WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


На правах рукописи

АЛИЕВА Айзанат Кадыровна

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БИРНАВИРУСА ПТИЦ И РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ

03.02.02 – вирусология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург 2011

Работа выполнена в лаборатории препаратов, применяемых в птицеводстве, Федерального Государственного Учреждения «Всероссийский Государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») и на базе Общества с ограниченной ответственностью «Биовет» (ООО «Биовет», Санкт-Петербург) Научные консультанты: доктор биологических наук, профессор, академик РАМН Киселев Олег Иванович доктор биологических наук, профессор Смоленский Владимир Иванович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Харченко Евгений Петрович доктор медицинских наук Зазимко Любовь Александровна доктор биологических наук Соловьев Борис Васильевич

Ведущая организация: Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» (Москва)

Защита состоится « 24 » января 2012 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 001.043.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт гриппа» Минздравсоцразвития РФ (197376, Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, 15/17)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт гриппа» Минздравсоцразвития РФ

Автореферат разослан «____» ______________ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук В.Ф. Суховецкая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ



Актуальность темы. Успешному развитию промышленного птицеводства во многом препятствуют различные инфекционные болезни, которые наносят большой экономический ущерб, обуславливая снижение продуктивности птиц и низкую рентабельность отрасли (Фисинин В.И., 2010). В начале 60-х годов прошлого столетия к их числу добавилась новая нозологическая единица – инфекционная бурсальная болезнь (ИББ), которая впервые была описана в США (Cosgrove A.S., 1962). ИББ широко распространена во всем мире и представляет серьезную угрозу развитию отрасли (Смоленский В.И., 1999;

Борисов А.В., 2000; Бирман Б.Я., 2003; Бессарабов Б.Ф. с соавт., 2008;

Lasher H.N., Shane S.M., 1994).

Вакцинопрофилактика в странах с развитым промышленным птицеводством считается главным способом защиты поголовья от вируса ИББ (Алиев А.С., 1991; Соловьев Б.В., 2001; Смоленский В.И. с соавт., 2011; Winterfield R.W., 1969; Cursiefsen D. et al., 1979). За истекшее десятилетие был создан широкий спектр отечественных и зарубежных живых и инактивированных вакцин против ИББ, но, как показывает практика, в крупных птицеводческих хозяйствах среди вакцинированной птицы наблюдаются эпизоотические вспышки ИББ.

Одна из причин проявления этих эпизоотий может быть связана со структурными изменениями в геноме вируса ИББ. Так, в конце 80-х годов в вакцинированных стадах птицы в США появились антигенные варианты, а в России и в Европе – антигенно сходные с «классическими» высоковирулентные штаммы вируса ИББ (ввВИББ), которые очень быстро распространились по всему миру. В отличие от ранее известных штаммов, в том числе и от новых американских антигенных вариантов, штаммы ввВИББ могут вызывать до 90% смертности в стадах яичных кроссов птицы (Алиев А.С., 1993; Box P.G., 1989;

Chettle N.J. et al., 1989; Van den Berg T.P. et al., 1991).

В этой связи становится актуальным более глубокое изучение иммунобиологических свойств бирнавируса птиц, которому до настоящего времени не уделялось достаточного внимания. Эффективность вакцины, как живой, так и инактивированной, может в значительной степени зависеть от соответствия антигенной специфичности избранного штамма в отношении полевых изолятов вируса ИББ, циркулирующих в птицеводческих хозяйствах.

В России для профилактики ИББ используются культуральные вакцины из слабореактогенных штаммов вируса ИББ (Д-78, ВНИВИП, Бюр S-706, Winterfield 25-12, Био-92 и другие). Известно, что иммуногенная активность культуральных вакцин против ИББ значительно уступает эмбриональным вариантам вакцинного препарата (Норкина С.Н., 2002; Hassan M.K. et al., 1996).

Отечественная живая эмбриональная вакцина из штамма БГ обладает остаточной реактогенностью, проявляющейся атрофией фабрициевой сумки, поражением почек и отрицательным влиянием на рост и развитие птицы (Жбанова С.Ю., 2005).

Существует широкий спектр поливалентных инактивированных вакцин отечественных и зарубежных производителей для профилактики инфекционных болезней птиц с различными комбинациями входящих в их состав антигенов, в том числе вируса ИББ. Поливалентные вакцины применяют на родительском поголовье для обеспечения пассивного иммунитета у потомства и не предназначены для иммунизации цыплят раннего возраста (Смоленский В.И., 1999; Борисов В.А., 2007). Технология изготовления моновалентной инактивированной вакцины «Авикрон» против ИББ основана на использовании гомогената фабрициевых сумок цыплят, зараженных вирулентным штаммом соответствующего вируса. Низкая технологичность производства вакцины (использование вирулентного вируса, содержание и убой большого количества зараженных вирусом ИББ птиц), потенциальная опасность предприятийизготовителей как источников эпизоотии являются причинами ограничения сферы применения вакцины и значительно усложняют (технологически и экономически) выпуск биопрепарата в промышленных масштабах (Гусев С.А., 2000).

Очевидно, что на современном этапе развития промышленное птицеводство России нуждается в более совершенных вакцинах против ИББ.

Мировой опыт промышленного птицеводства показал, что для профилактики ИББ нужны живые и инактивированные вакцины. Целесообразность использования живой и инактивированной вакцин или их комбинации определяется комплексом факторов, требующих специального изучения. Детального экспериментального изучения требует также оценка возможности комбинирования живой вакцины против ИББ с вакцинами против других распространенных болезней птицы, в частности, против болезни Марека.

Таким образом создание, усовершенствование и оценка эффективности средств активной специфической профилактики ИББ является актуальной задачей для развития отечественного птицеводства.

Цель работы – разработка и внедрение в ветеринарную практику новых эффективных средств активной специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни птиц.

Задачи исследования 1. Выяснение иммунобиологических свойств отечественных изолятов вируса ИББ, отбор штаммов со стабильными антигенными и другими свойствами для использования их в качестве производственных.

2. Разработка технологии культивирования производственных штаммов вируса ИББ и режима инактивации вируса ИББ.

3. Подбор адъювантов для изготовления инактивированных вакцин против ИББ.

4. Разработка технологии приготовления вакцинных препаратов против ИББ и методов их контроля.

5. Проведение испытаний и оценка эффективности разработанных препаратов в экспериментальных и производственных условиях.

6. Освоение промышленного производства живой и инактивированной вакцин против ИББ и внедрение их в ветеринарную практику.

7. Оценка эффективности ассоциированной вакцинации птиц против ИББ и болезни Марека (БМ).

8. Разработка и проверка в производственных условиях схемы вакцинопрофилактики ИББ, оценка эффективности средств и методов борьбы с ИББ в птицеводческих хозяйствах России.

9. Подготовка и утверждение нормативно-технической документации на разработанные биопрепараты.

Научная новизна. Изучены иммунобиологические свойства полевых изолятов и вакцинных штаммов вируса ИББ, отобраны штаммы, обладающие стабильными антигенными свойствами для использования их в качестве производственных.

Выбраны в качестве вакцинных производственные штаммы 52/70-М и КБК вируса ИББ, отработана технология их культивирования в развивающихся эмбрионах СПФ-кур. Штамм КБК паспортизирован и депонирован под № 117-ДЕП 15.10.2001 г. во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, в качестве производственного. Разработаны производственные технологии изготовления живой и инактивированной вакцин ИББ на основе отобранных штаммов, оформлены инструкции по их применению. Освоено промышленное производство живой и инактивированной вакцин против ИББ, которые успешно внедрены в ветеринарную практику. Научная новизна исследований подтверждена патентом Российской Федерации на изобретение № 2205021 «Вакцина против инфекционной бурсальной болезни птиц», 27.05.2003 г.

Теоретическая значимость проведенных исследований. Теоретически обоснована необходимость использования иммунобиологических и молекулярно-генетических подходов для отбора вируса при получении вакцинного штамма, что позволяет гарантировать выпуск качественных и безопасных вакцин.

Полученные новые данные о культуральных, иммунобиологических и генетических свойствах штаммов семейства бирнавирусов расширяют границы фундаментальных знаний о вирусах этой систематической группы и возможностях их использования в различных биотехнологических процессах.

Практическая значимость исследований. Разработаны технологии изготовления и инструкции по применению живой и эмульсионной инактивированной вакцин против ИББ, обоснована эффективность их практического применения. Внедрена в ветеринарную практику и широко используется в РФ для специфической профилактики ИББ комплексная схема эффективной вакцинопрофилактики ИББ.

Результаты научных исследований вошли в нижеперечисленные нормативные документы (НД), одобренные ученым советом ФГУ «ВГНКИ», утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России и Россельхознадзором МСХ РФ:

1. НД на «Вакцину против инфекционной бурсальной болезни из штамма КБК» (СТО 56204140-0001-2007), 01.02.2008 г.;

2. НД «Инструкция по применению вакцины против инфекционной бурсальной болезни из штамма КБК (вместо «Наставления по применению...»), 03.03.2008 г.;

3. НД на «Вакцину против инфекционной бурсальной болезни (ИББ) жидкую инактивированную» (ТУ 9384-001-56204140-03) от 05.02.2004 г., без ограничения срока действия;

4. «Инструкция по применению вакцины против инфекционной бурсальной болезни (ИББ) жидкой инактивированной» (вместо «Наставления по применению…»), 04.06.2009 г.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Изоляты вируса ИББ, выделенные в птицеводческих хозяйствах РФ, антигенно идентичны прототипному штамму 52/70-М, а их молекулярногенетическое различие не превышает 2%.

2. Аттенуированный штамм КБК вируса ИББ, селекционированный методом длительных пассажей на эмбрионах СПФ-кур, обладает свойствами, позволяющими использовать его для производства живой вакцины, а именно: авирулентностью для молодняка птиц, иммунногенностью и генетической стабильностью.

3. По разработанной технологии промышленного производства живой вакцины против ИББ из штамма КБК осуществлено изготовление и испытание препарата. Вакцина из штамма КБК является безвредной и эффективной при разных способах ее введения птице.

4. Применение новой живой вакцины может быть также эффективным при сочетанной вакцинации слабоиммунного молодняка птицы против ИББ и болезни Марека.

5. Инактивированная эмбриональная вакцина на основе вирулентного штамма 52/70-М вируса ИББ превосходит культуральную инактивированную вакцину на основе вакцинных штаммов по антигенности, протективности и технологичности производства.

6. В ряде случаев показана целесообразность одновременного применения живой и инактивированной вакцин против ИББ. Программу вакцинопрофилактики ИББ в промышленном птицеводстве целесообразно составлять конкретно для каждого хозяйства с учетом эпизоотической ситуации и особенностей технологии производства.

Внедрение в практику. Промышленное производство живой и инактивированной вакцин против ИББ по технологии, разработанной автором, организовано на базе ООО «Биовет». Предприятием произведено и выпущено 126 млн доз живой и 12,6 млн доз инактивированной вакцин высокого качества. При непосредственном участии автора на ФГУП «Курская биофабрика» внедрена технология производства живой вакцины из штамма КБК против ИББ. Производство осуществляется в соответствии с НД на вакцину (СТО 56204140-00012007), 01.02.2008 г.

Разработанные вакцинные препараты используются с целью профилактики ИББ в птицеводческих предприятиях Российской Федерации.

По материалам диссертации подготовлено и издано учебное пособие для студентов факультета ветеринарной медицины, слушателей курсов повышения квалификации высших сельскохозяйственных учреждений образования (Про токол № 1 методического совета Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины от 19.09.06 г.).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции по проблемам эпизоотологии и инфекционных заболеваний (Одесса, 2003); на юбилейной научнопрактической конференции, посвященной 35-летию ГУ «Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» (Махачкала, 2003); научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2004, 2008, 2010);

на международной юбилейной научно-практической конференции «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве» (Санкт-Петербург–Ломоносов, 2004); на международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы производства и применения биологических препаратов» (Алматы, 2004);

на I международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2005);

на международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики болезней животных (Алматы, 2005); на международном научнопрактическом конгрессе «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Москва, 2006); на VII международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2011); на заседаниях специальной комиссии по проблемам вирусных болезней методического и Ученого Советов ФГУ «ВГНКИ» (Москва, 2001–2004), а также на межлабораторном совещании ФГУ «ВГНКИ» (Москва, 2011) и на заседании ученого совета ФГБУ НИИ гриппа (Санкт-Петербург, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 39 научных работ, в том числе 16 работ в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Личный вклад автора заключается в формулировании проблемы, постановке целей и задач исследований, теоретическом и методологическом обосновании путей решения поставленных задач, непосредственном планировании эксперимента и выполнении исследований, обобщении и интерпретации ре зультатов. Автор лично принимала участие в апробации и промышленном производстве разработанных препаратов, в подготовке публикаций.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 316 страницах машинописного текста и содержит традиционные разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы, практические рекомендации, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 57 таблицами и 5 рисунками. Список литературы включает 383 источника, в том числе 272 зарубежных. В приложении представлены копии документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Работа выполнена в 1994–2010 гг.

в лаборатории препаратов, применяемых в птицеводстве, Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) и на базе ООО «Биовет».

В связи с многоплановостью исследований в диссертации нашли отражение результаты работ, проведенных совместно с сотрудниками ГНУ ВНИВИП, а также с ветеринарными специалистами практических лабораторий и птицеводческих предприятий.

Вирусные штаммы и препараты. В работе использовали эталонный штамм вируса ИББ – 52/70-М, вакцинные штаммы – Д-78, ST, Cu-1M, КБК и ВНИВИП, а также эпизоотические изоляты: Синявинский, Бендерский, Дубовляны, Таллинский, Раздельнянский; вакцины против ньюкаслской болезни и болезни Марека.

Культивирование вируса ИББ осуществляли в первичной культуре ФЭК и ПЭК и перевиваемых культурах клеток Vero и BGM-70; в 10–11-дневных развивающихся эмбрионах СПФ-кур и зараженных цыплятах 35–40-суточного возраста.

Определение биологической активности вируса ИББ. Биологическую активность вируса ИББ определяли путем титрования на первичных и перевиваемых культурах клеток, 10–11-суточных эмбрионах СПФ-кур.

Оборудование. Электронный микроскоп JEM-100CXI; световые микроскопы «ЛОМО»; микроцентрифуга «Eppendorf» (Германия), модель 5414; центрифуга «Beckman», модель J2-21; высокоскоростная центрифуга «Sorvall» (США), модель OTD65B; центрифуга MLW K 70-D (Германия); бытовые холодильники ОКА 6М 206 (Россия) (ГОСТ 16317-87); термостат электрический ЗЦ1125 (Украина) (ТУ 42-1878-60); спектрофотометр «Shimadzu UV-260» (Япония); микроизмельчитель тканей РТ-2 (ТУ 64-1-1505-72); коллоидная мельница «Probst Class G.m.b.h.» (Германия), модель JV-10; гомогенизатор Universal laboratory AID type MPW-309 (Польша); вискозиметр капиллярный ВПЖ-(ГОСТ 10028-62) (Россия).

Животные. Для изучения биологических, антигенных и иммуногенных свойств вакцин использовали цыплят СПФ-кур, а также естественно восприимчивую к вирусу ИББ птицу разных возрастных групп и пород из благополучных по ИББ и другим инфекционным заболеваниям хозяйств.





Серологические методы. Наличие специфических антител в сыворотках крови птицы определяли в реакциях нейтрализации (РН), диффузионной преципитации (РДП), торможения гемагглютинации (РТГА), также с использованием коммерческих наборов ИФА. Сыворотки тестировали в рекомендованных рабочих разведениях в соответствии с наставлениями по применению имеющихся коммерческих наборов.

Очистка вируса. Очистку вируссодержащих суспензий от балластных белков проводили протаминсульфатом (0,1–1,0%), хлороформом (0,5–2,0%) и фреоном-113 (0,5–2,0%).

Инактивация вирусного антигена. Для отработки режимов инактивации вируса ИББ использовали формальдегид, димер этиленимина и -пропиолактон.

Приготовление инактивированной вакцины. В качестве адъюванта при изготовлении экспериментальных образцов и производственных серий вакцины использовали гидроокись алюминия (ГОА), аэросил марки А-300 и минеральное масло Маркол-52. Для изготовления экспериментальных серий вакцины готовили водную фазу, состоящую из взвеси очищенного антигена в физрастворе (29%). При постоянном перемешивании в взвесь вируса добавляли гидрофильный эмульгатор – твин 80 (1%). Полученную смесь гомогенизировали в течение 30 мин. Затем готовили масляную среду путем смешивания минерального масла – Маркол 52 (67%) и липофильного эмульгатора – арлацел (3%) с последующей гомогенизацией в течение 30 мин. При получении готовой вакцины к водной фазе при постоянном перемешивании вносили масляную среду в соотношении 30:70. Смесь гомогенизировали в течение 1 ч, расфасовывали во флаконы и этикетировали.

Эффективность разработанных препаратов изучали в экспериментальных и производственных условиях путем сравнения основных эпизоотологических показателей (заболеваемость, смертность, сохранность цыплят и др.) в опытных и контрольных группах. Напряженность иммунитета оценивали по уровню специфических антител в сыворотках крови привитой птицы.

Статистическая обработка полученных результатов проводилась методом математической статистики, предложенным Г.Ф. Лакиным [68], с помощью программы OpenOffice Calc. Оценку статистической достоверности различий проводили с использованием теста t-распределения Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 1. Сравнительное изучение иммунобиологических свойств изолятов и эталонного штамма вируса ИББ До 1978 г. было принято считать, что вирус ИББ не имеет серологических вариантов. В связи с появлением высоковирулентных штаммов вируса ИББ в Европе и России и данных литературы об их антигенной неоднородности (Борисов А.В., 1995; Щербакова Л.О. с соавт., 2002), возникла необходимость в изучении антигенной специфичности вновь выделенных изолятов вируса в сравнении с ранее известным штаммом возбудителя ИББ, имеющимся в нашей коллекции.

Для выяснения данного вопроса использовали эталонный штамм вируса ИББ – 52/70-М и эпизоотические штаммы: № 1 – Синявинский; № 2 – Бендерский; № 3 – Дубовляны; № 4 – Таллинский; № 5 – Раздельнянский.

Антигенное родство штаммов вируса ИББ оценивали серологически путем титрования штаммоспецифических сывороток в РДП с каждым исследуемым антигеном и in vivo перекрестным заражением привитых цыплят разными штаммами вируса ИББ. Исследования показали, что эпизоотические и эталонный штаммы вируса, использованные в работе, обладают одинаковой преципитогенной активностью со всеми штаммоспецифическими сыворотками и образуют одинаковые линии преципитации. Перекрестно-реагирующая активность сывороточных антител в РДП была почти одинакова в отношении гомо- и гетерологичных антигенов, что свидетельствует о наличии общих вирусоспецифических антигенных детерминант.

Оценка резистентности птиц к заражению разрешающей дозой вируса ИББ показала, что процент защищенных птиц по группам колеблется в пределах 80–100%, независимо от происхождения штамма вируса, используемого для инфицирования, и согласуются с показателями серологических исследований, проведенных на 28-е сутки после введения антигенов. Уровень антител в РДП и ИФА составил 2,5–3,0 log2 и 3560–4250 соответственно.

При расшифровке в ПЦР структуры гена VР2 выделенных и известных штаммов вируса выявлено, что все они могут быть объединены в одну группу, поскольку отличия между ними не превышали 2%. Это позволило сделать предположение о том, что эти штаммы имеют общее происхождение и обладают родством с известным штаммом вируса ИББ, а индивидуальные иммунобиологические характеристики связаны с разной по длительности пассажной историей и технологическими параметрами их культивирования.

Полученные данные дают основания считать, что в птицехозяйствах стран СНГ циркулируют эпизоотические штаммы вируса ИББ, относящиеся к одному генотипу. Гибель цыплят в контрольной группе при заражении эпизоотическими штаммами была выше, чем в группе птиц, зараженных эталонным штаммом 52/70-М, что свидетельствует о высокой степени патогенности вновь выявленных изолятов по сравнению с ранее выделенным.

2. Оценка иммунобиологических свойств разных штаммов вируса ИББ, отобранных в качестве вакцинных Предварительно штаммы вируса ИББ были накоплены в соответствующей системе культивирования. После проведения необходимого контроля (стерильность, биологическая активность) и последующей инактивации димером этиленимина эти штаммы были использованы для получения опытных серий препарата. Для этого к инактивированной суспензии каждого вируса добавляли в качестве адъюванта 3% ГОА до конечной концентрации 1,5%.

Опытные образцы вакцин вводили однократно внутримышечно в объеме 0,5 мл цыплятам 21-суточного возраста, серонегативным к вирусу ИББ. Об антигенной активности штаммов судили по уровню накопления специфических антител в РДП, ИФА через 28 сут. после их введения, а протективная активность оценивалась по результатам заражения привитых и интактных цыплят вирулентным штаммом 52/70-М (табл. 1).

Таблица Сравнительная оценка антигенной активности вакцинных штаммов вируса ИББ Титр антител после Доза вируса Субстрат для поиммунизации Штамм в lg ЭИД50/мл % защиты лучения вируса или ТЦД50/мл РДП ИФА КБК Эмбрионы 6,5 1,6±0,24 2370±0,35 КБК Культура ФЭК 7,0 1,4±0,39 2120±0,22 КБК Культура BGM-70 7,5 1,3±0,13 1940±0,25 ВНИВИП Культура ФЭК 7,0 1,1±0,18 1770±0,33 ВНИВИП Культура BGM-70 7,5 1,0±0,14 1250±0,14 52/70-М Эмбрионы 6,5 3,8±0,53 5650±0,32 152/70-М Цыплята 6,0 4,0 ±0,54 6340±0,18 1 Введение инактивированной вакцины против ИББ, приготовленной из 10%-ной суспензии фабрициевых сумок инфицированных цыплят, имел самые высокие показатели антигенной и протективной активности при испытаниях в условиях острого опыта. Показатели иммунобиологических свойств вакцины на основе суспензии гомогената тушек, экстраэмбриональной жидкости и хорион-аллантоисных оболочек эмбрионов СПФ-кур, инфицированных штаммом 52/70-М, также оказались на достаточном уровне (3,8±0,53 log2 в РДП и 5650±0,32 в ИФА при 100%-ной эффективности иммунизации), тогда как образцы инактивированной вакцины из эмбрионального и культурального вирусного сырья, полученного при заражении штаммами ВНИВИП и КБК, не обеспечивали выработку достаточно активного иммунитета и, как следствие, защиту цыплят от заражения патогенным вирусом.

3. Разработка технологии производства живой вакцины из штамма КБК против ИББ Известно, что при производстве живых вакцин используются строго аттенуированные штаммы вируса, а в технологии инактивированных – патогенные штаммы возбудителя. Руководствуясь данным положением дальнейшую работу по разработке живой вакцины проводили со штаммом КБК, инактивированной – с патогенным штаммом 52/70-М.

Вакцинный штамм КБК получен путем 50-ти последовательных пассажей на эмбрионах СПФ-кур эпизоотического штамма, выделенного от больных цыплят-бройлеров, с последующим получением крупнобляшечного клона вируса методом негативных колоний в культуре клеток BGM-70.

В результате исследований был выбран оптимальный режим крупномасштабного культивирования вакцинного штамма КБК вируса ИББ. Технология включает получение полуфабриката вирусной биомассы путем заражения ХАО эмбрионов СПФ-кур в дозе 4,5 lg ЭИД50/мл вируса и культивирование в течение 72–96 ч при температуре 37°С. С использованием указанного режима накопление вируса достигало титра 6,5 lg ЭИД50/мл.

Полученные в ходе дальнейших экспериментов данные свидетельствуют о том, что вакцинный штамм КБК свободен от контаминантов, биологически активен (титр вируса 6,5 lg ЭИД50/мл), безвреден для цыплят, обладает выраженными стабильными протективными свойствами и не вызывает иммуносупрессию у вакцинированной птицы, что отвечает требованиям Международного эпизоотического бюро (МЭБ), предъявляемым к вакцинным штаммам для производства живых вакцин против ИББ. Иммуногенная эффективность штамма КБК в лабораторных опытах составила 100%.

На основании результатов лабораторных исследований, специфическую профилактику ИББ вакциной из штамма КБК при невысоком уровне пассивных антител рекомендуется проводить однократной подкожной прививкой с суточного возраста. Молодняк птицы, полученный от привитых родителей, следует вакцинировать двукратно не ранее 10–14 сут. путем перорального, интраназального или окулярного введения вакцины. Вторую вакцинацию рекомендуется проводить не ранее 10 сут. после первой. При подкожном применении вакцины формируется напряженный и длительный иммунитет (6 мес., срок наблюдения) со 100%-ной защитой птицы при заражении вирулентным вирусом ИББ.

После наработки вирусного сырья его использовали для составления живой вакцины. В качестве защитной среды при изготовлении живой вакцины против ИББ использовали среды разного состава, из которых наиболее эффективной оказалась среда СПЛФ, состоящая из лактозы, гидролизата белка и желатозы. Количество защитной среды для лиофилизации составляло 400 мл на 1000 мл вирусного сырья. Установлено, что инфекционный титр вируса ИББ, высушенного в среде с СПЛФ после 12-месячного хранения при –10°С снизился на 0,3 lg ЭИД50/мл, а при +4°С – на 0,8 lg ЭИД50/мл. Защитные свойства других сред при указанных режимах температур хранения были несколько хуже.

В лабораторных условиях проведены исследования для выяснения влияния на эффективность вакцинации против ИББ в условиях сочетанной вакцинации суточных цыплят живыми вакцинами против ИББ и болезни Марека (БМ). Для этого были сформированы три группы суточных цыплят по 50 голов. Цыплят первой группы вакцинировали против ИББ и БМ подкожно. Цыплят второй группы вакцинировали только против ИББ. Третью группу не вакцинировали, она являлась контрольной. Уровень иммунитета к вирусу ИББ оценивали серологически в РДП и ИФА, а также по результатам контрольного заражения.

Из данных табл. 2 видно, что невосприимчивость цыплят к заражению вирусом ИББ после одновременной вакцинации их против ИББ и БМ полностью совпадает с резистентностью цыплят к вирусу ИББ у привитых моновакциной из штамма КБК. Устойчивость к контрольному заражению у цыплят 1-й и 2-й групп наступала через 14 сут. после вакцинации и сохранялась до 60 сут.

(срок наблюдения).

Таким образом, при одновременной вакцинации цыплят против БМ и ИББ реактогенность вакцин не изменялась, а сроки развития иммунитета соответствовали таковым при раздельной иммунизации данными вакцинами.

Способ одновременной вакцинации против БМ и ИББ включен в инструкцию по применению вакцины из штамма КБК, строго вписывается в существующую в промышленном птицеводстве схему иммунизации против болезни Марека и не требует дополнительных материальных затрат.

Таблица Иммуногенная активность штамма КБК при ассоциированной вакцинации цыплят против ИББ и БМ I группа II группа III группа Сроки вакцинированные вакцинированные контроль исследопротив ИББ и БМ против ИББ вания % защиты % защиты % защиты (сут.) РДП ИФА при био- РДП ИФА при био- РДП ИФА при биопробе пробе пробе 7 1,3 820 50 1,4 850 45 0 200 14 2,5 1080 90 2,6 1200 90 0 250 21 3,8 1350 100 3,4 1290 100 0 200 28 4,2 2110 100 3,8 2160 100 0 300 60 3,8 2400 100 3,5 2500 100 0 150 Для контроля живой вакцины против ИББ из штамма КБК были использованы традиционные параметры, применяющиеся при контроле живых вирусных вакцин: внешний вид, отсутствие контаминации вирусной, бактериальной и грибковой микрофлорой, массовая доля влаги (остаточная влажность), растворимость, безвредность, антигенная активность, биологическая активность.

Результаты контроля безвредности живой вакцины из штамма КБК показали, что введение вакцинного препарата СПФ-цыплятам 14-дневного возраста в дозе 3,5 lg ЭИД50/мл не вызывает развития каких-либо клинических симптомов и патологоанатомических изменений, свойственных вирусу ИББ.

Контроль промышленных серий живой вакцины из штамма КБК на антигенную и протективную активность проводили на СПФ-цыплятах 14-суточного возраста. В сыворотках крови цыплят специфические антитела после 21 сут.

с момента вакцинации обнаруживались в 100% случаях в РДП, а их титр в ИФА составлял не менее 2737±0,44. Протективная активность вакцины оценивалась через 21 сут. после иммунизации цыплят путем заражения патогенным штаммом 52/70-М вируса ИББ в дозе 3,0 lg ИД50/мл. Все цыплята, иммунизированные живой вакциной в дозе 2,0 lg ЭИД50/мл, на контрольное заражение не реагировали и имели 100%-ную защиту. В контрольной невакцинированной группе птица болела с типичной клинической картиной ИББ. Однако, учитывая, что для вакцинации цыплят с пассивным иммунитетом требуется некий «запас» вируса, в качестве иммунизирующей была выбрана доза 2,5 lg ЭИД50/мл.

После успешного испытания образцов вакцины в лабораторных условиях дальнейшее изучение эффективности препарата проводили в условиях неблагополучных по ИББ птицехозяйств ряда регионов Российской Федерации (Воронежской, Новосибирской, Омской, Ростовской, Вологодской, Оренбургской, Псковской областей, Ставропольского и Красноярского краев).

С этой целью в течение ряда лет под нашим наблюдением находилось несколько крупных, неблагополучных по ИББ птицехозяйств, где применяли вакцину из штамма КБК. Применение живой вакцины на неблагополучной по ИББ Забродненской птицефабрике в Воронежской области показало, что вакцинация цыплят способствует не только увеличению сохранности птицы в привитой вакциной из штамма КБК группе, но и позволяет получать более высокие привесы живой массы, снижает количество «гипотрофиков» и случаев колибактериоза.

Позитивные результаты по применению живой вакцины против ИББ также получены на неблагополучных по ИББ в период испытаний птицефабриках «Шекснинская» и «Череповецкая» Вологодской области. Вакцинацию птиц проводили подкожно в суточном возрасте.

На птицефабрике «Череповецкая» привили 150 350 цыплят-бройлеров.

Оценку протективных свойств проводили по показателям общей сохранности (табл. 3).

Иммунизация цыплят вакциной из штамма КБК позволила увеличить их сохранность до 93,3–97,92%. Ранее на птицефабрике использовали вакцину из штамма БГ, сохранность птицы при этом по отдельным партиям колебалась в пределах 71–88%. Полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности вакцины из штамма КБК и ее преимуществе перед аналогичным препаратом из штамма БГ.

Таблица Результаты влияния вакцины из штамма КБК на сохранность птицы Гибель цыплят № корп. Кол-во цыплят Сохранность (%) голов % 54 19 300 543 2,8 97,22 18 250 967 5,3 94,43 19 200 1045 5,4 94,41 19 000 869 4,6 95,35 18 200 978 5,4 94,21 18 500 1115 6,03 94,13 19 100 1165 6,1 93,12 18 800 1257 6,69 93, На птицефабрике «Шекснинская» однократно методом подкожной иммунизации были привиты 8 млн цыплят. Осложнений и появления клинических признаков после применения вакцины не наблюдали. При исследовании в ИФА сывороток крови птиц, отобранных через 25 суток после иммунизации, были выявлены антитела в титрах 1225–2750, что подтверждало выраженную антигенную активность препарата. Сохранность привитого птицепоголовья составляла 93–95%, что свидетельствует о высокой иммуногенности вакцины.

Высокая антигенная активность препарата была также подтверждена его применением на птицефабрике «Первомайская» Псковской области, где однократно иммунизировали 293 181 цыплят-бройлеров в сравнении с вакциной Винтерфильд, которую, согласно инструкции, применяли двукратно методом выпаивания (табл. 4). Протективные свойства препарата оценивали по сохранности поголовья и другим производственным показателям.

Полученные результаты свидетельствуют, что по всем производственным показателям вакцина из штамма КБК существенно превосходит (p < 0,05) вакцины из штамма Винтерфильд за счет увеличения сохранности на 10,5%, среднесуточного привеса на 10,5 г, сокращения сроков откорма на 3 сут. и снижения затрат корма на единицу привесов на 0,35 кг.

Таблица Результаты сравнительных испытаний вакцин из штаммов КБК и Винтерфильд Единица Показатели Штамм КБК Штамм Винтерфильд измерения Принято на выращивание головы 81 495 78 1Сохранность % 94,5 Срок выращивания сутки 45 Живая масса бройлеров граммы 1742 13Среднесуточный прирост граммы 39,5 кормовые Конверсия корма 2,05 2,единицы На ППЗ «Котляревский» вакциной из штамма КБК прививали 434 тыс.

цыплят по двум схемам. В одной группе цыплят в количестве 120 тыс. вакцину вводили с питьевой водой двукратно в возрасте 8 и 18 сут., в другой – внутримышечно в суточном возрасте. Третья группа птиц в количестве 114 тыс. одновременно вакцинировалась против двух болезней – ИББ и БМ – в суточном возрасте.

Опыты показали, что, независимо от способа применения вакцины из штамма КБК, признаков, характерных для инфекционной бурсальной болезни, выявлено не было. При двукратной вакцинации методом выпаивания положительная реакция в РДП по разным партиям птицы составила от 80 до 92% в возрасте 35 дней. При однократном внутримышечном применении вакцины цыплята в суточном возрасте имели положительные результаты в РДП в 100% случаев уже в возрасте 25 дней, как и при одновременной вакцинации против ИББ и БМ.

Титры антител в ИФА также были одинаковы как при моновакцинации против ИББ, так и при одновременном методе иммунизации (среднегеометрический титр в ИФА – 2627, процент корреляции – 30–35).

То обстоятельство, что метод применения вакцины не оказал негативного влияния на уровень напряженности иммунитета против ньюкаслской болезни, является существенным показателем, подтверждающим отсутствие иммуносупрессивного влияния на привитое поголовье. Титр антител в РЗГА к вирусу ньюкаслской болезни после однократной вакцинации через 15 дней составлял от 1:64 до 1:512.

Процент сохранности птицы подопытных групп за период наблюдения составил на ремонтном молодняке 97,1%, у цыплят-бройлеров – 96,4%, среднесуточный прирост массы тела составил 38,4–39,2 г.

На птицефабрике «Дон» Ростовской области после однократной иммунизации вакциной из штамма КБК 280,3 тыс. голов цыплят, размещенных в 4 корпусах, сохранность достигала 96–97%. До начала профилактики ИББ вакциной из штамма КБК показатели сохранности колебались в пределах 86–92%. Мно голетняя плановая иммунизация новым препаратом позволила не только сохранить благоприятную эпизоотическую ситуацию в хозяйстве, но и повысить показатели рентабельности за счет однократного применения препарата и более низкой его стоимости.

В ОПХ «Сибирский НИИ птицеводства» Омской области вакциной из штамма КБК было привито 5,5 млн голов цыплят. Все партии цыплят, поступавшие на выращивание, прививали орально методом выпаивания по схеме:

первая вакцинация в 7–10-суточном возрасте, вторая – через 10 суток. Систематическое применение вакцины позволило не только предупредить возникновение острых вспышек ИББ в хозяйстве, но и улучшить производственные показатели. Так, за период вакцинации против ИББ сохранность птиц увеличилась на 11,7%. Среднесуточный привес молодняка увеличился на 5,6 г. Затраты корма на 1 ц прироста массы тела снизились на 0,5 кг.

На птицефабрике «Сибирская Губерния» Красноярского края вакциной из штамма КБК привито около 15 млн голов цыплят-бройлеров. После применения вакцины гибель цыплят сократилась с 7–8% до 1,0–1,5%; сохранность повысилась с 89,4 до 93,6%. Полученные результаты подтверждают представленные ранее экспериментальные данные о высоких протективных свойствах препарата.

В течение ряда лет вакцину из штамма КБК регулярно применяли на птицефабрике «Балахоновская» Ставропольского края взамен используемого ранее препарата из штамма БГ. При периодическом серологическом обследовании привитых партий птиц антитела в РДП выявляли в 100% случаях, сохранность поголовья при этом колебалась в пределах 94–95%.

Таким образом, результаты широких производственных испытаний, проведенных в различных регионах РФ показали, что вакцина из штамма КБК безвредна для цыплят суточного возраста при разных способах введения, она не вызывает клинически выраженных признаков и патологоанатомических изменений у подопытной птицы. Вакцина обладает выраженной антигенной активностью и индуцирует в организме иммунизированной птицы образование специфических антител. Изучение сроков формирования иммунитета вакциниро ванной птицы показало, что напряженный иммунный ответ отмечается на 21– 25 сут. после вакцинации и стабильно сохраняется на высоком уровне на весь восприимчивый период роста цыплят (до 120 сут.). Вакцина обладает выраженными протективными свойствами, создает более высокий уровень иммунитета по сравнению с другими препаратами и предохраняет привитую птицу в неблагополучных по ИББ хозяйствах, что характеризуется отсутствием у привитой птицы признаков заболевания.

4. Разработка технологии производства инактивированной вакцины против ИББ Необходимость разработки эмульсионной инактивированной вакцины против ИББ связанна с появлением в птицепредриятиях РФ высоковирулентных штаммов и недостаточной безопасностью живых вакцинных препаратов для молодняка птицы.

Данная работа включала разработку технологии получения вирусного сырья, режимов его очистки и инактивации, эмульгирование инактивированного антигена и адъюванта, испытание изготовленных образцов вакцины в экспериментальных и производственных условиях, разработку методов контроля препарата и нормативной документации.

Вирулентный штамм 52/70-М вируса ИББ был проверен на инфекционную активность, стерильность, контаминацию посторонними микроорганизмами, антигенность и иммуногенность. Результаты проверки на стерильность и контаминацию показали отсутствие в посевном материале штамма 52/70-М посторонней микрофлоры, грибов и вирусов.

Важным этапом в исследовании биологических особенностей штамма 52/70-М является определение стабильности его инфекционной активности, а также антигенных и иммуногенных свойств штамма в составе инактивированной вакцины. Для этого было проведено 20 последовательных пассажей 52/70-М вируса ИББ на эмбрионах СПФ-кур с определением показателей вирулентности и титра биологической активности.

Результаты проведенных исследований показали, что биологическая активность штамма 52/70-М вируса ИББ при пассировании на эмбрионах СПФкур изменяется незначительно, что указывает на его стабильность при длительном культивировании в данной биологической системе. Степень вирулентности штамма 52/70-М вируса ИББ также оказалась стабильной. Так, при заражении цыплят материалом вируса на уровне 5-, 10-, 15- и 20-го пассажей болезнь у цыплят проявляется однотипно и характеризуется, как правило, острым течением: отказом от корма, угнетением и диареей. Во всех случаях отмечали падеж не менее 40% птиц.

Высокая концентрация балластных белков в вирусной суспензии, накопленной в эмбрионах кур, зараженных вирусом ИББ, требует проведения предварительной очистки вирусного материала. Известно, что балластные белки препятствуют осуществлению процесса инактивации, способствуют развитию воспалительных реакций в месте инъекции препарата, а также являются дополнительной нагрузкой на иммунную систему птиц и снижают стабильность эмульсии. Для удаления балластных примесей из вирусного материала были испытаны комбинированные варианты очистки детергентами и центрифугированием.

Результаты проверки иммунобиологических свойств суспензий вируса ИББ, очищенных разными способами, показали, что наиболее успешным является использование фреона-113 в конечной концентрации 1% с последующим низкоскоростным центрифугированием.

В табл. 5 приведены характеристики биологических и физических показателей очищенных суспензий вируса ИББ, определенных с помощью РДП, ИФА и спектрофотометрии, которые подчеркивают зависимость влияния концентрации химических реактивов на степень удаления примесей и иммунобиологические показатели вируса.

Для отработки режимов инактивации вируса ИББ были испытаны традиционные инактиванты, использующиеся в ветеринарной биотехнологии: формальдегид, димер этиленимина и -пропиолактон. В результате проведенных экспериментов было установлено, что эффективным и надежным способом инактивации вируса ИББ является 0,2%-й раствор димера этиленимина при +37°С в течение 24 ч инкубации. С целью безопасности и большей уверенности в надежности инактивации, особенно при работе с производственными объемами вируса, экспозиция воздействия инактиванта была увеличена до 30 ч.

Данный режим инактивации позволял необратимо подавить инфекционную активность вируса в производственных объемах при максимальном сохранении антигенных и протективных свойств вакцинного штамма.

Таблица Эффективность очистки эмбрионального вируса ИББ от балластных белков Характеристика вирусного Титр антител материала Концентрация Способ очистки концентрареагента, % ция белков, прозрачность, % РДП, log2 ИФА мг/мл 0,1 3,75±0,12 39,4±2,16 2,5±0,55 4630±0,Протаминсульфат 0,5 3,50±0,23 54,2±3,25 2,6±0,84 4540±0,1,0 2,80±0,15 79,1±2,64 1,2±0,52 2150±0,0,5 3,46±0,16 48,5±2,47 2,3±0,24 4230±0,Хлороформ 1,0 2,95±0,25 44,2+2,24 1,5±0,56 2450±0,2,0 2,5±0,15 82,2±2,53 1,0+0,17 1860±0,0,5 3,28±0,26 30,8±3,28 2,9±0,69 5310±0,Фреон-113 1,0 2,98+0,18 50,8±3,25 2,8±0,54 5240±0,2,0 2,97±0,15 56,2±1,29 2,5±0,45 4280±0,Контроль – 4,25±0,23 20,4±0,24 2,8±0,46 5340±0,без очистки Примечание: контрольный образец – эмбриональный вирус ИББ, очищенный низкоскоростным центрифугированием.

В процессе конструирования инактивированной вакцины против ИББ были испытаны рекомендованные для практики адъюванты: ГОА, аэросил марки А-300 и минеральное масло Маркол-52.

Антигенную активность опытных серий вакцин с разными адъювантами оценивали на цыплятах 21-суточного возраста, которым препараты вводили внутримышечно в объеме 0,5 мл. Спустя 4 недели сыворотку крови исследовали в РДП и ИФА (табл. 6).

Таблица Антигенная активность инактивированного вируса ИББ с различными адъювантами Титр антител Инактивированный антиген вируса ИББ Количество голов РДП (log2) ИФА С гидроокисью алюминия 10 3,9±0,34 5896±0,С аэросилом 10 4,4±0,46 6526±0,С минеральным маслом 10 5,2±0,25 9214±0,Без адъюванта 10 2,2±0,37 4124±0,Контроль (непривитый) 10 0 Как следует из результатов опыта наиболее высокой антигенной активностью обладает препарат с масляным адъювантом. Установлен максимальный уровень антител на его введение (5,2±0,25 log2 в РДП и 9214±0,63 в ИФА).

Адъювантная способность гидроокиси алюминия и аэросила существенно не различалась. Наименее выраженный иммунный ответ отмечали у цыплят, которым вводили инактивированный антиген без адъюванта. В дальнейшей работе при изготовлении инактивированной вакцины против ИББ использовали масляный адъювант.

Для определения в инактивированной вакцине против ИББ оптимального компонентного состава – соотношения дисперсной фазы (инактивированный вирус) и дисперсной среды (Маркол-52) – были изготовлены опытные образцы препарата с различным весовым содержанием водной и масляной фаз (20/80, 30/70 и 40/60).

Установлено, что наиболее стабильную эмульсию (более 12 мес. при температуре +2…+8°С) и выраженные иммуногенные свойства имел биопрепарат, приготовленный из 70 частей масляного адъюванта Маркол-52 и 30 частей водной фазы инактивированного вируса ИББ.

Эксперименты по изучению продолжительности и напряженности иммунитета у птиц, привитых инактивированной вакциной против ИББ, полученной на базе Маркола-52, показали, что оба введенных объема вакцинного препарата (0,3 и 0,5 мл) вызывали выработку напряженного иммунитета у птиц продолжительностью 12 мес. как при подкожной, так и при внутримышечной инъекции (срок наблюдения).

Опытно-промышленные образцы инактивированной эмульгированной вакцины против ИББ имели стабильную эмульсию и обладали выраженной антигенной активностью в процессе хранения продолжительностью 12 мес. (гарантийный срок реализации вакцины) при температуре +2…+8°С.

При изучении иммунобиологических свойств инактивированной эмульгированной вакцины против ИББ в условиях промышленных птицеводческих предприятий было показано, что вакцина не вызывала у привитых птиц поствакцинальных осложнений местного или общего характера, что свидетельствует о ее безвредности.

В производственных опытах, проведенных на птицефабрике «Синявинская» Ленинградской области установлено, что однократное подкожное введение инактивированной вакцины в возрасте 10 сут. в дозе 0,3 мл обеспечивает успешную профилактику инфекции. Сохранность молодняка птицы, вакцинированного убитой вакциной, составила 97,1%. При контроле напряженности иммунитета через 3 недели после прививки установили наличие группового иммунитета в 99% случаях, среднегеометрический титр антител в ИФА составил 1504, а в РДП – 3,5 log2, высокий бурсальный индекс цыплят сохранялся на протяжении всего срока выращивания и в возрасте 120 дней составил более 4,0, что свидетельствует о сохранности фабрициевой сумки и высокой иммунологической реактивности организма вакцинированной птицы.

Сравнительные испытания живой вакцины из штамма БГ и инактивированной вакцины провели в условиях птицефабрики «Гайская» Оренбургской области на общем поголовье 130 340 голов с целью разработки эффективной схемы профилактики болезни в дальнейшем. Для этого первую группу цыплят прививали инактивированной вакциной в 10 сут. согласно наставлению, вторую – в 16 сут.; третью и четвертую группы цыплят одновременно иммунизировали инактивированной вакциной и вакциной из штамма КБК в 10 и 16 сут.

соответственно; цыплят пятой группы прививали вакциной из штамма БГ в и 17 сут.

Об эффективности вакцин и схем их применения судили по благополучию хозяйства по ИББ, общей сохранности, продуктивности, деловому выходу ремонтного молодняка и по результатам исследований сыворотки крови на наличие специфических антител в РДП у 30-, 40-, 50- и 60-ти дневных цыплят.

Одновременно изучали уровень поствакцинального иммунитета против ньюкаслской болезни, а также определяли бурсальный индекс в разные сроки выращивания птицы.

Производственные показатели выращивания цыплят при сравнительных испытаниях вакцин представлены в табл. 7.

Таблица Производственные показатели цыплят, привитых разными вакцинами против ИББ на птицефабрике «Гайская» Номера групп I II III IV V Показатели Количество голов 26 380 25 300 26 800 26 110 25 7Сохранность, % 97,2 99,2 98,5 99,4 91,Среднесут. прирост массы, г 11,3 11,1 11,4 11,97 10,Масса 1 гол. при переводе 1320 1260 1300 1350 11в 112 дней, г % деловой молодки 94,6 94,5 97,3 97,4 85,Однородность, % 86,4 87,1 87,5 88,3 78,% яйцекладки в 150 сут. 76,8 81,8 82,1 82,9 68,Выбраковка, % 1,24 0,8 0,7 0,49 3,Вакцинопрофилактика ИББ по указанным схемам вакцинации против ИББ обеспечивают полную защиту цыплят от полевого вируса. Введение инактивированной вакцины не вызывает побочных реакций местного и общего характера. Цыплята, привитые инактивированной вакциной в разные сроки отдельно и в ассоциации с живой вакциной, имеют наиболее высокие показатели сохранности (до 99,4%). Среднесуточный прирост их массы соответствует нормативным требованиям. При этом достигаются положительные результаты: вы сокий процент выхода деловой молодки (97,4%), низкий процент выбраковки (0,49%) и высокая однородность стада (88,3%).

Динамика серологических показателей реакции на введение вакцин свидетельствует о том, что наиболее активный групповой иммунитет установлен в 4-й группе, где цыплят в 16 сут. иммунизировали одновременно живой и инактивированной вакцинами. Среднеарифметический титр сывороток в РДП составил 3,8 log2. Высокие показатели бурсального индекса (более 5,2) отмечены в I–IV группах, в то время как в V группе низкие показатели бурсального индекса наблюдали, начиная с 30-суточного возраста.

Таким образом, результаты проведенного опыта свидетельствуют, что эффективность профилактики болезни ИББ тесно связана с типом вакцины, соблюдением правил ее применения, наличием материнских антител, которые отрицательно влияют на выработку поствакцинального иммунитета как при введении живой, так и инактивированной вакцины.

Применение вакцины из штамма БГ позволяет купировать инфекцию, но вызывает поражения бурсы и почек, что приводит к снижению общей сохранности и продуктивности птицы.

Высокая сохранность и продуктивность птицы в условиях данного хозяйства были достигнуты при совместном применении инактивированной и живой вакцин против ИББ в 16–18 сут.

Позитивный эффект от применения эмульсионной инактивированной вакцины против ИББ из штамма 52/70-М был также получен при ее испытании во время острой вспышки ИББ на птицефабрике «Лебедевская» Новосибирской области, где впервые инфекция была установлена 29 марта 1997 года среди цыплят 52-дневного возраста. Продолжительность заболевания равнялась 10 сут.

Суточный отход птицы составил до 883 из 19 500 голов, т.е. 4,5%. Всего в этой группе пало 4672 головы (26,8%).

В дальнейшем заболевание проявлялось как среди цыплят более раннего возраста (27-дневного), так и среди молодняка в возрасте 92 дней. Продолжительность заболевания составляла 7–10 сут. Заболеваемость и смертность на растали быстро, достигая максимума на 3–4 день, в течение последующих 5– 7 суток шел спад заболеваемости и гибель птиц прекращалась. В отдельных партиях количество заболевших цыплят достигло 100%, а смертность – 44,2%.

За время эпизоотии на птицефабрике «Лебедевская» отход птицы от ИББ составил 77 583 головы, что соответствует 15,6% от общего поголовья (498 480).

В период с мая 1997 г. по настоящее время на птицефабрике для вакцинации цыплят используется инактивированная вакцина из штамма 52/70-М. Первые партии цыплят иммунизировали данной вакциной в возрасте 10 дней. При этом процент падежа от ИББ был ниже, чем среди цыплят, иммунизированных вакцинами из штаммов Д-78, БЮР-706. После применения вакцины в более поздние сроки, в возрасте 15–18 дней, клинических признаков ИББ и отхода цыплят не отмечалось.

Совместно со специалистами птицефабрики проведено сравнительное изучение эффективности профилактики болезни с помощью вакцин из разных штаммов вируса ИББ. Результаты этих испытаний приведены в табл. 8.

Таблица Экономические показатели по группам цыплят, вакцинированных против ИББ Вакцинный штамм Контрольная Показатели группа БГ Д-78 БЮР-706 52/70-М % сохранности 92,7 54,4 59,5 96,8 55,Среднесуточный привес 12,0 11,1 10,4 12,9 10,Вес одной головы при 1320 1165 1139 1377 11переводе в 110 дней, г % делового молодняка 89,3 48,7 66,5 96,8 61,% однородности 76 68 65 86,5 50% яйцекладки, дн. 163 176 172 157 1% выбраковки 3,4 4,7 2,6 2,2 4,Экономическая эффективность +8084 –13 790 –7630 +11 966 – на 1000 голов, руб.

Работу проводили в условиях неблагополучия птицехозяйства по ИББ. Как видно из данных табл. 8, наиболее высокий уровень сохранности птицы (96,8 %) был в группе, привитой инактивированной вакциной из штамма 52/70-М. Уровень сохранности у цыплят, вакцинированной живыми вакцинами из штаммов Д-78 и БЮР-706 был значительно ниже (55,4 и 59,5% соответственно) и как в контрольной группе (55,0%).

Птицефабрика «Витязовская» Краснодарского края в течение ряда лет была неблагополучна по ИББ и стабильных результатов по профилактике инфекции с помощью живых вакцин получать не удавалось.

В производственных опытах для специфической профилактики ИББ испытаны вирусвакцина из штамма Винтерфилд 2512 и инактивированная вакцина из штамма 52/70-М.

Результаты сравнительных испытаний представлены в табл. 9.

Всего за период испытания инактивированной вакциной привито 1 млн 78 тыс. голов птицы. Поствакцинальных осложнений и случаев болезни ИББ среди вакцинированной птицы не выявлено. Эффективность препарата контролировали серологически (ИФА и РДП) и по бурсальному индексу в разные сроки после применения вакцины. Процент положительно реагирующих проб сывороток составляет 90–100%. Бурсальный индекс в 30-дневном возрасте – 4,1, в 40-дневном – 5,2 и в 50-дневном – 7,2.

Таблица Результаты сравнительных испытаний вакцин против ИББ на птицефабрике «Витязовская» Вакцинный штамм Показатели Винтерфилд 2512 52/70-М Всего поголовье, гол. 1 507 860 1 078 7Сохранность, % 97,82 98,Среднесуточный прирост, г 10,7 11,Деловой выход молодняка, % 80 На основании результатов производственных показателей и лабораторных исследований сывороток крови птицы, проведенных специалистами птицефабрики, можно сделать вывод о том, что инактивированная вакцина из штамма 52/70-М обладает выраженной протективной активностью, безвредна для молодняка и эффективна в очаге инфекции для купирования острых вспышек заболевания.

Производственные испытания на птицефабрике «Витязовская» показали отсутствие у привитой птицы поствакцинальных осложнений местного и общего характера, что свидетельствует о безвредности вакцины. При анализе основных производственных показателей (сохранность, продуктивность, конверсия корма) птицы родительских стад, иммунизированной инактивированной вакциной против ИББ, существенных отличий от нормативных показателей выявлено не было. Вакцина из штамма 52/70-М пригодна для профилактики ИББ среди цыплят яичных кроссов при однократном ее применении с 10–12-дневного возраста в зависимости от уровня материнского иммунитета.

Эффективность профилактики ИББ среди цыплят-бройлеров с помощью инактивированной вакцины из штамма 52/70-М оценивали на птицефабрике «Баксанская» Кабардино-Балкарской Республики в сравнении с широко используемыми для тех же целей в птицеводстве мясного направления живыми вакцинами.

Развернутые производственные показатели эффективности выращивания цыплят-бройлеров, иммунизированных двумя живыми (из штамма БГ и Винтерфилд 2512) и инактивированной вакцинами против ИББ представлены в табл. 10.

В группе птицы, привитой инактивированной вакциной, сохранность была выше на 4,4 и 3,5% по сравнению с птицей из групп, где применялись живые вакцины из штаммов БГ и Винтерфилд 2512. Соответственно, затраты корма уменьшились на 6,2%, индекс продуктивности был выше в 1,5 раза. Чем выше индекс продуктивности, тем лучше технические показатели стада. Это европейский коэффициент, используемый для сравнения показателей стад.

Таблица Производственные показатели эффективности выращивания бройлеров, иммунизированных живыми и инактивированной вакцинами против ИББ на птицефабрике «Баксанская» Группы цыплят, иммунизированных против ИББ живая вакцина инактивированная Показатели эффективности вакцина штамм штамм БГ (штамм 52/70-М) Винтерфилд 25Сохранность, % 91,5 92,4 95,Живая масса 1 гол., г 1860 1985 21Среднесуточный прирост, г 43,3 49,4 52,Конверсия корма, кг 2,3 1,91 1,Индекс продуктивности 208,5 249,1 279,Выход тушек 1-й категории, % 78,2 81,8 87,В последствии в производственных испытаниях на данной птицефабрике использовали комбинированный способ применения живой и инактивированной вакцин. Схема и результаты опыта приведены в табл. 11. Эффективность вакцин и схему их применения оценивали по благополучию хозяйства по инфекции, общей сохранности, продуктивности, деловому выходу ремонтного молодняка и по результатам исследований сыворотки крови птицы на наличие специфических антител в РДП и ИФА у 35-дневных цыплят. Одновременно изучали уровень поствакцинального иммунитета против ньюкаслской болезни, а также определяли бурсальный индекс в разные сроки выращивания птицы.

Данные, полученные в производственных условиях, подтверждают результаты лабораторных исследований и свидетельствуют об эффективности комбинированной прививки живой и инактивированной вакцинами против ИББ при специфической профилактике болезни. Согласно результатам серологических исследований, наиболее высокие титры в РДП и ИФА выявлены в группе цыплят, которых в суточном возрасте одновременно прививали живой и инактивированной вакцинами подкожно в разные точки и ревакцинировали в 18суточном возрасте живой вакциной методом выпаивания. Бурсальный индекс Таблица Результаты производственных испытаний вакцин против ИББ на птицефабрике «Баксанская» Результаты опыта Сроки Способ Кол-во Вакцина вакцинации РДП (log2) ИФА вакцинации птиц, гол.

РЗГА % гибели (сут.) БИ (log2) от ИББ сут. 35 сут. Живая Выпойка 7 и 14 21500 2,3 1,2 2730 4340 4,2 2,3 2,Инактивированная Подкожно 1 28340 – 2,6 – 4130 5,6 3,6 Инактивированная + живая Подкожно 1 25400 – 3,1 – 5430 5,2 3,2 Инактивированная + живая Подкожно 1 и 18 29750 – 3,5 5780 4,0 2,8 и ревакцинация живой и выпойка Примечание. РЗГА – средний геометрический титр антигемагглютининов к вирусу ньюкаслской болезни.

и титр антигемагглютининов в этой группе цыплят были максимальными, что указывает на высокую иммунологическую реактивность данной группы птицы.

Наблюдения показали, что испытываемая вакцина из штамма 52/70-М не вызывает у птицы осложнений местного и общего характера.

Таким образом, в результате экспериментальных опытов и производственных испытаний выбрана оптимальная схема специфической профилактики ИББ, которая предусматривает одновременное подкожное введение в суточном возрасте инактивированной и живой вакцин в разные точки с последующей ревакцинацией живой вакциной через 10–12 суток. Показана совместимость разработанных биопрепаратов при их комбинированном введении, в том числе отсутствие инактивации живой вакцины. Полученные нами данные соответствуют результатам исследований Ciambrone J.J., Clay R.P. (1986).

Проведенные эксперименты показали, что успех вакцинопрофилактики цыплят зависит от правильно выбранного срока первой вакцинации, используемого штамма и метода его введения.

На основании проведенных с положительным эффектом лабораторных и производственных испытаний и применения вакцины в условиях хозяйств была разработана нормативно-техническая документация (НТД) на вакцину эмульсионную инактивированную против ИББ из штамма 52/70-М. В НТД вошли постоянно действующие технические условия на вакцину, инструкция по применению и регламент по изготовлению и контролю препарата.

ВЫВОДЫ 1. Сравнительный анализ иммунобиологических и молекулярно-генетических свойств вакцинных штаммов и полевых изолятов вируса ИББ, циркулирующих в птицехозяйствах, показал их высокую антигенную гомологию.

2. Штамм КБК вируса ИББ, полученный методом селекции и аттенуации пассажами на эмбрионах СПФ-кур, обладает базовыми свойствами вакцинного штамма для производства живой вакцины: антигенной гомологичностью с полевыми изолятами вируса, высокой иммуногенностью, генетической стабиль ностью, апатогенностью при различных способах введения, отсутствием иммуносупрессивного эффекта.

3. Технология промышленного производства живой вакцины против ИББ на основе штамма КБК вируса ИББ включает: культивирование вируса в эмбрионах СПФ-кур, стабилизацию вируссодержащего материала в защитной среде с последующей лиофилизацией и хранением вакцины при температуре +4…+6°С в течение 12 месяцев.

4. Живая вакцина на основе авторского штамма КБК вируса ИББ безвредна и эффективна при различных способах вакцинации: подкожном, пероральном, интраназальном и интраокулярном. Выбор способа введения вакцины определяется наличием и уровнем материнских антител, а также эпизоотической ситуацией в хозяйстве.

5. Живая вакцина на основе штамма КБК вируса ИББ может применяться в сочетанной вакцинации суточных цыплят против ИББ и болезни Марека.

6. Промышленная технология изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против ИББ на основе штамма 52/70-М включает: культивирование вируса ИББ на эмбрионах СПФ-кур, его очистку от балластных белков, инактивацию димером этиленимина и получение эмульсии антигена с адъювантом.

7. Инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ безвредна, антигенно активна, эффективна при однократном парентеральном введении и вызывает формирование напряженного и продолжительного иммунитета.

8. Инактивированная эмульсионная вакцина против ИББ сохраняет исходные антигенные, иммуногенные свойства и стабильность эмульсии при хранении препарата при температуре +2…+8°С в течение 12-месячного срока наблюдения.

9. Эмульсионная инактивированная вакцина против ИББ в условиях птицеводческих хозяйств высокоэффективна для купирования острых вспышек и для профилактики субклинической формы болезни.

10. На основании практики использования разработанных вакцин против ИББ подтверждена экономическая и противоэпизоотическая эффективность разных схем их применения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Результаты научных исследований вошли в нормативные документы, которые были одобрены ученым советом ФГУ «ВГНКИ», утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России и Россельхознадзором МСХ РФ:

1. НД на «Вакцину против инфекционной бурсальной болезни из штамма КБК» (СТО 56204140-0001-2007), 01.02.2008 г.;

2. НД «Инструкция по применению вакцины против инфекционной бурсальной болезни из штамма КБК (вместо «Наставления по применению...»), 03.03.2008 г.;

3. НД на «Вакцину против инфекционной бурсальной болезни (ИББ) жидкую инактивированную» (ТУ 9384-001-56204140-03) от 05.02.2004 г., без ограничения срока действия;

4. «Инструкция по применению вакцины против инфекционной бурсальной болезни (ИББ) жидкой инактивированной» (вместо «Наставления по применению…»), 04.06.2009 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Алиева, А.К. Сравнительная оценка эффективности различных методов вакцинации против инфекционной бурсальной болезни птиц / А.С. Алиев, Р.С. Сираждинов, А.К. Алиева // Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с болезнями сельскохозяйственных животных: тез. науч.-практ. конф. – Ставрополь, 1999. – С. 33–34.

2. Алиева, А.К. О специфической профилактике инфекционной бурсальной болезни птиц / А.С. Алиев, Р.С. Сираждинов, Н.В. Никитина, А.К. Алиева // Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с болезнями сельскохозяйственных животных: материалы науч.-практ.

конф. – Ставрополь, 1999. – С. 35–36.

3. Алиева, А.К. Вакцина против инфекционной бурсальной болезни птиц из штамма КБК / А.С. Алиев, А.К. Алиева // Ветеринария. – 2003. – № 3. – С. 26–29.

4. Алиева, А.К. Вiрусвакцина протiв iнфекционной бурсальноi хвороби птицi зi штамму КБК / А.С. Алиев, А.К. Алиева // Ветерiнарна медiцiна Украiни. – 2003. – № 3. – С. 37–40.

5. Алиев, А.С., Алиева, А.К., Оганесян, В.А. Вакцина против инфекционной бурсальной болезни птиц // Патент № 2205021, опубл. 27.05.2003.

6. Алиева, А.К. Особенности иммуногенеза при инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева // Пятая международная конференция по птицеводству. – Алушта, 2004. – С. 496–497.

7. Алиева, А.К. Ассоциированная вакцинация против инфекционной бурсальной болезни и болезни Марека / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Материалы междунар. юбилейной науч.-практ. конф. – СПб.–Ломоносов, 2004. – С. 63–65.

8. Алиева, А.К. Эпизоотические особенности и клинико-морфологическая характеристика инфекционной бурсальной болезни в промышленном птицеводстве стран СНГ. Сообщение 1 / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Актуальные вопросы производства и применения биологических препаратов: сб. материалов междунар. науч.-практ. конф. – Алматы, 2004. – С. 293–302.

9. Алиева, А.К. Эпизоотические особенности и клинико-морфологическая характеристика инфекционной бурсальной болезни в промышленном птицеводстве стран СНГ. Сообщение 2 / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Актуальные вопросы производства и применения биологических препаратов: сб. материалов междунар. науч.-практ. конф. – Алматы, 2004. – С. 303–316.

10. Алиева, А.К. Диагностика инфекционной бурсальной болезни / А.С. Алиев, А.К. Алиева // Актуальные вопросы диагностики болезни животных: специальный выпуск материалов междунар. конф. – Алматы, 2005. – С. 32–37.

11. Алиева, А.К. Птицеводство Казахстана, современное состояние и перспективы развития / А.С. Алиев, Г.К. Калыкова, А.К. Алиева // Материалы I междунарного ветеринарного конгресса по птицеводству. – М., 2005. – С. 5–6.

12. Алиева, А.К. Вирусвакцина против инфекционной бурсальной болезни из штамма «КБК» / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: материалы конф. – СПб., 2005. – С. 6–7.

13. Алиева, А.К. Производственные испытания живой вакцины из штамма КБК для специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины:

материалы междунар. науч.-практ. конгр. – СПб., 2005. – С. 9–11.

14. Алиева, А.К. Разработка методов очистки вируса инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева, А.С. Алиев, А.И. Банников // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: материалы конф. – СПб., 2005. – С. 7–9.

15. Алиева, А.К. Применение РНГА для выявления специфических антител к вирусу инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева, А.С. Алиев, Э.П. Корнеева, А.И. Банников // Материалы I междунарного ветеринарного конгресса по птицеводству – М., 2005. – C. 68–70.

16. Алиева, А.К. К вопросу специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева, А.С. Алиев, В.А. Оганесян // Материалы I междунарного ветеринарного конгресса по птицеводству – М., 2005. – С. 112–115.

17. Алиева, А.К. Принципы специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни / А.С. Алиев, А.К. Алиева // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: материалы междунар. науч.-практ. конгр. – СПб., 2006. – С. 47–51.

18. Алиева, А.К. Инфекционная бурсальная болезнь птиц: учеб.-метод. пособие / А.С. Алиев, А.К. Алиева, В.А. Бакулин. – СПб., 2006. – 11 с.

19. Алиева, А.К. Эффективность ассоциированной вакцинации против инфекционной бурсальной болезни и болезни Марека / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Птица и птицепродукты. – 2006. – № 6. – С. 46–47.

20. Алиева, А.К. Ассоцiйована вакцiнация протiи iнфекцiонной хворобi и хворобi Марека / А.К. Алиева // Ветерiнарна медiцiна Украiни. – 2008. – № 3. – С. 17–18.

21. Алиева, А.К. К вопросу культивирования вируса инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева // Актуальные вопросы медицинской биологии и паразитологии: материалы юбилейной науч.-практ. конф., посвященной 200-летию кафедры биологии им. акад. Е.Н. Павловского. – СПб., 2009. – С. 11.

22. Алиева, А.К. Оценка биологических свойств вакцинного штамма КБК вируса инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева // Актуальные вопросы медицинской биологии и паразитологии: материалы юбилейной науч.-практ. конф., посвященной 200-летию кафедры биологии им. акад.

Е.Н. Павловского. – СПб., 2009. – С. 10.

23. Алиева, А.К. Желудочно-кишечные болезни птиц вирусной этиологии / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Птица и птицепродукты. – 2009. – № 4. – С. 50–54.

24. Алиева, А.К. Эпизоотология и профилактика инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Эпизоотология, иммунология, фармакология, санитария. – 2009. – № 2. – С. 27–34.

25. Алиева, А.К. Перспективы применения цитокинов в птицеводстве / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Птица и птицепродукты. – 2010. – № 2. – С. 34–36.

26. Алиева, А.К. Роль цитокинов в регуляции иммунитета у птиц / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Ветеринария. – 2010. – № 12. – С. 24–28.

27. Алиева, А.К. Сравнительное изучение схем вакцинации цыплят-бройлеров против инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Материалы VII междунар. ветеринарного конгр. по птицеводству. – М., 2011. – С. 85–88.

28. Алиева, А.К. Изучение антигенной специфичности полевых изолятов и эталонного штамма «52/70-М» вируса болезни Гамборо / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Материалы VII междунар. ветеринарного конгр. по птицеводству. – М., 2011. – С. 94–97.

29. Алиева, А.К. К вопросу изучения антигенной идентичности полевых изолятов и эталонного штамма «52/70-М» вируса болезни Гамборо / А.К. Алиева, А.С. Алиев, Г.Р. Юсупова // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. – 2011. – Т. 206. – С. 3–8.

30. Алиева, А.К. Оценка различных схем вакцинации цыплят-бройлеров против инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева, В.И. Смоленский, А.С. Алиев, Г.Р. Юсупова // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. – 2011. – Т. 207. – С. 33–37.

31. Алиева, А.К. Разработка инактивированной вакцины против инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева, О.И. Киселев, М.Г. Алиев, Г.Р. Юсупова // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. – 2011. – Т. 207. – С. 28–33.

32. Алиева, А.К. Оценка иммуносупресивной активности вакцинного штамма «КБК» вируса инфекционной бурсальной болезни птиц / А.К. Алиева // Ветеринарный врач. – 2011. – № 3. – С. 17–18.

33. Алиева, А.К. Изучение режима инактивации вируса инфекционной бурсальной болезни птиц / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Ветеринарный врач. – 2011. – № 4. – С. 5–7.

34. Алиева, А.К. Иммунобиологические свойства живой вакцины против инфекционной бурсальной болезни птиц / А.К. Алиева, В.И. Смоленский // Птица и птицепродукты. – 2011 – № 4. – С. 16–18.

35. Алиева, А.К. Иммунобиологические свойства инактивированной вакцины против инфекционной бурсальной болезни / А.К. Алиева, А.С. Алиев // Ветеринария и кормление. – 2011. – № 4. – С. 20–21.

36. Алиева, А.К. Производственные испытания вакцин против инфекционной бурсальной болезни птиц в неблагополучном хозяйстве / А.К. Алиева, С.Ю. Жбанова // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. – 2011. – № 2. – С. 29–30.

37. Алиева, А.К. Оценка эффективности вакцин против инфекционной бурсальной болезни птиц / А.К. Алиева, Г.В. Бегинин // Ветеринарная медицина. – 2011. – № 3. – С. 18–21.

38. Алиева, А.К. Аттенуация бирнавируса птиц и оценка его иммунобиологических свойств // А.К. Алиева, А.С. Алиев // Ветеринарная медицина. – 2011. – № 3. – С. 22–25.

39. Алиева, А.К. К вопросу вакцинации против инфекционной бурсальной болезни птиц / А.К. Алиева, Г.В. Бегинин // Международный вестник ветеринарии. – 2011. – № 3. – С. 6–9.

Автор выражает искреннюю благодарность и признательность всем сотрудникам учреждений, принимавших участие в проведении отдельных фрагментов работы и обсуждении их результатов






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.