WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Алешкин Андрей Владимирович

ПОЛИКОМПОНЕНТНЫЕ ПРОБИОТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ КОНСТРУИРОВАНИЕ, ПРОИЗВОДСТВО И СТРАТЕГИЯ ИХ ПРОДВИЖЕНИЯ НА РОССИЙСКОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОМ РЫНКЕ

03.01.06 биотехнология

03.02.03 микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Москва 2010

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Научный консультант:

Заслуженный деятель науки,

доктор медицинских наук, профессор Афанасьев Станислав Степанович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор  Бондаренко Виктор Михайлович

доктор медицинских наук,

профессор  Феклисова Людмила Владимировна

доктор медицинских наук  Алиева Елена Васильевна

Ведущая организация:

Федеральное государственное учреждение науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора (п. Оболенск, Московская область)

Защита диссертации состоится «___»_____________2011 г. в ______часов на заседании диссертационного совета Д 208.046.01 при Федеральном государственном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора по адресу: 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д.10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора по адресу: 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д.10.

Автореферат разослан «____» _____________2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук О.Ю. Борисова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В последнее десятилетие заметно возрос интерес к проблеме поддержания и восстановления микроэкологического статуса человека. Для этих целей все шире используют бактериотерапевтические препараты – пробиотики. Повышенное внимание к пробиотикам вызвано ростом контингента лиц, требующих коррекции аутофлоры, и прогрессом в изучении состава и биологических свойств микрофлоры, заселяющей различные биотопы человеческого организма, ее роли в поддержании здоровья макроорганизма; использованием микроэкологических подходов к раскрытию этиопатогенеза различных заболеваний; выявлением полезных свойств у микроорганизмов, не встречающихся в норме в биоценозах человека (Воробьев А.А., 2004; Грачева Н.М., 2004; Глушанова Н.А., 2005; Бондаренко В.М.,2007; Шевелева С.А., 2007; Шендеров Б.А., 2009).

Эффективность бактерийных препаратов определяется совокупностью биологических свойств штаммов, входящих в их состав (Бондаренко В.М., 2003; Шендеров Б.А., 2005; Феклисова Л.В., 2007). Отдельные производители расширили спектр культур, используемых в составе новых пробиотиков, включив в их рецептуру спороносные аэробные бациллы (род Bacillus), энтерококки, пропионовокислые бактерии, аэрококки, сахаромицеты, высшие грибы (Aspergillus, Risopus, Cordiceps) (Минушкин О.Н., 1998; Онищенко Г.Г., 2002; Шендеров Б.А., 2005; Новокшенов А.А., 2007). Другие  – пытаются повысить  биологическую активность пробиотиков за счет разработки комплексных препаратов на основе специально подобранных композиций штаммов, сочетания компонентов пре- и пробиотического происхождения, а также добавляя продукты метаболизма микрофлоры (Ардатская М.Д., 2002; Алешкин В.А., 2003; Бархатова Т.В., 2003; Шендеров Б.А., 2005; Амерханова А.М., 2009).

С одной стороны, расширение ассортимента пробиотиков способствует удовлетворению все более возрастающих требований клиники в антидисбиозных препаратах. Но, с другой стороны, настораживает увеличение количества пробиотиков, содержащих в своем составе нетипичные для нормофлоры человека микроорганизмы или потенциально патогенные виды факультативной части биоценоза. В этой связи представляется актуальным использование современных методов оценки биосовместимости экзогенных и индигенных микробных штаммов, а также компонентов бактериального и растительного происхождения в процессе рецептуростроения, технологической отработки и дальнейшего производства новых поликомпонентных пробиотических препаратов.

Современные клинические исследования открывают все новые стороны позитивного воздействия пробиотиков на физическое состояние человека, что позволяет расширить сферу их применения в комплексных лечебно-профилактических мероприятиях при некоторых инфекционных и неинфекционных патологических состояниях, в частности, хеликобактер-ассоциированной язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, гемабластозах и солидных опухолях, дислипидемии и ротавирусной инфекции (Сидоренко С.В., 2001; Cats A., 2003; Lebato-Mendizabal E., 2003; Alimonti A., 2004; Eremina E. L., 2008). Однако, развитие новых клинических направлений подразумевает создание инновационных медицинских технологий, позволяющих в полной мере реализовывать биологический потенциал поликомпонентных пробиотических средств.

По данным маркетинговых исследований ЗАО «Группа ДСМ», проведенных в 2009 году, около 67% отечественного фармацевтического рынка в стоимостном выражении составляет импортная продукция, в то же время, согласно отчету, представленному Контрольным управлением Президента РФ, замещение импортных лекарственных препаратов отечественными возможно более чем по 6000 наименований. В рамках направления, заданного правительством в принятом документе «Концепция долгосрочного социально-экономического развития Российской Федерации на период до 2020 года», одной из актуальнейших задач российского биотехнологического сектора является создание высокотехнологичных производств по выпуску конкурентоспособных пробиотических препаратов, которые по своим потребительским характеристикам не должны уступать импортным аналогам. Основным направлением прикладных исследований в этой связи является создание стандартных условий производства, соответствующих GMP, оптимизация технологических процессов и внедрение инновационных методик получения пробиотиков.

Конкурентоспособность биофармацевтического предприятия зависит от общей эффективности его деятельности и определяется совершенством используемых технологий, умелой постановкой маркетинговой службы, действенным менеджментом и рядом других экономических и технических параметров работы фирмы (Юданов А.Ю., 2003). Исследование проблемы повышения конкурентоспособности с точки зрения теории конкуренции помогает направить усилия по совершенствованию деятельности фирмы в русло правильной, подходящей именно для нее стратегии конкурентной войны (Гурков И.Б., 2006). Новые коммерческие фирмы, такие как «Биокад», «Амфита», «Партнер» в отличие от большинства приватизированных предприятий лучше приспособлены для бизнеса в условиях рыночной экономики. Однако, и для них выбор оптимальной стратегии на различных этапах жизненного цикла является «болезненным». В сверхбыстро меняющейся российской экономике (где сегодня выгодно биржевое дело, завтра – импорт автомобилей) укрепиться для получения высоких прибылей в сфере производства лекарственных средств, тем более, производимых с помощью суперсовременных наукоемких биотехнологических методов – серьезная стратегическая цель.

Цель исследования

Разработать теоретические и практические принципы конструирования, производства поликомпонентных пробиотических препаратов, алгоритмы их эффективного применения при инфекционной и неинфекционной патологии и продвижения на российском фармацевтическом рынке.

Задачи исследования

1. Разработать методы и теоретически обосновать необходимость оценки биосовместимости промышленно перспективных пробиотических штаммов при конструировании поликомпонентных синбиотических препаратов.

2. Создать структуру универсального опытно-производственного биотехнологического участка по выпуску поликомпонентных пробиотических препаратов.

3. Разработать синбиотическую конструкцию жидких пероральных иммунобиологических препаратов («Габрифлорин-бифидо» и «Габрифлорин-лакто»). Отработать рецептуру и технологию их производства. Оценить  микробиологические, санитарно-гигиенические характеристики, сохранность  всех компонентов препаратов для определения гарантийного срока хранения. Осуществить их санитарно-гигиеническую экспертизу и государственную регистрацию на Федеральном уровне.

4. Сконструировать комплексную синбиотическую субстанцию с различными сочетаниями пре- и пробиотичеких компонентов  в качестве исходного  сырья для широкого спектра готовых форм пробиотических препаратов («БАД-субстанция бифидобактерий и/или лактобацилл»). Отработать рецептуру и технологию производства. Оценить  микробиологические, санитарно-гигиенические характеристики, сохранность всех компонентов субстанции для определения гарантийного срока хранения. Осуществить их санитарно-гигиеническую экспертизу и государственную регистрацию на Федеральном уровне.

5. Расширить спектр клинического использования и разработать новые алгоритмы применения поликомпонентных пробиотических препаратов в инфекционной и неинфекционной патологии.

6. Сформулировать стратегию развития биотехнологической компании в условиях российского фармацевтического рынка.

Научная новизна исследования

На основе использования современных микробиологических, биохимических и молекулярно-генетических методов, впервые предложены подходы к оценке биосовместимости пробиотических штаммов между собой в консорциуме поликомпонентного препарата и с индигенной микрофлорой человека.

Впервые разработана структура универсального  биотехнологического участка по выпуску поликомпонентных пробиотических препаратов и методология оценки соответствия GMP созданных на нем стандартных условий производства (заявки на изобретение № 2010145025).

На базе современного биотехнологического комплекса отработана рецептура и технология получения новых поликомпонентных пробиотических субстанций и готовых форм («Габрифлорин» ТУ 9197-006-38989935-08, «БАД-субстанция бифидобактерий и/или лактобацилл» ТУ 9197-007-38989935-08).

Совместно с ведущими научно-практическими учреждениями г. Москвы, г. Казани и г. Астрахани разработаны новые алгоритмы клинического применения поликомпонентных пробиотических препаратов при ротавирусной инфекции, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки,  онкопатологии, а также для профилактики и снижения риска развития сочетанной дислипидемии.

Впервые дано системное обоснование применения и эффективности комплекса маркетинга в соответствии с выбранной конкурентной стратегией биотехнологического предприятия, разработаны методические подходы к формированию ассортимента продукции, определению потенциально перспективных пробиотических ниш, выявлены необходимые с точки зрения потребителя характеристики позиционирующихся на них поликомпонентных препаратов.

Теоретическая значимость работы

Теоретически обоснована необходимость и разработаны методы оценки биосовместимости промышленно перспективных пробиотических штаммов при конструировании поликомпонентных синбиотических препаратов.

Создана научная концепция универсального биотехнологического участка по выпуску поликомпонентных пробиотических препаратов и процедура его валидации.

Разработаны теоретико-методологические основы и методические подходы к формированию стратегии развития биотехнологической компании и повышению конкурентоспособности производственно-сбытовых систем в условиях российского фармацевтического рынка.

Практическая значимость работы

Конструирование поликомпонентных пробиотиков, основанное  на изучении биосовместимости производственных штаммов и подборе их синбиотических ассоциаций, позволяет повысить эффективность и безопасность клинического применения разработанных комбинированных иммунобиологических препаратов.

Созданная структура универсального биотехнологического участка позволяет решать широкий спектр производственных задач по выпуску поликомпонентных пробиотических субстанций и готовых форм препаратов (СЭЗ на пилотный участок по производству БАД №77.07.16.000.М.290.03.08 от 11.03.2008, СЭЗ на полномасштабный участок по производству БАД №77.07.16.000.М.005908.06.10 от 08.06.2010).

Проведенные исследования и разработанные на их основе рецептурный состав и нормативная технологическая документация обеспечили прохождение процедуры независимой экспертизы продукции и государственной регистрации Федеральной службой Роспотребнадзора с внесением в Государственный реестр биологически активных добавок к пище:

  • «Габрифлорин-бифидо» СГР№77.99.23.3.У.5705.6.09 от 09.06.2009;
  • «Габрифлорин-лакто» СГР№77.99.23.3.У.5706.6.09 от 09.06.2009;
  • «БАД-субстанция бифидобактерий» СГР№77.99.23.3.У.5708.6.09 от 09.06.2009;
  • «БАД-субстанция лактобацилл» СГР№77.99.23.3.У.5709.6.09 от 09.06.2009;
  • «БАД-субстанция бифидобактерий и лактобацилл» СГР№77.99.23.3.У.5707.6.09 от 09.06.2009.

Новые аспекты применения поликомпонентных пробиотических препаратов позволяют повысить эффективность лечения больных и снизить риск развития побочных эффектов при антибиотико- и химиотерапии инфекционных и неинфекционных заболеваний.

Использование разработанной стратегия развития биотехнологической компании позволит повысить конкурентоспособность и эффективность деятельности  предприятий отрасли с использованием современных подходов к управлению и комплекса маркетинга.

Внедрение в практику

Зарегистрированные в Федеральном реестре Роспотребнадзора жидкие препараты-синбиотики нового поколения БАД «Габрифлорин-бифидо» и «Габрифлорин-лакто» выпускаются на производственном участке ООО «НПФ Амфита».

Разработанные «БАД-субстанция бифидобактерий», «БАД-субстанция лактобацилл» и «БАД-субстанция бифидобактерий и лактобацилл»  используются для промышленного получения следующих готовых препаратов:

«Бифидум-Мульти 1», «Бифидум-Мульти 2», «Бифидум-Мульти 3», «Нормоспектрум для детей», «Нормоспектрум для взрослых», «Полибактерин».

Новые алгоритмы применения поликомпонентных пробиотических препаратов «Бифидум-Мульти» и «Нормоспектрум» внедрены в лечебно-профилактический процесс ряда учреждений здравоохранения:

  • ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии Росздрава, г. Москва;
  • Филиал ГОУ ВПО РГМУ Росздрава «НКЦ геронтологии», г. Москва;
  • ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Росздрава, г. Казань;
  • Правобережная больница ФГУ ЮОМЦ Росздрава, г. Астрахань.

Анализ результатов данных исследований приведен в клинических отзывах, актах внедрения, протоколах наблюдений.

Универсальная структура производственного биотехнологического участка и валидационные методики оценки стандартных условий производства включены в разрабатываемый коллективом ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора СанПиН «Требования к размещению, устройству, оборудованию, контролю и эксплуатации  асептических и контролируемых  объектов».

Созданные на основе разработанной концепции универсального производственного участка ТЗ, исходные данные на проектирование и строительство и проект прошли экспертизу Роспотребнадзора СЭЗ №77.07.16.000.Т.000143.02.10 от 01.02.2010 и признаны удовлетворяющими существующим санитарным нормам и правилам.

Разработанная конкурентная стратегия и конкретный комплекс маркетинговых мероприятий использованы компаниями «Биокад», «Партнер» и «НПФ Амфита» при продвижении новых поликомпонентных пробиотических препаратов на российском фармацевтическом рынке в 2003-2009 гг.

Положения, выносимые на защиту

  1. Разработана концепция конструирования пробиотических препаратов, позволяющая усовершенствовать их лечебные свойства, и в связи с этим расширить спектр клинического применения и, в соответствии с предложенным алгоритмом, использовать в схемах лечения инфекционной и неинфекционной патологии.
  2. Созданный универсальный биотехнологический участок позволяет наладить выпуск широкого ассортимента конкурентноспособных поликомпонентных пробиотических субстанций и готовых фармакологических форм.
  3. Логичным завершением многоэтапного научного исследования, охватывающего целый ряд задач – от составления рецептуры поликомпонентных пробиотических препаратов, их клинических испытаний, выпуска на созданном универсальном опытно-производственном участке – является разработка стратегии продвижения полученных конкурентноспособных препаратов на российский фармацевтический рынок.

Апробация работы

Диссертация апробирована на заседании Ученого совета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора , протокол №7 от 21.10.2010 г.

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на российских и международных конференциях: I Московсковском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва, 2003; 8-й Российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии», Москва, 2009; 2-й Международном конгрессе по пробиотикам, Санкт-Петербург, 2009; VI Региональной научно-практической конференции «Педиатрия и детская хирургия в Приволжском Федеральном округе», Казань, 2009; XI Всероссийском конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье», Москва, 2009; Совместной конференции врачей Республики Татарстан и Российской гастроэнтерологической ассоциации, Казань, 2010; International Scientific Conference on Probiotics and Prebiotics IPC2010, Kosice, Slovakia, 2010; XVI российской гастроэнтерологической неделе, Москва, 2010; VII международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность», Москва, 2010.

Публикации

Основное содержание работы отражено в 53 научных публикациях: в статьях, в том числе, в рекомендованных ВАК РФ – 16, в других изданиях – 17, в патентах на изобретение РФ – 18, в монографиях – 2.

Объем и структура диссертации

Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы из 394 наименований, в том числе, 144 зарубежных и 250 отечественных работ. Диссертация изложена на 300 страницах основного текста, содержит 52 рисунка  и 74 таблицы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы, методы и объем проведенных исследований

       Исследования выполнены в 2003-2009 гг. в лаборатории биологии бифидобактерий ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора в рамках НИР (Рег. номер 01.2.006 08847) и лаборатории проблем фармацевтического менеджмента НИЦ ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова. Объекты и объем проведенных исследований представлен в таблице 1.

Исследования производственных штаммов проводились как традиционными, так и модифицированными микробиологическими методами исследований, разработанными в лаборатории биологии бифидобактерий (Жиленкова О.Г., 2007, 2009).

Подлинность производственных штаммов устанавливали по морфологическим, культуральным, физиологическим и ферментативным признакам. Определение биохимических свойств промышленно-перспективных штаммов бифидобактерий и лактобацилл осуществляли параллельно на трех биохимических тест-системах – API-20А (bioMerieux, Франция), API-50CHL (bioMerieux, Франция), АНАЭРОтест 23 (PLIVA-Lachema Diagnostica s.r.o., Чехия). Для исследования антибиотикочувствительности был применен модифицированный в лаборатории биологии бифидобактерий диско-диффузный метод на основе МУК 4.2.1890-04 «Методические рекомендации по определению чувствительности  микроорганизмов к антибактериальным препаратам» и рекомендаций  Национального Комитета Клинических  Лабораторных Стандартов, NCCL, 2002 г., США. Использовали диски с антибиотиками производства ФГУН НИИЭМ им. Пастера (Россия, Санкт-Петербург).

Видовую идентификацию бифидобактерий и латобацилл проводили молекулярно-генетическими методами на основе амплификации и секвенирования фрагментов двух генов: 16S рибосомальной РНК и трансальдолазы (Карзанова М.Е, Воронина О.Л., 2006).

Для изучения динамики культивирования монокультур и поликомпонентных ассоциаций применяли как стандартные лабораторные и производственные питательные среды, так и обогащенные пребиотическими компонентами, разработанные в лаборатории биологии бифидобактерий ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.

Определение биосовместимости испытуемых производственно-перспективных пробиотических штаммов по отношению к индигенной микрофлоре человека проводили на основании модели определения антагонистической активности, в том числе, модифицированным методом отсроченного антагонизма на плотной питательной среде.

Построенные на основе собственных проектных решений биотехнологические производственные участки (пилотный и полномасштабный) валидировались с помощью оригинальных методик, разработанных вместе с ведущим инженером лаборатории клинической микробиологии и биотехнологии ФГУН МНИИЭМ им Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора Григорьевым В.В.

Клинические исследования осуществлялись совместно с ведущими специалистами ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии Росздрава, г. Москва, Филиалом ГОУ ВПО РГМУ Росздрава «НКЦ геронтологии», г. Москва, ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Росздрава, г. Казань, Правобережной больницей ФГУ ЮОМЦ Росздрава, г. Астрахань.

Статистический анализ клинических данных, полученных в открытых рандомизированных исследованиях, выполнялся с использованием пакета прикладных программ «SAS» и включал следующие его элементы: построение

Таблица 1. Объекты и объем проведенных исследований.

Раздел работы

Объект исследований

Объем исследований

I.                Маркетинговые исследования

ь пробиотические препараты

сбор и анализ данных розничного аудита по 40 препаратам

•                 вторичные

 

 

 

ьфирмы, позиционирующиеся на пробиотическом сегменте

построение конкурентного поля по 37 фирмам

•                 первичные

ь               конечные потребители

121 анкета, 3 фокус-группы по 8 человек

 

ь               врачи

161 анкета, 3 фокус-группы по 8 человек

 

ь               провизоры

113 анкета, 3 фокус-группы по 8 человек

II.              Конструирование рецептуры

11 производственных штаммов бифидобактерий и 6 лактобацилл:

ь морфология 102 образцов культур

• подтверждение видовой подлинности

Bifidobacterium bifidum 1, Bifidobacterium bifidum 791, Bifidobacterium

ь биохимические свойства 85 образцов культур

 

bifidum ЛВА-3, Bifidobacterium breve 79-88, Bifidobacterium breve79-119,

ь молекулярно-генетическое типирование 17 образцов культур

 

Bifidobacterium  infantis 79-43, Bifidobacterium  infantis 73-15, Bifidobacterium

ькультуральные свойства 85 образцов

 

longum В379М, Bifidobacterium  longum Я-3, Bifidobacterium adolescentis Г7513, Bifidobacterium adolescentis ГО-13, Lactobacillus  plantarum 8-РА-3,Lactobacillus

ь антибиотикочувствительность 51 образца культур к 32 антибиотикам из 16 групп

 

fermentum  90-ТС-4, Lactobacillus acidophilus К3Ш24, Lactobacillus acidophilus NK-1, Lactobacillus acidophilus 100 аш, Lactobacillus casei КМН-12

ь антагонистические свойства 51 образца культур к тест-штаммам

•изучение межвидового синергизма пробиотических штаммов внутри поликомпонентной ассоциации в процессе культивирования и хранения

25 поликомпонентных ассоциаций бифидобактерий и/или лактобацилл

ь  культуральные свойства 125 многовидовых образцов ь антагонистические свойства 75 многовидовых образцов культур к тест-штаммам

• оценка  взаимодействия пробиотических штаммов с индигенной микрофлорой человека

3 производственных штамма (B.bifidum 791, B.lоngum B379M, L.acidophilus NK-1) с 12 индигенными штаммами человека из ГКНМ ФГУН МНИИЭИ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора бифидобактерий (ГКНМ 7520, ГКНМ 7538, ГКНМ 7544, ГКНМ 7570, ГКНМ 7587, ГКНМ 7712) и лактобацилл (ГКНМ 124, ГКНМ 125, ГКНМ 126, ГКНМ 127, ГКНМ 128, ГКНМ 132)

108 моделей для определения антагонистической активности

•сохранность производственных микроорганизмов при добавлении пребиотиков, микроэлементов, витаминов и антиоксидантов

5 производственных штаммов бифидобактерий и лактобацил при добавлении Рафтилина, Рафтилозы и Авимина

136 образцов жидкой и сухой биомассы

Таблица 1 (продолжение). Объекты и объем проведенных исследований.

III.            Производство и технология

проектная документации

подготовлена для двух производственных участков и диагностической микробиологической лаборатории

•    создание стандартных условий производства

пилотный производственный участок

построен и отвалидирован собственными методами

 

полномасштабный производственный участок

построен и отвалидирован собственными методами

 

диагностическая микробиологическая лаборатория

построен и отвалидирован собственными методами

•   создание аппаратной цепочки производства

технологическое оборудование производственных участков

спроектированы и доработаны ферментеры и смеситель

•   отработка и масштабирование технологии

производства

режимы ферментации

174 ферментаций

методика концентрирования

50 циклов концентрирования

 

режимы сублимационного высушивания

126 циклов лиофилизации

IV.            Регистрация

НТД

рецептура, ТУ, ТИ

•  продуктовая линека Габрифлорин

опытно-экспериментальные серии БАД

изучены санитарно-гигиенические, микробиологические, технологические параметры и сроки хранения 24 серий

•  БАД-субстанцию бифидобактерий и/или

  лактобацилл

НТД

рецептура, ТУ, ТИ

 

опытно-экспериментальные серии БАД-субстанции

изучены санитарно-гигиенические, микробиологические, технологические параметры и сроки хранения 36 серий

V.              Клинические испытания

 

двухкратное клинико-лабораторное обследование

•   Язва желудка и двенадцатиперстной кишки

взрослые

60 пациентов

• Реабилитационные мероприятия при

онкозаболеваниях

дети

127 пациентов

•    Дислипидемия у лиц пожилого возраста

взрослые

30 пациентов

•    Ротавирусная инфекция

дети

105 пациентов

VI.            Выведение на фармрынок

конкурентные стратегии и маркетинговые комплексы

Разработаны конкурентные стратегия и маркетинговые мероприятия для выведения на рынок 21 поликомпонентного пробиотического препарата фирм-производителей ЗАО «Биокад», ЗАО «Партнер» и ООО «НПФ Амфита»

гистограмм для визуальной оценки характера распределения; подсчет частот для определения количества наблюдений в каждый день исследования и выявления переменных с большим числом пропущенных значений; расчет средних значений и элементарная статистика для определения основных параметров распределений показателей и проверки их на соответствие нормальному закону распределения; корреляционный анализ для выявления взаимосвязи между параметрами; расчет Т-критерия Стьюдента для определения различий средних значений показателей в сравниваемых выборках.

Емкость пробиотического сегмента российского фармацевтического рынка за исследуемый период рассчитывалась методом розничного аудита.

Идентификацию конкурентных стратегий компаний, позиционирующихся на пробиотическом сегменте фармрынка, осуществляли на основе модифицированной нами типологии Юданова А.Ю.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Предпосылки создания поликомпонентного пробиотического препарата

Жизненный цикл поликомпонентного пробиотического препарата можно представить в виде многоступенчатого пайп-лайна, где на входе рассматривается сама возможность создания, а на выходе – готовый препарат, удовлетворяющий конкретную потребность общества в улучшении качества жизни посредством коррекции нарушенного микробиоценоза желудочно-кишечного тракта (рис.1).

Рисунок 1. Этапы реализации биотехнологического проекта по созданию поликомпонентного пробиотического препарата.

Организации нового биотехнологического производства предшествует проведение первичных и вторичных маркетинговых исследований. Анализ вторичной маркетинговой медико-биологической информации продемонстрировал высокую частоту возникновения дисбиотических состояний различного генеза среди детского и взрослого населения России, подразумевающих существенную потребность фармацевтического рынка в препаратах, корригирующих микроэкологические нарушения ЖКТ. Применение антибактериальных и химиотерапевтических средств, а также острые кишечные инфекции являются ведущими на сегодняшний день этиологическими факторами дисбактериоза. Развивающиеся на их фоне декомпенсированные формы дисбиотических нарушений требуют разработки новых высокоэффективных средств и методов профилактики и лечения.

Для оценки перспективности создания нового поликомпонентного пробиотического средства с экономической точки зрения нами был проведен анализ существующей емкости данного сегмента российского фармацевтического рынка с помощью метода розничного аудита. Используя динамику продаж лекарственных препаратов в России, распределенных по анатомо-терапевтическим группам, за исследуемый период нами был выявлен наиболее емкий сегмент – группа лекарственных средств, применяемых для лечения болезней желудочно-кишечного тракта (ЖКТ/болезни обмена составляют около 20% от  всего объема российского фармацевтического рынка) (рис.2).

Рисунок 2. Анализ продаж лекарственных и парафармацевтических средств по анатомо-терапевтическим группам в России за 2003-2009 гг.

Существенной частью данной группы являются препараты, относящиеся к классу A07FA по анатомо-терапевтическо-химической классификации –антидиарейные микроорганизмы. Емкость данного сегмента рынка выросла с $17млн в 2002 до $120 млн в 2009 году. Причем, если в 2003 году лишь 40% препаратов данной  группы классифицировались как комбинированные, то в 2009 году уже около 70% продаваемых в России пробиотических средств по данным розничного аудита относились к этому разряду (рис.3). Таким образом, нам удалось выделить препарат «дойную корову» пробиотического сегмента фармацевтического рынка, в терминологии матрицы Boston Consulting Group – однокомпонентный «Бифидумбактерин» и «восходящие звезды» – препараты, уровень розничных продаж которых значительно вырос за последнее время – поликомпонентные пробиотические лекарственные и парафармацевтические средства («Линекс», «Нормоспектрум» и др.) (рис.4).

Рисунок 3. Рейтинг продаж бактерийных препаратов на российском  фармацевтическом рынке в 2009 г.

Полученные в результате сбора и анализа вторичной маркетинговой информации результаты послужили основой, как для конструирования рецептуры собственного инновационного продукта, так и для выбора целевого сегмента при его выведении на российский фармацевтический рынок.

Доля рынка

                Высокая       Низкая

Темп роста в отрасли

Высокий

Экономика

в целом

«Звезда»

комбинированные препараты:

ЛИНЕКС, НОРМОСПЕКТРУМ

«Вопросительные знаки»

препараты на основе споровых микроорганизмов:

БАКТИСУБТИЛ, БИОСПОРИН

Низкий

«Дойные коровы»

БИФИДУМБАКТЕРИН

«Собаки»

препараты на основе кишечной палочки:

КОЛИБАКТЕРИН

Рисунок 4. Бостонская матрица «рост/доля рынка».

Биосовместимость, как основной принцип  создания безопасных и эффективных поликомпонентных пробиотических препаратов

На втором этапе – отработке рецептуры, нами были определены основные требования к ингредиентам, входящим в состав поликомпонентного пробиотического препарата, ведущим из которых является биосовместимость (рис. 5).

Рисунок 5. Принцип биосовместимости как основа рецептуростроения поликомпонентных пробиотиков.

Характер роста промышленных штаммов на  питательных средах – как бифидобактерий, так и лактобацилл – отличался большим разнообразием формы, цвета и размера колоний, что свидетельствовало о невозможности  внутриродовой дифференциации этих культур только по морфологическим признакам.

Для биохимической идентификации отобранных производственно-перспективных микроорганизмов применяли стандартные коммерческие тест- системы. Данные по исследованию биохимических свойств бифидобактерий и лактобацилл позволили достовернее различать пищевые потребности ряда производственных штаммов, что послужило основанием при составлении поликомпонентных ассоциаций для совместного культивирования и подбора пребиотических компонентов для обогащения питательных сред.

Определение чувствительности производственных штаммов бифидобактерий и лактобацилл к антибиотикам продемонстрировало, что наиболее широким спектром антибиотикорезистентности на фоне  остальных изученных культур обладали штаммы вида B. longum и вид Lactobacillus plantarum 8-РА-3. Выявленные факты  резистентности явились предпосылкой для дальнейшего  изучения сочетанного применения поликомпонентных препаратов нормофлоры и антибиотиков.

Все изученные штаммы обладали высокой антагонистической активностью.  При этом наибольшую антагонистическую активность продемонстрировали: из бифидобактерий - Bifidobacterium adolescentis ГО-13, Bifidobacterium breve 79-88, Bifidobacterium breve 79-119; из лактобацилл - Lactobacillus casei КНМ-12.

При исследовании культуральных свойств промышленно-перспективных микроорганизмов была подтверждена технологичность всех испытуемых штаммов, о чем свидетельствовало получение биомассы с высоким содержанием КОЕ/мл бактерий (108-109) и  активное продуцирования в процессе ферментации органических кислот

В результате проведенного молекулярно-генетического типирования производственных штаммов показано, что для ряда бифидобактерий – B.adolescentis ГО-13, B.bifidum 791, B.breve 79-119, B.breve 79-88, B.infantis 73-15, B.longum B379M результаты секвенирования по двум мишеням – 16S рибосомальной РНК и трансальдолазы – совпали с идентификацией по традиционным характеристикам (морфологическим, биохимическим и т.д.). В то же время B.bifidum ЛВА-3 и B.bifidum 1 были идентифицированы как B.breve, B.longum Я-3 – как B.adolescentis, B.adolescentis Г 75-13 – как B.longum. Молекулярно-генетическая  идентификация производственных штаммов лактобацилл по гену 16S рРНК продемонстрировала полное совпадение с фенотипическим у L. plantarum 8-РА-3, в то время как у L. acidophilus (NK-1, К3Ш24, 100 аш) и L. fermentum 90-ТС-4 последовательность 16S рРНК не соответствовала паспортным данным штаммов, полученным традиционными методами. Сравнение нуклеотидной последовательности их 16S рРНК с последовательностями в базе данных GenBank свидетельствовало, что штаммы NK-1 и 100 аш, идентифицированные ранее как  L. acidophillus, на самом деле относятся к L. helveticus, штамм L. acidophillus К3Ш24 – к группе L.casei/paracasei,  а L. fermentum 90-ТС-4 – к L. plantarum.

Использование методов молекулярно-генетической идентификации штаммов необходимо для осуществления контроля в процессе производства, гарантирует идентичность данной культуры исходному штамму, позволяет контролировать чистоту используемой культуры, повышает безопасность производства.

Полученные результаты по изучению межвидовых взаимодействий  пробиотических штаммов внутри поликомпонентной ассоциации в процессе культивирования и хранения свидетельствуют о возможности совместного культивирования различных видов бифидобактерий и лактобацилл, а также синергидном эффекте – более высокой антагонистической активности и большей стабильности при хранении консорциума штаммов, что позволяет решить сложную биотехнологическую задачу получения многокомпонентных пробиотических препаратов, имеющих определенный состав и назначение (табл.2).

При определении биосовместимости методом совместного культивирования на плотной и полужидкой питательной среде, а также методом отсроченного антагонизма (рис. 6) испытуемые производственные штаммы B.bifidum 791, B.lоngum B379M, L.acidophilus NK-1 в подавляющем числе наблюдений не ингибировали рост индигенных культур основных представителей нормальной микрофлоры.

Изучение влияния пребиотиков – растворимых пищевых волокон на производственные штаммы отразило перспективность использования источников  инулина и олигофруктозы («Рафтилина» и «Рафтилозы») в качестве ингредиентов в составе питательных сред для культивирования бифидо- и лактобактерий.  Было показано, что эти добавки способствуют лучшей сохранности препаратов в широком температурном диапазоне.  Подтверждена не только биосовместимость, но и  рост-стимулирующий эффект на производственные пробиотические штаммы «Рафтилина», «Рафтилозы» и аминокислотно-витаминно-минерального комплекса «Авимин» (табл.3).

Таблица 2. Зоны задержки роста тест-культур (в мм) в присутствии отдельных штаммов бифидо- и лактобактерий и их консорциумов.

Объект исследования

S.sonnei 5063

S.flexneri 170

E.coli 157

S.aureus 209

Proteus vulgaris 177

Bifidobacterium bifidum 791

16+3

15+2

15+3

14+1

17+2

Bifidobacterium

breve 79-119

30+1

27+2

29+2

30+1

28+1

Bifidobacterium

infantis 73-15

12+2

12+1

15+2

13+2

17+2

Bifidobacterium

longum В379М

24+2

20+2

23+2

17+3

25+3

Bifidobacterium

adolescentis ГО-13

32+2

26+1

29+2

26+1

25+1

Бифидо-консорциум

32+1

28+2

31+2

31+1

28+1

Lactobacillus plantarum 8-РА-3

18+1

19+3

20+1

27+2

21+2

Lactobacillus

acidophilus NK-1

27+4

29+1

29+3

22+1

30+2

Лакто-консорциум

31+1

31+3

33+1

32+2

32+1

Таблица 3.  Влияние комплекса Авимин на динамику роста производственных штаммов бифидо- и лактобактерий в процессе культивирования (котроль – среда, содержащая дрожжевой экстракт, среда 1 – 2,5% Авимина, среда 2 – 5% Авимина).

Наименование штамма

Число КОЕ/мл после культивирования

Значение рН

Значение титруемой кислотности, 0Т


контроль

среда

1

среда

2

контроль

среда 1

среда 2

контроль

среда 1

среда

2

В.bifidum 791

1,5x108

1,7x108

1,5x108

4,47

4,40

4,44

130

132

121

В.longum В379М

3,0x107

1,7x108

2,1x108

5,34

4,94

4,83

152

130

169

B.infanlis

79-43

5,5x107

4,0x107

5.5x108

4,76

4,37

4,43

120

144

136

L.casei KHM-12

3,0x108

4,4x108

5.5x108

4,23

4,24

4,29

132

118

122

L.plantarum

8-PA-3

5,5x108

4,5x108

6,0x108

4,40

4.37

4,42

114

108

108

Рисунок 6. Результаты изучения совместного культивирования при  отсроченном подсеве индигенных штаммов человека.

Таким образом, полученные данные по биосовместимости подтвердили перспективность выбранного технологического подхода к конструированию поликомпонентных синбиотических препаратов и субстанций, что позволило нам перейти к третьему этапу пайп-лайна – созданию производства и масштабированию лабораторных рецептур в промышленных объемах.

Концепция создания универсального биотехнологического  участка по производству поликомпонентных пробиотических субстанций и готовых форм

В процессе создания парафармацевтического цеха нами были сформулированы основные принципы построения  биотехнологического участка по выпуску поликомпонентных пробиотических субстанций и готовых форм: стандартные условия, универсальность аппаратной цепочки и операционная технологичность производства. Разработанные критерии послужили фундаментом для создания проектной документации, а также основных положений, касающихся валидационных процедур выполненных общестроительных работ и монтажа вентиляционных систем асептических производственных помещений. 

Для каждой серии продукции были достигнуты стандартные условия производства благодаря созданию оптимального уровня поточности комплекса помещений, четко структурированных по технологической и функциональной принадлежности, с соблюдением регламентированных контрольно-аналитических процедур: от подготовки исходного сырья и материалов, через наработку посевного материала и ферментацию, с последующей сублимацией концентрированной биомассы, смешиванием ее, согласно рецептуре, с необходимыми функциональными ингредиентами, до фасовки в различные лекарственные  формы  и  упаковку в  потребительскую  тару  (рис. 7).  Все технологические помещения - герметично запираемые с отрегулированными при пуско-наладке и еженедельно проверяемыми, обеспечивающими дополнительную надежность перепадами давлений между боксами – как внутри, так и между категорируемыми зонами классов С, D и К. Автономная от здания приточно-вытяжная вентиляция благодаря внедренной методике контроля герметичности ограждающих строительных конструкций и воздуховодов вентиляционных систем  классифицируемых  помещений  (рис. 8) позволила добиться значений параметров микробного загрязнения воздуха, замеряемых при помощи аппарата Кротова, 0 КОЕ/м3 бактерий и 9 КОЕ микроорганизмов по методу седиментации в течение 4 часов на чашку Петри диаметром 90 мм как в оснащенном, так и в эксплуатируемом состоянии производственных помещений зоны С, что существенно ниже нормативных показателей.

Согласно второму основному принципу создания биотехнологического участка, в выстроенных по критериям GMP помещениях была внедрена универсальная производственная цепочка. На сегодняшний день набор технологического оборудования в герметичном исполнении, усовершенствованный в соответствии с асептическими принципами биотехнологии, дает возможность культивировать широкий спектр промышленно перспективных штаммов бифидобактерий и лактобацилл. Ферментационные, сублимационные и фасовочные мощности позволяют получать субстанции и готовые продукты в виде жидких и сухих фармформ с соблюдением основных принципов – непрерывности, согласованности и безопасности проведения всех производственных операций.

Номер по плану

Наименование помещений и основного оборудования

Класс чистоты

1

Гардероб

НК

Туалет

НК

2

Коридор

НК

Материальный шлюз

НК/D

3

Холодильная камера

НК

4

Помещение для приготовления питательных сред; 4.1, 4.2 – Пищеварочный котел

НК

5

Весовая; 5.1 – Весы электронные

НК

Моечная; 5а.4 – Аквадистиллятор, 5а.5 – Сухожаровой шкаф

D

6

Помещение вторичной упаковки

НК

7

Персональный шлюз

НК/D

8

Стерилизационная; 8.2 - Автоклав

D

Термальная

D

9

Персональный шлюз

D/C

10

Ферментационная; 10.1 – Парогенератор, 10.2 - Ферментер

C

11

Помещение первичной упаковки; 11.1 – Капсулирующая машина, 11.2 – Укупорочная машина, 11.3 – Дозатор, 11.4 – Смеситель

C

12

Посевной бокс

C

13

Контрольный бокс

C

14

Помещение лиофильной сушилки; 14.1 – Лиофильная сушилка, 14.2 – Морозильный ларь, 14.3 - Сепаратор

C

15

Коридор

D

16

Коридор

C

17

Материальный шлюз

D/C

18

Технический коридор

K

19

Венткамера

НК

Рисунок 7. Структура полномасштабного биотехнологического участка.

Закрывают регулирующее устройство приточной системы 5. Прибор контроля избыточного давления (разрежения) воздуха 7 подключают к  полости асептического помещения 2 через импульсную трубку 8. Включают вытяжную вентиляционную систему 4. Регулирующим устройством 6 устанавливают предельно допустимую расчётную проектную  величину разрежения в полости 2. Прибором контроля скорости воздушного потока 9 и его датчиком 10, размещённым  в полости вытяжного воздуховода 12, подключённым к прибору контроля 9  импульсной трубкой 8, контролируют  объёмную скорость воздуха (L выт). Аналогично контролируют объёмную скорость воздушного потока (Lприт), поступающего через неплотности закрытого регулирующего устройства 5 в  приточном воздуховоде 13.

Gфакт  =  L выт – Lприт  / Sоск, причем Gфакт [Gтр], где

Gфакт – фактическая удельная  воздухопроницаемость воздуха через ограждающие конструкции асептических помещений (кг/м2час);

[Gтр] - нормативная величина удельной воздухопроницаемости ограждающих конструкций асептических помещений (0,13 для зон А и В и 0,23 кг/м2час для зон С и D) при избыточном давлении в полости асептического помещения 50 Па;

L выт  -  количество воздуха прошедшего через вытяжной воздуховод (м3/час);

Lприт - количество воздуха прошедшего через приточный воздуховод (м3/час);

Sоск  - общая площадь ограждающих строительных конструкций асептических помещений 1 (м2).

Фактическая величина, полученная в результате контроля удельной воздухопроницаемости Gфакт не должна превышать нормативную величину [Gтр]. В случае превышения указной величины воздухопроницаемости, устраняют обнаруженные течи и повторяют испытания.

Рисунок 8. Методика контроля герметичности ограждающих строительных конструкций классифицируемых помещений асептических производств.

Третьей необходимой особенностью современного биотехнологического производства является высокая технологичность осуществляемых на нем операций. Инновационные методы совместного культивирования пробиотических штаммов, повышение активности биомассы путем обогащения среды пребиотическими компонентами и последующее концентрирование не только позволили увеличить производительность оборудования, но и открыли перед созданными биотехнологическими участками (пилотным и полномасштабным)  неограниченные возможности по выпуску субстанций бифидо- и лактобактерий широкого ассортиментного перечня. Сырьевая технологичность, позволяющая произвести из единого набора пробиотических субстанций неограниченное по своему разнообразию количество готовых продуктов, открыла перед биотехнологическим комплексом широкие перспективы по собственному и контрактному производству поликомпонентных пробиотических препаратов.

В период с 2007 по 2010 год построены пилотный и полномасштабный биотехнологические участки, полностью удовлетворяющие как собственной концепции универсального производства, так и получившие положительные  заключения Роспотребнадзора, разрешающие выпуск пробиотических БАД. Благодаря внедрению инновационных технологий, на созданной аппаратной схеме, по отвалидированному графику выпускаются 11 готовых форм поликомпонентных пробиотиков и более 20 лиофилизированных бифидо- и/или лактосодержащих субстанций различного штаммового состава.

Отработка рецептуры и  технологии, государственная регистрация и запуск серийного производства поликомпонентных пробиотических препаратов и субстанций

На основании разработанной концепции поликомпонентного синбиотического продукта и с учетом методик, внедренных на собственном биотехнологическом участке, нами была разработана рецептура и  технология, а затем проведена государственная регистрация и запуск серийного производства жидких иммунобиологических продуктов – «Габрифлорин-лакто» и «Габрифлорин-бифидо». Основной идеей при конструировании серии жидких пробиотиков явилось создание рецептуры, сочетающей в себе технологическую воспроизводимость, антагонистическую активность к широкому спектру патогенных микроорганизмов, возможность использования у детей с 3-х месячного возраста, а также более длительный срок хранения относительно существовавших на рынке аналогов (60 против 30-40 суток). Учитывался также и немаловажный фактор экономической рентабельности – производство данного вида продукции исключает дорогостоящую процедуру сублимации.

В состав «Габрифлорин-бифидо» включены штаммы из ГКНМ ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора Bifidobacterium bifidum 791, Bifidobacterium longum В379М и Bifidobacterium adolescentis ГО-13, в «Габрифлорин-лакто» – Lactobacillus acidophilus  100аш, Lactobacillus acidophilus  NK-1, Lactobacillus acidophilus К3Ш24, Lactobacillus plantarum 8-РА-3. Данные по исследованию пребиотических и технологических свойств инулина, олигофруктозы и дрожжевого автолиза  Авимин,  послужили основанием для обогащения этими ингредиентами препаратов  серии «Габрифлорин». Кроме того, в состав этих БАД были включены аскорбиновая кислота, как  антиоксидант, и яблочный пектин в качестве естественного сорбента.

Отработанная технология получения готовой формы жидких синбиотиков, благодаря универсальному характеру выстроенной производственной цепочки допускает введение в рецептуру дополнительных видов и штаммов бифидо- и лактобактерий, разнообразных пребиотических компонентов для непрерывного совершенствования  существующего продукта.

Разработанные технологические документы с образцами продукции  получили положительную оценку экспертов ГУ НИИ питания РАМН, по результатам которой Федеральным центром Роспотребнадзора была проведена их регистрация  с занесением в Федеральный реестр биологически активных добавок к пище. Подготовленная техническая документация, контрольно-аналитические мероприятия, а также проведенная в аккредитованном  органе добровольная сертификация позволили подтвердить качество выпускаемых поликомпонентных пробиотиков декларацией о соответствии. С июля 2008 года налажен промышленный выпуск данных препаратов на предприятии ООО «НПФ Амфита».

В рамках рассмотренной выше сырьевой технологичности универсального производственного участка были разработаны рецептуры «БАД-субстанция бифидобактерий», «БАД-субстанция лактобацилл» и «БАД-субстанция бифидобактерий и лактобацилл», способные удовлетворить как собственные потребности по выпуску готовых поликомпонентных пробиотических препаратов, так и обеспечить контрактное производство. Согласно утвержденной в установленном порядке нормативной документации общая номенклатура микроорганизмов для наработки БАД-субстанций составляет 11 штаммов бифидобактерий и 6 лактобацилл (табл. 1 раздел II). На основе данного перечня возможны различные варианты рецептур и сочетаний микроорганизмов.

При производстве БАД-субстанции использовались приемы совместного культивирования штаммов. Полученные жидкие биомассы концентрировались с помощью сепаратора, а затем сублимационно высушивались. Биомасса лактобацилл в процессе изготовления «БАД-субстанции бифидобактерий и лактобацилл» добавлялась отдельно в  соотношении 1:10. Полученная таким образом сухая субстанция фасовалась в герметичную упаковку и подвергалась контрольным мероприятиям в соответствии с существующими  нормативными документами. Во всех образцах продукции, протестированных в независимых аккредитованных лабораториях, в процессе длительного хранения бифидобактерии и лактобациллы сохранялись в жизнеспособном состоянии без существенных потерь в течение 12 месяцев (содержание КОЕ/г готовой субстанции не менее 109). На основании представленных результатов разработаны технологические документы, которые вместе с образцами продукции были представлены на экспертизу в Федеральный центр Роспотребнадзора и ГУ НИИ Питания РАМН, по результатам которой получены санитарно-эпидемиологическое заключение на ТУ и регистрационные свидетельства на БАД-субстанцию. На сегодняшний день из разработанной «БАД-субстанции бифидобактерий» производится линейка поликомпонентных пробиотических препаратов «Бифидум-Мульти», «БАД-субстанция бифидобактерий и лактобацилл» используется как для производства собственных препаратов серии «Нормоспектрум», так и для контрактного производства таблетированного пробиотика «Полибактерин».

Современные алгоритмы применения поликомпонентных пробиотических препаратов в инфекционной и неинфекционной патологии

В исследования, посвященные пятому этапу жизненного цикла поликомпонентного пробиотического препарата, нами были включены мультицентровые клинические испытания «Бифидум-Мульти» и «Нормоспектрум», проведенные с целью расширения их лечебно-профилактического применения при инфекционных и неинфекционных патологических состояниях, охватившие 322 человека в возрасте от 1-го года до 80 лет.

Используя представленные выше данные по естественной антибиотикорезистентности ряда производственных штаммов бифидобактерий и лактобацилл, входящих в БАД «Нормоспектрум», нами предложен новый алгоритм применения поликомпонентных пробиотиков in vivo при хеликобактер-ассоциированной инфекции на фоне антибиотикотерапии с целью снижения частоты и тяжести возникающих побочных эффектов лечения и уменьшения риска развития микроэкологических нарушений.

«Нормоспектрум» назначался по 1 капсуле 3 раза в день в течение 10 суток. В состав препарата входят штаммы B. bifidum, B. longum и B. adolescentis, характерные для нормальной микрофлоры взрослого человека, два штамма ацидофильных лактобацилл, а также виды  L. plantarum и L. casei, пребиотические компоненты –  инулин и олигофруктоза, витаминно-минеральный премикс.

Проведенное исследование выявило преимущество одновременного со стандартной эрадикационной терапией применения поликомпонентного пробиотика «Нормоспектрум» в комплексном лечении язвы желудка и ДПК, выражающееся: 1) в тенденции к увеличению случаев элиминации Н. pylori по данным уреазного теста (89% в основной группе, принимавший «Нормоспектрум» одновременно с эрадикационной терапией и 71% в контрольной группе); 2) в раннем устранении функциональных расстройств работы ЖКТ (боли и тяжесть в области эпигастрия, изжога купировались в основной группе на 3-4 день, а в контрольной – на 6-7 день лечения); 3) уменьшении степени выраженности гиперемии слизистой желудка, по данным гастроскопии (рис. 9); 4) в нормализации содержания бифидобактерий; 5) статистически достоверном  увеличении  лактобацилл;  6) нормализации уровня типичных эшерихий, по данным исследования кала (рис. 10).

Рисунок 9. Степень выраженности гиперемии слизистой желудка по данным ЭГДС до и после лечения (1-ая группа – стандартная эрадикационная терапия с последующим применением БАД «Нормоспектрум», 2-ая – стандартная эрадикационная терапия с одновременным применением БАД «Нормоспектрум», 3-ья – контрольная – стандартная эрадикационная терапия).

У 127 детей с онкологическими заболеваниями на разных сроках, прошедших с момента окончания специального лечения, нами были проведены исследования состояния микробиоценоза, как одного из важнейших гомеостатических составляющих человеческого организма. В случае обнаружения дисбиотических  нарушений, возникших  в  результате

(а)

(б)

(в)

Рисунок 10. Сравнение содержания бифидобактерий (а), лактобацилл (б) и типичных эшерихий (в) при микробиологическом исследовании кала до и после лечения.

химиотерапии, для их коррекции проводился короткий 10-ти дневный курс синбиотика «Бифидум-Мульти 2» или «Бифидум-Мульти 3». «Бифидум-Мульти 2» для детей  от 3 до 14 лет содержит в своем составе виды B. bifidum, B.breve, B. infantis и B.longum. В рецептуре «Бифидум-Мульти 3», для детей старше 14 лет и взрослых –  B. bifidum, B.longum и B.adolescentis. Кроме того, в оба препарата входят пребиотические компоненты: пектин, олигофруктоза и инулин. Степень микробиологических нарушений обследованных детей диагностировалась экспертом по результатам бактериологического исследования кала. Выраженные нарушения микробиоценоза кишечника  2-ой степени, требующие обязательной коррекции, выявлялись у детей с гемобластозами (рис. 11а) и солидными опухолями (рис. 11б) на протяжении всего периода диспансерного наблюдения (до десяти лет и более), 3-ей степени в срок до 5 лет от момента окончания специального лечения.

(а)

(б)

Рисунок 11. Нарушение микробиоценоза толстой кишки у детей с гемобластозами (а) и солидными опухолями (б) в различные сроки (до 2 лет, от 2 до 5 лет и более 5 лет) прошедшие от момента окончания специального лечения.

Согласно представленному дизайну исследования, детям с выраженными дисбиотическими нарушениями кишечника проводили  короткий десятидневный курс синбиотика «Бифидум-Мульти», в результате которого удалось получить статистически значимое (р<0,05) уменьшение выраженности дисбиотических нарушений кишечника от 5% (при третьей степени) до 15% (при второй степени). В то же время, достоверное увеличение уровня бифидобактерий и лактобацилл (р<0,05) в кале, корректно принимавших препарат «Бифидум-Мульти», позволяет с уверенностью говорить о возможности продолжения процессов нормализации функционального состояния и микрофлоры ЖКТ детей и после кратковременного воздействия пробиотиком (рис.12).

Дальнейшее клиническое исследование касалось изучения влияния синбиотика «Нормоспектрум» на микрофлору кишечника и липидный обмен у лиц пожилого возраста. Под наблюдением находилось 30 женщин, получавших «Нормоспектрум» по 2 капсулы 2 раза в день перед едой в течение  20 дней.

После проведенного препаратом «Нормоспектрум» курса  происходило улучшение клинических и лабораторных показателей состояния микрофлоры кишечника. На этом фоне у  пациентов  1-й  возрастной  группы (46-65 лет) отмечалось  статистически достоверное  снижение  уровня  триглицеридов (с

(а)

(б)

(в)

Рисунок 12. Коррекция дисбиотических нарушений кишечника у детей с острым лимфобластным лейкозом в период диспансерного наблюдения (а – изменение степени микробиологических нарушений, б – сравнение содержания бифидобактерий, в – лактобацилл при микробиологическом исследовании кала до и после лечения).

2,9±0,03 до 2,0±0,23 ммоль/л, р<0,05). У лиц с сочетанной дислипидемией из 2- й группы (66-80 лет) после приема препарата происходило снижение содержания общего холестерина (с 7,1±0,07 до 5,9±0,04 ммоль/л, р<0,05).

Заключительное исследование посвящено клинико-лабораторной оценке эффективности синбиотического препарата «Нормоспектрум» при ротавирусных гастроэнтеритах у 105 детей в возрасте от 1 года до 11 лет. В рамках протокола клинического испытания определяли возможное влияние препарата на купирование симптомов вторичной лактазной недостаточности; изучали потенциальный санирующий эффект синбиотика (по темпам элиминации вируса из кишечника) при ротавирусной инфекции (РВИ). Диагноз РВИ подтверждался результатами иммунохроматографического теста.

Изучаемая группа состояла из 45 детей, получавших наряду со стандартной терапией  «Нормоспектрум»  по 1 мерной ложке (0,5 г) 2 раза в день в течение 5 дней с момента госпитализации и 60 пациентов, которые получали лечение по традиционной схеме: диета, оральная или инфузионная регидратационная терапия. Результаты исследования представлены в таблице 4.

Таблица 4. Сравнительная характеристика клинико-лабораторной эффективности синбиотика «Нормоспектрум» при РВИ у детей.

Клинический показатель

Исследуемая группа

Контрольная группа

р-значение

Продолжительность лихорадки, дни

2,93±0,33

3,76±0,48

р<0,05

Продолжительность анорексии, дни

2,02±0,33

2,1±0,31

Продолжительность инфекционно-токсического синдрома (вялость, слабость, адинамия), дни

2,33±0,3

2,41±0,29

Продолжительность диареи, дни

3,49±0,3

4,88±0,46

p<0,05

Средняя частота стула на 5 день терапии

1,04±0,32

1,73±0,57

p<0,05

Продолжительность жалоб на боли в животе, дни

1,16±0,3

1,42±0,31

Продолжительность метеоризма, дни

1,29±0,29

1,71±0,36

p<0,05

Продолжительность рвоты, дни

1,69±0,24

2,41±0,42

р<0,05

Продолжительность признаков обезвоживания, дни

1,67±0,25

2,18±0,38

р<0,05

Элиминация АГ РВ на 5 день терапии, %

33,3

11

Лактазная недостаточность на день госпитализации, % больных

52,3

59

Улучшение лабораторных показателей углеводной (лактазной) недостаточности, % больных

41,67

4

Отсутствие динамики лабораторных показателей углеводной (лактазной) недостаточности, % больных

41,66

92

Длительность лихорадочного периода как одного из основных показателей инфекционно-токсического синдрома достоверно различалась в сравниваемых группах: у детей получавших «Нормоспектрум», продолжительность лихорадки была примерно на сутки меньше, чем в группе сравнения (р<0,05).

Положительное влияние пробиотических штаммов и цинка, входящих в состав «Нормоспектрума», характеризовалось достаточно быстрой нормализацией стула, уменьшением явлений метеоризма, купированием болей в животе. Общая продолжительность диарейного синдрома составила 3,49 дня в исследуемой группе и 4,88 дня в группе контроля (p<0,05). Применение «Нормоспектрума» достоверно уменьшало длительность периода болезни, в течение которого у больного регистрировалась рвота,  сокращало период проявлений обезвоживания в сравнении с группой контроля.

Полученные данные свидетельствуют о выраженном санирующем эффекте синбиотика. На 5 день от начала терапии у 33,3% больных детей, получавших «Нормоспектрум», антиген ротавируса в фекалиях не определялся, тогда как в группе контроля лишь у 11%.

Лабораторные признаки дисахаридазной недостаточности регистрировались в первые дни госпитализации более, чем у половины больных (52,3-59%). На фоне приема «Нормоспектрума» показатели, характеризующие нарушение переваривания сахаров, нормализовались у 41,7% детей исследуемой группы и лишь в 4% – в контрольной.

Стратегия развития биотехнологической компании в условиях российского фармацевтического рынка

Последняя по порядку, но одна из важнейших по значимости задач, решаемых в рамках единой концепции разработки поликомпонентного пробиотического препарата – построение стратегии выведения зарегистрированного продукта на фармацевтический рынок.

Для реализации поставленной задачи нами было определено конкурентное поле компаний, позиционирующихся на пробиотическом сегменте российского фармацевтического рынка, идентифицирован тип осуществляемой этими фирмами конкурентной стратегии. Основными конкурентами компаний «Амфита», «Биокад» и «Партнер» на сегодняшний день являются «Lek» с хитом продаж «Линекс» и  долей 30% и «Ratiopharm» с метаболическим пробиотиком «Хилак-форте» и долей 21% (рис.  13).  Эти

Рисунок 13. Средние за период 2003-2009 гг доли ежегодных продаж (в %) десяти крупнейших производителей бактерийных препаратов на российском фармрынке.

организации в соответствии с модифицированной теорией конкурентных стратегий Юданова соответствуют  фирмам-«виолентам» (или слонам), основными чертами которых являются: массовый профиль производства, крупный размер компаний, высокий уровень расходов на НИОКР (табл. 5).

В рамках сложившейся ситуации на пробиотическом сегменте российского фармрынка при разработке стратегии вывода новых конкурентноспособных продуктов на примере исследуемых биотехнологических компаний нами были выработаны следующие рекомендации:

  1. Сосредоточиться на выпуске поликомпонентных пробиотических субстанций и готовых препаратов, непрерывно расширяя линейку выпускаемой продукции как за счет введения в продукты новых пробиотических штаммов и пребиотических компонентов,  так и за счет –увеличения разновидностей фармакологических форм выпускаемой продукции.
  2. При разработке комплекса маркетинга для ЗАО «Биокад» и ООО «НПФ Амфита» уйти от «лобового столкновения» с фармгигантами придерживаться «патиентной» (лисица) нишевой стратегии продвижения. Для ЗАО «Партнер» – использовать все имеющиеся ресурсы «виолентной» стратегии: технологический опыт, навыки обслуживания рынка, завоеванную у потребителей репутацию, накопленные финансовые возможности, чтобы избежать поглощения другой крупной компанией-конкурентом.
  3. При выводе новых поликомпонентных пробиотичеких препаратов использовать все 3 составляющие продвижения (сервис для аптек, врачей и дистрибьюторов, содержание медицинских представителей и рекламу, нацеленную на конечного потребителя), а также дополнительно для ЗАО «Партнер» возможности имеющегося у него административного ресурса.

Используя разработанную стратегию, ООО «НПФ Амфита» укрепила свои позиции на пробиотическом сегменте российского фармацевтического рынка. Один из ее основных брэндов – «Нормоспектрум» – вошел в топ-100 самых продаваемых БАДов России за 2009 год. Линейка «Бифистим» успешно выведенная в 2004 на российский фармрынок была в 2006 году продана компании «Биомед» и продолжает занимать одно из ведущих мест по объему продаж среди отечественных пробиотических препаратов. ЗАО «Партнер» за счет выпуска нового поликомпонентного бактерийного лекарственного средства «Флорин форте» в 2007 году укрепил свои позиции крупнейшего российского производителя бифидо- и лактосодержащих препаратов.

Таблица 5. Методология построения поля эталонных конкурентных стратегий на базе модифицированной типологии Юданова.

ХАРАКТЕРИСТИКА СТРАТЕГИИ

ТИПОЛОГИЯ ЮДАНОВА

ТИПОЛОГИЯ ГУРКОВА

ТИПОЛОГИЯ СТРИКЛЕНДА-ТОМПСОНА

ТИПОЛОГИЯ

МАЙЛЗА-СНОУ

ПРИМЕЧАНИЯ

высокие издержки,  низкое качество – низкая потребительская ценность

«Неудачник» (высокая цена)

«Аутсайдер» (низкая цена)

«Реактор»

У Портера есть понятие «критической области» на графике доля рынка/рентабельность

высокие издержки,  высокая цена, высокое качество - высокая потребительская ценность

«Патиент»

(лисы)

«Защитник качества»

«Cфокусированная стратегия дифференциации» (узкий сегмент рынка)

«Дефендер»

(узкий продуктовый сегмент)

низкие издержки, низкая цена, умеренное качество -  умеренная потребительская ценность

«Виолент»

(львы, слоны, бегемоты)

«Защитник издержек»

«Стратегия лидерства по издержкам» (большая доля рынка)

«Дефендер»

(узкий продуктовый сегмент)

сочетание высокой потребительской ценности (высокого качества, не имеющего аналогов) с низкими издержками и ценами

«Эксплерент»

(ласточки)

«Проспектор»

«Стратегия оптимальных издержек» («наилучшей стоимости»)

«Проспектор»

высокая цена, особое качество, низкие издержки

«Интегрирован-ный анализатор»

«Cфокусированная стратегия низких издержек»

«Анализатор» (присутствуют на двух сегментах продуктового рынка)

У Юданова – аналог «эксплерента» переходящего к «патиентной» стратегии

средний уровень издержек, цен и потребительской ценности, присутствие на различных сегментах рынка

«Коммутант» (мыши)

«Диверсифицированный анализатор» (обширный набор ключевых компетенций)

«Анализатор» (присутствуют на двух сегментах продуктового рынка)

различный уровень качества, высокие компетенции, умеренные издержки, повышенная цена

«Монополист»

С одной стороны такой тип конкурентной стратегии, противоречит рынку совершенной конкуренции, с другой – «виолент» у Юданова может ненадолго в конкретной отрасли превратиться в монополиста. Возможно также  возникновение естественной монополии и картельного сговора

ВЫВОДЫ

  1. Теоретически обоснована необходимость и разработаны методы оценки биосовместимости промышленно перспективных пробиотических штаммов при конструировании поликомпонентных симбиотических препаратов, позволяющие повысить эффективность и безопасность их применения в клинической практике.

2. Созданная научная концепция, включающая структуру и основные принципы построения  современного биотехнологического участка, позволяет решать широкий спектр промышленных задач по выпуску большого ассортимента конкурентоспособных поликомпонентных пробиотических субстанций и готовых фармакологических форм.

3. Разработанная на основании принципа биосовместимости рецептура и внедренная на производственном участке универсальная технология получения жидких пробиотиков прошли экспертизу  ФГУ «Российский центр испытаний и сертификации – Москва» и Федеральной службы Роспотребнадзора с включением новых препаратов-синбиотиков «Габрифлорин-бифидо» и «Габрифлорин-лакто» в Государственный реестр  в качестве биологически активных добавок к пище – источников пробиотических микроорганизмов (бифидобактерий и лактобацилл).

4. Созданные по принципу сырьевой технологичности на биотехнологическом производственном участке синбиотические рецептуры «БАД-субстанция бифидобактерий», «БАД-субстанция лактобацилл» и «БАД-субстанция бифидобактерий и лактобацилл», рекомендованные Роспотребнадзором для использования в пищевой промышленности при производстве биологически активных добавок к пище, способны полностью удовлетворить как собственные потребности по выпуску готовых поликомпонентных пробиотических препаратов (БАД «Бифидум-Мульти 1», БАД «Бифидум-Мульти 2», БАД «Бифидум-Мульти 3», БАД «Нормоспектрум для детей от 1 до 14 лет», БАД «Нормоспектрум для детей от 3 до 14 лет», БАД «Нормоспектрум для детей от 14 лет и взрослых», БАД «Нормоспектрум-инулин для детей от 1 до 14 лет», БАД «Нормоспектрум-инулин для детей от 14 лет и взрослых»), так и контрактное производство  (БАД «Полибактерин»).

5. Расширен спектр лечебно-профилактического применения поликомпонентных пробиотических препаратов при инфекционных и неинфекционных патологических состояниях: внедрен новый алгоритм одновременного со стандартной эрадикационной терапией применения синбиотика «Нормоспектрум» в комплексном лечении язвы желудка и ДПК; «Бифидум-Мульти» включен в спектр реабилитационных мероприятий для коррекции глубоких дисбиотических нарушений, вызванных полихимиотерапией при онкозаболеваниях у детей в период диспансерного наблюдения; получено клинико-лабораторное подтверждение возможности коррекции поликомпонентным пробиотиком «Нормоспектрум» содержания общего холестерина и триглицеридов у лиц пожилого возраста; использование синбиотика «Нормоспектрум» эффективно купировало  основные симптомы ротавирусного гастроэнтерита у детей.

6. Проведенный теоретико-методологический анализ позволил систематизировать существующие подходы к типологиям эталонных конкурентных стратегий, идентифицировать стратегический тип развития основных компаний-конкурентов, позиционирующихся на пробиотическом сегменте российского фармацевтического рынка, сформировать собственную конкурентную стратегию и комплекс маркетинговых мероприятий по выведению новых препаратов-синбиотиков.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

  1. При конструировании новых поликомпонентных синбиотических препаратов необходимо использовать современные принципы оценки биосовместимости, включающие подтверждение видовой подлинности отобранных производственных штаммов, синергизма пробиотических штаммов внутри поликомпонентной ассоциации, эффективности и безопасности их взаимодействия с индигенной микрофлорой человека, сохранности при добавлении пребиотиков, микроэлементов, витаминов и антиоксидантов.
  2. Создавая биофармацевтическое производство, следует придерживаться разработанной структуры и основных принципов построения современного биотехнологического участка – стандартных условий, универсальности аппаратной цепочки и операционной технологичности производства, а также использовать валидационные методики для оценки соответствия заданным проектировочным решениям.
  3. Зарегистрированная Федеральной службой Роспотребнадзора серия жидких поликомпонентных пробиотиков «Габрифлорин» может быть использована в качестве лечебно-профилактического средства для коррекции микрофлоры ЖКТ при дисбиотических состояниях у детей (с 3-х месячного возраста) и взрослых.
  4. Созданные синбиотические рецептуры «БАД-субстанции бифидобактерий и/или лактобацилл» рекомендуются для использования в пищевой промышленности при производстве широкого спектра готовых форм бифидо- и лактосодержащих биологически активных добавок к пище.
  5. Расширение спектра клинического применения поликомпонентных пробиотических препаратов и разработка новых алгоритмов их использования позволяет рекомендовать:
  • одновременное со стандартной эрадикационной терапией применение синбиотика «Нормоспектрум» в комплексном лечении язвы желудка и ДПК, позволяющее избежать побочных реакций, вызванных массивным приемом антибактериальных средств;
  • «Бифидум-Мульти» при проведении реабилитационных мероприятий для коррекции глубоких дисбиотических нарушений, вызванных полихимиотерапией при онкозаболеваниях у детей;
  • «Нормоспектрум» в схеме коррекции содержания общего холестерина и триглицеридов  у лиц пожилого возраста;
  • синбиотик «Нормоспектрум» для повышения эффективности лечения ротавирусной инфекции у детей.
  1. Использовать разработанную стратегию развития биотехнологической компании с целью повышения конкурентоспособности и эффективности деятельности предприятий фармацевтической отрасли, применяя современные подходы к управлению и комплекс маркетинга.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.Серебрянский Ю.Е. Проблемы цитокинотерапии инфекционных заболеваний/ Серебрянский Ю.Е., Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Денисов Л.А., Рубальский О.В., Терентьев А.А., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С., Алешкин А.В., Степанов А.В. – М. – Москва, 1999 – 108 с.

2.Серебрянский Ю.Е. Проблемы цитокинотерапии инфекционных заболеваний/ Серебрянский Ю.Е., Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Денисов Л.А., Рубальский О.В., Терентьев А.А., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С., Алешкин А.В., Степанов А.В. – М. – Москва: Типография Учебного центра, 2000 – 106 с.

3.Бойко А. В. Микрофлора влагалища у девочек предпубертатного возраста./ Бойко А. В., Алешкин В. А., Афанасьев С. С., Воробьев А.А., Богданова Е.А., Хасьянов Э.А., Рубальская Е.Е., Абдрахимова Н.Р., Ефимова О.Г., Садолина И.В., Алешкин А.В., Афанасьев М.С.// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. № 2 С. 91-94.

4.Леванова Л. А. Возрастные особенности микробиоценоза кишечника у жителей г. Кемерово/ Леванова Л. А., Алешкин В. А., Воробьев А. А, Афанасьев С.С., Зинин-Бермес Н.Н., Рубальский О.В., Алешкин А.В.// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. № 3 С. 72-75.

5.Леванова Л. А. Становление микрофлоры кишечника у детей первого года жизни./ Леванова Л. А., Алешкин В. А., Воробьев А. А, Афанасьев С.С., Сурикова Е.В., Рубальский О.В., Алешкин А.В.// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. № 4 С. 47-50.

6.Леванова Л. А. Микробиоценоз кишечника в критические периоды развития ребенка./ Леванова Л. А., Алешкин В. А., Воробьев А. А, Афанасьев С.С., Зинин-Бермес Н.Н., Алешкин А.В.// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. № 6 С. 69-74.

7.Леванова Л. А. Состояние нормальной микрофлоры кишечника у детей дошкольного возраста, проживающих в экологически неблагополучном регионе./ Леванова Л. А., Алешкин В. А., Воробьев А. А, Афанасьев С.С., Сурикова Е.В., Алешкин А.В.// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2002. № 1 С. 64-67.

8.Алешкин В.А. Перспективы использования иммунобиологических препаратов в профилактике и лечении хронического хламидийного и стафилококкового носительства у детей./ Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Лобачев Н.В., Алешкин А.В.// Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. – М., 2002. – C. 135-137.

9.Леванова Л. А. Особенности биологических свойств условнопатогенных бактерий, определяющих характер дисбиотических нарушений в составе нормальной микрофлоры толстой кишки./ Леванова Л. А., Алешкин В. А., Воробьев А. А, Афанасьев С.С., Сурикова Е.В., Рубальский О.В., Алешкин А.В.// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.2002.№5 С. 48-52.

10.Алешкин А.В. Бактерийный препарат нового поколения «Споробактерин»./ Алешкин А.В., Афанасьев С.С., Давыдкин В.Ю., Манько Т.Н., Давыдкин И.Ю.// Медицинская картотека. – 2003. – №4. – С.18.

11.Лютов А.Г. Изучение терапевтической эффективности биологически активной добавки «Кипацид»./ Лютов А.Г., Бочкарева С.С., Алешкин А.В., Лукьянова О.Ю., Зуева М.М. // Приложение к журналу «Вестник восстановительной медицины».Сборник материалов научно-практической конференции «Иммуноглобулиновые препараты энтерального и внитривенного применения». – М., 2003. – С. 41-43.

12.Бочкарева С.С. Рынок препаратов внутривенных иммуноглобулинов/ Бочкарева С.С., Лютов А.Г., Алешкин А.В.// Приложение к журналу «Вестник восстановительной медицины».Сборник материалов научно-практической конференции «Иммуноглобулиновые препараты энтерального и внитривенного применения». – М., 2003. – С. 44-45.

13.Петрова М.С. Результаты клинического испытания препаратов «Бифистим» у детей/ Петрова М.С., Москалева Т.Н., Алешкин А.В.// Вопросы детской диетологии. 2004. т. 2. №2. C.26-29.

14.Запруднов А.М. Оценка эффективности и безопасности биологически активной добавки «Бифистим» у детей/ Запруднов А.М., Харитонова Л.А., Алешкин А.В.//Вопросы современной педиатрии. 2004. т. 3 №4. C.108-111.

15.Алешкин А.В. Стратегия развития биотехнологической компании «Биокад».// Бизнес медицина. – 2004. – №5. – C.27.

16. Алешкин А.В. Определение значимых характеристик пробиотических препаратов с помощью маркетингового анализа первичной рыночной информации/ Алешкин А.В., Пирлик Г.П.// Новые лекарственные препараты. – 2004. – №3. – С.44-47.

17.Алешкин А.В. Стратегия развития биотехнологической компании «Биокад»// Новые лекарственные препараты. – 2004. – №3. – С.48-51.

18.Алешкин А.В. Разработка концепции вывода новых конкурентоспособных продуктов на российский фармацевтический рынок для компании Биокад.// Выпускная аттестационная работа. Программа: мастер делового администрирования (MBA). – Москва, 2005 – 90 с.

19.Алешкин А.В. Средства для лечения дисбактериоза кишечника.// Новая аптека. Аптечный ассортимент. – 2005 – №8. – С.26-30.

20.Алешкин А.В. Ввод новинок в ассортимент аптечной сети.// Фармацевтическое обозрение. – 2006. – №5. – C.16-19.

21.Грачева Н.М. Возможности коррекции дисбактериоза кишечника у детей./ Грачева Н.М., Петрова М.С., Москалева Т.Н., Алешкин А.В., Соловьева А.И., Бочкарева С.С.// Инфекционные болезни. 2006 т. 4. №4. C.62-66.

22.Галимзянов Х.М. Вопросы функционального использования бактериофагов./ Галимзянов Х.М., Голикова Т.О., Зязин С.Н., Мамонтова Н.С., Рубальский Е.О., Янченко Е.К., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Алешкин А.В., Воропаева Е.А., Афанасьев Д.С., Голикова В.М.// Естественные науки. 2007. т.20. №3. C. 57-63.

23.Галимзянов Х.М. Перспективы использования бактериофагов в качестве биологически активных добавок к пище/ Галимзянов Х.М., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Голикова Т.О., Зязин С.Н., Мамонтова Н.С., Рубальский Е.О., Янченко Е.К., Алешкин А.В., Беляев Н.И., Амерханова А.М., Афанасьев Д.С.// Астраханский медицинский журнал. 2008. №1. С. 83-87.

24.Алешкин В.А. Исследование комплекса бактериофагов с индуцированной вирулентностью, перспективных для коррекции местной антиинфекционной резистентности/ Алешкин В.А., Амерханова А.М., Афанасьев С.С., Алешкин А.В.// Материалы Вероссийской научно-практической конференции «Современные представления об иммунокоррекции». – Пенза, 2008. C.3-4.

25.Алешкин А.В. Синбиотик Нормоспектрум® в лечении заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки/ Алешкин А.В., Исаев Р.Р., Рубальский О.В., Амерханова А.М., Панов А.А.// Вестник Российского государственного медицинского университета. 2009. №2. С.19-22.

26.Алешкин А.В. Новый алгоритм использования поликомпонентных бактерийных препаратов при язве желудка и двенадцатиперстной кишки/ Алешкин А.В., Оленина Л.С., Амерханова А.М., Зязин С.Н., Титов Е.И.// Гастроэнтерология Санкт-Петербурга, 2009. – №4 – C. М1.

27.Амерханова А.М. Эффективность синбиотика «Нормоспектрум» у пожилых людей с нарушениями липидного обмена/ Амерханова А.М., Алешкин А.В., Чулок Т.А., Терешина Е.В., Серова ЛД//Гастроэнтерология Санкт-Петербурга,2009–№4–C.М1-М2

28.Шевцов В.В. Значимость изучения отдельных метаболитов микрофлоры толстой кишки у больных раком легких, ассоциированного с дисбактериозом, на фоне приема препарата-синбиотика «Нормоспектрум»/Шевцов В.В., Зубкова Е.С., Митрохин С.Д., Забазный НП, Алешкин А.В.//Гастроэнтерология Санкт-Петербурга,2009–№4–C.М45

29.Алешкин А.В. Клиническая эффективность синбиотика «Нормоспектрум»® в комплексной терапии заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки/ Алешкин А.В., Исаев Р.Р., Рубальский О.В., Кураленко А.А., Амерханова А.М., Панов А.А.// Ремедиум Приволжья. – 2009. – №9. – С.26.

30.Алешкин А.В. Клинико-лабораторная оценка эффективности препарата «Бифидум-Мульти» при диспансерном лечении онкобольных детей/ Алешкин А.В., Амерханова А.М., Воропаева Е.А., Ефимова О.Г., Цейтлин Г.Я., Коновалова М.В..// Медицинский альманах. 2010 №1(10). С.193-195.

31.Амерханова А.М. Роль бифидофлоры в жизнеобеспечении организма ребенка и факторы, определяющие ее формирование./ Амерханова А.М., Воронина О.Л., Жиленкова О.Г., Алешкин А.В., Лисунова С.А., Зубкова Е.С., Романова А.А., Субботина М.Е., Кунда М.С.//Вопросы детской диетологии2010т.8№3С.22-29.

32.Метельская В.А. Колонизационная резистентность и иммунологическая реактивность слизистых ротоглотки у детей в норме и при бронхолегочных заболеваниях./ Метельская В.А., Алешкин В.А., Воропаева Е.А., Караулов А.В., Несвижский Ю.В., Афанасьев С.С., Матвеевская Н.С., Панурина Р.Л., Бичучер А.М., Гречишникова О.Г., Байракова А.Л., Урбан Ю.Н., Алешкин А.В., Слободенюк В.В., Егорова Е.А. // Вестник Российской академии медицинских наук. 2010. №7. С.10-15.

33.Халиуллина С.В. Эффективность применения пробиотиков в комплексной терапии ротавирусной инфекции у детей/ Халиуллина С.В., Алешкин А.В., Амерханова А.М., Анохин В.А., Гутор И.А.// Вопросы практической педиатрии. 2010. т.5. №4. С. 87-90.

34.Алешкин А.В. Технические основы биологической безопасности асептических и контролируемых объектов биотехнологических производств и диагностических лабораторий./ Алешкин А.В., Григорьев В.В.// Сборник материалов VII Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность». Москва, 28-29 октября, 2010. – С. 26-28.

35.Aleshkin A.V. Correction of GIT Microbiocenosis Disorders in Children with Oncological Diseases during Dispensary Observation./ Aleshkin A.V., Tseitlin G.Ya., Amerhanova A.M., Konovalova M.V.// Proceedings of the International Scientific Conference on Probiotics and Prebiotics IPC2010,Kosice, Slovakia, June 15-17,2010.–P.15.

Изобретения

36. Патент на изобретение № 2125389 С1 Российская Федерация МПК 6 A23L1/305, A23L1/29, A61K38/21, Заявка № 98107888/13 от 24.04.1998, опубликовано 27.01.1999, бюлл № 3/ Биологически активная добавка к пище/ Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Каркищенко Н.Н., Рубальский О.В., Денисов Л.А., Пчелинцев С.Ю., Воробьев А.А., Серебрянский Ю.Е., Джумагазиев А.А., Хасьянов Э.А., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С., Каркищенко В.Н., Алешкин А.В., Миронов В.В., Казимирова Е.И.; заявители и патентообладатели Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Каркищенко Н.Н., Рубальский О.В., Денисов Л.А., Пчелинцев С.Ю., Воробьев А.А., Серебрянский Ю.Е., Джумагазиев А.А., Хасьянов Э.А., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С., Каркищенко В.Н., Алешкин А.В., Миронов В.В., Казимирова Е.И.

37. Патент на изобретение № 2136314 С1 Российская Федерация МПК 6  A61K39/395, Заявка № 98117175/14 от 16.09.1998, опубликовано 10.09.1999, бюлл № 25/ Суппозиторий на основе иммуноглобулинового препарата/ Алешкин В.А., Алешкин А.В., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Борисова И.В., Ханина Г.И.; заявители и патентообладатели Алешкин В.А., Алешкин А.В., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Борисова И.В., Ханина Г.И.

38. Патент на изобретение № 2144832 С1 Российская Федерация МПК 7 A61K38/19, A61K39/395, A61P31/00, Заявка № 99109415/14 от 17.05.1999, опубликовано 27.01.2000, бюлл № 3/ Противовирусное, противомикробное и противокандидозное средство / Лобачев Н.В., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Денисов Л.А., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С., Рубальская Е.Е.; заявители и патентообладатели Лобачев Н.В., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Денисов Л.А., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С., Рубальская Е.Е.

39. Патент на изобретение № 2144294 С1 Российская Федерация МПК 7 A23L1/03, A23L1/305, A61K35/74, Заявка № 99106695/13 от 31.03.1999, опубликовано 20.01.2000, бюлл № 2/ Пищевая биологически активная добавка / Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Пилат Т.Л., Рубальский О.В., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.; заявители и патентообладатели Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Пилат Т.Л., Рубальский О.В., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.

40.Патент на изобретение № 2146531 С1 Российская Федерация МПК 7 A61K38/21, A61K35/74, A61P31/00, A61P37/00, Заявка № 99109416/14 от 17.05.1999, опубликовано 20.03.2000, бюлл № 8/ Способ лечения инфекционных заболеваний / Султанова С.В., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Гришина Т.И., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.; заявители и патентообладатели Султанова С.В., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Гришина Т.И., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.

41. Патент на изобретение № 2157646 С1 Российская Федерация МПК 7 A23L1/30, A23D9/00, A61K38/17, A61K38/19, A61K38/21, Заявка №2000101147/13 от 19.01.2000, опубликовано 20.10.2000, бюлл № 29/ Биологически активная добавка к пище/ Павельева Л.Г., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Журавлев А.В., Лунеев Д.Е., Денисов Л.А., Журавлева Е.Н., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.; заявители и патентообладатели Павельева Л.Г., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Журавлев А.В., Лунеев Д.Е., Денисов Л.А., Журавлева Е.Н., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.

42.Патент на изобретение № 2161887 С1 Российская Федерация МПК 7 A23D9/00, A23L1/30, A61K9/02, A61K9/06, A61K38/19, A61K38/20, A61K39/395, A23C9/00 Заявка №2000117592/13 от 06.07.2000, опубликовано 20.01.2001, бюлл № 2/ Биологически активная добавка/ Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Давыдкин В.Ю., Рубальский О.В., Давыдкин И.Ю., Ханина Г.И., Гаврин А.Г., Алешкин А.В., Денисов Л.А., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.; заявители и патентообладатели Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Давыдкин В.Ю., Рубальский О.В., Давыдкин И.Ю., Ханина Г.И., Гаврин А.Г., Алешкин А.В., Денисов Л.А., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.

43. Патент на изобретение № 2164765 С1 Российская Федерация МПК 7 A23L1/30, A23D9/00, A23L1/24, A61K9/00, Заявка №2000120944/13 от 11.08.2000, опубликовано 10.04.2001, бюлл № 10/ Биологически активная добавка / Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Давыдкин В.Ю., Денисов Л.А., Давыдкин И.Ю., Гаврин А.Г., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.; заявители и патентообладатели Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Рубальский О.В., Давыдкин В.Ю., Денисов Л.А., Давыдкин И.Ю., Гаврин А.Г., Алешкин А.В., Афанасьев Д.С., Афанасьев М.С.

44.Патент на изобретение № 2366437 С2 Российская Федерация МПК A61K35/74, A61P31/04, Заявка №2007139680/15 от 29.10.2007, опубликовано 10.09.2009, бюлл № 25/ Композиция на основе бактериофагов (варианты)/ Алёшкин В. А., Рубальский О. В., Афанасьев С. С., Алешкин А. В. , Гаврин А. Г., Амерханова А. М., Логунов О. В., Киселёва И. А., Пугачёва Т. Г., Афанасьев Д. С., Рубальский Е. О., Голикова В. М., Давыдкин В.Ю., Давыдкин И. Ю.; заявитель и патентообладатель ООО "Амфита".

45. Патент на изобретение № 2366708 С2 Российская Федерация МПК C12N7/00, A61K35/76, A61P31/04, Заявка №2007139681/13 от 29.10.2007, опубликовано 10.09.2009, бюлл № 25/ Иммунобиологический бактерицидный препарат (варианты)/ Алёшкин В. А., Рубальский О. В., Афанасьев С. С., Алешкин А. В. , Гаврин А. Г., Амерханова А. М., Логунов О. В., Киселёва И. А., Пугачёва Т. Г., Давыдкин В.Ю., Афанасьев Д. С., Рубальский Е. О., Голикова В. М., Давыдкин И. Ю.; заявитель и патентообладатель ООО "Амфита".

46. Патент на изобретение № 2373274 С1 Российская Федерация МПК C12N1/00, A23C9/12, A61K35/74, A23L1/29, A61K8/99, Заявка №2008128539/13 от 15.07.2008, опубликовано 20.11.2009, бюлл № 32/ Штамм Bifidobacterium breve OV-12, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств/ Алешкин В. А., Амерханова А. М., Афанасьев С. С., Алешкин А. В., Жиленкова О. Г., Воронина О. Л., Субботина М. Е., Кунда М. С.; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора.

47. Патент на изобретение № 2373275 С1 Российская Федерация МПК C12N1/00, A23C9/12, A61K35/74, A23L1/29, A61K8/99, Заявка №2008128543/13 от 15.07.2008, опубликовано 20.11.2009, бюлл № 32/ Штамм Bifidobacterium pseudocatenulatum OV-17, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств/ Алешкин В. А., Амерханова А. М., Афанасьев С. С., Алешкин А. В., Жиленкова О. Г., Воронина О. Л., Субботина М. Е., Кунда М. С.; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора.

48. Патент на изобретение № 2373277 С1 Российская Федерация МПК C12N1/00, A23C9/12, A61K35/74, A23L1/29, A61K8/99, Заявка №2008128544/13 от 15.07.2008, опубликовано 20.11.2009, бюлл № 32/ Штамм Bifidobacterium angulatum OV-15, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств/ Алешкин В. А., Амерханова А. М., Афанасьев С. С., Алешкин А. В., Жиленкова О. Г., Воронина О. Л., Субботина М. Е., Кунда М. С.; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора.

49. Патент на изобретение № 2373278 С1 Российская Федерация МПК C12N1/00, A23C9/12, A61K35/74, A23L1/29, A61K8/99, Заявка №2008128545/13 от 15.07.2008, опубликовано 20.11.2009, бюлл № 32/ Штамм Bifidobacterium pseudocatenulatum OV-2, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств/ Алешкин В. А., Амерханова А. М., Афанасьев С. С., Алешкин А. В., Жиленкова О. Г., Воронина О. Л., Субботина М. Е., Кунда М. С.; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора.

50. Патент на изобретение № 2375443 С1 Российская Федерация МПК C12N1/20, A23C9/12, A61K35/74, A23L1/29, A61K8/99, Заявка №2008128541/13 от 15.07.2008, опубликовано 10.12.2009, бюлл № 34/ Штамм Bifidobacterium bifidum OV-7, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств/ Алешкин В. А., Амерханова А. М., Афанасьев С. С., Алешкин А. В., Жиленкова О. Г., Воронина О. Л., Субботина М. Е., Кунда М. С.; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора.

51. Патент на изобретение № 2375444 С1 Российская Федерация МПК C12N1/20, A23C9/12, A61K35/74, A23L1/29, A61K8/99, Заявка №2008128540/13 от 15.07.2008, опубликовано 10.12.2009, бюлл № 34/ Штамм Bifidobacterium bifidum OV-19, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств/ Алешкин В. А., Амерханова А. М., Афанасьев С. С., Алешкин А. В., Жиленкова О. Г., Воронина О. Л., Субботина М. Е., Кунда М. С.; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора.

52. Патент на изобретение № 2375445 С1 Российская Федерация МПК C12N1/20, A23C9/12, A61K35/74, A23L1/29, A61K8/99, Заявка №2008128542/13 от 15.07.2008, опубликовано 10.12.2009, бюлл № 34/ Штамм Bifidobacterium longum OV-20, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств/ Алешкин В. А., Амерханова А. М., Афанасьев С. С., Алешкин А. В., Жиленкова О. Г., Воронина О. Л., Субботина М. Е., Кунда М. С.; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора.

53. Патент на изобретение № 2393214 С1 Российская Федерация МПК C12N1/20, A61K35/74, C12P37/00 , Заявка №2009102950/13 от 29.01.2009, опубликовано 27.06.2010, бюлл № 18/ Иммунобиологическое противоаллергическое средство (варианты), штамм Lactobaccilius acidophilus NKJC, Lactobaccilius acidophilus JCH, Lactobaccilius acidophilus KAA/ Черепанова Ю. В., Поспелова В. В., Алёшкин В. А., Афанасьев С. С., Лахтин В. М., Амерханова А. М., Куяров А. В., Рубальский О. В., Ульянова Л. П., Алешкин А. В., Волкова Е. В., Лахтин М. В., Ахминеева А. Х., Рубальский Е. О., Куяров А. А., Афанасьев М. С., Афанасьев Д. С; заявители и патентообладатели ООО «ИнноПроб», Алёшкин В. А., Афанасьев С. С., Амерханова А. М., Куяров А. В., Рубальский О. В., Алешкин А. В., Ахминеева А. Х., Рубальский Е. О., Афанасьев М. С., Афанасьев Д. С.

Список сокращений

БАД – биологически активная добавка к пище

ДПК – двенадцатиперстная кишка

ЖКТ – желудочно-кишечный тракт

КОЕ – колониеобразующая единица

НТД – нормативно-техническая документация

РВИ – ротавирусная инфекция

СГР – свидетельство государственной регистрации

СЭЗ – санитарно-эпидемиологическое заключение

ТЗ – техническое задание

ТИ – технологическая инструкция

ТУ – технические условия

ЭГДС – эзофагогастродуоденоскопия

GMP – Good Manufacturing Practice

p – критический уровень значимости величины

0Т – градусы Тернера

 






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.