение. - 2007. - № 5. – С. 41-44.
  9. Оганова, М.А. Экспериментальное изучение влияния кислоты феруловой на динамику изменения количества миелокариоцитов при введении циклофосфамида / М.А. Оганова, Л.Е. Назарова // Изв. вузов Сев. Кавк.регион. Естественные науки.- Фармакология. – 2007. - Спецвып. – С. 57-59.
  10. Назарова, Л.Е. Влияние 5-фторурацила на динамику изменения массы органов триады Селье на фоне действия феруловой кислоты / Л.Е.Назарова, М.А. Оганова // Экология и здоровье человека: материалы XII конгр. – Самара, 2007. - Т.2. - Спец.вып. – С. 66-69.
  11. Оганова, М.А. Экспериментальное изучение влияния кислоты феруловой на динамику изменения количества миелокариоцитов при введении массивных доз 5-фторурацила / М.А.Оганова, Л.Е.Назарова // Вестник РУДН. Серия медицина. – 2007. - № 6. – С. 276-278.
  12. Воспроизведение геморрагического инсульта в эксперименте / М.Д.Гаевый, Л.Е.Назарова, Л.Д.Гаевая, Ю.А. Огурцов // Пат. физиология и эксперим. терапия. – 2008. - № 2. – С. 7-8.
  13. Оганова, М.А. Влияние кислоты феруловой на динамику изменения лейкоцитарной формулы при введении 5-фторурацила /М.А.Оганова, Л.Е. Назарова //Клинич. фармакология и терапия. - 2010. - № 6. – С. 74-76.
  14. Назарова, Л.Е. Влияние кислоты феруловой на динамику изменения лейкоцитарной формулы при введении циклофосфамида / Л.Е.Назарова, М.А.Оганова // Изв. Самарского науч. центра РАН.- 2010. – Т. 12, № 1(8). – С. 2083-2087.
  15. Назарова, Л.Е. Влияние феруловой кислоты на зону некроза, возникающего в результате окклюзии правой средней мозговой артерии / Л.Е.Назарова, И.Н. Дьякова // Мед. вестн. Башкортостана. -  2011. - № 3. – С. 133-135.

-основные  работы, опубликованные в других изданиях:

  1. Назарова, Л.Е. Протекторный эффект феруловой кислоты при действии на клетки модельных липидных радиотоксинов / Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова, Ю.А.Огурцов // Регион.конф.по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы… - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2001. – С. 203.
  2. Анализ зависимости антиоксидантных свойств производных 3-фенилпропеновой (коричной) кислоты от характера заместителей в её бензольном ядре и алифатической цепи /Ю.А.Огурцов, Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова, А.А.Дьяков. -  Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2002. – 13 с. -Деп. в ВИНИТИ РАН 19.02.02, № 334–В. 
  3. Абисалова, И.Л. Радиопротекторные свойства феруловой кислоты /И.Л.Абисалова, Л.Е.Назарова, Ю.А.Огурцов. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2003. – 14 с. - Деп. в ВИНИТИ РАН 07.08.03, № 1537–В.
  4. Назарова, Л.Е.  Влияние феруловой кислоты и цистамина на степень эндогенной интоксикации у крыс, пораженных -излучением / Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова, Ю.А. Огурцов; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2004. – Вып.59. – С. 238.
  5. Назарова, Л.Е. Некоторые аспекты регуляции мозгового кровообращения /Л.Е.Назарова; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2004. – Вып.59. – С. 300.
  6. Методические аспекты экспериментального исследования церебропротекторной активности фармакологических средств / М.Д.Гаевый, Л.Е.Назарова, Ю.А.Огурцов [и др.] // Человек и лекарство: тез.докл. 11 Рос. нац. конгр. 19-23 апр. 2004 г. – М., 2004. С. 776.
  7. Абисалова, И.Л. К вопросу о радиопротекторном действии феруловой кислоты / И.Л.Абисалова, Л.Е. Назарова // Человек и лекарство: тез.докл. 12 Рос. нац. конгр. 18-22 апр. 2005 г. – М., 2005. С. 298.
  8. Дьякова, И.Н. Влияние феруловой кислоты на выживаемость крыс при циркуляторной гипоксии / И.Н.Дьякова, Л.Е. Назарова // Человек и лекарство: тез.докл. 12 Рос. нац. конгр. 18-22 апр. 2005 г. – М., 2005. С. 660.
  9. Назарова, Л.Е. Мембраностабилизирующие свойства некоторых производных коричной кислоты / Л.Е.Назарова, М.Д.Гаевый // Человек и лекарство: тез.докл. 12 Рос. нац. конгр. 18-22 апр. 2005 г. – М., 2005. С. 687.
  10. Дьякова, И.Н. Влияние феруловой кислоты на скорость мозгового кровотока и сопротивление сосудов мозга крыс / И.Н.Дьякова, Л.Е. Назарова // Современные проблемы фармакологии и фармации: материалы Всерос.науч.-практ.конф. 18-19 мая 2005 г. – Новосибирск: Новосибир. гос.мед.акад., 2005. – С. 284-286.
  11. Назарова, Л.Е. Феруловая кислота в роли радиопротектора /Л.Е.Назарова, И.Л. Абисалова // Современные проблемы фармакологии и фармации: материалы Всерос.науч.-практ.конф. 18-19 мая 2005 г. – Новосибирск: Новосибир. гос.мед.акад., 2005. – С. 320-322.
  12. Назарова, Л.Е. Влияние феруловой кислоты и цистамина на содержание продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови крыс, пораженных -излучением/Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова  //Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы 9 Междунар.съезда Фитофарм - 2005 22-25 июня 2005 г.– СПб., 2005. – С. 121-122.
  13. Назарова, Л.Е. Исследование эффективности радиопротекторного действия феруловой кислоты в сравнении с цистамином / Л.Е.Назарова, И.Л. Абисалова // Тез.докл.Междунар. науч.конф., посвящ.75-летию Ереван.гос.мед.ун-та им. М.Гераци. -  Ереван, 2005. – С. 273-274.
  14. Гаевый, М.Д. Сравнительная характеристика методов воспроизводства острых нарушений мозгового кровообращения / М.Д.Гаевый, Л.Е.Назарова, Л.Д. Гаевая // Тез.докл.Междунар. науч.конф., посвящ.75-летию Ереван.гос.мед.ун-та им. М.Гераци. -  Ереван, 2005.– С. 132.
  15. Дьякова, И.Н. Влияние феруловой кислоты на поведение ишемизированных крыс в тесте «открытое поле» / И.Н.Дьякова, Л.Е. Назарова // Тез.докл.Междунар. науч.конф., посвящ.75-летию Ереван.гос.мед.ун-та им. М.Гераци. -  Ереван, 2005.– С. 170-171.
  16. Огурцов, Ю.А. Поиск новых гепатопротекторов среди производных коричной кислоты / Ю.А.Огурцов, Л.Е. Назарова // Тез.докл.Междунар. науч.конф., посвящ.75-летию Ереван.гос.мед.ун-та им. М.Гераци. -  Ереван, 2005.– С. 290-291.
  17. Цитопротекторное действие феруловой кислоты / Л.Е.Назарова [и др.] // Физиология и здоровье человека: науч.тр. 1 Съезда физиологии СНГ 19-23 сент. 2005 г. Сочи, Дагомыс. – М.: Медицина; Здоровье, 2005. – Т. 2, № 6. – С. 4.
  18. Дьякова, И.Н. Влияние феруловой кислоты на поведение крыс в тесте «открытое поле» / И.Н.Дьякова, Л.Е. Назарова // Фармация и здоровье: материалы Междунар.науч.-практ.конф. 9-12 ноябр.2005 г. – Пермь: ПГФА, 2005. – С. 174-175.
  19. Назарова, Л.Е. Влияние феруловой кислоты на гистоморфологические изменения в семенниках облученных крыс / Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова, Ю.А. Огурцов; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2005. – Вып. 60. – С. 391.
  20. Назарова, Л.Е. Влияние кислоты феруловой на гистологическую картину срезов тонкого кишечника облученных крыс / Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова, Ю.А. Огурцов; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2006. – Вып. 61. – С. 370-372.
  21. Дьякова, И.Н.  Влияние кислоты феруловой на поведение крыс в тесте «открытое поле» в условиях ишемии мозга, вызванной билатеральной перевязкой общих сонных артерий / И.Н.Дьякова, Л.Е. Назарова; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2006. – Вып. 61.– С. 351-353.
  22. Назарова, Л.Е.  Влияние кислоты феруловой на гистологическую картину селезенки облученных крыс / Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова, Ю.А. Огурцов; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2007. – Вып. 62. – С. 515-517.
  23. Назарова, Л.Е. Влияние кислоты феруловой на поведение крыс в тесте «открытое поле» в норме и при ишемии мозга, возникающей в результате гравитационных перегрузок / Л.Е.Назарова, И.Н. Дьякова; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2007. – Вып. 62.– С. 517-520.
  24. Назарова, Л.Е. Влияние феруловой кислоты на лейкоцитарные фракции крови крыс, пораженных гамма-излучением / Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова // Аллергология и иммунология. - 2007. - Т. 8, № 1. – С. 156.
  25. Оганова, М.А. Эффективность феруловой кислоты у животных с моделированными цитопениями / М.А.Оганова, Л.Е.Назарова // Аллергология и иммунология. -  2007. -Т. 8, № 1. – С. 11.
  26. Влияние феруловой кислоты на морфологическую картину печени при гепатозе, вызванном тетрахлорметаном / Л.Е.Назарова [и др.]; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. – Вып. 63. – С. 458-460.
  27. Оганова, М.А. Влияние циклофосфамида и 5-фторурацила на изменение гистоморфологической структуры тонкого кишечника на фоне действия кислоты феруловой / М.А.Оганова, Ю.А.Огурцов, Л.Е.Назарова; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. – Вып. 63. – С. 468-470.
  28. Назарова, Л.Е. Некоторые аспекты фармакологической активности феруловой кислоты /Л.Е.Назарова; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. – Вып. 63.– С. 457-458.
  29. Назарова, Л.Е. Изучение хронической токсичности кислоты феруловой по биохимическим показателям крови/Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова, М.А.Оганова //Фармация из века в век: сб.науч.тр.науч.-практ.конф.- СПб., 2008. – С. 118-121.
  30. Оганова, М.А. Влияние кислоты феруловой, мексидола и дерината на биохимические показатели крови при интоксикации циклофосфамидом и 5-фторурацилом / М.А.Оганова, Л.Е. Назарова // Фармация из века в век: сб.науч.тр.науч.-практ.конф.- СПб., 2008. – С. 121-124.
  31. Назарова, Л.Е. Коррекция лейкопенического действия 5-фторурацила с помощью феруловой кислоты /Л.Е.Назарова // Человек и лекарство: тез.докл. 15 Рос. нац. конгр. 14-18 апр. 2008 г. – М., 2008. С. 672.
  32. Назарова, Л.Е. Изменение активности свертывающей системы крови на фоне действия феруловой кислоты /Л.Е.Назарова // Человек и лекарство: тез.докл. 15 Рос. нац. конгр. 14-18 апр. 2008 г. – М., 2008. С. 672-673.
  33. Назарова, Л.Е. Влияние кислоты феруловой на динамику изменения общего количества нейтрофилов периферической крови при введении циклофосфамида / Л.Е.Назарова, М.А.Оганова // Аллергология и иммунология. – 2008. – Т. 9, № 3. – С. 320-321.
  34. Оганова, М.А. Влияние циклофосфамида и 5-фторурацила на изменение гистоморфологической структуры тонкого кишечника на фоне действия кислоты феруловой / М.А.Оганова, Ю.А.Огурцов, Л.Е. Назарова ; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. – Вып. 63. – С. 468-470.
  35. Назарова, Л.Е. Изучение влияния кислоты феруловой на уровень стресса при воздействии высоких доз цитостатиков / Л.Е.Назарова, М.А.Оганова, И.Л. Абисалова // Науч.тр.2 Съезда физиологов СНГ 29-31 окт. 2008 г. Кишинэу, Молдова.–М.-Кишинэу:Медицина-Здоровье, 2008.–С.188-189.
  36. Оганова, М.А. Влияние циклофосфамида на изменение гистоморфологической структуры семенников на фоне действия кислоты феруловой в сравнении с мексидолом и деринатом / М.А.Оганова, Л.Е. Назарова; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2009. – Вып.64. – С. 479-481.
  37. Оганова, М.А. Влияние циклофосфамида и 5-фторурацила на изменение гистоморфологической структуры тимуса на фоне действия кислоты феруловой / М.А.Оганова, Ю.А.Огурцов, Л.Е.Назарова ; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. – Вып. 63. – С. 466-468.
  38. Оганова, М.А. Влияние циклофосфамида на изменение гистоморфологической структуры семенников на фоне действия кислоты феруловой в сравнении с мексидолом и деринатом / М.А.Оганова, Л.Е. Назарова; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2009. – Вып.64. –С. 479-481.
  39. Назарова, Л.Е. Влияние кислоты феруловой на биохимические показатели крови крыс, пораженных тетрахлорметаном / Л.Е.Назарова, И.Л.Абисалова, М.А. Оганова // Аллергология и иммунология. – 2009. – Т. 10, № 1. – С. 155.
  40. Назарова, Л.Е. Антигемолитическая активность кислоты феруловой в условиях цитотоксического поражения костного мозга / Л.Е.Назарова, М.А. Оганова // Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов: тез.докл.Всерос.науч.-практ.конф. - Бюл.федер. центра сердца, крови и эндокринологии им. В.А.Алмазова. – СПб., 2010. - № 2. – С. 150.
  41. Оганова, М.А. Оценка антимутагенной активности кислоты феруловой методом микроядерного тестирования / М.А.Оганова, Л.Е.Назарова, А.С. Лысенко // Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов: тез.докл.Всерос.науч.-практ.конф. - Бюл.федер. центра сердца, крови и эндокринологии им. В.А.Алмазова. – СПб., 2010. - № 2. – 157-158.
  42. Назарова, Л.Е. Церебропротекторная активность кислоты феруловой при фокальной ишемии головного мозга / Л.Е.Назарова, И.Н. Дьякова // Человек и лекарство: тез.докл. 17 Рос. нац. конгр. 12-16 апр. 2010 г. – М., 2010. С. 687.
  43. Оганова, М.А. Влияние кислоты феруловой на динамику изменения массы тела животных при введении циклофосфамида / М.А.Оганова, Л.Е. Назарова // Человек и лекарство: тез.докл. 17 Рос. нац. конгр. 12-16 апр. 2010 г. – М., 2010. – С. 693.
  44. Оганова, М.А. Влияние 5-фторурацила на изменение гистоморфологической структуры семенников на фоне действия кислоты феруловой / М.А.Оганова, Л.Е.Назарова; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2010. – Вып. 65.- С. 480-482.
  45. Назарова, Л.Е. Влияние кислоты феруловой на время свертывания крови in vitro / Л.Е.Назарова, И.Н.Дьякова; под ред. М.В.Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. – Пятигорск: Пятигорская ГФА,2011. – Вып. 66. – С. 543-544.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АлАт                –аланинаминотрансфераза

Гр                        –Грей

Кавинтон 3,2        –кавинтон в дозе 3,2 мг/кг

МДА                –малоновый диальдегид

Мексидол 50        –мексидол в дозе 50 мг/кг

ПОЛ                        –перекисное окисление липидов

РТ                        –ретикулоциты

Силибор 30        –силибор в дозе 30 мг/кг

CCI4                        –тетрахлорметан

ФК                        –кислота феруловая

ФК 30                –кислота феруловая в дозе 30 мг/кг

ФК 100                –кислота феруловая в дозе 100 мг/кг

ФК 200                –кислота феруловая в дозе 200 мг/кг

5-ФУ                        –5-фторурацил

Циннаризин 5,2        –циннаризин в дозе 5,2 мг/кг

Цистамин 100        –цистамин в дозе 100 мг/кг

ЦФ                        – циклофосфамид

ЩФ                         –щелочная фосфатаза

Благодарности:

       Выражаю благодарность зав.кафедрой органической химии Пятигорской ГФА, д.ф.н., профессору Оганесяну Э.Т., за предоставленные для исследования вещества; руководителю лаборатории биологических испытаний филиала ИБХ РАН д.б.н., профессору Мурашеву А.Н.; научному консультанту, засл.деятелю науки РФ, д.м.н., профессору Гаевому М.Д.; к.м.н. Огурцову Ю.А.; ученикам: к.ф.н. Абисаловой И.Л., к.ф.н. Дьяковой И.Н., к.ф.н. Огановой М.А. за оказанную помощь при выполнении диссертационной работы, всем коллегам по кафедре, а также за техническую верстку работы к.ф.н. Огановой М.А. и Лысенко А.С.

НАЗАРОВА ЛЮБОВЬ ЕФИМОВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ

КИСЛОТЫ ФЕРУЛОВОЙ

14.03.06 ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ

ДОКТОРА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Подписано в печать « » января 2012 г. Формат 60х84/16.

Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл.печ.л. 2,0

Тираж 100 экз. Заказ №

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

(357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.