WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

На правах рукописи

ОРЛОВСКАЯ ТАТЬЯНА ВЛАДИСЛАВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НЕКОТОРЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ РАСТЕНИЙ С ЦЕЛЬЮ РАСШИРЕНИЯ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ФАРМАЦИИ

14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Пятигорск – 2011 Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный консультант: доктор фармацевтических наук, профессор Гаврилин Михаил Витальевич

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор Оганесян Эдуард Тоникович доктор фармацевтических наук, профессор Куркин Владимир Александрович доктор биологических наук, профессор Яковлев Геннадий Павлович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Росздрава»

Защита состоится « » _________ 2011 г. в 900 часов на заседании диссертационного совета Д 208.069.01 при ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава».

Автореферат разослан « » ___________ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Е.В. Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одним из важных направлений медицинской и фармацевтической науки является поиск новых источников биологически активных соединений (БАС) с целью дальнейшего расширения производства фитопрепаратов различного спектра действия, которые характеризуются эффективностью и малой токсичностью, что позволяет использовать их длительное время для профилактики и лечения многих заболеваний без риска возникновения побочных явлений. Не менее важно и то, что некоторые природные БАС пока не могут найти синтетических аналогов. Однако потребность населения в препаратах природного происхождения удовлетворяется не полностью, в частности, это происходит из-за дефицита лекарственного растительного сырья (ЛРС) [Каухова И.Е., 2006].

Многие лекарственные растения, применяемые отечественной традиционной медициной, уже давно не образуют промышленных зарослей, а некоторые являются редкими или исчезающими. Динамика ухудшения экологической обстановки, антропогенное воздействие на природные фитоценозы дикорастущих лекарственных видов также катастрофически сокращают их природные запасы. Рассматриваемая проблема актуальна и с позиций фармакоэкономики, т.к. для современного производства фитопрепаратов необходима гарантированная сырьевая база, которую в настоящее время, могут обеспечить растения, культура выращивания которых, хорошо развита, так как они имеют определенное значение в качестве сырья для пищевой промышленности.

Новый подход к использованию в фармации некоторых культивируемых пищевых растений имеет ряд неоспоримых преимуществ: во-первых, это достаточная сырьевая база (опыт культуры выращивания, селекция, сортовой отбор с повышенным содержанием действующих веществ, высокий уровень агротехники, возможность размещения посадочных площадей в наиболее благоприятных почвенно-климатических и экологических зонах и т.д.). Во-вторых – исследуемые растения являются пищевыми, а, следовательно, безвредными для организма человека.

Анализ литературных данных показал, что многие пряно-ароматические растения содержат ряд ценнейших веществ и обладают различной фармакологической активностью. Следует отметить, что многие из них такие, как куркума, имбирь, артишок, кунжут, момордика, пажитник и др., уже давно применяются в научной медицине многих стран и входят в их Фармакопеи (Европейская, США, Британская Травяная, Китайская и др.), что делает их приоритетными для включения в отечественную фармакопею [Смирнова Ю.А., Киселева Т.Л., 2009]. На основе их сырья создан целый ряд эффективных препаратов, однако в нашей стране из-за отсутствия соответствующих нормативных документов многие из них не используются в достаточной мере.

Литературные сведения о химическом составе изучаемого сырья нельзя считать полными, т.к. исследователей, как правило, интересовала та или иная группа химических соединений, имеющих пищевое значение, а не весь комплекс БАС, для некоторых видов сырья информация отсутствует, не указаны соединения, по которым следует проводить химическую стандартизацию сырья. За счет выявления новых групп БАС, более полной утилизации комплекса веществ из растительного сырья, можно расширить рамки использования не только новых видов сырья, но и уже официнального (плоды моркови дикой, семена кунжута восточного и пажитника сенного).

Актуальным является и совершенствование норм и контроля качества как исходного ЛРС, так и препаратов из него по основным группам БАС [Маркарян А.А., 2004] с привлечением наиболее современных и перспективных физикохимических методов. Проблема морфолого-анатомической диагностики растительного сырья для объективной оценки его подлинности, отличия от примесей и фальсификации также актуальна.

Фармакологические исследования по рассматриваемым видам сырья носят фрагментарный характер, так как проводились в отношении только некоторых групп БАС, большая часть данных имеет предварительное значение.

В настоящее время, в современной фармацевтической науке создалась противоречивая ситуация между необходимостью поиска новых источников природных БАС, существующими возможностями культивирования растений и отсутствием исследований, позволяющих внедрить в медицинскую практику новые растительные источники сырья. Все это приводит к выводу об актуальности полного фармакогностического изучения исследуемых видов растительного сырья как новых источников природных БАС.

Таким образом, изучение, освоение и использование культивируемых пищевых лекарственных растений открывает отчетливые перспективы для создания экономически выгодных, доступных, безопасных и терапевтически эффективных отечественных лекарственных препаратов, что, несомненно, совпадает с задачами, поставленными Российским правительством по развитию отечественной фармацевтической промышленности.

Цель работы. По итогам комплексного фитохимического изучения сырья культивируемых пищевых растений разработать научно-методическое обоснование их использования в качестве лекарственного растительного сырья и создания фитопрепаратов на их основе.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Проанализировать современное состояние исследований по биологическим, химическим и фармакологическим свойствам культивируемых ЛР, выделить и дать теоретическое обоснование необходимости и возможности их применения в медицинской практике.

2. Провести фитохимические исследования по группам биологически активных соединений: липиды, эфирные масла, углеводы, пептиды, полифенолы, а также макро- и микроэлементы.

3. Установить диагностические признаки ЛРС, разработать методики качественного и количественного определения БАС.

4. Обосновать показатели норм качества ЛРС и разработать нормативную документацию на лекарственное сырье наиболее перспективных растений и фитосубстанций на их основе.

5. Провести фармакологический скрининг наиболее перспективных фракций из растительного сырья.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. В результате проведенных исследований теоретически обоснована и экспериментально подтверждена целесообразность использования сырья культивируемых растений, имеющих пищевое значение: куркумы длинной, имбиря аптечного, моркови дикой, клоповника посевного, артишока колючего, пажитника сенного, момордики харантия, чернушки посевной, кунжута восточного, кмина тминового, перца однолетнего, полыни эстрагон в качестве источников ценных БАС, что доказывает перспективу расширения их использования в медицинской практике.

Впервые с помощью современных физико-химических методов (ВЭЖХ, ГЖХ, ГХ-МС, электрофореза и др.) проведено систематическое фитохимическое изучение основных групп биологически активных веществ (углеводов, липидов, пептидов, эфирных масел, фенольных соединений, сапонинов и др.).

Данные исследования показали значение различных классов соединений, что определяет развитие новых ресурсосберегающих технологий комплексного использования сырья при его промышленной переработке.

Среди углеводов исследуемых растительных объектов выделены и изучены: спирторастворимые углеводы, водорастворимые, кислые углеводы и гемицеллюлозы. Определен их качественный и количественный состав. Проведен анализ структурных особенностей пектинов. В результате проведенных исследований, впервые в качестве источников полисахаридов предложены новые виды сырья: околоплодник момордики харантия, корневища имбиря аптечного, корневища куркумы длинной, семена клоповника посевного, семена пажитника сенного, листья артишока колючего (технологический выход в пересчете на абсолютно сухое сырье данных видов составлял от 20 до 30 %).

Впервые изучен липидный комплекс семян пажитника сенного, момордики харантия, чернушки посевной, клоповника посевного, плодов моркови дикой, кмина тминового, корневищ имбиря аптечного и куркумы длинной с определением физико-химических показателей жирного масла, определением компонентного состава методом ГЖХ, ТСХ и ГХ-МС. В качестве промышленных источников жирного масла можно отнести семена чернушки посевной (содержание липидного комплекса составляет до 35 %), семена клоповника посевного (до 20 %) и плоды артишока колючего (до 20 %). Наиболее ценными по составу можно считать жирные масла семян пажитника сенного и момордики харантия, что предопределяет перспективу изучения их фармакологических свойств, как ранозаживляющих, гепатопротекторных и гиполипидемических средств.

Разработана методика экстракции пептидов из семян кунжута восточного, момордики харантия, клоповника посевного, чернушки посевной, пажитника сенного, полыни эстрагон, перца однолетнего, плодов кмина тминового, моркови дикой и артишока колючего, на основе которой получены пептидные экстракты и установлен их аминокислотный состав. В результате анализа пептидных фракций методом ВЭЖХ было определено количественное содержание каждого пептида и его молекулярная масса, что позволяет решать вопросы, связанные с идентификацией, контролем чистоты и количественным определением. Впервые из плодов кмина тминового, семян перца однолетнего, кунжута восточного получены биоактивные пептиды, установлена их фунгицидная и цитотоксическая активность.

Впервые проведено изучение с использованием метода ВЭЖХ фенольных соединений в образцах сырья: плоды моркови дикой, листья и плоды артишока колючего, семена пажитника сенного, корневища куркумы длинной и имбиря аптечного, семена и околоплодник момордики харантия, семена клоповника посевного. Всего в исследуемых объектах идентифицировали 30 соединений фенольной природы, относящихся к коричным кислотам, флавоноидам, фенологликозидам, фенолокислотам, кумаринам и дубильным веществам.

Установлено что, такие растительные объекты как: листья и плоды артишока колючего, семена пажитника сенного, корневища куркумы длинной, околоплодник момордики харантия и семена клоповника посевного нужно рассматривать как лекарственное растительное сырье, в котором гидроксикоричные кислоты могут выступать в роли индикаторных компонентов, что предопределяет перспективу их медицинского использования и вопросы стандартизации сырья. В свою очередь, как источник флавоноидов можно рассматривать такие растительные объекты как: семена клоповника посевного, пажитника сенного, плоды моркови дикой и листья артишока колючего, как источники кумаринов – плоды моркови дикой, семена пажитника сенного, околоплодник момордики харантия, фенолокислот – плоды моркови дикой и артишока колючего, семена клоповника посевного и пажитника сенного, корневища куркумы длинной и имбиря аптечного.

Определен химический состав изучаемых образцов эфирного масса методом ГХ-МС: в эфирном масле корневищ имбиря аптечного идентифицированы 29 веществ; корневищ куркумы длинной идентифицированы 25 веществ; плодов моркови дикой – 18; семян чернушки посевной – 7; плодов кмина тминового из Узбекистана – 15, а из Марокко – 16 компонентов. Общее количество идентифицированных веществ составляло от 93 до 100 %. Изученные образцы эфирного масла отличались от литературных данных, как по составу, так и по количеству идентифицированных компонентов, в связи, с чем доказано, что проводить стандартизацию сырья, особенно имбиря аптечного, куркумы длинной и моркови дикой только по показателю «Эфирное масло» недостаточно.

Впервые проведены систематические исследования накопления куркуминоидов в корневищах куркумы длинной и кумаринов в плодах моркови дикой, выделенных из различных образцов сырья, которые послужили основой для разработки единых подходов к обнаружению данных соединений в ЛРС и решению проблемы стандартизации по группам БАС, наиболее стабильных в химическом отношении и привносящих наибольший вклад в биологическую активность суммарных препаратов.

В результате впервые предложены новые методики оценки качества корневищ куркумы длинной, позволяющая достоверно устанавливать содержание куркуминоидов при помощи объективного метода ВЭЖХ и новая методика оценки качества плодов моркови дикой по содержанию кумаринов спектрофотометрическим методом.

На основании морфолого-анатомического исследования уточнены морфологические и выявлены диагностически значимые анатомические признаки, позволяющие проводить диагностику ЛРС: корневищ куркумы длинной (цельное сырье, измельченное, порошок), корневищ имбиря аптечного (цельное сырье, измельченное, порошок), плодов моркови дикой (цельное сырье и порошок), плодов кмина тминового (цельное сырье), семян пажитника сенного (цельное сырье), семян клоповника посевного (цельное сырье), плодов момордики харантия (цельное сырье), плодов артишока колючего (цельное сырье).

Микродиагностические признаки плодов кмина тминового, момордики харантия, артишока колючего и семян клоповника посевного описаны впервые.

Впервые проведены фармакологические скрининговые исследования стандартизированных фитосубстанций на основе исследуемых видов сырья, позволяющие их рекомендовать для получения новых фитопрепаратов, обладающих отхаркивающим, гепатопротекторным, гипохолестеринемическим, антиоксидантным, антибактериальным и гипогликемическим действием.

На основании изучения данных литературы, химического состава и фармакологической активности исследуемых видов растительного сырья предложены научно-методические подходы к обоснованию использования сырья пищевых растений как источников новых лекарственных средств.

Практическая значимость работы. В результате фитохимического и фармакологического исследования доказана возможность и перспективность использования ряда пищевых растений в качестве новых источников биологически активных соединений, создания фитопрепаратов на основе различных групп БАС изученных растений.

Предложены новые виды ЛРС для включения в Государственную фармакопею России XII издания: корневища куркумы длинной, корневища имбиря аптечного, семена пажитника сенного, плоды моркови дикой, листья артишока колючего.

Впервые установлены нормы качества сырья: корневищ куркумы длинной, корневищ имбиря аптечного, плодов моркови дикой, листьев артишока колючего, семян пажитника сенного, которые легли в основу нормативной документации (ФС и ФСП).

Разработан унифицированный подход к стандартизации: корневищ куркумы длинной, корневищ имбиря аптечного, плодов моркови дикой, листьев артишока колючего свежих, семян пажитника сенного в соответствии с современными требованиями и группой действующих БАС, которые включены в современную нормативную документацию (НД).

Для НД и оценки качества сырья, на основании проведенных фитохимических исследований разработаны и предложены методики ТСХ-анализа для корневищ куркумы длинной (куркуминоиды); семян клоповника посевного (кумарины); семян пажитника сенного (диосцин, диосгенин).

Разработаны методики количественного определения: куркуминоидов в корневищах куркумы длинной (спектрофотометрия и ВЭЖХ); кумаринов в плодах моркови дикой (спектрофотометрия); суммы гидроксикоричных кислот (в пересчете на кофейную кислоту) в листьях артишока колючего (спектрофотометрия); суммы фенольных соединений (в пересчете на хлорогеновую кислоту) в семенах клоповника посевного (спектрофотометрия); суммы фенольных соединений (в пересчете на 6-гингерол) в корневищах имбиря аптечного (спектрофотометрия); определения диосгенина и суммы фурастаноловых гликозидов в семенах пажитника сенного (спектрофотометрия).

Для определения куркуминоидов в корневищах куркумы длинной и кумаринов в плодах моркови дикой установлены валидационные характеристики (по параметрам специфичность, линейность, предел количественного определения, точность, прецизионность, уровень систематической погрешности).

Теоретически и экспериментально доказана целесообразность использования новых видов ЛРС: плоды момордики харантия, семена клоповника посевного, семена полыни эстрагон, семена перца однолетнего, семена чернушки посевной, плоды артишока колючего, плоды кмина тминового и семена перца однолетнего для применения в медицинской практике.

Показана возможность использования исследуемых видов растительного сырья в комплексных малоотходных технологиях получения современных лекарственных фитопрепаратов.

Материалы внедрения. На основании проведенных исследований разработаны НД для включения в Государственную фармакопею России XII издания:

1. Фармакопейные статьи (ФС) «Куркумы длинной корневища» и «Моркови дикой плоды» (находятся на экспертизе в ФГУ «НЦ ЭСМП»);

2. Фармакопейная статья предприятия (ФСП) «Моркови дикой плодов экстракт жидкий» (Регистрационное удостоверение ЛРС – 005939/09-210709);

3. Фармакопейная статья (ФС) «Имбиря аптечного корневища» (подготовлена к рассмотрению);

4. Проекты ФСП «Артишока колючего листья» и «Пажитника сенного семена».

Результаты диссертационной работы включены в монографию Т.В. Орловской, М.В. Гаврилина, В.А. Челомбитько «Новый взгляд на пищевые растения, как перспективные источники лекарственных средств».

Разработан «Способ количественного определения восстанавливающих сахаров» (патент № 2403566).

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Теоретическое обоснование необходимости и возможности использования новых сырьевых источников на основании изучения химического состава и фармакологической активности в научной медицине.

2. Результаты изучения химического состава исследуемых объектов.

3. Обоснование норм качества некоторых видов ЛРС.

4. Результаты скрининговых фармакологических исследований.

5. Научно-методическое обоснование использования сырья пищевых растений, как источников новых лекарственных средств.

Апробация работы. Материалы исследования доложены и обсуждены на различных региональных, Всероссийских и международных конференциях, в том числе на Международной научно-практической конференции «Потребительский рынок: качество и безопасность товаров и услуг» (Орел, 2001 г.), на XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 20г.), на VII Интернациональном симпозиуме по химии природных соединений (Республика Узбекистан, г. Ташкент, 2007 г.) на I Международной научнопрактической конференции «Инновационные технологии в пищевой промышленности» (Пятигорск, 2008 г.), на региональных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2010, 2011 гг.).

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научноисследовательских работ ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава» по комплексной теме: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (№ Гос. регистрации 01200906461).

Публикации. Основные положения отражены в 40 научных работах, в том числе 1 патента РФ на изобретение, 18 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертаций на соискание ученой степени доктора наук.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 358 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы «Объекты и методы исследования» (2 глава), экспериментальной части (3, 4, 5 главы), общих выводов, списка литературы и приложения. В тексте содержится 80 таблиц, 122 рисунка. Список цитируемой литературы, включает 580 источников, из них – 253 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследований. В основу скринингового отбора объектов исследования положен принцип современных информационных ресурсосберегающих технологий [Смирнова Ю.А., 2009]: анализ данных литературы о применении растений в научной и народной медицине, рынка пищевого сырья в РФ, сведений о химическом составе, сырьевой базы и биологической активности (рис. 1). На первом этапе изучили номенклатуру ЛРС, применявшегося ранее в России и включенного в настоящее время в зарубежные фармакопеи. Факт включения объекта в нормативный документ такого уровня предполагает наличие достоверных сведений об эффективности его применения в медицине. Затем провели оценку сырьевой базы, учитывая несколько позиций:

доступность на российском рынке в качестве пищевого сырья, возможной интродукции растений в условиях России и развитие промышленной культуры, как в России, так и за рубежом. Анализ степени изученности химического состава и проблем стандартизации позволил сформулировать необходимость комплексного подхода к фитохимическому изучению растительного сырья, что определяет экономический фактор целесообразности его использования и установления достоверных показателей качества. Расширение номенклатуры ЛРС возможно также за счет видов длительно применявшихся в народной медицине и имеющих пищевую ценность наряду с лекарственной, либо широко используемых в качестве БАД. Актуальным является и изучение растительных объектов с доказанной экспериментально и клинически фармакологической активность особенно в отношении лечения социально значимых заболеваний (сахарный диабет, злокачественные новообразования и др.).

В результате научно-методического подхода к выбору растений, как возможных источников лекарственных средств, выделили наиболее перспективные для дальнейшего исследования.

Объектами изучения служили промышленные образцы растительного сырья, полученные от фирм-изготовителей, которые имели соответствующие сертификаты качества и безопасности на выпускаемую продукцию, документы о регистрации растительного сырья на территории РФ, что гарантирует стандартную процедуру получения сырья. Качество и безопасность растительного сырья соответствовали гигиеническим нормативам, установленным СанПиН 2.3.2.560-96 «Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов».

Фитохимические исследования проводились с использованием современных физико-химических методов: хроматография колоночная (КХ), тонкослойная (ТСХ), бумажная (БХ), газожидкостная (ГЖХ), газожидкостная хроматомасс-спектрометрия (ГХ-МС), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), электрофорез, спектрофотометрия в УФ, видимой и ИК- областях, атомно-абсорбционная спектроскопия (ААС) и др.

Скриниговые микробиологические и фармакологические исследования включали изучение антибактериальной, фунгицидной, цитотоксической, отхаркивающей, гепатопротекторной, гипогликемической, гипохолестеринемической, антиоксидантной, ферментной, ранозаживляющей активностей.

Анализ нормативных документов момордика куркума длинная артишок колючий кунжут восточный перец однолетний пажитник сенной имбирь аптечный харантия Ph. Eur, DAB, BР, Ph. Fr, ГФ КНР, JP, Ph. Eur, DAB, BР, Ph. Eur, DAB, BР, JP, Ph. Eur, DAB, BР, BHP, Ph. Eur, DAB, BР, BHP, USPОГФ I-VIII NF, Ph. Fr, JP, ОГФ I-IV Ph. Fr, ГФ КНР, ОГФ I-II ОГФ I-III Ph. Fr, BHP USP-NF, ОГФ IV-VIII ГФ КНР Виды растений с доказанной возможностью интродукции в условиях РФ артишок момордика пажитник клоповник чернушка кунжут клоповник перец полынь морковь колючий харантия сенной посевной посевная восточный посевной однолетний эстрагон дикая Виды растений широко культивируемых в мировой практике, имеющих коммерческую значимость артишок куркума имбирь чернушка морковь кунжут пажитник кмин клоповник колючий длинная аптечный посевная дикая восточный сенной тминовый посевной Растения, имеющие актуальное фармакотерапевтическое действие артишок имбирь кунжут куркума пажитник морковь момордика чернушка клоповник кмин харантия колючий аптечный восточный длинная сенной дикая посевная посевной тминовый Перспективные объекты для исследования Curcuma Trigonella Cynara Lepidium Nigella Momordica Zingiber Daucus Cuminum Sesamum Artemisia Capsicum longa officinale foenum- scolymus sativum sativa charantia carota cyminum orientale dracunculus annuum сем.

сем. сем. graecum сем. сем. сем.

сем. сем. сем. сем. сем.

Zingibe- Zingibe- Astera- Brassica- Ranuncu- Cucurbitaсем.

Apiaceae Apiaceae Pedaliaceae Asteraceae Solanaceae raceae ceae raceae Fabaceae ceae laceae ceae Рисунок 1 – Схема информационного поиска перспективных объектов исследования (BHP – Британская Травяная Фармакопея 1996 г.; ВР – Британская Фармакопея 2009 г.; DAB – Немецкая фармакопея 2008 г.; JP – Фармакопея Японии XV изд.; Ph. Eur. – Европейская фармакопея 2009 г.; ГФ КНР – Государственная фармакопея Китайской народной республики VII изд.; USP-NF – Фармакопея США; Ph. Fr. – Французская фармакопея X изд.; ОГФ – отечественная государственная фармакопея) ИССЛЕДОВАНИЕ ОСНОВНЫХ ГРУПП БАС Исследование углеводов Используя различную растворимость углеводов в полярных и неполярных растворителях в зависимости от природы, степени полимеризации и физико-химических свойств, выделены углеводные фракции: спирторастворимые углеводные фракции; растворимые в холодной воде углеводы; растворимые в горячей воде углеводы; кислые углеводы; гемицеллюлозы А и Б (щелочные углеводы). Представленные данные позволяют считать наиболее богатыми углеводами (более 20 %) следующие растительные источники: момордика харантия (околоплодник), имбирь аптечный (корневища), пажитник сенной (семена), клоповник посевной (семена), артишок колючий (листья), куркума длинная (корневища) (табл.1).

Методом ГЖХ изучен качественный и количественный состав полисахаридных комплексов исследуемых видов сырья. Установлено, что в составе различных углеводных фракций преимущественно содержатся глюкоза, галактоза, арабиноза; в качестве минорных моносахаридов присутствуют рамноза, ксилоза, манноза. С учетом количественного соотношения моносахаридов содержащиеся остатки чаще всего представляют собой глюкогалактаны, глюкоарабаны, арабиногалактаны. Накопление указанных компонентов, особенно глюкозы, галактозы, арабинозы, предопределяет перспективность фармацевтического использования соответствующих фракций углеводов.

Учитывая перспективность фармацевтического использования пектинов, была поставлена задача – исследовать наиболее важные характеристики пектинов (рН 1 % водных растворов, содержание свободных и этерифицированных карбоксильных групп, полигалактуроновой кислоты) для оценки функциональных свойств (табл. 2).

Высокое содержание свободных карбоксильных групп пектинов до 47 % (исчисление от молярной массы полимера), выделенных из корневищ имбиря аптечного, околоплодника момордики харантия, а также из семян кунжута восточного, чернушки посевной, момордики харантия и листьев артишока колючего, делает перспективными данные растительные объекты для выделения пектинов с выраженными сорбционными свойствами, особенно в отношении ионов токсичных и тяжелых металлов.

Таблица 1 – Результаты определения суммы углеводных фракций, % к сырью, n=Спирторас- Растворимые в Растворимые в Растительные Кислые Гемицелтворимые холодной воде горячей воде Итого объекты углеводы люлозы углеводы углеводы углеводы Морковь дикая — 1,61±0,21 0,25±0,15 1,19±0,16 0,54±0,15 3,59±0,(плоды) Момордика харантия:

6,02±1,25 0,54±0,15 1,26±0,28 1,24±0,31 4,06±1,56 13,12±0,семена 9,31±2,32 12,72±2,46 2,13±0,75 2,73±0,54 2,68±0,52 29,57±1,околоплодник Имбирь аптечный 3,34±1,05 5,33±1,15 9,62±2,42 5,66±1,23 5,41±1,65 29,36±1,(корневища) Куркума длинная — — 2,72±0,45 1,43±0,16 17,41±3,56 21,56±1,(корневища) Клоповник посевной 8,78±2,31 5,44±1,42 1,78±0,34 2,74±0,12 4,58±1,08 23,32±1,(семена) Чернушка посевная 2,31±0,58 1,07±0,15 1,34±0,15 3,18±0,12 3,24±0,15 11,14±0,(семена) Кунжут восточный 1,42±0,51 1,05±0,45 0,29±0,09 3,62±0,75 6,15±1,75 12,53±0,(семена) Пажитник сенной — — 7,82±2,34 8,41±2,85 11,93±3,57 28,16±2,(семена) Артишок колючий:

11,34±2,34 5,11±1,12 0,78±0,15 2,41±0,57 2,63±0,43 22,27±0,листья — 0,12±0,05 0,36±0,05 0,56±0,05 7,73±1,10 8,77±0,плоды Кмин тминовый плоды — 0,44±0,01 1,16±0,17 0,48±0,01 2,06±0,12 4,14±0,образцы: Узбекистан — 0,25±0,05 0,25±0,05 0,42±0,15 0,89±0,18 1,81±0, Марокко Высокая степень этерификации карбоксильных групп пектинов, полученных из плодов моркови дикой и кмина тминового, корневищ куркумы длинной, семян момордики харантия, листьев и плодов артишока колючего (4088 %), является основанием для рекомендации данных пектинов к использованию в качестве вспомогательных веществ при приготовлении лекарственных форм: гелеобразователей, загустителей, стабилизаторов и др.

Таблица 2 – Физико-химические характеристики пектинов содержащихся в углеводных фракциях исследуемых растений, n=Содержание Расти- Содержание Степень рН 1 % этерифициротельный свободных этерифиСырье водных ванных источник карбоксильных кации, растворов карбоксильных пектинов групп, % % групп, % Морковь плоды 3,61±0,18 2,7±0,2 19,8±1,0 88,0±4,дикая семена 3,42±0,17 12,2±0,5 9,7±0,5 44,3±2,Момордика околохарантия 3,28±0,16 27,1±1,3 9,4±0,5 25,8±1,плодник Имбирь корне3,12±0,14 46,8±2,2 1,1±0,1 2,3±0,вища аптечный Куркума корне3,61±0,17 2,3±0,2 3,2±0,2 58,2±2,вища длинная Клоповник семена 3,21±0,15 10,1±0,4 2,8±0,3 21,7±1,посевной Чернушка семена 3,39±0,17 14,4±0,7 4,5±0,2 23,8±1,посевная Кунжут семена 3,35±0,17 16,2±0,8 9,9±0,5 37,9±1,восточный Пажитник семена 3,52±0,16 6,4±0,9 2,9±0,6 31,18±2,сенной листья 3,50±0,16 5,0±0,3 4,5±0,2 47,4±2,Артишок колючий:

плоды 3,42±0,17 12,2±0,6 8,3±0,4 40,5±2,Кмин тминовый 3,57±0,16 4,1±0,2 3,2±0,2 43,8±2,плоды Узбекистан 3,58±0,15 3,2±0,2 2,2±0,2 40,7±2,Марокко Для анализа пектинов использован метод спектрофотометрии по реакции взаимодействия с карбазолом (табл. 3). Как видно из представленных данных, выраженным накоплением галактуроновой кислоты характеризуются углеводные фракции, полученные из семян пажитника сенного, плодов кмина тминового, плодов артишока колючего, корневищ куркумы длинной, семян кунжута восточного. Причем, первые четыре из перечисленных пектинов сопоставимы по анализируемому показателю с известными промышленными пектинами – цитрусовым и яблочным.

Таблица 3 – Результаты количественного определения полигалактуроновой кислоты в углеводных фракциях по реакции взаимодействия с карбазолом, n=Растительный Содержание источник Сырье полигалактуроновой кислоты, пектина % к фракции углеводов семена Пажитник сенной 65,4±3,плоды Кмин тминовый 60,1±3,плоды Артишок колючий 53,2±2,корневища Куркума длинная 52,2±2,семена Кунжут восточный 40,9±2,семена Клоповник посевной 30,2±1,семена Чернушка посевная 29,3±1,плоды Морковь дикая 21,6±1,семена Момордика харантия 20,1±1,корневища Имбирь аптечный 19,7±0,околоплодник Момордика харантия 18,4±0,листья Артишок колючий 18,2±1,Исследование липидов Жирное масло получали классическими методами Сокслета и Фолча (табл. 4). Такие объекты как семена чернушки посевной, семена клоповника посевного и плоды артишока колючего могут быть отнесены к «масличному» сырью (содержание жирного масла более 18 %), что в свою очередь, позволит для данных объектов использовать не только экстракционные методы выделения, но и метод прессования.

Для идентификации масла и контроля отсутствия в нем посторонних примесей использовали метод ГЖХ. По набору и количеству эссенциальных жирных кислот отличаются масла, полученные из семян чернушки посевной (55,2 %), клоповника посевного (41,5 %), плодов артишока колючего (37,8 %) и корневищ имбиря аптечного (39,9 %). Во всех исследованных образцах масел преобладали ненасыщенные жирные кислоты от 58,1- 95,0 %. Значительным количеством насыщенных жирных кислот отличались масла семян момордики харантия 36,0 % и корневищ имбиря аптечного 41,9 %. Доминирующее количество олеиновой кислоты обнаружено в масле плодов кмина тминового 61,2-70,% и плодов моркови дикой – 61,3 %.

Установленные методом ГЖХ параметры исследованных жирных масел позволяют проводить их идентификацию и предлагать ГЖХ анализ в качестве унифицированного метода стандартизации данных растительных объектов.

Хлороформно-метанольный экстракт колоночной хроматографией разделяли на нейтральные (НЛ), гликолипиды (ГЛ) и фосфолипиды (ФЛ). Содержание каждой группы устанавливали гравиметрически после удаления растворителя. Содержанием ФЛ отличались плоды моркови дикой и плоды артишока колючего, а ГЛ – семена чернушки посевной и плоды артишока колючего, а особенно семена момордики харантия (табл. 4).

Таблица 4 – Фракционный состав липидного комплекса изучаемых объектов Содержание, Выход, % к сырью Наименование % от общей массы сырья Б Х/М НЛ ГЛ ФЛ Семена пажитника сенного 7,67±1,13 8,05±2,09 64,5±3,6 28,2±2,3 7,3±1,Семена момордики харантия 10,04±2,51 12,68±2,85 35,4±2,2 57,4±3,1 7,2±1,Плоды артишока колючего 16,34±3,05 24,09±3,85 44,2±2,0 30,9±2,3 24,9±2,Семена чернушки посевной 36,01±4,58 37,01±3,95 53,0±2,3 37,2±2,3 9,8±1,Семена клоповника посевного 17,95±3,15 21,56±3,05 62,6±3,0 20,8±2,0 16,6±1,Плоды моркови дикой 12,24±2,38 15,64±3,54 58,5±3,1 17,8±1,2 23,7±2,Корневища имбиря аптечного 7,93±2,31 10,29±2,85 75,0±3,5 17,9±1,6 10,1±1,Плоды кмина тминового 9,52±2,35 14,23±2,12 66,4±3,8 20,5±2,0 13,1±1,Примечание: экстрагент Б – бензин «Нефракс», Х/М – хлороформ - метанол (2:1) В результате изучения хлороформно-метанольной фракции методами газожидкостной хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) установлено, что наиболее многообразными по количеству идентифицированных компонентов являются масла:

корневищ имбиря аптечного (идентифицировано 19 компонентов, среди которых специфические для данного растения вещества: куркумен – 6,08 % и зингиболен – 6,55 % и остатки фосфолипидов);

семян чернушки посевной (идентифицировано 36 компонентов, помимо жирных кислот, присутствуют ретинолы, токоферолы, ситостерины);

семян клоповника посевного (триглицериды состоят из кислот: олеиновой – 25,55 % и линолевой – 20,63 %, из 24 идентифицированных соединений, интерес в плане фармакологического действия масла представляют фосфолипиды и гликолипиды);

плодов кмина тминового (компонентный состав жирного масла представлен 24 соединениями, из жирных кислот доминирует линолевая – 24,56 %, заслуживают внимания, содержащиеся в нем фосфолипиды, стерины и их производные, токоферол и ретинол).

В масле плодов артишока колючего идентифицирована редкая вакценовая кислота (3,3 %), которая для данного вида сырья может являться маркерной.

Наиболее ценными по составу можно считать жирные масла семян пажитника сенного (в жирном масле присутствуют составляющие фосфо- и гликолипидов, ксантины, а из жирных кислот превалирует олеиновая кислота – 17,17 %) и момордики харантия (компонентный состав липидов доказывает высокое содержание в них фракции гликолипидов от 54 до 60 %), что предопределяет перспективу изучения их фармакологических свойств, как ранозаживляющих средств.

Таким образом, изучен компонентный состав 8 образов жирного масла исследуемых растительных объектов методам ГХ-МС, который позволил идентифицировать не только жирнокислотный состав, но и сопутствующие фосфо-, гликолипиды, стерины, ретинолы, токоферолы и др. БАС.

Исследование пептидов Количественное содержание суммарного белка в исследуемых образцах, определяли методом Кьельдаля (табл. 5). Полученные данные свидетельствуют о высоком содержании белков во всех исследованных образцах (8,12-25,93 %), однако околоплодник момордики харантия, корневища куркумы длинной и имбиря аптечного, листья артишока колючего не перспективны в плане изучения пептидной фракции, ввиду низкого содержания общего белка (менее 15 %).

На первоначальном этапе исследовалась эффективность экстракции катионных пептидов из семян различными минеральными и органическими кислотами, 60 % водным ацетоном, буферами с различной ионной силой. Установлено, что наибольшая полнота извлечения пептидов из измельченных и обезжиренных семян достигалась 0,05 М раствором уксусной кислоты.

Все пептидные экстракты, полученные по разработанной методике, охарактеризованы методом аминокислотного анализа. Данная методика позволяет получать пептидные экстракты с воспроизводимым компонентным составом.

Как следует из результатов исследования, аминокислотный состав пептидных экстрактов представлен всеми незаменимыми аминокислотами, в различном количественном соотношении и отличается сбалансированностью по заменимым аминокислотам. В обогащенной пептидами фракции наибольшее содержание азотсодержащих веществ находится в экстрактах семян полыни эстрагон, чернушки посевной, моркови дикой, перца однолетнего (более 40 %).

Количественное определение пептидов в анализируемых образцах сырья проводили спектрофотометрическим методом (метод Каар-Каля, табл. 5).

Таблица 5 – Содержание белка и пептидов в исследуемых образцах, n=Наименование растения: сырье Выход белка, % Выход пептидов, % Кунжут восточный: семена 22,68±2,21 1,02±0,Кмин тминовый: плоды 15,73±1,31 1,44±0,Момордика харантия: семена 22,85±3,13 2,20±0,Момордика харантия: околоплодник 12,32±1,24 — Клоповник посевной: семена 23,02±2,71 1,68±0,Чернушка посевная: семена 19,43±1,02 0,86±0,Пажитник сенной: семена 25,76±2,75 3,60±0,Артишок колючий: плоды 19,95±1,55 1,22±0,Артишок колючий: листья 11,63±2,05 — Морковь дикая: плоды 25,93±2,01 1,88±0,Полынь эстрагон: семена 24,78±2,01 1,34±0,Имбирь аптечный: корневища 10,24±1,06 — Куркума длинная: корневища 8,12±1,07 — Перец однолетний: семена 28,65±3,12 5,68±0,Из данных таблицы следует, что содержание пептидного комплекса в анализируемых образцах сырья составляет в среднем от 0,86 до 5,68 %, что в свою очередь позволяет предположить перспективность их дальнейшего изучения.

Диализованные экстракты пептидных комплексов исследовали методом гель-электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) для определения гомогенности и молекулярных масс пептидов которые варьировали в каждом образце от 67 000 Да до 36-35 Да. Низкомолекулярные пептиды от 250 кДа до 11 кДа зафиксированы в образцах, полученных из семян кунжута восточного, клоповника посевного, пажитника сенного, чернушки посевной, перца однолетнего и плодах артишока колючего (рис. 2).

1 2 3 4 5 6 7 8 9 Рисунок 2 – Электрофореграмма пептидов:

мар – белки-маркеры, 1 – кунжута восточного, 2 – кмина тминового, 3 – момордики харантия, 4 – клоповника посевного, 5 – перца однолетнего, 6 – чернушки посевной, 7 – пажитника сенного, 8 – артишока колючего, 9 – моркови дикой, 10 – полыни эстрагон В последние годы для разделения смесей пептидов очень широко применяется метод ОФ-ВЭЖХ, который предполагает предварительную обработку пептидов ферментами для их энзиматического распада, но процесс данной стадии зависит от многих условий (температура проведения реакции, качество ферментов, индивидуальные свойства пептидов, время реакции), что весьма трудно воспроизвести с точностью при нескольких повторных опытах. Мы в своих исследованиях использовали более современный, воспроизводимый и точный метод эксклюзионной ВЭЖХ. Данный метод является разработкой сотрудников лаборатории пептидов Института химии природных соединений.

На примере изучения пептидов плодов артишока колючего методами электрофореза (рис. 2) и ВЭЖХ (рис. 3) видно, что разделение пептидного экстракта проходит идентично, но в результате анализа пептидных фракций методом ВЭЖХ не только уточнена молекулярная масса каждого пептида, но и определено их количественное содержание, что позволяет решать вопросы, связанные с идентификацией, контролем чистоты и количественным определением.

Norm.

min 5 10 15 20 Рисунок 3 – Хроматограмма ВЭЖХ пептидов плодов артишока колючего По литературным данным известно, что пептиды, содержащиеся в семенах, имеют катионную природу и проявляют выраженную антимикробную и фунгицидную активности. Такие пептиды могут послужить альтернативой антибиотикам, к которым у ряда патогенов выработалась резистентность.

Поэтому для получения катионных пептидов полученные экстракты из семян перца однолетнего, кунжута восточного и чернушки посевной, плодов кмина тминового и моркови дикой разделяли с помощь ионообменной хроматографии, полученные активные пептидные фракции после диализа лиофильно высушивали и использовали для дальнейшего анализа методом гельэлектрофореза в ПААГ и ВЭЖХ.

В результате их экстракта семян перца однолетнего выделили 2 фракции (рис. 4).

Полученные фракции были исследованы методами гель-электрофореза (рис. 5) и ВЭЖХ (рис. 6). Анализ фракций показал, что экстракт и выделенные фракции содержат в своем составе низкомолекулярные белки порядка 6-10 кДа.

6753343604581512260,0,0,0,0,0,0,0 10 20 30 40 50 60 70 № пробирки Рисунок 4 – Результаты изучения пептидного экстракта семян перца однолетнего методом ионнообменной хроматографии кДа 12.3 4 5 1 Рисунок 5 – Электрофореграмма пептидов семян перца однолетнего:

1 – цитохром – 12,4 кДa; 2 – смесь маркеров (фосфорилаза В – 97 кДa, альбумин – 68 кДa, карбонангидраза – 29 кДa), 3 – пептидный экстракт, 4 – I фракция; 5 – II фракция; 6 – III фракция Рисунок 6 – ВЭЖХ анализ фракции II пептидного экстракта семян перца однолетнего Пептидный экстракт плодов кмина тминового состоял из одной фракции, содержащий белок с молекулярной массой порядка 10 кДа.

Из экстракта семян кунжута восточного получено 4 фракции, которые проанализированы методом электрофореза в градиенте 10-15 % ПААГ (рис. 7).

кДа 1 5 2 Рисунок 7 – Электрофореграмма пептидных фракций семян кунжута восточного:

1 – смесь белков-маркеров (карбонангидраза – 29 кДа;

цитохром С – 12,4 кДа), 2 – пептидный экстракт, 3 – фракция I, 4 – фракция II, 5 – фракция III, 6 – фракция IV Все фракции пептидов семян кунжута восточного содержат низкомолекулярные пептиды с относительной молекулярной массой 5-10 кДа.

Анализ суммарного белкового экстракта плодов моркови дикой показал, что он содержит большое количество низкомолекулярных пептидов с молекулярным весом в пределах 2,5-8 кДа. После его разделения на колонке с Сефадексом G-15 получили три фракции. Далее фракция 1 была разделена ионообменной хроматографией на колонке с КМ-TSK-650 M. В результате получены две пептидные фракции с молекулярной массой в пределах 9-10 кДа.

После разделения ионообменной хроматографией пептидного экстракта из семян чернушки посевной получено 3 фракции. Содержание пептидов в полученных фракциях анализировали электрофоретическим методом, который показал наличие пептидов с молекулярной массой порядка 5-10 кДа во второй и третьей фракции.

Исходя из литературных данных, можно предположить, что пептиды с молекулярной массой 2-5 кДа относятся к классу дефензинов, а с М.м. около кДа – к так называемым липидпереносящим белкам и соответствует данным для известных антимикробных пепетидов. Следует отметить, что результаты изучения пептидов из плодов моркови дикой и семян чернушки посевной, заготовленных от растений, выращенных в России сопоставимы с ранее полученными данными из образцов сырья, выращенных в Узбекистане, что косвенно доказывает устойчивость пептидного состава [Ю.И. Ощепкова, 2009, A.Yili, 2007].

Таким образом, из пептидных экстрактов, полученных из семян перца однолетнего, кунжута восточного, чернушки посевной, плодов кмина тминового и моркови дикой с помощь ионообменной хроматографии и гель-электрофореза выделили и охарактеризовали биоактивные пептиды.

Все пептидные фракции были протестированы на фунгицидную и противоопухолевую активность, в аккредитованной лаборатории Института биоорганической химии им. А.С. Садыкова АН РУз (Республика Узбекистан, г. Ташкент).

Биологическую активность пептидных экстрактов и фракций, полученных после разделения на СМ-TSK геле, проверяли на фунгитоксичность на культуре патогенных штаммов № 108 гриба Verticillium dahlia турбидиметрическим микропланшетным методом.

Таблица 6 – Фунгицидная и цитотоксическая активность пептидных фракций Цитотоксичность, % Фунгитоксичность Фракции подавления включения IC мкг/мл Н3-тимидина Экстракт перца овощного 79 33,Фракция П-1 70 10,Экстракт кунжута восточного 60 2,Фракция К-2 37 1,Фракция К-3 30 2,Фракция К-4 39 Экстракт кмина тминового 64 1,Экстракт чернушки посевной 65 95,Фракция Ч-1 41 39,Фракция Ч-2 58 96,Фракция Ч-3 18 42,Экстракт моркови дикой 60 21,Фракция М-1 16 10,Фракция М-2 25 5,Примечание: IC50 – концентрация пептидов, вызывающих 50 % подавление роста гриба Как следует из полученных данных, наибольшей фунгицидной активностью обладают пептидные экстракты кунжута восточного и моркови дикой и их отдельные компоненты их фунгицидная активность возрастает в 2-3 раза. Некоторая разница в активности различных фракций, по-видимому, связана с загрязнениями или возможной другой природой пептидов, что приводит к относительно более низкой величине фунгицидной активности между фракциями (табл. 6).

Действие полученных фракций и индивидуальных пептидов на пролиферативную активность клеток меланомы мышей КМЛ в культуре тканей оценивалось в цитотоксическом тесте по включению Н3-тимидина в ДНК опухолевых клеток. Рост меланомы мышей под действием исследуемых белков в концентрации 100 мкг/мл in vitro подавляется (табл. 6).

Выраженная цитотоксическая активность пептидов чернушки посевной делает их перспективными для дальнейшего углубленного изучения противоопухолевой активности на различных видах опухолей в тестах, как in vitro, так и in vivo.

Исследование эфирных масел Несмотря на то, что в химическом отношении наиболее изученной группой БАС (по данным литературы) являются эфирные масла (особенно имбиря аптечного, куркумы длинной и моркови дикой) в теоретическом плане всегда представляет интерес их исследование и сравнение с данными литературы, так как эта группа БАС является одной из самых лабильных по составу в зависимости от многих факторов. Это необходимо учитывать, также и потому, что фармакологическая активность может изменяться в зависимости от компонентного состава. Поэтому определен химический состав изучаемых образцов эфирного масса методом ГХ-МС: в эфирном масле корневищ имбиря аптечного идентифицированы 29 веществ; в эфирном масле корневищ куркумы длинной идентифицированы 25 веществ; в эфирном масле плодов моркови дикой идентифицировали 18 химических компонентов; в эфирном масле семян чернушки посевной идентифицировано 7 компонентов; в эфирном масле плодов кмина тминового из Узбекистана – 15, а из Марокко – 16 компонентов. Общее количество идентифицированных компонентов составляло от 93 до 100 %.

Данный фрагмент работы, показал, что изученные нами образцы эфирного масла отличались от описанных в литературе образцов, как по составу, так и по количеству идентифицированных компонентов. В связи, с этим можно сказать, что проводить стандартизацию сырья, особенно имбиря аптечного, куркумы длинной и моркови дикой только по показателю «Эфирное масло» нецелесообразно.

Исследование фенольных соединений С использованием метода ВЭЖХ определено относительное содержание отдельных идентифицированных фенольных веществ (табл. 7).

В результате проведенных исследований можно констатировать тот факт, что, такие растительные объекты как: листья и плоды артишока колючего, семена пажитника сенного, корневища куркумы длинной, околоплодник момордики харантия и семена клоповника посевного нужно рассматривать как лекарственное растительное сырье, в котором гидроксикоричные кислоты могут выступать в роли индикаторных компонентов и являться их источниками, что в свою очередь предопределяет перспективу их медицинского использования и вопросы стандартизации сырья. В свою очередь, как источник флавоноидов Таблица 7 – Компонентный состав фенольных соединений исследуемых видов растительного сырья Наименование сырья плоды листья плоды семена корневища корневища околоплод- семена семена Группа Наименование ник момордиморкови артишока артишока пажитника куркумы имбиря клоповника БАС вещества момордики ки дикой колючего колючего сенного длинной аптечного посевного харантия харантия содержание в смеси, % (метод внутренней нормализации) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Корич- Кофейная кислота 2,10 38,55 3,63 24,70 17,86 2,72 17,28 1,ные Хлорогеновая 0,88 1,00 8,98 3,54 14,кисло- кислота ты Неохлорогеновая 6,88 1,46 8,17 2,кислота Цикориевая 2,70 2,88 7,45 0,кислота Феруловая кислота 1,19 12,12 3,28 0,65 6,86 2,45 5,Коричная кислота 2,Флаво- Лютеолин-72,20 35,19 1,34 1,58 14,гликозид ноиды Лютеолин 0,Дигидрокверцетин 4,99 4,99 10,81 0,00* 4,Ориентин 0,46 7,Рутин 7,37 0,08 6,54 2,34 5,46 1,Кверцетин 2,43 3,70 2,33 3,Гесперидин 2,33 0,Витексин 5,31 9,22 6,Гиперозид 0,01 1,35 3,продолжение таблицы 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Гесперидин 1,05 2, Виценин 0,Апигенин 0,02 0,Кемпферол 0,00* 0,08 2,Феноло- Арбутин гликози- 9,ды Феноло- Салициловая 6,06 2,кислота кислоты Галловая кислота 13,51 21,05 11,73 11,49 24,12 5,15 9,Кумари- 4-Оксикумарин 0,ны Кумарин 3,04 1,73 0,97 2,Метоксикумарин 5,Скополетин 18,Умбеллиферон 7,66 2,35 2,Эскулетин 1,57 10,76 0,Дубиль- Пирагаллол 5,61 0,ные Эпикатехин 1,вещества Неидентифицированые 13 2 12 11 8 4 8 13 пики Примечание: «*» значение 0,00 вещества, не означает, что их нет, в сумме веществ они являются самыми минорными можно рассматривать такие растительные объекты как: семена клоповника посевного и листья артишока колючего, как источники кумаринов – плоды моркови дикой, семена пажитника сенного, околоплодник момордики харантия, фенолокислот – плоды моркови дикой и артишока колючего, семена клоповника посевного и пажитника сенного, корневища куркумы длинной и имбиря аптечного.

Артишок колючий по системе магнолиофитов Тахтаджяна относится к трибе Carduinae. К близким родам этой трибы относятся расторопша (Silybum).

В связи с этим, в плодах артишока колючего проводили целенаправленный поиск флаволигнанов – фармакологически активной группы соединений расторопши пятнистой.

Для исследования плодов артишока колючего на присутствие флаволигнанов в качестве СО был использован силимарин, содержащий сумму флаволигнанов расторопши пятнистой. Согласно полученным данным, в СО силимарина зафиксировано 8 пиков. На хроматограмме спиртового извлечения плодов артишока колючего идентифицировано 3 пика, соответствующих по времени удерживания компонентам силимарина.

Для количественной оценки использовали сумму площадей идентифицированных веществ. Согласно полученным данным в плодах артишока колючего методом ВЭЖХ найдено суммы флаволигнанов, в пересчте на силимарин 0,28±0,02 %.

Учитывая, что флаволигнаны расторопши пятнистой представляют собой группу соединений доминирующими компонентами, которой являются силибин, силидианин и силикристин, продолжили исследование плодов артишока колючего с целью выяснения содержания в них силибина. При добавлении к изучаемому спиртовому извлечению раствора ГСО силибина была получена хроматограмма представленная на рисунке 8. Метод добавок отрицает наличие силибина в плодах артишока колючего.

Несмотря на отсутствие силибина проведенные исследования доказывают наличие других составляющих флаволигнанов растропши пятнистой, что не закрывает возможности дальнейших исследований плодов артишока колючего в отношении изучения гепатопротекторного и антиоксидантного действия.

1 Рисунок 8 – Хроматограмма спиртового извлечения из плодов артишока колючего(1) и спиртового извлечения с добавлением ГСО силибина (2) * * * Результаты показали значительное количество органических кислот в исследуемых видах сырья только в околоплоднике момордики харантия (0,41 %±0,02), поэтому продолжили изучение данной группы БАС методом ВЭЖХ. В результате исследования идентифицированы и количественно определены кислоты (%, метод внутренней нормализации): щавелевая (64,84), лимонная (2,87), винная (3,85), аскорбиновая (27,02), янтарная (1,43).

* * * Для определения подлинности и показателей норм качества растительного сырья проводили морфолого-анатомическое изучение, определение числовых показателей и разработку методов количественного определения БАС в некоторых видах сырья.

Установление морфолого-анатомического строения изучаемых образцов растительного сырья проводили по следующей схеме:

описание внешних признаков цельного, измельченного и в виде порошка сырья;

общая схема и фрагмент поперечного среза;

микрофотографии и схемы анатомо-диагностических признаков на соответствующих срезах цельного сырья;

микрофотографии и схемы анатомо-диагностических признаков порошка.

В результате проведенных исследований уточнены морфологические и выявлены диагностически значимые анатомические признаки, позволяющие определять подлинность лекарственного растительного сырья для 8 образцов сырья. Микродиагностические признаки плодов кмина тминового, момордики харантия, артишока колючего и семян клоповника посевного описаны впервые.

Определены числовые показатели качества сырья: влажность, зола общая, зола, нерастворимая в 10 % кислоте хлористоводородной, содержание суммы экстрактивных веществ, извлекаемых водой очищенной, спиртом этиловым 40 %, 70 % и 96 %.

Совершенствование методов оценки качества ЛРС Для раздела НД «Подлинность» были разработаны методики ТСХ анализа для некоторых видов сырья. Для этого подбирали оптимальную систему ТСХ, избирательный экстрагент, условия очистки извлечения и детектирования хроматограмм. В результате предложены следующие методики:

идентификации куркуминоидов в корневищах куркумы на пластинках «Силуфол УФ-254» в системе растворителей хлороформ – спирт этиловый (19:1) с детекцией в УФ свете с длиной волны 254 и 366 нм;

идентификации кумаринов в семенах клоповника посевного в системе хлороформ – метанол – вода (26:16:4) и детектировании в УФ свете при длине волны 366 нм;

идентификации диосгенина в семенах пажитника сенного на пластинках «Силуфол» в системе растворителей хлороформ – петролейный эфир – ацетон (6:2:1) и детектировании путем опрыскивания хроматограммы реактивом Санье и нагревании при 90-1000 С в течение 2 минут.

* * * Исходя из первичного аналитического скрининга фенольных соединений, проведенного методом ВЭЖХ, мы выделили для каждого объекта ведущую группу биологически активных соединений, для которой разрабатывали методы количественного определения.

Количественное определение куркуминоидов в корневищах куркумы длинной В фармакологическом отношении наиболее важной группой соединений в корневищах куркумы длинной являются куркуминоиды, которые представлены тремя соединениями куркумином, деметоксикуркумином и бисдеметоксикуркумином. Их соотношение может изменяться в зависимости от фазы вегетации или места сбора. Все куркуминоиды обладают одинаковым фармакологическим действием, которое определяется наличием гептадиенонового фрагмента. Именно поэтому вся процедура идентификации должна быть направлена на выявление этой группы соединений.

Чаще всего, для идентификации куркуминоидов в сырье используется метод спектрофотометрии. Использование данных методик обусловлено наличием максимума поглощения при 425±3 нм. Однако такой же характер спектра будет присущ извлечениям из сырья любого вида куркумы. В этой связи идентификация сырья по УФ спектру будет недостаточно объективной. Поэтому для идентификации и количественного определения целесообразнее использовать метод ВЭЖХ. В качестве элюента использовали водно-ацетонитрильные смеси различной концентрации, а в качестве модификатора – кислоту муравьиную. В наших условиях был получен ряд хроматограмм, из которых следовало, что только при элюировании 37-35 % ацетонитрилом с 1-2 % кислоты муравьиной удается достичь удовлетворительного разделения (рис. 9).

mV 10 21415 1718 2021 22 16 ch0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 мин Рисунок 9 – Хроматограмма извлечения из сырья – экстрагент:

ацетонитрил 35 % По результатам валидации установлено, что приведенная методика является специфичной для определения содержания куркуминоидов в сырье, характеризуется корректной точностью и воспроизводимостью при величине относительного стандартного отклонения (3,48 %), что позволяет использовать ее для достоверной оценки качества сырья.

К у р 3 1 9 8.6 9 К у р 1 2. 7 4 Содержание суммы куркуминоидов колебалось от 1,21 до 2,77 %. На основании полученных данных установили нижний предел содержания куркуминоидов в сырье не менее 1,0 %. Разработанная методика нашла отражение в ФС «Куркумы длинной корневища».

Количественное определение кумаринов в плодах моркови дикой Ввиду того, что количество и качество эфирного масла плодов моркови дикой меняется в зависимости от места произрастания растения, условий хранения сырья, климатических условий и других факторов разработать современную методику стандартизации сырья моркови по показателю «Эфирное масло» с установлением четкого содержания компонентного состава не представляется возможным. Поэтому разработана методика количественного содержания кумаринов в сырье моркови дикой, как наиболее стабильной группы БАС и обеспечивающей фармакологический эффект. Для количественного определения кумаринов использовали градиентный режим элюирования. В качестве оптимальных условий были признаны следующие: 15 минут элюирования смесью ацетонитрил : раствор кислоты муравьиной 20 г/л 10:90, затем за 35 минут соотношение ацетонитрила и раствора кислоты муравьиной изменялось до 60:при расходе подвижной фазы 1 мл/мин. В этих условиях были проанализированы извлечения из различных образцов сырья плодов моркови дикой. Содержание каждого из компонентов (кумарина, умбеллиферона, эскулетина, скополетина) определялось с использованием соответствующих стандартных образцов, а содержание неидентифицированного компонента в пересчете на кумарин. Полученные данные представлены в таблице 8.

Таблица 8 – Результаты количественного определения отдельных кумаринов в различных образцах сырья, % Название вещества № Неидентиф.

обКумарин Умбеллиферон Скополетин Эскулетин пик в пересчете разца на кумарин 1 0,0112 0,0447 0,0268 0,0060 0,1181 0,202 0,0011 0,0137 0,0876 0,0106 0,2149 0,323 0,0196 0,0016 0,0024 0,0063 0,1798 0,204 0,0151 0,0013 0,0013 0,0023 0,2700 0,295 0,0120 0,0020 0,0039 0,0005 0,2814 0,296 0,0135 0,0027 0,0015 0,0002 0,0319 0,04Как следует из полученных результатов, в анализируемом сырье можно идентифицировать все исследуемые кумарины, но одни из них являются доминирующими, а другие присутствуют в следовых количествах. Хроматограммы других образцов сырья существенно отличаются между собой, что затрудняет выбор маркерного вещества. Поэтому этот метод не позволяет оценить качество сырья и предложить какое-либо соединение для стандартизации плодов моркови дикой. В связи с этим, было признано целесообразным, использовать для определения кумаринов в плодах моркови дикой, метод спектрофотометрии.

Анализ спектров поглощения извлечений, полученных спиртом этиловым 90 %, содержащим 1 % концентрированной кислоты хлористоводородной, показал, что все они имеют плато в области 300-320 нм, которое соответствует максимуму поглощения кумарина при 315 нм (рис. 10).

С использованием данной методики были проанализированы изучаемые образцы сырья, что позволило в пересчете на кумарин установить нижний предел содержания суммы кумаринов в плодах моркови дикой 0,2 %.

A 0.0.0.0.0.0.0.0.280 290 300 310 320 330 340 350 нм Рисунок 10 – Спектры поглощения раствора СО кумарина и извлечения из сырья моркови дикой (образец № 3):

1 – CO кумарина, 2 – извлечение Для методики установлены валидационные характеристики (по параметрам специфичность, линейность, предел количественного определения, точность, прецизионность, уровень систематической погрешности). Методика обладает достаточной чувствительностью и, варьируя навеской можно анализировать сырь с любым содержанием кумаринов.

Метод количественного определения суммы гидроксикоричных кислот в листьях артишока колючего В результате исследования фенольных соединений методом ВЭЖХ было установлено, что основным компонентом в листьях артишока колючего является кофейная кислота (табл. 7), поэтому она использована в качестве стандартного вещества при расчете количественного содержания суммы коричных кислот. Присутствие кофейной кислоты устанавливали в извлечениях полученных спиртом этиловым 70 %, спектр поглощения измеряли в интервале длин волн 200-400 нм. Было обнаружено совпадение спектров поглощения у растворов полученных извлечений и раствора CO кофейной кислоты по максимумам около 327±2 нм и 299±2 нм и минимуму при 264±2 нм.

Методом добавок установлено, что внесение определенного количества кофейной кислоты в водно-спиртовое извлечение из листьев артишока колючего вызывает увеличение интенсивности поглощения при сохранении характера полосы поглощения. При этом наблюдается полоса поглощения с максимумом при 329±2 нм, минимумом при 265±2 нм и перегибом в области 290-310 нм.

В связи с этим количественное определение коричных кислот проводили методом прямой спектрофотометрии, установлено, что в листьях артишока колючего содержание гидроксикоричных кислот в перечете на кофейную кислоту составило 1,2-4,1 %, и данная методика может быть использована как для стандартизации сырья – листьев артишока колючего, так и лекарственных препаратов на его основе.

Метод количественного определения суммы фенольных соединений в семенах клоповника посевного Аналогично разрабатывали методику количественного определения суммы фенольных соединений в семенах клоповника посевного.

Спектр поглощения спиртового извлечения имеет характерную полосу поглощения с максимумами около 330±2 нм, минимум при 264±2 нм и перегибы в области 230-240 и 300-320 нм, что соответствует спектру CO хлорогеновой кислоты. Содержание суммы фенольных соединений, в пересчете на хлорогеновую кислоту в семенах клоповника посевного составляло 0,75-1,03 %.

Метод количественного определения суммы фенольных соединений в корневищах имбиря аптечного Согласно полученным данным максимум поглощения водно-спиртового раствора находится при длине волны 280±2 нм и совпадает с максимум поглощения спиртового раствора 6-гингерола. Поэтому в дальнейших исследованиях мы использовали длину волны 280 нм.

Содержание суммы фенольных соединений, в пересчете на 6-гингерол в корневищах имбиря аптечного составило 1,8-2,6 %.

Метод количественного определения диосгенина и суммы фурастаноловых гликозидов в семенах пажитника сенного Определение стероидных сапонинов проводили методом, предложенным в ФС «Трава якорцев стелющихся». Метод основан на способности фурастаноловых гликозидов образовывать с пара-диметиламинобензальдегоидом соединения, окрашенные в розовый цвет. Измерив оптическую плотность окрашенных растворов при длине волны 518 нм, концентрацию фурастаноловых гликозидов находили по графику, построенному по кобальта хлориду, который использовался в качестве заменителя раствора сравнения.

Количественное определение диосгенина проводили методом спектрометрии в видимой области, предложенным в ФС «Корневища с корнями диоскореи». Метод основан на способности диосгенина, образовывать с реактивом Марки соединения, окрашенные в розовый цвет. Измеряя оптическую плотность окрашенных растворов при длине волны 490 нм, концентрацию диосгенина находили по градуированному графику, построенному по СО диосгенина.

В результате проведенного анализа установлено, что содержание фуростаноловых гликозидов в семенах пажитника сенного составляет 2,62-6,01 %, диосгенина – 0,99-1,75 % в пересчете на абсолютно-сухое сырье.

* * * Изучен макро- и микроэлементный состав 12 исследуемых образцов сырья. В изучаемых видах определено количественное содержание от 16 до элементов, из которых 13 являются эссенциальными и 5 условноэссенциальными.

Установлено, что все исследуемые образцы сырья соответствуют по показателю содержания тяжелых металлов требованиям ГФ XII.

C точки зрения радиологической безопасности исследуемые образцы растительного сырья не представляют опасности, так как накапливают до 1 % Cs137 и 0,15-0,30 % Sr-90 от допустимого нормативной документацией уровня.

* * * По итогам проведенных фитохимических исследований определили приоритетные группы биологически активных комплексов перспективных в отношении создания на их основе фитосубстанций обладающих различной фармакологической активностью.

Настои готовили в соответствии с требованиями ГФ XI издания.

Жидкий экстракт из плодов артишока колючего – методом модифицированной реперколяции (с включением стадии термической экстракции) по аналогии с жидким экстрактом из плодов расторопши пятнистой [Авдеева Е.В., 2007].

Сухие экстракты получали методом бисмацерации из предварительно обезжиренного сырья, в количестве 100,0 г. Количество экстрагента и продолжительность экстракции на первой стадии мацерации составило 800,0 мл в течение 6-12 часов, на второй – 500,0 мл в течение 3-4 часов при периодическом перемешивании. Полученные извлечения упаривали под вакуумом при температуре 50-600 С в сушильном шкафу до влажности не более 5 %. Конечные продукты представляли собой гигроскопичные порошки коричневого цвета со специфическим запахом и горьким вкусом. Опытные образцы сухих экстрактов были получены в условиях заводской лаборатории ЗАО «Вифитех».

Характеристика полученных экстрактов представлена в таблице 9.

Изучение фармакологической активности Изучение «острой» токсичности всех исследуемых объектов показало, что они практически безопасны для человека. Практическая нетоксичность исследуемых фитосубстанций делает целесообразным проведение фармакологического скрининга в опытах in vivo.

Установлено, что сухие экстракты, полученные из семян пажитника сенного и плодов момордики харантия, обладают выраженным гипогликемическим действием и снижают уровень глюкозы в сыворотке крови животных при экспериментальном аллоксановом диабете на 38,48 % и 65,89 % соответственно.

Таблица 9 – Показатели качества сухих экстрактов полученных на основе растительного сырья исследуемых видов Группа Выход Влаж- Метод действующих Экстрагент сухого Сырье ность, стандар- веществ и их экстракта, %** тизации количество, %* %** экстрагент – спирт этиловый спектро- фурастаноловые фотомет- гликозиды, рия 18,32±0,Семена пажитника 70 % 19,07±1,21 3,41±0,сумма фенольных соедисенного нений в пересчете на ВЭЖХ кофейную кислоту, 1,08±0,сумма фенольных соедиСемена спектронений в пересчете на клоповника 70 % 22,08±1,26 2,16±0,42 фотометхлорогеновую кислоту, рия посевного 3,85±0,сумма флаволигнанов в ВЭЖХ пересчете на силимарин, Плоды 1,01±0,артишока 80 % 21,36±0,84 2,58±1,спектро- оксикоричные кислоты в колючего фотомет- пересчете на кофейную рия кислоту, 7,61±0,Корневища спектро- сумма фенольных куркумы 80 % 22,04±0,95 2,54±1,03 фотомет- соединений в пересчете на рия куркумин 8,04±0,длинной экстрагент – вода очищенная Плоды вода титримет- органические кислоты, момордики 12,35±0,46 3,05±0,очищенная рический 3,32±0,харантия Примечание: * – выход экстракта приведен в пересчете на вес абсолютно сухого сырья, ** – указано среднее значение шести определений Содержание общего холестерина в сыворотке крови животных под влиянием сухих экстрактов пажитника сенного достоверно снижается на 31,66 %, артишока колючего – на 45,88 %. Сухой экстракт куркумы длинной снижает общий холестерин крови на 47,86 %, но недостоверно.

Максимальное содержание антиоксидантов имеет место в сухом экстракте, полученном из плодов момордики харантия спиртом этиловым 70 %, семян клоповника посевного спиртом этиловым 40 %, плодов артишока колючего спиртом этиловым 70 %.

В сравнительном аспекте влияние на функциональное состояние печени исследуемого артишока колючего плодов экстракта жидкого не имело выраженных достоверных различий с действием препарата – аналога расторопши экстракта жидкого. Следовательно, артишока колючего плодов экстракт жидкий можно рекомендовать для более углубленного изучения с целью создания гепатопротекторного средства.

Наибольшую отхаркивающую активность проявил настой, полученный из семян клоповника посевного, который превосходит действие препарата сравнения «Мукалтин», по-видимому, это объясняется не только высоким содержанием ВРПС, но и сапонинов (двигательная активность мерцательного эпителия увеличивалась на 43,87 %). Настой из корневищ имбиря аптечного показал отхаркивающий эффект сопоставимый с препаратом сравнения (после аппликации двигательная активность увеличивалась на 30,21 %).

Изучение антибактериального действия выявило преимущественно активность извлечений, полученных 40 % спиртом этиловым из корневищ куркумы длинной, имбиря лекарственного и семян чернушки посевной. Установлено выраженное антибактериальное действие спиртового извлечения из корневищ куркумы длинной по отношению практически ко всем тест-культурам.

Эфирные масла куркумы длинной, имбиря аптечного, кмина тминового и моркови дикой, полученные из исследуемых образцов сырья проявляют широкий спектр антибактериальной активности, что дает основание для их дальнейшего углубленного изучения в качестве потенциальных противомикробных средств.

Исследуемые фитосубстанции: жирное масло пажитника сенного и масляный экстракт момордики харантия при наружном нанесении на ожоговую рану ускоряли в ней репаративные процессы, что приводило к более раннему отторжению ожогового струпа и сокращению сроков эпителизации.

* * * Результаты проведенных исследований позволили сформулировать методологическое обоснование использования сырья пищевых растений, как новых источников лекарственных средств (рис. 11).

Предлагаемые методические подходы базируются на проведении комплекса теоретических, фитохимических, фармакологических и технологических исследований, объединяемых общей целью – создание фармакоэкономических БЛОК 1 Выявление перспективных объектов БЛОК 2 Расширение сведений о исследования химическом составе • Анализ нормативных документов • Определение качественного состава • Анализ рынка пищевого сырья БАС • Обобщение сведений о применении • Опредлеление количественного растений в научной и народной медицине содержания БАС • Анализ ресурсной базы • Определение ведущих групп БАС • Данные о химическом составе • Изучение аналитической групы БАС • Актуальность фармакотерапевтического действия БЛОК 4 Создание фитосубстанций с различной БЛОК 3 Разработка нормативной фармакологической активностью с учетом комплексной документации на сырье перспективных переработки сырья видов • Выбор технологической схемы получения фитосубстанций с учетом приоритетных групп БАС • Разработка методик качественного и количественного анализа БАС в ЛРС • Изучение возможности комплексной переработки растительного сырья для выделения различных • Определение числовых показателей биологически активных комплексов • Установление анатомо-диагностических • Проведение фармакологического скрининга полученных признаков ЛРС фитосубстанций • Составление нормативной документации • Разработка лекарственных форм, их стандартизация, на ЛРС оценка специфической активности, безопасности, составление НД Рисунок 11 – Схема научно-методического обоснования использования сырья пищевых растений, как источников новых лекарственных средств условий для расширения номенклатуры лекарственных растений и производства доступных, безопасных и терапевтически эффективных отечественных лекарственных фитопрепаратов для лечения определенных форм заболеваний.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 1. Теоретически и экспериментально обоснована возможность использования растительного сырья, культивируемых растений при комплексном изучении в медицинской практике.

2. Проведено всестороннее фитохимическое изучение с целью установления их общего химического состава и выявления, основных наиболее перспективных БАС. Данный этап исследования позволил расширить сведения о химическом составе, и показал возможность их комплексной переработки:

выделены различные фракции углеводных комплексов из 13 образцов сырья, установлен их качественный и количественный состав, позволивший в качестве источников полисахаридов предложить новые виды сырья: околоплодник момордики харантия, корневища имбиря аптечного, корневища куркумы длинной, семена клоповника посевного, семена пажитника сенного, листья артишока колючего (выход составил от 21,6 % до 29,8 %);

выделен и изучен компонентный состав 9 образов жирного масла исследуемых растительных объектов, который позволил идентифицировать не только жирнокислотный состав, но и сопутствующие фосфо-, гликолипиды, стерины, ретинолы, токоферолы и др. БАС; наиболее ценными по составу являются жирные масла семян пажитника сенного и момордики харантия; такие объекты как семена чернушки посевной, семена клоповника посевного и плоды артишока колючего могут быть отнесены к «масличному» сырью (содержание жирного масла более 18 %);

разработаны методы выделения биоактивных пептидных экстрактов из видов исследуемых растений, количественно определен и установлен их аминокислотный состав, методом гель-электрофореза определены молекулярные массы пептидов, низкомолекулярные пептиды от 250 кДа до кДа были зафиксированы в образцах, полученных из семян кунжута восточного, клоповника посевного, пажитника сенного, чернушки посевной, перца однолетнего и плодах артишока колючего; разделение пептидов проводили также методом экслюзионной ВЭЖХ, в результате уточнены молекулярные массы пептидов, показана их гомогенность; из пептидных экстрактов, полученных из семян перца однолетнего, кунжута восточного, чернушки посевной, плодов кмина тминового и моркови дикой с помощь ионообменной хроматографии и гель-электрофореза выделили и охарактеризовали биоактивные пептиды; доказана их противофунгицидная и цитотоксическая активность;

определены содержание в сырье, физико-химические показатели эфирного масла, полученного из 6 видов растительного сырья, методом ГХ-МС определен химический состав изучаемых образцов эфирного масса: в эфирном масле корневищ имбиря лекарственного идентифицированы веществ; в эфирном масле корневищ куркумы длинной идентифицированы 25 веществ; в эфирном масле моркови дикой идентифицировали химических компонентов; в эфирном масле чернушки посевной идентифицировано 7 компонентов; в эфирном масле кмина тминового из Узбекистана – 15, а из Марокко – 16 компонентов;

в 9 исследуемых объектах методами хроматографии (БХ, ТСХ, ВЭЖХ) идентифицировали 30 соединений фенольной природы, из них 6 – коричных кислот, 13 – флавоноидов, 1 – фенологликозид, 6 – кумаринов, 2 – дубильных вещества;

идентифицировано 5 органических кислот и определено их количественное содержание в околоплоднике момордики харантия: щавелевая кислота (64,84 % содержания в выделенной смеси), лимонная кислота (2,87 %), винная кислота (3,85 %), аскорбиновая кислота (27,02 %), янтарная кислота (1,43 %);

изучен макро- и микроэлементный состав 12 исследуемых образцов сырья, в изучаемых видах определено количественное содержание от 16 до 30 элементов, из которых 13 являются эссенциальными и 5 условноэссенциальными.

3. На этапе установления норм качества сырья предложены методики качественного и количественного анализа БАС, установлены числовые показатели сырья.

4. По результатам макро- и микроскопического исследования определены диагностические признаки цельного, измельченного и в виде порошка ЛРС: корневищ куркумы длинной, корневищ имбиря аптечного, плодов моркови дикой, плодов кмина тминового, семян пажитника сенного, семян клоповника посевного, плодов момордики харантия, плодов артишока колючего.

5. Обосновано проведение стандартизации сырья куркумы длинной и моркови дикой по содержанию куркуминоидов и кумаринов соответственно и разработаны новые методики их количественного определения с валидационной характеристикой.

6. Результаты скрининговых фармакологических исследований некоторых фитосубстанций, стандартизированных по ведущей группе биологически активных соединений, показали наличие отхаркивающего, гепатопротекторного, гипохолестеринемического, антиоксидантного, антибактериального, гипогликемического действия.

7. На основании проведенных исследований разработана нормативная документация на лекарственное сырье: ФС «Куркумы длинной корневища» и ФС «Моркови дикой плоды» (находятся на экспертизе в ФГУ «НЦ ЭСМП»);

ФСП «Моркови дикой плодов экстракт жидкий» (Регистрационное удостоверение ЛРС – 005939/09-210709); Проекты ФС «Имбиря аптечного корневища», ФСП «Артишока колючего листья», ФСП «Пажитника сенного семена».

8. Сформулированы научно-методические подходы к обоснованию использования сырья пищевых растений, как новых источников лекарственных средств.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Орловская, Т.В. Пажитник сенной – перспективное целебное растение / Т.В.

Орловская, З.С. Магомедова // Российские аптеки. – 2004. – № 7-8. – С. 7880.

2. Орловская, Т.В. Изучение жирнокислотного состава липидов семян клоповника посевного / Т.В. Орловская // Вестник Воронежского госуниверситета (ВГУ). Сер.: химия, биология, фармация. – 2006. – № 2. – С. 334-335.

3. Орловская, Т.В. Изучение аминокислотного состава семян клоповника посевного / Т.В. Орловская // Дальневосточный мед. журн. – 2006. – № 2. – С.

73-74.

4. Орловская, Т.В. Изучение углеводов Trigonella foenum-graecum / Т.В. Орловская, В.А. Челомбитько // Химия природ. соединений. – 2006. – № 2. – С.

181.

5. Орловская, Т.В. Изучение углеводов Curcuma longa / Т.В. Орловская, В.А.

Челомбитько // Химия природ. соединений. – 2006. – № 4. – С. 389-390.

6. Орловская, Т.В. Изучение углеводов Cynara scolymus / Т.В. Орловская, И.Л.

Лунева, В.А. Челомбитько // Химия природ. соединений. – 2007. – № 1. – С.

89-90.

7. Орловская, Т.В. Аминокислотный состав семян и околоплодника Momordica charantia / Т.В. Орловская, В.А. Челомбитько // Химия природ. соединений.

– 2007. – № 2. – С. 195.

8. Орловская, Т.В. Химический состав листьев Cynara scolymus / Т.В. Орловская, И.Л. Лунева, В.А. Челомбитько // Химия природ. соединений. – 2007. – № 2. – С. 196-197.

9. Орловская, Т.В. Изучение углеводов Lepidium sativum / Т.В. Орловская, В.А.

Челомбитько // Химия природ. соединений. – 2007. – № 3. – С. 255-256.

10. Орловская, Т.В. Изучение фенольного комплекса Lepidium sativum / Т.В.

Орловская, В.А. Челомбитько // Химия природ. соединений. – 2007. – № 3. – С. 269.

11. Орловская, Т.В. Изучение жирнокислотного, аминокислотного и минерального состава корневищ имбиря аптечного / Т.В. Орловская // Известия высш. уч. зав. Сев.-Кавк. регион. – 2007. – Спецвыпуск: Проблемы фармации, фармакологии и рациональной терапии. – С. 100-102.

12. Орловская, Т.В. Аминокислотный и минеральный состав корневищ куркумы длинной / Т.В. Орловская, Ибрагим Самер Али, В.А. Челомбитько // Известия высш. уч. зав. Сев.-Кавк. регион. – 2007. – Спецвыпуск: Проблемы фармации, фармакологии и рациональной терапии. – С. 102-104.

13. Орловская, Т.В. Изучение углеводов и липидов Momordica charantia / Т.В.

Орловская // Химия природ. соединений. – 2008. – № 2. – С. 179-180.

14. Орловская, Т.В. Изучение полисахаридов Zingiber officinale / Т.В. Орловская // Химия природ. соединений. – 2008. – № 2. – С. 181-182.

15. Орловская, Т.В. ВЭЖХ-анализ плодов момордики харантия / Т.В. Орловская // Фармация. – 2010. – № 1. – 8-11.

16. Гаврилин, М.В. Содержание куркуминоидов в корневищах куркумы длинной / М.В. Гаврилин, Т.В. Орловская, С.П. Сенченко // Фармация. – 2010. – № 3. – С. 30-32.

17. Гаврилин, М.В. Валидация методики определения куркуминоидов в корневищах куркумы длинной / М.В. Гаврилин, Т.В. Орловская, С.П. Сенченко // Фармация. – 2010. – № 6. – С. 18-22.

18. Исследование биоактивных пептидов из некоторых видов растений / Т.В.

Орловская [и др.] // Химия природ. соединений. – 2010. – № 2. – С. 276-277.

19. Патент 2403566 Российская Федерация, МПК G01N 33/15. Способ количественного определения восстанавливающих сахаров // Н.Ш. Кайшева, А.Ш.

Кайшев, Т.В. Орловская. – № 2008149186/21; заявл. 12.12.2008 г.; опубл.

10.11.2010. – Бюл. № 31. – 14 с.

20. Выделение и изучение фермента липазы из семян чернушки посевной / Т.В.

Орловская [и др.] // Регион. конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2002; Пятигорск): материалы… – Пятигорск: Пятигорск. ГФА, 2002. – С. 18-19.

21. Орловская, Т.В. Изучение полисахаридного комплекса семян клоповника посевного / Т.В. Орловская // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 59. – Пятигорск, 2004. – С. 42.

22. Орловская, Т.В. Определение диосгенина в пажитнике сенном (Trigonella foenum-graecum), культивируемом на Кавказских Минеральных Водах (КМВ) / Т.В. Орловская, З.С. Магомедова, В.А. Челомбитько // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр.

/ Пятигорск. ГФА. – Вып. 60. – Пятигорск, 2005. – С. 36-37.

23. Экспериментальное изучение противоожоговой активности жирного масла семян пажитника сенного / Т.В. Орловская [и др.] // Человек и лекарство:

тез. докл. 12 Рос. нац. конгр. 18-22 апр. 2005 г. – М., 2005. – С. 451-452.

24. Орловская, Т.В. Разработка характеристик подлинности и доброкачественности клоповника посевного семян / Т.В. Орловская // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА, СПб. ГХФА. – Вып. 62. – Пятигорск, 2007. С. 98-99.

25. Орловская, Т.В. Морфолого-анатомическое изучение семян и листьев клоповника посевного / Т.В. Орловская, В.А. Челомбитько // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА, СПб. ГХФА. – Вып. 62. –Пятигорск, 2007. С. 99-101.

26. Орловская, Т.В. Определение антибактериальной активности различных извлечений из некоторых видов лекарственного растительного сырья и оценка его микробиологической чистоты / Т.В. Орловская, М.В. Мазурина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.

науч. тр. / Пятигорск. ГФА, СПб. ГХФА. – Вып. 62. – Пятигорск, 2007.

С. 501-502.

27. Орловская, Т.В. Состав и содержание липидного и полисахаридного комплексов плодов моркови дикой / Т.В. Орловская // Фармация из века в век:

тр. науч.-практ. конф. – СПб., 2008. – Ч. 3. Анализ и стандартизация лекарственных средств. С. 108-111.

28. Орловская, Т.В. Морфолого-анатомическое изучение корневищ имбиря лекарственного / Т.В. Орловская // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып.

63. – Пятигорск, 2008. – С. 70-73.

29. Орловская, Т.В. Морфолого-анатомическое изучение корневищ куркумы длинной / Т.В. Орловская, В.А. Челомбитько // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 63. – Пятигорск, 2008. – С. 74-76.

30. Орловская, Т.В. Новый подход к стандартизации пищевого растительного сырья / Т.В. Орловская // Инновационные технологии в пищевой промышленности: материалы междунар. науч.-практ. конф. (1; 1-2 июля 2008; Пятигорск). – Пятигорск, 2008. – С. 128-133.

31. Орловская, Т.В. Показатели норм качества корневищ куркумы длинной / Т.В. Орловская, В.А. Челомбитько // Фармация из века в век: тр. науч.практ. конф. – СПб., 2008. – Ч. 3. Анализ и стандартизация лекарственных средств. С. 104-108.

32. Орловская, Т.В. Морфолого-анатомическое изучение плодов моркови дикой / Т.В. Орловская // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 64. – Пятигорск, 2009. – С. 89-91.

33. Определение фенольных соединений в противодиабетическом сборе № 1 / Т.В. Орловская [и др.] // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 64. – Пятигорск, 2009. – С. 120-122.

34. Орловская, Т.В. Исследование фенольного комплекса корневищ куркумы длинной / Т.В. Орловская, В.А. Челомбитько // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 65. – Пятигорск, 2010. – С. 96-98.

35. Орловская, Т.В. Изучение гипогликемической и гипохолестеринемической активности некоторых сухих экстрактов / Т.В. Орловская, С.А. Кулешова, В.А. Челомбитько // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 66. – Пятигорск, 2011. – С. 553-554.

36. Орловская, Т.В. Сравнительная оценка гепатопротекторной активности экстрактов артишока колючего и расторопши пятнистой / Т.В. Орловская, С.А.

Кулешова // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 66. – Пятигорск, 2011. – С. 551-553.

37. Орловская, Т.В. Определение антибактериальной активности некоторых эфирных масел / Т.В. Орловская, М.В. Мазурина // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 66. – Пятигорск, 2011. – С. 555-556.

38. Орловская, Т.В. Количественное определение антиоксидантов в некоторых сухих экстрактах / Т.В. Орловская, М.И. Кодониди // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 66. – Пятигорск, 2011. – С. 156-157.

39. Орловская, Т.В. Изучение «острой» токсичности активности некоторых видов растительного сырья и фитосубстанций на его основе / Т.В. Орловская, С.А. Кулешова // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. – Вып. 66. – Пятигорск, 2011.

– С. 550-551.

40. Orlovskaya, T.V. Chemical study of Curcuma longa rhizomes / T.V. Orlovskaya, Ibragim Samer Ali, V.A. Chelombit'ko // International Symposium on the Chemistry of Natural Compounds: abstracts (7; October 16-18 2007; Tashkent, Uzbekistan). Tashkent: AS RUz., 2007. – P. 343.

* * * Автор выражает искреннюю благодарность за консультативную помощь и предоставленное рабочее место в соответствующих лабораториях:

кандидатам химических наук, старшим научным сотрудникам лаборатории химии высокомолекулярных растительных веществ Института химии растительных веществ им. С.Ю. Юнусова АН РУз (Республика Узбекистан, г. Ташкент) Л.Г. Межлумян, Н.Р. Юлдашевой, М.Х. Маликовой, ученому секретарю института В.И. Виноградовой;

доктору химических наук, зав. лабораторией химии белков и пептидов Института биоорганической химии им. А.С. Садыкова АН РУз (Республика Узбекистан, г. Ташкент) О.Н. Вешкуровой;

доктору биологических наук, ведущему научному сотруднику научного центра сердечнососудистой хирургии РАМН им. А.Н. Бакулева (г. Москва), профессору Г.А. Осипову;

докторам фармацевтических наук кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета, профессору В.А. Куркину и профессору Е.В. Авдеевой;

доценту кафедры фармакологии Пятигорской ГФА, кандидату фармацевтических наук С.А. Кулешовой;

доктору фармацевтических наук, начальнику лаборатории ООК ЗАО «Вифитех» И.Н. Зилфикарову (Московская обл., пос. Оболенск).

Автор выражает особую глубокую признательность и благодарность доктору фармацевтических наук, профессору Михаилу Витальевичу Гаврилину за постоянную, неоценимую помощь при выполнении аналитических исследований, обсуждении полученных результатов и оформлении диссертации.

ОРЛОВСКАЯ ТАТЬЯНА ВЛАДИСЛАВНА ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НЕКОТОРЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ РАСТЕНИЙ С ЦЕЛЬЮ РАСШИРЕНИЯ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ФАРМАЦИИ 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук Подписано к печати « » _________ 2011 г. Формат 60х84/Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. 2,Тираж 100 экз. Заказ № _____ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» 357532, г. Пятигорск, пр. Калинина,




© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.