WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

Храмова Ирина Афанасьевна

ХАРАКТЕРИСТИКА
МАКРОФАГАЛЬНОЙ СИСТЕМЫ У ЖЕНЩИН
ПРИ НАРУШЕНИИ ПРОЦЕССА РЕПРОДУКЦИИ

03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени
доктора медицинских наук

Владивосток – 2011

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Владивостокский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России».

Научные консультанты:        заслуженный деятель науки, академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор

Мотавкин Павел Александрович;

доктор медицинских наук, профессор

Шаронов Анатолий Степанович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Рыжавский Борис Яковлевич;

доктор медицинских наук, профессор

Хасина Шоэль-Александровна;

доктор биологических наук, профессор

Плехова Наталия Геннадьевна

Ведущая организация: Хабаровский институт охраны материнст­ва и детства СО «РАМИ».

Защита диссертации состоится «21» октября 2011 г. в ___ часов на заседании диссертационного совета Д. 03.03.04 при Владивостокском государственном медицинском университете по адресу: Владивосток, пр. Острякова, 4.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета по адресу: Владивосток, пр. Острякова, 2.

Автореферат разослан « ___ » __________ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

д-р мед. наук, профессор

Г.В. Рева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность диссертационной работы. Проблема репродуктивного здоровья женщины чрезвычайно многопланова. Она имеет социальное и биологическое значение и определяется физическим развитием, заболеваемостью, искусственными абортами, нерациональным применением средств контрацепции, особенно гормональной (Иванов А.Г., 2004; Радзинский В.Е и др., 2006; Ушакова Г.А. и др., 2006; Серов В.Н., 2007 и др.). Социально значимым показателем нарушения репродуктивного здоровья женщины является бесплодие различного генеза (Кулаков В.И. и др., 2001; Федорова Т.А., 2003; Хусаинова В.Х. и др., 2003; Яманова М.В., 2003; Овсянникова Т.В., 2004), невынашивание беременности (Серов В.Н., 2007; Радзинский В.Е., Костин И.Н., 2007; Трунова Л.А., 2008), рождение ребенка с различными видами патологии (Кулаков В.И., Барашнев Ю.И., 2002).

Полноценность формирования и функционирования репродуктивной системы определяется взаимодействием нервной, эндокринной и иммунной систем организма (Мотавкин П.А. с соавт., 1990; Михайлова Н.А., 2001; Федорова Т.А., 2003; Левенец С.А. с соавт., 2006; Крыжановский Г.Н. с соавт., 2008). Исследования в этом направлении (Акмаев И.Г. с соавт.; Бурлаков Г.В.; Зубарева О.Е. с соавт.; Корнева Е.А.; Магаева С.В.; Шаронов А.С. с соавт.), представленные на Второй Российской конференции по нейроиммунопатологии в 2002 г. в Москве, организованной по инициативе академика РАМН Г.Н. Крыжановского, позволили сформировать новую интегральную медико-биологическую дисциплину – нейроиммуноэндокринологию.

Роль иммунной системы в формировании и функционировании репродуктивной системы женщины несомненна, и в области иммунологии репродукции в настоящее время ведутся активные исследования, позволившие показать роль, прежде всего, системы Т- и В-лим­фоцитов, антител, цитокинов – факторов гуморального и клеточного им­мунитета в определении и сохранении репродуктивного здоровья женщины (Сухих Г.Т., Ванько Л.В., 1999; Николаева М.А., 2001; Труно­ва Л.А. с соавт., 2008).

В последнее десятилетие значительно увеличилось число публикаций, посвященных изучению активности фагоцитирующих клеток организма женщин при различных физиологических состояниях и их нарушении. В частности, показаны изменения функциональной активности нейтрофилов крови беременных женщин в процессе подготовки к родам, роль фагоцитирующих клеток в элиминации иммунных комплексов, образующихся в процессе беременности, и роль процесса активации плацентарных макрофагов при нормальной беременности (Буйнова А.Н., 2008; Дорофеева Н.А. и др., 2008; Павлов О.В., 2008; Сафронова В.Г. и др., 2008), что свидетельствует об актуальности данного направления исследований в области иммуноморфофизиологии репродукции и определяет необходимость дальнейшего поиска в изучении клеток системы макрофагов организма как важнейшей составляющей репродуктивного здоровья и реализации репродуктивной функ­ции женщин.

Цель исследования: выявить закономерности изменения морфо-функциональных свойств и активности клеток системы макрофагов женщин в процессе проявления их репродуктивной функции, определить на этой основе возможные механизмы нарушения, приводящие к развитию гинекологических заболеваний и бесплодию, наметить пути коррекции этих нарушений.

Задачи исследования:

1. Изучить структурно-функциональные особенности клеток системы макрофагов на клеточном и молекулярном уровнях у женщин репродуктивного возраста.

2. Выявить влияние факторов, нарушающих реализацию репродуктивной функции женщин, на клетки системы макрофагов: моноциты крови и перитонеальные макрофаги.

3. Изучить связь состояния гормонального статуса с морфо-функ­циональной активностью моноцитов крови и перитонеальных макрофагов.

4. Исследовать активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в процессе нормального менструального цикла и при его нарушении.

5. Оценить роль клеток системы макрофагов в созревании фолликула и овуляции.

6. Исследовать участие моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в оплодотворении яйцеклетки и развитии беременности.

7. Клинически изучить роль целенаправленной коррекции измененных клеток системы макрофагов при лечении бесплодия.

Научная новизна

Впервые обнаружено, что синтез и секреция моноцитов/макрофа­гов в различные периоды циклических изменений в организме женщины, связанные с ее гормональной перестройкой, изменяются. Точкой приложения этого является изменение состояния стабильности лизосомных мембран, проявляющееся лабилизацией и стабилизацией.

При лабилизации лизосомных мембран моноцитов крови и перитониальных макрофагов происходит повышение выхода лизосомных ферментов из лизосом, что приводит к реализации их регуляторного и эффекторного внеклеточного действия, созданию оптимальных условий для овуляции, фертилизации, транспортировки зародыша.

Теоретическая значимость

В результате проведенных исследований показана взаимосвязь изменений морфо-функциональных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с течением различных гинекологических заболеваний и формированием бесплодия. Выявлено участие этих клеток за счет лизосомных ферментов в нарушении циклических процессов репродуктивной системы женщины, в реализации программы подготовки к репродукции на этапах созревания фолликула, овуляции и ее завершении при фертилизации.

Определена зависимость активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов от уровня половых гормонов и их соотношения: повышенние ФСГ, пролактина, эстрадиола прямо или опосредованно приводят к повышению адгезивной и поглотительной активности клеток, лабилизации лизосомных мембран, увеличению секреции и снижению синтеза лизоцима; повышенние уровеня ЛГ, прогестерона, тестостерона – к обратному эффекту. Выявлено, что при воспалительном процессе в половых органах женщины, следствием которого является активация клеток системы макрофагов, повышение уровня секреции IL8 моноцитами крови сопровождается лабилизацией лизосомных мембран и повышением секреции лизосомного фермента лизоцима перитонеальными макрофагами и моноцитами крови.

Установлено, что повышенный уровень экспрессии рецепторов на клетках эндометрия к эстрадиолу в пролиферативную фазу маточного цикла приводит к лабилизации лизосомных мембран, увеличению секреции и снижению синтеза лизоцима моноцитами/макрофагами. Повышенный уровень экспрессии рецепторов к прогестерону в секреторную фазу цикла ведет к обратному эффекту, что связано с разной степенью клеточной активации.

Практическая значимость

В данной работе на основании клинических и экспериментальных данных доказано, что изменение структурно-функциональных свойств и секреторно-синтетической активности клеток системы макрофагов может служить диагностическим тестом различных гинекологических заболеваний, в том числе и бесплодия. Обоснована возможность достижения позитивного эффекта лечения бесплодия путем включения в комплексную терапию целенаправленной коррекции клеточных нарушений. Это легло в основу методических рекомендаций по консервативному лечению бесплодия в качестве вспомогательной технологии восстановления репродуктивного здоровья женщины.

В процессе выполнения работы получен патент на изобретение «Способ оценки активации фагоцитирующих клеток» (№ 2010115177 (021473) от 14.03.2011 г.).

В практику научных исследований и практическое здравоохранение внедрены созданные в процессе выполнения диссертации 3 рационализаторских предложения.

Совокупность полученных в процессе выполнения диссертации данных предполагает перспективность всесторонней оценки участия клеток системы макрофагов как вспомогательных клеток репродуктивной системы в комплексном исследовании нарушений репродуктивной функции женщины.

Внедрение результатов исследования в практическую деятельность

Выявленные изменения стабильности лизосомных мембран, синтеза и секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами при воспалительных процессах матки и придатков матки при нарушении менструального цикла, бесплодии позволяют рекомендовать исследования секреторно-синтетической активности этих клеток в качестве диагностического теста при заболеваниях репро­дуктивной системы.

Впервые предложена целесообразность применения иммунокоррегирующей терапии при нарушении процессов овуляции.

Учитывая трудности в диагностике и лечении женщин с различными формами бесплодия, особенно бесплодия неясного генеза, помимо исследования ПСЛМ, секреторно-синтетический активности мо­ноцитов/макрофагов рекомендуем исследовать цитологическую картину пунктата из заднего свода влагалища женщины.

Обосновано использование различных средств контрацепции под контролем ПСЛМ, синтеза и секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами.

Личный вклад автора

Автор самостоятельно планировала исследования, проводила сбор материала, изучение и анализ литературы по теме диссертации. Основные клинико-экспериментальные исследования, статистическая обработка данных проведены лично автором диссертации.

Апробация материалов диссертации

Материалы диссертации были представлены на научно-практи­ческих конференциях: «Актуальные аспекты терапии» (Владивосток, 1991); «Социально-медицинские аспекты рождаемости и охраны матери и ребенка» (Благовещенск, 1991); «6-ой встрече Европейской ассоциации акушеров и гинекологов» (Москва, 1991); II Международном симпозиуме Фонда медицинского обмена Япония-Россия (Владивосток, 1994); научно-практической конференции, посвященной 30-ле­тию роддома № 3 (Владивосток, 1997); на конференции, посвященной 130-летию Военно-морского госпиталя ТОФ (Владивосток, 2002); Юбилейной конференции, посвященной 135-летию Военно-морского клинического госпиталя ТОФ (Владивосток, 2007); на ХШ Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, ОАЭ, 26–29 апреля 2008); на «Объединенном иммунологическом Форуме (Санкт-Петербург, 30 июня – 5 июля 2008); на Международной конференции «Физиология и патология иммунной системы» (Москва, 15–17 сентября 2008), на научно-практическом семинаре «Современные технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний» (Владивосток, 12 мая 2009), на VI Дальневосточном региональном конгрессе «Человек и лекарство» (Владивосток, 24–25 сентября 2009), на УШ конференции иммунологов Урала (Сыктывкар, 28–30 июня 2010).

Публикации по теме диссертации: по теме диссертации опубликовано 38 работ, из них 11 статей в рецензируемых журналах из списка ВАК для докторских диссертаций, и один патент Российской Федерации.

Публикации

Основные положения и результаты работы отображены в 38 научных работах. Из них 11 – в журналах, рекомендуемых ВАК для публикации материалов докторских диссертаций. Написаны методические рекомендации для практического здравоохранения.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Клетки системы макрофагов имеют существенное значение в процессе функционирования репродуктивной системы женщины с созреванием фолликула, овуляцией, фертилизацией, развитием беременности и при различных видах патологии: воспалительных заболеваниях, нарушениях менструального цикла, бесплодии различного генеза.

2. Активность клеток системы макрофагов подвержена влиянию циклических изменений в организме женщины и находится в тесной связи с состоянием гормонального статуса, процессом их активации в различные физиологические периоды женщин.

3. Исследование состояния стабильности лизосомных мембран, секреторно-синтетических процессов клеток системы макрофагов является основой нового подхода в диагностике нарушений процесса репродукции и определении рациональных подходов к коррекции этих нарушений.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 254 страницах, из них текст занимает 251 страницу. Диссертация состоит из введения, 5 глав, заключения, общих выводов, библиографического списка, включающего 518 источников (290 отечественных и 228 иностранных). Иллюстративный материал представлен 108 рисунками и 5 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Клинико-лабораторные исследования проведены в период с 1999 по 2009 гг. на базе кафедр акушерства и гинекологии, патофизиологии ВГМУ, различных базах ЛПУ г. Владивостока: МУЗ КРД № 3, МУЗ ГКБ № 1, ГУЗ ГВВ (МСЧ строителей), госпиталя пограничных войск Тихоокеанского пограничного округа, ВМКГ ТОФ. Отдельные разделы работы выполнены в ГУЗ «Краевой диагностический центр», ООО «Юнилаб», в ГУЗ «Приморское Краевое бюро судебно-медицинской экспертизы».

Широкое исследование гинекологической заболеваемости и состояния репродуктивного здоровья в соответствии с Государственной политикой в области охраны репродуктивного здоровья населения России нами, совместно с доцентом кафедры акушерства и гинекологии ВГМУ Р.И. Бакшеевой при активном участии Приморского регионального фонда «Здоровье женщины» (председатель – Н.А. Михайлова), проведено обследование 1800 женщин Приморского края. По данным результатам выявлено, что в структуре гинекологической заболеваемости женщин Приморского края на первом месте (54,4%) стоят воспалительные заболевания (сальпингоофорит, вульвовагинит, метроэндометрит, эндоцервицит). По данным ВОЗ, эта группа заболеваний в мире составляет 60–70%. Процент выявляемости доброкачественной опухоли – миомы матки, составил 16,3+4,7% (по мировой статистике это заболевание встречается в 13–20%). Встречаемость заболеваний, связанных со слабостью связачного аппарата (опущение, полное и неполное выпадение влагалища, шейки матки, матки), составила 14,1+3,9%. У женщин были выявлены нарушения менструального цикла и климактерический синдром, свидетельствующие о гормональных расстройствах, с частотой 11,6+3,5%. Встречаемость эрозии шейки матки колебалась от 1,7% до 27,3% и в среднем составила 9,9+4,7%.

Практически здоровых женщин среди общего числа обследованных оказалось 350 человек, что составляет 19,4+5,2%.

Из 1800 женщин на основании их информированного согласия были более углубленно обследованы 350 женщин, с биологическим материалом которых проведены специальные исследования в соответствии с решением поставленных задач.

Все экспериментальные и клинические исследования проведены по согласованию с Независимым междисциплинарным этическим комитетом ВГМУ (протокол № 6 дело № 42 от 8 июня 2009 г.).

Проведенные исследования предполагали использование различных методов, отраженных в таблице 1.

Таблица 1 – Направление, объем и методы исследования

Направление

Методы

Объем

1

2

3

4

I

Клинические исследования

1. Обследование и лечение женщин в соответствии с принятыми стандартами обследования и лечения гинекологических больных (Приказ МЗ РФ №323 от 5.11.98 г. и №50 от 10.02.03 г.)

160
здоровых женщин

190
больных
женщин

II

Клинико-статистические исследования

1. Исследование репродуктивного здоровья женщин Приморского края (опрос, осмотр, назначение лечения)

1800
женщин

III

Получение
иммунокомпетентных
клеток

1. Выделение мононуклеаров крови методом A. Boyom (1968) в описании А.Н. Чередеева (1976)

350
чел/проб

2. Получение перитонеальных макрофагов из пунктата заднего свода влагалища общепринятым методом.

350
чел/проб

3. Окраска препаратов по Романоскому-Гимзе и им­муноцитохимическим методом

24
препарата

IV

Исследование функциональных свойств
фагоцитирующих
клеток

1. Оценка адгезивной способности фагоцитирующих клеток с расчетом показателя прилипаемости (ПП) методом А.С. Шаронова (2003)

350
чел/проб

2. Изучение поглотительной способности фагоцитирующих клеток с общепринятой оценкой фагоцитарного показателя (ФП) и фагоцитарного числа (ФЧ) микрометодом Н.С. Мотавкиной (1987)

280 чел/проб

V

Изучение состо­яния стабильности лизосомных мембран клеток системы макрофагов и лизосом­ных ферментов

1. Определение стабильности лизосомных мембран, секретированного и синтезированного лизоцима клеток системы макрофагов по А.С. Шаронову (1989).

2. Микрометод определения лизоцима по Н.С. Мотавкиной (1979)

1050
анализов

VI

Изучение
уровня гормонов
крови женщин

1. Определение гормонов в сыворотке крови иммуноферментным методом по инструкции со стандартными наборами реактивов в том числе: фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), лютеинизирующего гормона (ЛГ), пролактина, эстрадиола, прогестерона, тестостерона

580
анализов

VII

Изучение
маркера
активации
макрофагов

1. Определение интерлейкина 8 методом сендвич-варианта твердофазного иммуноферментного метода с использованием реактивов фирмы «R&D Diagnostics Inc.» (США)

40 чел/проб

VIII

Исследование
экспрессии
рецепторов
к стероидным
гормонам

1. Иммуногистохимическое исследование экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону с использованием моноклональных антител (Dako, США) в соответствии с инструкцией к наборам реактивов и рекомендациями О.Н. Лысенко (2004)

24
анализа

Статистическая обработка
материала

1. Математическая обработка материала проводилась в соответствии с рекомендациями О.Ю. Ребровой (2002), методами описательной, параметрической и непараметрической статистики с использованием программы «Statistica 6»

Все
показатели

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Структурно-функциональные особенности
клеток системы макрофагов у женщин репродуктивного
возраста: здоровых и с различными видами патологии

Исследование особенностей морфо-функциональной активности пе­ритонеальных макрофагов и их предшественников – моноцитов крови – при воспалительных заболеваниях проведено с клетками здоровых женщин и больных острым и хроническим метроэндометритом и сальпингоофоритом, часто приводящими к развитию бесплодия.

Как видно из таблицы 2, адгезивные свойства моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по показателю прилипаемости повышаются у женщин при возникновении острого воспаления по сравнению со здоровыми женщинами (p<0,05). При хронических формах заболеваний прилипаемость данных клеток превышает показатели здоровых женщин (p<0,05), но несколько ниже, чем у женщин с острыми формами заболеваний (p>0,05). Повышение адгезивных свойств макрофагов при воспалительных заболеваниях могут быть связаны с их активацией, особенно в процессе острого течения воспаления, что определяется более высокой способностью моноцитов крови прикрепляться к эндотелию сосудов и проникать в очаг воспаления, а перитонеальных макрофагов взаимодействовать с фагоцитируемыми объектами (Маянский Д.Н., 1991, Ни­шева Е.С. и др., 2001).

Таблица 2 – Показатели активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у здоровых женщин и больных с воспалением матки и придатков матки

Показатели активности
клеток

Здоровые женщины и больные воспалением

здоровые

острый метроэндо-метрит

хронический
метроэндометрит

острый сальпин-гоофорит

хронический
сальпин-гоофорит

моноцитов:
ПП в мкг/мл

3,7+0,2

4,5+0,15

3,2+0,18

4,35+0,1

3,1+0,15

ФП в %

50,1+1,4

56,7+1,3

52,4+1,8

58,5+1,5

51,8+2,6

ФЧ в усл.ед.

8,5+0,4

10,3+0,35

7,9+0,5

10,5+0,45

8,0+0,55

ПСЛМ в %

53,8+0,6

55,7+0,3

62,6+0,9

57,8+0,8

64,8+1,2

Lсекр в мкг/мл

0,75+0,03

0,9+0,04

1,1+0,07

0,95+0,05

1,3+0,1

Поглотительная способность, оцениваемая по проценту активных фагоцитов, поглотивших хотя бы один фагоцитируемый объект (ФП), и среднему числу поглощенных объектов (ФЧ), у больных острыми воспалительными заболеваниями матки и придаков матки повышается по сравнению со здоровыми женщинами (достоверность различий по ФП составляет p<0,05 и p<0,01 соответственно при эндометрите и сальпингоофорите, а по ФЧ – p<0,05 при обеих формах заболевания).

Это свидетельствует об активации данной функции макрофагальных клеток при воспалении. Отмечено, что при хронических формах воспалительных заболеваний матки и придатков матки поглотительная способность макрофагов, судя по ФП, ниже, чем при острых формах заболеваний (p>0,05 и p<0,05 соответственно при эндометрите и сальпингоофорите). Средняя поглотительная активность клеток, оцениваемая по ФЧ, при хроническом метроэндометрите и сальпингоофорите достоверно не отличается от показателя при остром течение заболевания (p>0,05), хотя при хроническом сальпингоофорите данный показатель заметно ниже показателя при остром течение заболевания.

Функционирование клеток, в том числе макрофагов, сопряжено с мембранными процессами в клетках. Одним из важных критериев этих процессов является изменение состояния стабильности лизосомных мембран, которое изменяется в сторону лабилизации или стабилизации и оценивается по выходу из лизосом и клеток маркерных лизосомных ферментов – катепсина D, кислой фосфатазы или лизоцима (De Duve C, Wattiaux R., 1966). В наших исследованиях был использован метод А.С. Шаронова оценки стабильности лизосомных мембран по лизоциму, утвержденный как отраслевое рацпредложение № 0-2822 от 27.02.87 г. и являющийся основой методических рекомендаций МЗ СССР (1989).

Проведенные исследования состояния лизосомных мембран макрофагов с оценкой показателя стабильности лизосомных мембран (ПСЛМ) у больных женщин с острыми и хроническими воспалительными заболеваниями матки и придатков показали, что при воспалении происходит достоверное повышение ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по сравнению со здоровыми (p<0,05 и p<0,01 соответственно при остром и хроническом воспалительном процессе), свидетельствующее о процессе лабилизации лизосомных мембран клеток и повышении выхода лизосомных ферментов из лизосом и клеток. Отмечено, что ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов женщин при хроническом течение метроэндометрита и сальпингоофорита преобладает, по сравнению с данным показателем клеток, у женщин с острым воспалительным процессом (p<0,01 и p<0,05 соответственно по ПСЛМ моноцитов и макрофагов).

Секреторная активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов при остром метроэндометрите и сальпингоофорите достоверно выше по сравнению со здоровыми женщинами (p<0,05). Еще более выраженое повышение уровня секреции моноцитами крови и перитонеальными макрофагами наблюдается у больных хроническим метроэндометритом и сальпингоофоритом (p<0,01).

В результате снижения стабильности с развитием лабилизации лизосомных мембран и повышения секреторной активности клеток системы макрофагов возрастает общий уровень лизоцима в сыворотке крови и маточном секрете у женщин с острым и, еще более значительно, с хроническим метроэндометритом и сальпингоофоритом (p>0,05 и p<0,05 соответственно).

Синтетическая активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин достоверно повышается при остром воспалительном процессе в матке и придатках и снижается при хроническом воспалении (p<0,05). Выявленное снижение синтетической активности клеток макрофагальной системы женщин при хроническом воспалительном процессе матки и придатках свидетельствует о нарушении в них процесса активации, что способствует, наряду с увеличением секреции лизосомных ферментов, хронизации процесса воспаления.

Другим видом патологии, при которой было проведено изучение морфо-функциональных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, является нарушение менструального цикла. Нормальный менструальный цикл, как известно, происходит у каждой здоровой женщины репродуктивного возраста 1 раз в 21–35 дней с периодом менструации в течение 3–7 дней и кровопотерей в объеме 30–50 мл крови. Его постоянство и течение находятся под строгим контролем, главным образом, фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) и лютеинизурующего гормона (ЛГ) – гонадотропных гормонов передней доли гипофиза, воздействующих на яичники, приводя их к циклическим изменениям с созреванием фолликула, овуляцией созревшего фолликула и образованием желтого тела. В процессе циклических изменений в яичнике образуются эстрогены, андрогены и прогестерон, включающиеся в общий циклический процесс и взаимодействующее с гонадотропными гормонами по принципу обратной связи, дополняя процесс созревания фолликула и определяя циклические изменения в слизистой матки. Дополнительным гормональным фактором в этом процессе является третий гонадотропный гормон – пролактин или лютеотропный гормон, необходимый для становления желтого тела, стимуляции развития молочных желез и потенцирования действия андрогенов. При нарушении сложной композиции гормональных взаимодействий происходит нарушение менструального цикла, развитие той или иной патологии репродуктивной функции.

Весьма частыми расстройствами менструального цикла являются гипоменоррея и гиперменоррея, заключающиеся в усилении, ослаблении, временном или длительном прекращении маточных кровотечений, что непосредственно связано с гормональными нарушениями и процессами созревания фолликула и овуляции. Исследование клеток макрофагальной системы при этом виде нарушений позволило выявить определенные изменения в их функционировании (таблица 3).

Таблица 3 – Показатели активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с нормальным и нарушенным менструальным циклом

Показатели
активности
клеток

Женщины с нормальным и нарушенным менструальным циклом

нормальный МЦ

гипоменоррея

гиперменррея

моноцитов:
ПП в мкг/мл

3,7+0,1

3,3+0,09

4,2+0,15

ФП в %

50,1+1,2

45,3+1,0

57,4+2,3

ФЧ в усл.ед.

8,5+0,23

7,3+0,3

9,6+0,25

ПСЛМ в %

53,8+1,6

47,8+1,1

59,5+1,3

Lсекр в мкг/мл

0,75+0,03

0,6+0,04

0,93+0,05

Lсинт в мкг/мл

0,4+0,025

0,29+0,02

0,3+0,02

макрофагов:
ПП в мкг/мл

4,4+0,12

3,9+0,1

4,8+0,07

ФП в %

62,5+1,3

56,3+1,7

68,9+1,9

ФЧ в усл.ед.

12,3+0,4

10,5+0,35

14,2+0,45

ПСЛМ в %

59,6+1,5

52,3+1,7

64,7+1,0

Lсекр в мкг/мл

0,9+0,07

0,69+0,03

1,3+0,1

Lсинт в мкг/мл

0,7+0,03

0,5+0,06

0,53+0,05

Исследование адгезивной способности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов при нормальном менструальном цикле (НМЦ) и при его нарушении показало, что при гипоменоррее происходит снижение адгезивной активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин по сравнению с женщинами с НМЦ (p<0,05). У женщин с гиперменорреей наблюдается достоверное повышение, судя по ПП, адгезивной активности исследованных клеток системы макрофагов (p<0,05). Отклонения адгезивной способности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в ту или иную сторону при разных вариантах нарушения МЦ могут быть связаны, прежде всего, с гормональным дисбалансом в организме женщин. А результат морфо-функционально­го нарушения клеток системы макрофагов может быть неоднозначным и с точки зрения функционирования репродуктивной системы – неоптимальным.

Поглотительная способность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов (ФП и ФЧ) у женщин при гипоменоррее достоверно снижена по сравнению с их значением у женщин с НМЦ, а при гиперменоррее – повышена (p<0,05).

Выявленное изменение адгезивной и поглотительной способности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с гипо- и гиперменорреей сочетается с определенными изменениями стабильности лизосомных мембран данных клеток. Отмечено, что при гипоменоррее происходит снижение ПСЛМ моноцитарно-макрофагальных клеток, свидетельствующее о стабилизации их лизосомных мембран. При гиперменоррее наблюдается лабилизация лизосомных мембран моноцитов и макрофагов, о чем свидетельствует повышение ПСЛМ. Выявленные изменения ПСЛМ, по сравнению с аналогичным показателем у женщин с НМЦ, статистически значимы (p<0,05).

Как результат стабилизации лизосомных мембран моноцитов крови и макрофагов женщин с гипоменорреей происходит снижение их секреторной активности и снижение лизоцима сыворотки крови и секрета матки по сравнению с данным показателем у женщин с нормальным МЦ (p<0,05). Секреторная активность моноцитов и макрофагов и уровень лизоцима крови и маточного секрета у женщин с гиперменорреей в связи с лабилизацией лизосомных мембран клеток, напротив, повышается (p<0,05).

Определение синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, свидетельствующее о состоянии их активности, у здоровых женщин с нормальным менструальным циклом и у женщин с нарушением менструального цикла показало, что при гипо- и гиперменоррее наблюдается снижение активности клеток системы макрофагов (p<0,05 по сравнению с показателями женщин с НМЦ).

Кроме того, нами проанализированы изменения морфо-функцио­нальных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин при применении контрацептивов в течение года с позиции их возможного влияния на репродуктивную функцию. Было проведено исследование в трех группах женщин 25–30 лет: первую группу составили женщины, как правило, предохраняющиеся от развития беременности с использованием презерватива; вторую – внутриматочных средств (ВМС с медью); третью – оральных контрацептивов (ОК), содержащих в определенном соотношении гормоны – эстрадиол и прогестерон (таблица 4).

Как показали полученные результаты, в зависимости от применения разных средств контрацепции показатели морфо-функциональ­ного состояния клеток системы макрофагов были неоднозначными. Отмечено, что при применении презерватива и ВМС ПП исследованных клеток практически не отличается (p>0,05). В то же время показатель адгезивной способности клеток женщин, применявших ОК, заметно снижен по сравнению с показателями адгезии моноцитов и макрофагов женщин, использующих для контрацепции презерватив и ВМС (p<0,05).

Поглотительная способность моноцитов и макрофагов также отличается у женщин при постоянном использовании разных видов контрацепции. Выявлено, что данная функция клеток макрофагальной системы, подобно адгезивной активности клеток, достоверно снижена у женщин, регулярно пользующихся с целью контрацепции ОК по сравнению с другими группами женщин (p<0,05).

При регулярном применении ОК в клетках моноцитарно-макро­фагального ряда в организме женщин наблюдается стабилизация лизосомных мембран, о чем свидетельствует достоверное снижение ПСЛМ клеток в этой группе женщин (p<0,05 по сравнению с другими группами женщин).

В связи с повышением стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин, регулярно применяющих ОК, происходит заметное (p<0,05 по сравнению с результатами двух других групп женщин) снижение их секреторной активности.

Общий сывороточный лизоцим и лизоцим секрета матки также заметно снижены, как оказалось, у применявших ОК женщин. Очевидно, это является результатом взаимосвязи местных и общих изменений в организме женщины под влиянием оральных средств контрацепции.

При этом синтетическая активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов при применении женщинами ОК повышена и отмечается некоторое возрастание этой синтетической активности изучаемых клеток у применявших ВМС женщин (p<0,05 и p>0,05 – достоверность разницы повышения Lсинт в группе применявших соответственно ОК и ВМС женщин по сравнению с женщинами, живущими половой жизнью с использованием презерватива).

Таблица 4 – Показатели активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин, применявших различные виды контрацепции

Показатели
активности
клеток

Женщины, применявшие различные виды контрацепции

презерватив

ВМС с медью

ОК

1

2

3

4

моноцитов:
ПП в мкг/мл

3,8+0,12

3,85+0,1

3,2+0,15

ФП в %

50,1+0,7

50,9+1,1

47,6+0,5

ФЧ в усл.ед.

8,5+0,4

8,6+0,5

6,7+0,4

ПСЛМ в %

53,8+1,4

54,2+1,6

47,8+1,5

Lсекр в мкг/мл

0,7+0,06

0,65+0,03

0,5+0,04

Lсинт в мкг/мл

0,4+0,03

0,45+0,05

0,54+0,04

Окончание табл. 4

1

2

3

4

макрофагов:
ПП в мкг/мл

4,7+0,09

4,74+0,1

4,2+0,14

ФП в %

62,5+1,6

63,2+1,8

56,6+1,3

ФЧ в усл.ед.

12,3+0,4

12,8+0,5

9,8+0,6

ПСЛМ в %

59,6+1,3

60,3+1,7

53,5+1,4

Lсекр в мкг/мл

0,86+0,07

0,9+0,06

0,6+0,06

Lсинт в мкг/мл

0,7+0,04

0,78+0,04

0,86+0,03

Воспалительные заболевания половых органов, прежде всего матки и придатков, нарушение менструального цикла, применение контрацептивов, а также и другие причины могут приводить к формированию у женщины бесплодия. Диагноз бесплодия определяется как неспособность к зачатию при регулярной половой жизни без контрацептивов в течение более 1 года. Были исследованы морфо-функциональ­ные особенности клеток системы макрофагов при формировании основных форм бесплодия различного генеза: трубно-перитонеального, эндокринного, иммунного и бесплодия неясного генеза. Последняя форма бесплодия составляет 2,5–15% (Сухих Г.Т., Ванько А.В., 1999; Федорова Т.А., 2003) и наблюдается при полном клиническом благополучии на фоне отсутствия видимых отклонений в организме женщины по данным функциональной и лабораторной диагностики.

Как показали результаты исследований, морфо-функциональные свойства моноцитов крови и перитонеальных макрофагов здоровых рожавших женщин и женщин с различными формами бесплодия в различной степени отличаются (таблица 5).

Таблица 5 – Показатели активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у здоровых женщин и женщин с различными формами бесплодия

Показатели активности
клеток

Здоровые женщины и женщины с различными формами бесплодия

здоровые

трубно-перитонеальное

эндокринное

иммунное

неясного генеза

1

2

3

4

5

6

моноцитов:
ПП в мкг/мл

3,6+0,15

3,1+0,1

3,0+0,14

3,5+0,12

3,5+0,1

ФП в %

50,4+1,0

49,7+0,9

47,4+1,1

50,5+1,2

50,8+1,3

ФЧ в усл.ед.

8,2+0,15

7,8+0,12

7,5+0,1

8,5+0,17

8,3+0,14

Окончание табл. 5

1

2

3

4

5

6

ПСЛМ в %

52,8+1,4

55,6+1,7

47,6+1,1

51,0+1,3

45,3+1,5

Lсекр в мкг/мл

0,7+0,01

0,78+0,04

0,65+0,01

0,72+0,03

0,6+0,02

Lсинт в мкг/мл

0,49+0,03

0,45+0,02

0,55+0,02

0,51+0,01

0,4+0,015

макрофагов:
ПП в мкг/мл

4,3+0,05

4,1+0,04

4,0+0,09

4,4+0,1

4,5+0,1

ФП в %

62,8+1,5

60,8+1,0

56,3+1,1

61,2+1,2

59,9+1,3

ФЧ в усл.ед.

11,9+0,4

10,0+0,2

9,7+0,3

11,5+0,5

11,0+0,4

ПСЛМ в %

57,9+1,6

63,8+1,3

50,3+1,4

56,3+1,5

48,4+1,7

Lсекр в мкг/мл

0,89+0,02

0,96+0,05

0,8+0,015

0,86+0,01

0,76+0,04

Lсинт в мкг/мл

0,7+0,02

0,63+0,03

0,82+0,025

0,72+0,02

0,59+0,03

Наиболее значительные отклонения морфо-функциональных свойств макрофагальных клеток наблюдаются у женщин с трубно-перитонеаль­ной и эндокринной формами бесплодия – состояниях, значительным образом отличающихся по этиологии и патогенезу. В частности, в этих группах женщин значительно снижены адгезивные свойства моноцитов и макрофагов. Причем, выявленное снижение ПП статистически значимо по сравнению с другими группами обследованных (p<0,05).

Отмечено снижение и поглотительной активности моноцитов/мак­рофагов, оцениваемой по ФП и ФЧ, у женщин с трубно-перитонеальной и эндокринной формами бесплодия по сравнению со здоровыми рожавшими женщинами. Однако выявленная разница ФП моноцитов крови во всех исследованных группах оказалась недостоверной (p>0,05), а макрофагов достоверной лишь у женщин с эндокринным бесплодием (p<0,05 в сравнении с группой здоровых рожавших и женщин с иммунным и трубно-перитонеальной формами бесплодия). Средняя поглотительная способность активных фагоцитов (ФЧ) достоверно низкая в группах женщин с трубно-перитонеальным и эндокринным бесплодием по сравнению с другими группами обследованных (p<0,05).

При оценке состояния стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов здоровых женщин и женщин с бесплодием по ПСЛМ было отмечено, что по сравнению со здоровыми рожавшими женщинами у женщин с эндокринным и с бесплодием неясного генеза данный показатель значительно снижен (p<0,05 и p<0,01 соответственно), свидетельствуя о выраженной стабилизации лизосомных мембран клеток, а у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием – несколько повышен (p>0,05), как результат их лабилизации.

Закономерность изменения секреторной активности моноцитов кро­ви и перитонеальных макрофагов у здоровых женщин и женщин с бесплодием аналогична изменениям состояния стабильности лизосомных мембран клеток, что объяснимо взаимосвязанностью двух процессов: секреторная активность моноцитов и макрофагов женщин с эндокринным бесплодием и бесплодием неясного генеза наиболее низкая, а при трубно-перитонеальном бесплодии несколько повышена.

Уровени сывороточного лизоцима и лизоцима маточного секрета как критерий однонаправленного изменения секреторной активности клеток-продуцентов данного фермента по направленности изменений повторяют характер изменений секреции лизоцима клетками. При этом следует отметить, что статистически значимое снижение сывороточного лизоцима и лизоцима маточного секрета наблюдается у женщин с бесплодием неясного генеза (p<0,05).

При анализе полученных результатов оценки состояния активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с различными формами бесплодия по способности клеток к синтезу лизоцима было отмечено следующее. При бесплодии неясного генеза синтетическая активность исследованных клеток как моноцитов крови, так и перитонеальных макрофагов находится на самом низком уровне, достоверно отличаясь от показателей здоровых рожавших женщин и женщин с иммунным и трубно-перитонеальным бесплодием (p<0,05). У женщин с эндокринным бесплодием наблюдается повышенная синтетическая активность, особенно перитонеальных макрофагов: количество лизоцима перитонеальных макрофагов в данной группе женщин достоверно превышает аналогичные показатели в других исследованных группах женщин (p<0,05).

Для уточнения значимости участия макрофагального звена в формировании женского бесплодия проведено исследование морфо-функцио­нальных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с многолетним бесплодием и родившими здорового ребенка после эффективного лечения, сопрововождавшегося, как правило, восстановлением свойств клеток системы макрофагов. Лечение проводилось в зависимости от формы бесплодия индивидуально в соответствии с современными подходами в гинекологии при лечении разных форм бесплодия.

В процессе лечения женщин с трубно-перитонеальным бесплодием (под наблюдением находилось 300 женщин) с использованием противовоспалительной, иммуномодулирующей (направленной на макрафагальное звено иммунной системы) терапии и физиотерапии было отмечено восстановление активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по сравнению с уровнем у здоровых рожавших женщин (таблица 6).

Таблица 6 – Результаты изменения свойств моноцитов крови и перито­неальных макрофагов у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием при эффективном лечении с восстановлением репродуктивной функции и наступлением беременности

Исследуемые
показатели

Исследуемые клетки обследованных женщин

здоровых рожавших

с трубно-перитонеальным бесплодием

леченных
от бесплодия
с последующей
беременностью

моно­циты

макрофаги

моно­циты

макрофаги

моно­циты

макрофаги

ПП
в мкг/мл

3,6+0,15

4,3+0,05

3,1+0,1

4,1+0,04

3,6+0,09

4,4+0,08

ФП в %

50,4+1,0

62,8+1,5

49,7+0,9

60,8+1,0

53,5+1,1

65,2+1,4

ФЧ в усл.ед.

8,2+0,15

11,9+0,4

7,8+0,12

10,0+0,2

8,3+0,12

12,7+0,2

ПСЛМ в %

52,8+1,4

57,9+1,6

55,6+1,7

63,8+1,3

53,8+1,0

60,0+1,2

Lсекр
в мкг/мл

0,7+0,01

0,89+0,02

0,78+0,04

0,96+0,05

0,71+0,01

0,92+0,02

Lсинт
в мкг/мл

0,49+0,03

0,7+0,02

0,45+0,02

0,63+0,03

0,48+0,01

0,67+0,01

Как видно из таблицы, показатель прилипаемости (ПП) клеток системы макрофагов полностью достигает значений здоровых женщин. Фагоцитарный показатель и фагоцитарное число в процессе лечения достоверно повышаются по сравнению с показателями исследованных клеток женщин до лечения (p<0,05) и даже несколько превосходят показатели контрольной группы (p>0,05). Результатом эффективного лечения, очевидно, можно считать повышение стабильности лизосомных мембран моноцитов и макрофагов – ПСЛМ снижается до соответствующего уровня показателя клеток женщин контрольной группы (p>0,05). При этом наблюдается тенденция к снижению секреторной и повышению синтетической активности моноцитов/макро­фагов.

Проводимое специфическое лечение женщин с эндокринным бесплодием (пролечено 150 женщин), у которых имели место описанные выше морфо-функциональные отклонения моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, также приводит в определенной степени к восстановлению их нарушенных свойств (таблица 7).

Таблица 7 – Результаты изменения свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с эндокринным бесплодием при эффективном лечении с восстановлением репродуктивной функции и наступлением беременности

Исследуемые
показатели

Исследуемые клетки женщин

здоровых рожавших

с эндокринным
бесплодием

леченных
от бесплодия
с последующей
беременностью

моно­циты

макрофаги

моно­циты

макрофаги

моно­циты

макрофаги

ПП
в мкг/мл

3,6+0,15

4,3+0,05

3,0+0,14

4,0+0,09

3,4+0,1

4,1+0,12

ФП в %

50,4+1,0

62,8+1,5

47,4+1,1

56,3+1,1

49,4+0,9

60,6+1,3

ФЧ в усл.ед.

8,2+0,15

11,9+0,4

7,5+0,1

9,7+0,3

8,1+0,12

12,0+0,5

ПСЛМ в %

52,8+1,4

57,9+1,6

47,6+1,1

50,3+1,4

51,9+1,5

57,0+1,7

Lсекр
в мкг/мл

0,7+0,01

0,89+0,02

0,65+0,01

0,8+0,015

0,71+0,01

0,9+0,03

Lсинт
в мкг/мл

0,49+0,03

0,7+0,02

0,55+0,02

0,82+0,025

0,53+0,01

0,75+0,01

Так, адгезивная активность моноцитов и макрофагов повышается и практически не отличается от показателей клеток здоровых рожавших женщин (p>0,05). Происходит повышение поглотительной активности, судя по ФП и ФЧ. Наблюдается переход повышенно стабильного состояния лизосомных мембран моноцитов/макрофагов у женщин с бесплодием в более лабилизированное, приближенное к их состоянию у здоровых женщин (p>0,05). При этом повышается секреторная активность исследуемых клеток, особенно заметно – перитонеальных макрофагов (p<0,05 по сравнению с показателем у женщин с эндокринным бесплодием). Ранее повышенная синтетическая активность моноцитов/макрофагов у женщин с эндокринным бесплодием снижается до величины, соответствующей значениям у здоровых женщин.

Женщинам с бесплодием неясного генеза (39 женщин) назначалось лечение, аналогичное лечению трубно-перитонеального бесплодия, исходя из возможности наличия в организме латентной инфекции, неблагоприятно сказывающейся на репродуктивном здоровье. Как показали результаты исследования, отраженные в таблице 8, у пролеченных женщин (с положительным эффектом наступления беременности) наблюдалось повышение функциональной активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по показателям адгезивной и поглотительной способности, синтеза и секреции клеток, изменялась стабилизация лизосомных мембран до нормального уровня здоровых рожавших женщин. Учитывая то, что у женщин с бесплодием неясного генеза наиболее значимое нарушение морфо-функциональной активности клеток системы макрофагов было связано именно со стабилизацией их лизосомных мембран, восстановление состояния стабильности лизосомных мембран может быть расценено как позитивный фактор.

Таким образом, морфо-функциональные свойства моноцитов/макро­фагов у женщины находятся в зависимости от их физиологического состояния. Изменения этих свойств, происходящие при различных заболеваниях, таких как воспалительные, гормональные нарушения, при формировании той или иной формы бесплодия неоднозначны. Эти изменения проявляются в снижении или повышении функциональной активности клеток, нарушении соотношения синтеза и секреции лизоцима. В основе этих изменений лежит способность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов к активации под воздействием воспалительных и гормональных факторов путем включения внутриклеточного синтеза, сохранения стабильного состояния лизосомных мембран, проявления секреторной, поглотительной в отношении фагоцитируемых объектов активности. Совокупная оценка изменений разнообразных структурно-функциональных свойств моноцитов/макрофагов позволяет считать, что эти клетки организма принимают самое непосредственное участие в реализации репродуктивной функции женщины и их полноценное функционирование определяет ее репродуктивное здоровье.

Таблица 8 – Результаты изменения свойств моноцитов крови и перито­неальных макрофагов у женщин с бесплодием неясного генеза при эффективном лечении с восстановлением репродуктивной функции и наступлением беременности

Исследуемые
показатели

Исследуемые клетки обследованных женщин

здоровых рожавших

с бесплодием
неясного генеза

леченных
от бесплодия
с последующей
беременностью

моно­циты

макрофаги

моно­циты

макрофаги

моно­циты

макрофаги

1

2

3

4

5

6

7

ПП
в мкг/мл

3,6+0,15

4,3+0,05

3,5+0,1

4,5+0,1

3,8+0,12

4,6+0,1

ФП в %

50,4+1,0

62,8+1,5

50,8+1,3

59,9+1,3

53,5+1,2

64,6+1,6

ФЧ в усл.ед.

8,2+0,15

11,9+0,4

8,3+0,14

11,0+0,4

8,4+0,1

12,5+0,3

Окончание табл. 8

1

2

3

4

5

6

7

ПСЛМ в %

52,8+1,4

57,9+1,6

45,3+1,5

48,4+1,7

52,5+1,3

58,9+1,5

Lсекр
в мкг/мл

0,7+0,01

0,89+0,02

0,6+0,02

0,76+0,04

0,73+0,03

0,88+0,01

Lсинт
в мкг/мл

0,49+0,03

0,7+0,02

0,4+0,015

0,59+0,09

0,47+0,01

0,65+0,02

2. Взаимосвязь структурно-функциональной активности
моноцитов крови и перитонеальных макрофагов
и процессом их активации у женщин репродуктивного
возраста с состоянием гормонального статуса

Были исследованы структурно-функциональные особенности клеток макрофагальной системы у женщин с нормальным, пониженным и повышенным уровнем ФСГ, ЛГ, пролактина (таблица 9), эстрадиола, прогестерона, тестостерона (таблица 10) – гормонов, непосредственно участвующих в реализации репродуктивной функции женщины и, по некоторым данным, оказывающих определенное влияние на иммунокомпетентные клетки, в том числе на моноциты и макрофаги (Чеботарев В.Ф., 1979; Говалло В.И, 1987). Группу женщин с нормальным содержанием гормона составляли здоровые женщины с нормальным менструальным циклом, у которых уровень исследованных гормонов был сбалансирован в пределах средних показателей нормы. Группы с повышенным и пониженным уровнем гормонов составлялись из обследованных клинически здоровых женщин с учетом особенностей их гормонального статуса (верхняя и нижняя граница нормы гормонов) и с теми или иными нарушениями менструального цикла. Исследование зависимости структурно-функциональных свойств моноцитов/макрофагов от уровня половых гормонов проводилось в середине менструального цикла – в период, совпадающий с происходящей овуляцией при композиционном гормональном соотношении (Пепперелл Р.Дж. и др., 1983).

Анализ полученных результатов изучения адгезивных свойств моноцитов и макрофагов по показателю прилипаемости (ПП) у женщин с разным уровнем ФСГ показал, что по сравнению с результатами, полученными для клеток женщин с нормальным уровнем ФСГ, составляющим в фолликулиновую фазу 2,8–11,3 mIU/ml и в лютеиновую фазу – 1,1–9,2 mIU/ml, ПП моноцитов и макрофагов женщин с пониженным уровнем гормона достоверно ниже (p<0,05), а с повышенным – выше (p<0,05).

Таблица 9 – Показатели активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с различным уровнем гонадотропных гормонов

Показатели активности клеток

Женщины с нормальным, повышенным и пониженным уровнем гормона крови

уровень ФСГ

уровень ЛГ

уровень пролактин

пониженный

нормальный

повышенный

пониженный

нормальный

повышенный

пониженный

нормальный

повышенный

моноцитов:
ПП в мкг/мл

2,9+0,3

3,7+0,1

4,4+0,2

4,5+0,26

3,7+0,1

3,1+0,15

3,1+0,14

3,7+0,1

4,5+0,25

ФП в %

44,7+1,7

50,1+1,3

55,0+1,0

54,8+1,1

50,1+1,3

44,3+1,5

46,4+0,9

50,1+1,3

59,7+1,5

ФЧ в усл.ед.

7,5+0,25

8,3+0,15

8,9+0,12

8,8+0,1

8,3+0,15

7,4+0,16

6,8+0,4

8,3+0,15

9,5+0,3

ПСЛМ в %

77,6+1,6

83,8+1,3

89,7+1,4

88,9+1,2

83,8+1,3

78,3+1,1

78,9+1,2

83,8+1,3

89,3+1,4

Lсекр в мкг/мл

0,63+0,03

0,75+0,03

0,84+0,01

0,83+0,01

0,75+0,03

0,62+0,025

0,76+0,04

0,75+0,03

1,1+0,1

Lсинт в мкг/мл

0,52+0,02

0,44+0,01

0,39+0,02

0,4+0,01

0,44+0,01

0,51+0,03

0,42+0,015

0,44+0,01

0,46+0,016

макрофагов:
ПП в мкг/мл

3,5+0,2

4,4+0,12

5,2+0,18

5,1+0,2

4,4+0,12

3,9+0,1

3,7+0,2

4,4+0,12

5,2+0,3

ФП в %

57,3+1,2

62,5+1,0

68,8+2,1

67,9+1,25

62,5+1,0

56,7+1,4

57,8+1,3

62,5+1,0

67,5+1,2

ФЧ в усл.ед.

9,2+0,6

11,8+0,4

13,4+0,35

12,9+0,25

11,8+0,4

9,3+0,4

9,7+0,6

11,8+0,4

13,6+0,5

ПСЛМ в %

82,4+2,1

89,6+1,4

95,8+1,5

94,9+1,3

89,6+1,4

82,5+1,7

85,7+1,0

89,6+1,4

95,5+1,5

Lсекр в мкг/мл

0,79+0,01

0,9+0,07

1,5+0,18

1,3+0,1

0,9+0,07

0,76+0,03

0,89+0,04

0,9+0,07

1,3+0,12

Lсинт в мкг/мл

0,77+0,018

0,7+0,012

0,62+0,015

0,62+0,02

0,7+0,012

0,78+0,025

0,69+0,015

0,7+0,012

0,73+0,01

Таблица 10 – Показатели активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с различным уровнем половых гормонов

Показатели активности клеток

Женщины с нормальным, повышенным и пониженным уровнем гормона крови

уровень эстрадиола

уровень прогестерона

уровень тестостерона

пониженный

нормальный

повышенный

пониженный

нормальный

повышенный

пониженный

нормальный

повышенный

моноцитов:
ПП в мкг/мл

3,3+0,09

3,7+0,1

4,8+0,3

3,9+0,07

3,7+0,1

3,2+0,11

3,8+0,09

3,7+0,1

3,1+0,18

ФП в %

46,4+1,1

50,1+1,3

59,7+2,5

56,4+1,2

50,1+1,3

47,7+1,1

51,4+1,0

50,1+1,3

42,7+2,1

ФЧ в усл.ед.

7,3+0,3

8,3+0,15

9,5+0,4

8,6+0,12

8,3+0,15

7,1+0,4

8,4+0,09

8,3+0,15

7,1+0,25

ПСЛМ в %

78,9+1,1

83,8+1,3

90,3+1,5

88,9+2,2

83,8+1,3

75,3+2,7

85,9+1,3

83,8+1,3

74,3+2,8

Lсекр в мкг/мл

0,6+0,07

0,75+0,03

0,93+0,05

0,83+0,02

0,75+0,03

0,62+0,025

0,79+0,05

0,75+0,03

0,63+0,02

Lсинт в мкг/мл

0,42+0,015

0,44+0,01

0,39+0,012

0,42+0,012

0,44+0,01

0,53+0,033

0,4+0,01

0,44+0,01

0,5+0,017

макрофагов:
ПП в мкг/мл

3,7+0,2

4,4+0,12

5,6+0,4

4,7+0,1

4,4+0,12

3,6+0,2

4,5+0,1

4,4+0,12

3,4+0,3

ФП в %

57,8+1,3

62,5+1,0

67,5+1,2

67,8+1,4

62,5+1,0

54,5+2,3

63,8+0,9

62,5+1,0

49,5+3,9

ФЧ в усл.ед.

10,4+0,25

11,8+0,4

13,6+0,46

12,4+0,2

11,8+0,4

9,6+0,6

12,4+0,2

11,8+0,4

9,2+0,7

ПСЛМ в %

86,7+1,0

89,6+1,4

97,7+2,3

90,7+1,1

89,6+1,4

77,7+2,9

92,7+1,2

89,6+1,4

75,7+3,7

Lсекр в мкг/мл

0,72+0,02

0,9+0,07

1,2+0,06

1,0+0,02

0,9+0,07

0,78+0,01

0,97+0,04

0,9+0,07

0,77+0,01

Lсинт в мкг/мл

0,69+0,01

0,7+0,012

0,65+0,01

0,69+0,01

0,7+0,012

0,79+0,03

0,66+0,015

0,7+0,012

0,77+0,02

Более низкий уровень поглотительной активности, судя по ФП и ФЧ, наблюдается у женщин с пониженным, а наиболее высокий – у женщин с повышенным уровнем ФСГ. Выявленные отклонения ФП и ФЧ от значений показателей у женщин с нормальным уровнем гормона статистически значимы (p<0,05).

Однонаправленность изменений адгезивных и поглотительных свойств клеток макрофагальной системы, вероятно, предполагает общий механизм действия ФСГ на свойства клеток. Действие ФСГ направлено непосредственно на клетки гранулезы фолликула в яичнике, что приводит к синтезу ароматазы и дальнейшему образованию из андрогенов эстрогенов (Краснопольская К.В., Калугина А.С., 2005). На плазматической мембране макрофагов описаны рецепторы для многих гормонов, в частности для эстрогенов, прогестерона, других стероидных гормонов (van Furth в 1980). Эти данные указывают на опосредованное влияние ФСГ на внутриклеточные процессы в клетках макрофагальной системы. Полученный результат изменения адгезивной и поглотительной способности моноцитов и макрофагов может быть связан с этим взаимодействием.

Изменение клеточного состояния моноцитов и макрофагов характеризуется изменением стабильности их лизосомных мембран, оцениваемой по ПСЛМ. ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с пониженным содержанием ФСГ значительно ниже по сравнению с этим показателем у женщин с нормальным уровнем гормона в крови, а у женщин с повышенным содержанием ФСГ в крови – этот показатель повышен (p<0,05). Следовательно, сниженный уровень гормона сопровождается стабилизацией лизосомных мембран моноцитов/ макрофагов, а повышенный – лабилизацией. Лизосомомембранотропный эффект, связанный с колебанием уровня ФСГ, может быть связан с изменением образования эстрадиола, находящегося в прямой зависимости от ФСГ и обладающего лабилизирующим действием на лизосомные мембраны клеток, как было показано ранее (C. Szego 1972).

Как результат стабилизации лизосомных мембран можно расценить выявленное снижение секреторной активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с пониженным уровнем ФСГ по сравнению с женщинами с нормальным уровнем гормона в крови, снижение количества лизоцима сыворотки крови и маточного секрета. Лабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с повышенным уровнем ФСГ сопровождается заметным повышением их секреторной активности и возрастанием сывороточного и маточного лизоцима. Следует отметить, что выявленные различия уровня секреции моноцитов и макрофагов статистически значимы (p<0,05).

Синтетическая активность клеток макрофагальной системы, судя по внутриклеточному лизоциму, имеет обратную зависимость от уровня ФСГ в крови женщин по сравнению с секреторной активностью. При повышенном содержании гормона в крови женщин наблюдается незначительное снижение синтеза лизоцима моноцитами (p>0,05) и достоверное снижение – перитонеальными макрофагами (p<0,05) по сравнению с синтезом лизоцима клетками женщин с нормальным уровнем гормона. Напротив, при пониженном содержании ФСГ синтез лизоцима в моноцитах и макрофагах женщин заметно возрастает (p<0,05 в сравнении с показателем у женщин с нормальным уровнем ФСГ и p<0,01 по сравнению с показателями у женщин с повышенным уровнем ФСГ). По-видимому, влияние ФСГ на функциональные свойства клеток макрофагальной системы организма женщин проявляется опосредованно, например, через эстрогены, синтез которых находится под контролем ФСГ.

Под влиянием ЛГ также за счет включения внутриклеточного мессенджера ц-АМФ в клетках текальной оболочки фолликула происходит синтез андрогенов (андростендиона и тестостерона) из холестерина, а из андрогенов далее в клетках гранулезы фолликула под воздействием ароматазы образуются эстрогены (Краснопольская К.В., Калугина А.С., 2005). Учитывая то, что на плазматической мембране макрофагальных клеток точно доказано присутствие рецепторов половых гормонов, в частности для эстрогенов и прогестерона, разный уровень ЛГ в крови женщины может оказывать опосредованное действие на функциональные характеристики моноцитов и макрофагов.

Результаты изучения адгезивных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по показателю прилипаемости (ПП) у женщин с разным уровнем лютеинизирующего гормона показал, что по сравнению с результатами клеток женщин с нормальным уровнем ЛГ, составляющим в фолликулиновую фазу 1,1–11,6 mIU/ml и в лютеиновую фазу – 0,9–14,7 mIU/ml, ПП моноцитов и макрофагов женщин с пониженным уровнем гормона достоверно выше (p<0,05), а с повышенным – ниже (p<0,05). Обратный по сравнению с ФСГ эффект ЛГ может быть связан с преобладанием действия андрогенов, образующихся, прежде всего, под воздействием ЛГ в текальной оболочке фолликула.

Более высокие ФП и ФЧ – критерии поглотительной активности макрофагальных клеток – выявлены при исследовании у женщин с низким уровнем ЛГ крови по сравнению с показателями женщин с нормальным уровнем гормона (p<0,05). У женщин с повышенным содержанием ЛГ значения ФП и ФЧ находятся на самом низком уровне (p<0,05 и p<0,01 в сравнении с показателями у женщин с нормальным и пониженным уровнем ЛГ). ПСЛМ моноцитов и макрофагов у женщин с пониженным уровнем ЛГ превышают показатели женщин с нормальным уровнем гормона (p<0,05), а у женщин с повышенным содержанием ЛГ – находятся на сниженном уровне (p<0,05). Это свидетельствует о том, что у женщин с пониженным уровнем ЛГ крови имеет место лабилизированное состояние лизосомных мембран клеток макрофагальной системы, а с повышенным уровнем ЛГ – стабилизированное по сравнению с состоянием стабильности лизосомных мембран моноцито/макрофагов женщин с нормальным содержанием гормона в крови. Данный результат предполагает стабилизирующий эффект ЛГ на лизосомные мембраны моноцитов и макрофагов, что может быть связано с прямым действием гормона на клетки или опосредованным через андрогены, образующиеся под воздействием ЛГ в текальной оболочке фолликула.

Секреторная активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, оцениваемая по лизоциму, при повышенном содержании ЛГ снижена, а при пониженном – повышена по сравнению с показателями секреторной активности клеток женщин с нормальным уровнем гормона крови (p<0,05). Аналогичная направленность изменения количества лизоцима сыворотки крови и смыва матки наблюдается у женщин с разным уровнем ЛГ, что, очевидно, определяется прямой зависимостью содержания лизоцима в биологических жидкостях от уровня его секреции.

Результаты вариации синтеза лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у женщин с разным уровнем ЛГ показали, что синтетическая активность клеток более высокая у женщин с повышенным содержанием гормона и снижена – при пониженном его содержании (p<0,05). Иными словами, лютеинизирующий гормон в отношении синтеза лизоцима моноцитами/макрофагами оказывает позитивное действие.

Данные изучения адгезивных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по показателю прилипаемости (ПП) у женщин с разным уровнем пролактина показали, что по сравнению с результатами клеток женщин с нормальным уровнем пролактина, составляющим 81–500 mIU/l, ПП моноцитов и макрофагов женщин с пониженным уровнем гормона достоверно ниже (p<0,05), а с повышенным – выше (p<0,05).

При повышенном уровне пролактина имеет место более высокая, а при пониженном – сниженная поглотительная активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по сравнению с поглотительной активностью клеток у женщин с нормальным уровнем гормона. Причем, наиболее высокий процент активных фагоцитов (ФП) наблюдается среди моноцитов женщин с повышенным уровнем гормона крови, а наиболее низкий показатель средней активности фагоцита (ФЧ) – среди популяции перитонеальных макрофагов у женщин с пониженным уровнем пролактина (p<0,01).

Состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с разным уровнем пролактина крови различается. Повышение уровня пролактина сопровождается снижением стабильности лизосомных мембран или лабилизацией, о чем свидетельствует более высокий ПСЛМ по сравнению с показателями моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с нормальным уровнем гормона (p<0,05). ПСЛМ моноцитов и макрофагов женщин с пониженным уровнем пролактина имеет лишь тенденцию к снижению (p>0,05 в сравнении с ПСЛМ клеток женщин с нормальным уровнем пролактина), что свидетельствует о незначительной стабилизации лизосомных мембран клеток при низком содержании данного гормона в плазме крови.

Секреторная активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, уровень сывороточного и маточного секрета лизоцима имеют значительный подъем у женщин с гиперпролактинемией по сравнению с показателями у женщин с нормальным уровнем пролактина крови (p<0,05), что определяется процессом лабилизации лизосомных мембран клеток-продуцентов лизоцима при повышенном содержании гормона в крови.

Синтез лизоцима клетками системы макрофагов заметно не изменяется при колебании уровня пролактина крови, хотя незначительное его снижение наблюдается при пониженном и повышение – при повышенном уровне гормона крови (достоверность различий составляет p>0,05 по сравнению с показателем у женщин с нормальным уровнем гормона крови).

Эстрогенный гормон эстрадиол, играющий важную роль в овуляции зрелого фолликула, обладает способностью непосредственно воздействовать на моноциты крови и перитонеальные макрофаги через имеющиеся на их плазматической мембране рецепторы (van Furth R., 1980).

Результаты, полученные при изучении адгезивных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по показателю прилипаемости (ПП) у женщин с разным уровнем эстрадиола, показали, что по сравнению с результатами адгезивных свойств клеток женщин с нормальным уровнем гормона, составляющим в фолликулиновую фазу 73–305 pmol/l и в лютеиновую фазу – 10–89 pmol/l, ПП моноцитов и макрофагов, при пониженном уровне эстрадиола по сравнению с показателями у женщин с нормальным уровнем гормона заметно снижена (p<0,05), а при повышенном – более высокая (p<0,05).

С уровнем эстрадиола находится в зависимости состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов женщин: при пониженном уровне гормона крови наблюдается стабилизация лизосомных мембран исследуемых клеток, о чем свидетельствует снижение ПСЛМ, при повышенном – лабилизация. Влияние эстрогенов на лизосомные мембраны лейкоцитов отмечалось ранее в исследованиях C. Szego (1972), показавшим в экспериментальных исследованиях путем избирательного торможения антителами продукции эстрогена клетками-продуцентами гормона развитие стабилизации лизосомных мембран лейкоцитов. Лабилизирующее влияние эстрадиола на лизосомные мембраны моноцитов крови и перитонеальных макрофагов опосредуется через рецепторы к эстрадиолу, имеющимися на мембране данных клеток (van Furth R., 1980).

Уровень секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами сопряжен с состоянием стабильности лизосомных мембран клеток. Он значительно увеличен в клетках женщин с повышенным количеством эстрадиола по сравнению с показателями секреции клеток женщин с нормальным содержанием гормона крови (p<0,05) и несколько уменьшен у женщин с пониженным уровнем гормона крови (p>0,05). Лабилизация лизосомных мембран моноцитов/макрофагов и повышение их секреторной активности по лизоциму при гиперэстрогенемии сопровождается повышением лизоцима сыворотки крови и маточного секрета (p<0,05), а стабилизация лизосомных мембран клеток и снижение секреции лизоцима при гипоэстрогенемии – снижением лизоцима сыворотки крови и маточного секрета.

Синтетическая активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов также подвержена изменениям под влиянием эстрадиола. Особенно заметно это влияние при гиперэстрогенемии по достоверному снижению синтеза клеточного лизоцима (p<0,05) по сравнению с показателем клеток женщин с нормальным уровнем эстрадиола.

Прогестерон – гормон желтого тела, играет важную роль в физиологии репродуктивной системы и обладает противовоспалительным действием и способностью взаимодействовать с клетками системы макрофагов за счет присутствующих в их плазматической мембране рецепторов к прогестерону (van Furth R., 1980).

Результаты, полученные при изучении адгезивных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по показателю прилипаемости (ПП) у женщин с разным уровнем прогестерона, показали, что по сравнению с показателем адгезии клеток женщин с нормальным уровнем гормона, составляющим в фолликулиновую фазу 0–6 nmol/l и в лютеиновую фазу – 10–89 nmol/l, ПП моноцитов и макрофагов женщин с пониженным уровнем гормона достоверно ниже (p<0,05), а с повышенным – выше (p<0,05).

Процент активных фагоцитов и средняя активность фагоцита у женщин с пониженным уровнем прогестерона превышают такие показатели у женщин с нормальным уровнем гормона, а с повышенным – снижены. Причем, повышение ФП при пониженном и снижение ФЧ при повышенном уровне гормона крови как моноцитов крови, так и перитонеальных макрофагов статистически значимо (p<0,05). Снижение ФП моноцитов при повышенном уровне прогестерона и повышение ФЧ моноцитов и макрофагов при пониженном уровне прогестерона заметно, но статистически не значимо (p>0,05).

Прогестерон обладает стабилизирующим действием на лизосомные мембраны моноцитов/макрофагов: повышение уровня гормона в крови сопровождается снижением ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов на статистически значимую величину (p<0,01 по сравнению с показателями клеток женщин с нормальным уровнем гормона). Снижение уровня гормона в крови приводит, по-видимому, к относительной недостаточности его стабилизирующего эффекта и некоторому повышению ПСЛМ клеток за счет возникающей лабилизации лизосомных мембран (p>0,05).

С повышенным уровнем прогестерона крови наблюдается статистически значимое (p<0,05) снижение секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами, количества лизоцима в сыворотке крови и маточном секрете, а с понижением уровня прогестерона – некоторое повышение данных показателей. Это свидетельствует также в пользу стабилизирующего действия прогестерона на лизосомные мембраны клеток-продуцентов лизоцима – моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, снижающего их секреторную активность.

Синтез лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами при пониженном содержании прогестерона в крови находится на одном уровне с его синтезом при нормальном уровне гормона (p>0,05). При этом повышенный уровень прогестерона в крови сопровождается возрастанием синтетической активности как моноцитов, так и макрофагов на статистически значимую величину (p<0,05).

Андрогенный гормон тестостерон образуется у женщин клетками текальной оболочки фолликула яичника при стимулирующем влиянии ЛГ, является субстратом для образования эстрогенов под воздействием ароматазы. Нами был проведен экспериментальный анализ изменения структурно-функциональных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с разным уровнем тестостерона в крови. В частности, изучение адгезивных свойств моноцитов и макрофагов по показателю прилипаемости у женщин с разным уровнем тестостерона показало, что по сравнению с результатами, полученными для женщин с нормальным уровнем тестостерона, составляющим 0,35–1,3 pmol/l, ПП моноцитов и макрофагов женщин с пониженным уровнем гормона достоверно ниже (p<0,05), а с повышенным – выше (p<0,05).

Поглотительная активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с оценкой ФП и ФЧ при пониженном уровне тестостерона незначительно превышает показатели клеток женщин с нормальным уровнем гормона (p>0,05), а при повышенном заметно снижена (p<0,05).

Изменение стабильности лизосомных мембран моноцитов/макро­фагов в сторону снижения ПСЛМ (p<0,05) более всего связано с повышением уровня тестостерона в крови. Полученный результат говорит о стабилизирующем действии тестостерона на лизосомные мембраны моноцитов и макрофагов.

Наряду со стабилизацией лизосомных мембран моноцитов/макро­фагов у женщин с повышенным уровнем тестостерона крови наблюдается снижение их секреторной активности и количества сывороточного и маточного секрета лизоцима (p<0,05 по сравнению с показателями секреции клетками женщин с нормальным уровнем гормона). Незначительная лабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин при относительной недостаточности тестостерона сопровождается некоторым увеличением секреции лизоцима и увеличением его содержания в сыворотке крови и маточном секрете (p>0,05).

С повышенным уровнем тестостерона сопряжена более высокая синтетическая активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, судя по синтезу лизоцима, а с пониженным уровнем тестостерона – сниженная активность синтеза лизосомного фермента. Причем, выявленные отклонения данного показателя, по сравнению с показателями клеток женщин с нормальным уровнем тестостерона, статистически значимы (p<0,05).

Полученные данные предполагают наличие зависимости структурно-функциональной активности клеток системы макрофагов от исходного уровня половых гормонов, что может быть следствием непосредственного или опосредованного действия гормонов на данные клетки. Это действие может быть связано с взаимодействием гормонов с моноцитами/макрофагами через находящиеся в этих клетках рецепторы к гормонам и избирательным включением внутриклеточных мессенджеров ц-АМФ или ц-ГМФ, о чем было сказано выше. Ранее установлено, что стимуляция ц-АМФ ведет к повышению синтетических процессов в клетках и стабилизации их лизосомных мембран, а ц-ГМФ – к лабилизации (Дорофеев Г.И. и др., 1978; Государский В.И., 1980; Коровкин Б.Ф., 1982; Wells W. et.al., 1984). В частности, доказано лабилизирующее действие на лизосомные мембраны лейкоцитов эстрадиола, стабилизирующее – кортизола (Кобылянский Л.Н., 1983; Szego C., 1972; Ignarro L., 1974; Weissmann G., 1976). Очевидно, динамическое равновесие гормонального соотношения на разных стадиях менструального цикла определяет не только основные процессы функционирования репродуктивной системы – фолликулогенеза, овуляции, но и оказывают вторичное модулирующее действие на морфо-функцио­нальную активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов и их лизосомные ферменты.

Активация клеток системы макрофагов – важный процесс их включения в биологические реакции в организме. При активации макрофагов возникает усиление многих процессов в клетках, в частности, происходит повышение синтеза и секреции лизосомных ферментов, усиление выработки провосполительных цитокинов, в том числе, секреции IL8, уровень которого в крови заметно повышается (Фрейдлин И.С., 1999; Шаронов А.С., 2007; Ярилин А.А., 2008; Швыдченко И.Н. и др., 2009; Bulut Y., Faure E., Thomas L. et.al., 2002.). Нами было проведено исследование связи стабильности лизосомных мембран и секреторно-син­тетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с их активацией, оцениваемой по уровню секреции IL8, возникающей при активации клеток макрофагальной системы – одного из главных продуцентов данного IL, на модели острого и хронического воспаления матки и придатков.

У здоровых женщин уровень секреции IL8 моноцитами крови составляет 125+26 пг/мл/106кл. Полученные результаты свидетельствуют о том, что при остром воспалительном процессе в матке и придатках происходит возрастание уровня секреции IL8 до 340+37пг/мл/106кл, а при хроническом воспалении – до 1267+130 пг/мл/106кл, что соответствует различной степени активации клеток-продуцентов интерлейкина.

Проведено исследование ПСЛМ, секреции и синтеза лизоцима моноцитов крови и перитонеальных макрофагов женщин с нормальным (группа здоровых женщин), повышенным (группа женщин с острым воспалением матки и придатков) и высоким (группа женщин с хроническим воспалением матки и придатков) уровнем IL8 (таблица 11). Было выявлено, что при остром и еще более при хроническом воспалительном процессе у женщин на фоне повышения уровня секреции IL8 происходит повышение ПСЛМ моноцитов/макрофагов, свидетельствующее о происходящей лабилизации их лизосомных мембран, по сравнению с ПСЛМ клеток здоровых женщин с принятым за норму уровнем секреции IL8 (p>0,05 и p<0,01 соответственно).

Параллельно с лабилизцией лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов происходит повышение секреции клеточного лизоцима, что, очевидно, определяется взаимосвязанностью двух клеточных процессов. При этом наиболее выраженная секреция лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами наблюдается у женщин, больных хроническим воспалением матки и придатков с более высоким уровнем секреции моноцитами крови IL8. Синтез клетками лизоцима повышается наряду с увеличением уровня секреции IL8 у женщин с острым и хроническим воспалительным процессом матки и придатков. Однако при заметно выраженном дальнейшем повышении секреции IL8 моноцитами крови у больных хроническим воспалением по сравнению с уровнем секреции IL8 моноцитами крови больных острым воспалительным процессом (p<0,01), синтез лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами значительно отстает и практически находится на одном уровне с синтезом лизоцима в клетках женщин с острым воспалительным процессом (p>0,05).

Таблица 11 – Показатели активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у здоровых женщин и больных воспалением матки и придатков матки с разным уровнем IL8

Показатели
активности
клеток

Здоровые и больные женщины с воспалением матки и придатков

уровень секреции IL8

нормальный
(здоровые
женщины)

повышенный
(женщины
с острым
воспалением)

высокий
(женщины
с хроническим
воспалением)

моноцитов:
ПСЛМ в %

53,8+1,3

57,5+1,2

64,7+2,7

Lсекр в мкг/мл

0,76+0,03

0,85+0,02

0,95+0,06

Lсинт в мкг/мл

0,44+0,01

0,57+0,05

0,59+0,07

макрофагов:
ПСЛМ в %

59,6+1,4

63,7+1,1

69,3+2,5

Lсекр в мкг/мл

0,9+0,07

0,98+0,03

1,2+0,08

Lсинт в мкг/мл

0,7+0,012

0,79+0,03

0,8+0,03

Оценивая полученный результат с точки зрения особенностей изменения структурно-функционального состояния моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в связи с их активацией у больных воспалением матки и придатков, можно отметить следующее. Повышение уровня секреции IL8 моноцитами крови при остром и значительно более при хроническом воспалительном процессе сопровождается лабилизацией лизосомных мембран с повышением секреции лизосомного фермента лизоцима моноцитами и перитонеальными макрофагами. Это связано с активацией клеток системы макрофагов при воспалении.

Проведенный экспериментальный анализ изменения активации моноцитов крови и перитонеальных макрофагов при двух формах бесплодия – трубно-перитонеальном и бесплодии неясного генеза, в сравнении со здоровыми фертильными женщинами, показал следующее. По уровню секреции IL8 моноцитами крови можно считать, что повышенно активное состояние моноцитов/макрофагаов наблюдается у женщин с трубно-перитонельным бесплодием, у которых имеет место повышенный уровень секреции IL8, составляющий 1130+112 пкг/мл/106кл, по сравнению с состоянием активности клеток здоровых фертильных женщин. У здоровых фертильных женщин уровень секреции IL8 моноцитами крови колеблется в пределах от 80 до 130 пкг/мл106кл и в среднем составляет 118+25 пкг/мл106кл. При бесплодии неясного генеза уровень секреции IL8 моноцитами крови лишь незначительно превышает уровень секреции IL8 фертильных женщин – 128+30 пкг/мл106кл, что предполагает близкое исходное состояние активности клеток-продуцентов интерлейкина 8 (моноцитов крови).

У женщин с трубно-перитонеальным бесплодием наряду с повышенным уровнем секреции IL8 моноцитами крови, по сравнению с нормальным уровнем секреции IL8 у здоровых людей (p<0,01) и у женщин с бесплодием неясного генеза, уровень секреции IL8 не отличается от показателя у здоровых фертильных женщин (p>0,05). Состояние же стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их секреторная и синтетическая активность подвержены разнонаправленным изменениям.

Результаты исследования ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов фертильных женщин, женщин с трубно-перито­неальным и бесплодием неясного генеза показали, что при трубно-пе­ритонеальном бесплодии происходит выраженное повышение ПСЛМ моноцитов крови и еще более – перитонеальных макрофагов по сравнению с показателями у здоровых женщин (p<0,05 и p<0,01 соответственно), что свидетельствует о происходящей лабилизации лизосомных мембран моноцитов/макрофагов у женщин с данной патологией. У женщин с бесплодием неясного генеза наблюдается снижение ПСЛМ моноцитов и макрофагов, по сравнению с показателями фертильных женщин, свидетельствующее о происходящей стабилизации лизосомных мембран клеток (p<0,05 и p<0,01 соответственно).

Секреция лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами повышена у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием (p<0,05) и снижена у женщин с бесплодием неясного генеза (p<0,01) по сравнению с показателями секреции лизоцима моноцитами и макрофагами фертильных женщин. Синтез лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием и особенно с бесплодием неясного генеза снижен по отношению к показателям здоровых фертильных женщин (p<0,05 и p<0,01 соответственно).

Таким образом, при трубно-перитонеальном бесплодии повышенная секреторная активность моноцитов крови по IL8 сопровождается снижением синтеза лизосомного фермента лизоцима и лабилизацией лизосомных мембран моноцитов и перитонеальных макрофагов с одновременным повышением секреции. При бесплодии неясного генеза незначительное повышение секреции IL8 сочетается со снижением секреции лизоцима за счет стабилизации лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов и снижением синтеза лизоцима. Повышение секреции IL8 и секреции лизоцима, более тесно связанное с лабилизацией лизосомных мембран и в меньшей степени – с нарастанием синтеза фермента, при трубно-перитонеальном бесплодии может быть связано с длительной активацией клеток системы макрофагов в течение хронического воспалительного процесса. Незначительное по­вышение секреции IL8, стабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов со снижением секреции и синтеза лизоцима, выявленные при бесплодии неясного генеза, могут отражать скрытые процессы в организме женщины при данном состоянии, в том числе латентную инфекцию.

Активация клеток, в том числе клеток системы макрофагов, сопровождается и повышением экспрессии клеточных рецепторов (Фрейдлин И.С., 1984; Говалло В.И., 1987). В этой связи был проведен экспериментальный анализ изменения состояния стабильности лизосомных мембран, синтеза и секреции конститутивного лизосомного фермента лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у женщин при увеличении экспрессии рецепторов к эстрадиолу и прогестерону на клетках эндометрия в разные маточные фазы менструального цикла: пролиферативную и секреторную.

В пролиферативную фазу преобладает эстрадиол, его действие сопряжено с нарастанием синтеза и экспрессии рецепторов к данному гормону (Лысенко О.Н. и др., 2004). Высокий уровень гормона сопровождается сильным уровнем экспрессии к гормону и лабилизацией их лизосомных мембран (p<0,05 разница ПСЛМ моноцитов и макрофагов у женщин с сильной экспрессией рецепторов к эстрадиолу и умеренной экспрессией и p<0,01 – с отсутствием экспрессии), что подтверждает лабилизирующее действие эстрадиола на лизосомные мембраны моноцитов/макрофагов.

Соответственно секреторная активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с сильной экспрессией рецепторов к эстрадиолу на клетках эндометрия наиболее высокая (p<0,05 разница Lсекр моноцитов и макрофагов у женщин с сильной экспрессией рецепторов к эстрадиолу и умеренной экспрессией и p<0,01 – с отсутствием экспрессии).

Синтез лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами находится в обратной зависимости от уровня экспрессии рецепторов к эстрадиолу и, очевидно, от содержания эстрадиола. Данный результат согласуется с описанными выше данными, свидетельствующими о снижении синтетической активности моноцитов/макрофагов при повышении уровня эстрадиола.

В секреторную фазу, развивающуюся после овуляции с образованием желтого тела, закономерным образом происходит подъем содержания прогестерона и спад эстрадиола. При этом в секреторную фазу происходит резкое снижение экспрессии рецепторов к эстрадиолу и длительная экспрессия рецепторов к прогестерону, как было описано О.Н. Лысенко с соавт. (2004). Исследованные на этом фоне моноциты крови и перитонеальные макрофаги, как оказалось, отличаются по их функциональному состоянию у женщин с разным гормональным статусом, свидетелем чего является уровень экспрессии рецепторов к прогестерону в клетках эндометрия. Это может быть связано с прямым возрастающим действием прогестерона на клетки системы макрофагов или опосредованным за счет различного числа рецепторов к гормону. Вероятно, параллельно количественному изменению рецепторов в эндометрии может происходить изменение в мембранах макрофагальных клеток.

Из полученных результатов оценки показателя стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов видно, что при отсутствии и умеренной экспрессии рецепторов к прогестерону наблюдается практически одинаковое значение ПСЛМ как моноцитов, так и макрофагов с незначительным преобладанием его уровня в случае отсутствия рецепторов (p>0,05). С нарастанием экспрессии рецепторов происходит значительное снижение ПСЛМ клеток (p<0,05), что свидетельствует о происходящей стабилизации их лизосомных мембран.

Секреторная активность в отношении лизосомного фермента лизоцима при отсутствии экспрессии рецепторов к прогестерону повышена, особенно у макрофагов (p<0,05), по сравнению с ее проявлением клетками женщин с умеренной экспрессией рецепторов к гормону. При значительном повышении количества рецепторов к прогестерону (сильная экспрессия) наблюдается снижение секреции в моноцитах крови и перитонеальных макрофагах под воздействием стабилизирующего рецептор-опосредованного эффекта гормона (p<0,01).

Синтез лизоцима моноцитами/макрофагами также варьирует в секреторную фазу менструального цикла, что может быть связано с действием прогестерона опосредованно через рецепторы к гормону. При наиболее высокой экспрессии рецепторов к прогестерону в клетках организма женщины имеет место наибольший уровень синтеза лизосомного фермента моноцитами крови и перитонеальными макрофагами (p<0,05).

Таким образом, полученные результаты исследования свидетельствуют о разносторонней зависимости структурно-функциональных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов от уровня половых гормонов, их соотношения и рецептор-опосредованного действия. Влияние гормонов на моноциты крови и перитонеальные макрофаги может происходить непосредственно через имеющиеся в клетках рецепторы к гормонам или опосредованно путем изменения количественных гормональных соотношений. Происходящие при этом изменения в макрофагальных клетках определяют процесс их активации и степень возможного участия в реализации репродуктивной функции организма женщины за счет эффекторного действия клеток и их лизосомных ферментов.

3. Стабильность лизосомных мембран, соотношение синтеза
и секреции лизосомного фермента лизоцима моноцитов
крови и перитонеальных макрофагов
при циклических изменениях в организме женщин

Проведен анализ результатов исследований стабильности лизосомных мембран, клеточного синтеза и секреции маркерного фермента лизосом и их мембран – лизоцима моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в процессе менструального цикла (Покровский А.А., Тутельян В.А., 1976; Фрейдлин И.С., 1987; Ройт А., 1991). Обследования проведены в менструальную фазу, фолликулярную – в динамике созревания фолликула, в период овуляции, лютеальную фазу, при фертилизации, на этапе имплантации зародыша. Критериями установления контрольных точек данных процессов являлись данные анамнеза о временных периодах, результаты функциональных и лабораторных исследований.

Было исследовано состояние стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток крови в 1-ый день менструации и в период ее завершения у женщин репродуктивного возраста 18–40 лет. Полученные результаты показали, что в начале менструации показатель стабильности лизосомных мембран (ПСЛМ) моноцитов крови (65,3±1,4%) и перитонеальных макрофагов (70,6±1,2%) женщин был достоверно ниже (p<0,01), чем после ее завершения (72,4±1,3% и 80,3±1,7% соответственно), свидетельствуя о происходящей лабилизации лизосомных мембран этих клеток к периоду завершения менструации. Это может быть связано с изменением морфо-функционального состояния моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в связи как с гормональной перестройкой в организме женщины, так и с нейрогенным фактором, что свидетельствует о связи местных и общих изменениях в организме женщин в период менструации. При этом изменение морфо-функцио­нального состояния моноцитов крови и перитонеальных макрофагов может быть важным в определении защитного потенциала организма женщин в критический период менструального цикла.

Результатом лабилизации лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов является повышение их секреторной активности в конце менструации: секреция лизосомного фермента лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами заметно выше в период завершения менструации (p<0,01 и p<0,05 соответственно).

Исследование синтетической активности моноцитов и макрофагов на примере синтеза лизоцима в менструальную фазу цикла показало, что в конце менструации наблюдается подъем синтеза лизоцима, особенно макрофагами (разница в синтезе лизоцима макрофагами вначале и в конце менструации достоверно значима p<0,05).

Период завершения менструации совпадает с подъемом выработки ФСГ, являющегося стимулом к созреванию фолликула и нарастанием синтеза эстрадиола, что характерно для начала фолликулярной фазы. Фолликулярная фаза менструального цикла заключается в дифференцировке первичных фолликулов в зрелые фолликулы через определенные периоды развития: рост до стадии преполостных, преовуляторных фолликулов, завершающего этапа созревания фолликула с формированием созревшего ооцита непосредственно перед овуляцией (Никитин А.И., 2005).

В динамике фолликулярной фазы менструального цикла происходит постепенное увеличение ПСЛМ, свидетельствующее о нарастании лабилизации лизосомных мембран клеток системы макрофагов. При этом следует отметить, что увеличение ПСЛМ моноцитов крови в середине фолликулярной фазы (77,3±1,2%) по сравнению с ее началом (73,6±1,5%) и при завершении фолликулярной фазы (82,5±1,3%) по сравнению с ее серединой статистически значимо (p<0,05). Возрастание ПСЛМ макрофагов к середине фолликулярной фазы значительно (p<0,05), но дальнейшее его увеличение менее выражено (p>0,05).

Результат исследования секреторной активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в динамике фолликулярной фазы показал, что секреция лизоцима данными клетками возрастает особенно значительно в середине фазы (p<0,05) с дальнейшим приростом уровня секреции на завершающей стадии фолликулярной фазы в период достижения зрелости фолликула. Эти данные можно объяснить существующей связью между стабильностью лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов и секрецией лизосомных ферментов.

Синтез лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами к середине фолликулярной фазы незначительно снижается (p>0,05), а на завершающей стадии созревания фолликула заметно возрастает ((p<0,05), что, несомненно, может быть связано с изменением соотношения гормонов в эти периоды.

Овуляция зрелого фолликула происходит при пусковом действии возросшей концентрации ЛГ на фоне оптимальных соотношений других половых гормонов и заключается в разрыве стенки фолликула и выходе яйцеклетки. Разрыв стенки фолликула происходит за счет тканевой реакции с истончением стенки ткани яичника в соответствующем месте, нарушения кровообращения, ферментативного воздействия гиалуронидазы, протеаз, диастазы (Жмакина К.Н., 1980). В этом отношении изменение внеклеточной активности лизосомных ферментов при лабилизации лизосомных мембран клеток системы макрофагов может играть определенную роль. Ановуляция возникает, прежде всего, при нарушении гормональных соотношений и заключается в отсутствии овуляции. Частыми причинами ановуляции являются гиперпролактинемия и гиперэстрогенемия (Brown J.B. et.al., 1983).

При нормальном менструальном цикле с наступающей овуляцией, (что выявлялось в процессе клинического обследования, в период исследования на 13–15 день – во время происходящей овуляции) ПСЛМ моноцитов (83,8±1,3%) и макрофагов (89,6±1,7%) в среднем несколько превышает показатели стабильности лизосомных мембран клеток предшествующего предовуляционного периода (p>0,05). При ановуляторном цикле в аналогичный период отмечается более выраженный подъем ПСЛМ как моноцитов (88,4±1,0%), так и макрофагов (97,7± 1,9%), что свидетельствует о повышенной лабильности лизосомных мембран клеток системы макрофагов у женщин с наступающей ановуляцией (p<0,05 в сравнении с показателями при овуляторном цикле).

При этом наблюдается и заметное повышение секреторной активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в отношении лизосомного фермента лизоцима у женщин при ановуляции (p<0,05). Секреция клетками лизоцима в период овуляции у женщин с овуляторным циклом остается на одном уровне в сравнении с результатами предовуляторного значения.

Синтетическая активность моноцитов и макрофагов в отношении лизоцима в период овуляции у женщин с овуляторным циклом незначительно возрастает по сравнению с предовуляторным уровнем (p>0,05). При ановуляторном цикле синтез лизоцима находится на низком уровне и соответствует уровню синтеза лизоцима клетками системы макрофагов середины периода созревания фолликула.

После овуляции неоплодотворенная яйцеклетка разрушается в течение 1–2 дней. Наступает лютеальная фаза с образованием и функционированием желтого тела, которое продуцирует более всего прогестерон и, в меньшей мере, эстрадиол в течение 12–14 дней и подвергается обратному развитию или регрессии. Возрастание уровня прогестерона после овуляции значительно и может достигать десятикратного увеличения по сравнению с базальной секрецией (Остин К., Шорт Р., 1987; Фанченко Н.Д., Щедрина Р.Н., 2005; O’Connor et.al., 1998).

Исследование состояния стабильности лизосомных мембран моноцитов/макрофагов в динамике лютеальной фазы показало, что к середине фазы происходит снижение ПСЛМ моноцитов и макрофагов с 80,2±5,6% до 53,3±4,2% у моноцитов и с 87,4±4,9% до 65,8±1,5% у макрофагов (p<0,01), свидетельствующее о стабилизации их лизосомных мембран. В позднем периоде лютеальной фазы наблюдается заметное повышение ПСЛМ до 66,7±2,7% у моноцитов и до 73,5±2,0% у макрофагов по сравнению с серединой фазы (p<0,05). Но значение ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в этот период значительно ниже, чем в начале лютеальной фазы (p<0,05), когда лизосомные мембраны данных клеток находятся в лабилизированном состоянии.

Однонаправлено с ПСЛМ изменяется секреторная активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в динамике лютеальной фазы: в середине фазы происходит снижение синтеза лизосомного фермента, в позднем периоде фазы – подъем. Синтез лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами в середине лютеальной фазы достоверно повышается (p<0,05), а в конце лютеальной фазы происходит его снижение.

Были проанализированы результаты исследования состояния стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их секреторно-синтетической активности у 20 женщин, отобранных из числа обследованных, с наступившей фертилизацией, установленной ретроспективно на основании анамнестических данных и по результатам проводимымых тестов на беременность.

В начальный период развития зародыша (15–16 день нормального менструального цикла) ПСЛМ моноцитов и макрофагов соответствует аналогичным показателям у женщин с овуляторным менструальным циклом в начале лютеальной фазы без фертилизации. Через 5–6 дней после фертилизации – в период происходящей имплантации зародыша и соответствующий середине лютеальной фазы (19–21 день цикла) при отсутствии фертилизации, наблюдается некоторое снижение ПСЛМ моноцитов и макрофагов (p>0,05). На 10–12 день развития зародыша (26–28 день цикла) происходит дальнейшее снижение ПСЛМ клеток системы макрофагов (p>0,05 по сравнению с 5–6 днем развития зародыша и p<0,05 по сравнению с 1–2 днем развития зародыша). В целом, в случае наступления фертилизации и до наступления имплантации поддерживается достаточно лабильное состояние лизосомных мембран клеток системы макрофагов, что, вероятно, определяется совокупным действием прогестерона и эстрадиола на их активность и предполагает свободный выход лизосомных ферментов из клеток. Это, по-видимому, может иметь рациональное значение для создания оптимальной среды в маточных трубах при транспортировке зародыша и при его имплантации.

Секреторная активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, оцениваемая по лизосомному ферменту лизоциму, в динамике с момента наступления фертилизации постепенно снижается к 10– 12 дню развития зародыша. Причем, в первые дни после фертилизации уровень секреции лизоцима имеет достаточно высокое значение как у моноцитов, так и у макрофагов. При этом разница между секреторным лизоцимом в 1–2 день развития зародыша и на 5–6-й день незначительная (p>0,05). Синтез лизоцима в макрофагальных клеток нарастает, что может быть связано с превалирующим действием прогестерона.

Оценивая описанные в данном разделе результаты исследований следует отметить следующее. В различные фазы менструального цикла происходит изменение функционального состояния клеток системы макрофагов, находящиеся в тесной связи с уровнем гормонов и их соотношением. Эти изменения, прежде всего, связаны с изменением состояния стабильности лизосомных мембран клеток и, судя по конкретно исследованному маркерному ферменту лизосом и лизосомных мембран лизоциму, с изменением синтеза и секреции данного фермента. Очевидно, клетки системы макрофагов играют вторичную роль в репродуктивном процессе. Однако их участие находит свое приложение и может быть реализовано через основную фагоцитарную функцию и путем воздействия их лизосомных ферментов на окружающие тканевые структуры – клетки, их рецепторы, межклеточное вещество, биологически активные молекулы. При этом изменения морфо-функциональной активности макрофагальных клеток на различных этапах процесса репродукции могут играть как физиологическую, так и патологическую роль.

Таким образом, нами исследована взаимосвязь молекулярного и клеточного уровней регуляции репродуктивной системы женщины с организменным уровнем на примере изучения секреторно-синтени­ческой активности перитонеальных макрофагов и моноцитов крови.

Таблица 12 – Взаимосвязь секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с различными видами патологии репродуктивной системы

Нозологические
группы

Показатели секреторно-синтетической активности
(1 группа)

Моноциты
крови
(2 группа)

Перитонеальные
макрофаги
(3 группа)

Здоровые

r12>0,9

r13>0,9

r23>0,9

Острое воспаление матки
и придатков

r12>0,9

r13>0,9

r23>0,9

Хроническое воспаление
матки и придатков

r12>0,9

r13>0,9

r23>0,9

Нарушение менструального цикла по типу гипоменорреи

r12>0,9

r13>0,9

r23>0,9

Нарушение менструального цикла по типу гиперменорреи

r12>0,9

r13>0,9

r23>0,9

Трубно-перитонеальное
бесплодие

r12>0,9

r13>0,9

r23>0,9

Эндокринное бесплодие

r12>0,9

r13>0,9

r23>0,9

Иммунологическое бесплодие

r12>0,9

r13>0,9

r23>0,9

Бесплодие неясного генеза

r12>0,9

r13>0,9

r23>0,9

Примечания:

r12 – коэффициент корреляции между первой и второй группами;

r13 – коэффициент корреляции между первой и третьей группами;

r23 – коэффициент корреляции между второй и третьей группами.

Как видно из таблицы 12, имеется сильная корреляционная связь между уровнем секреторно-синтетических процессов перитонеальных макрофагов и моноцитов крови при различных физиологических и патологических состояниях в женском организме. Это позволяет говорить о регуляции репродуктивной системы женщины на разных уровнях: молекулярном, связанном с секреторно-синтетическими процессами в клетках; клеточном, проявляющемся активацией клеток; органном (изменения в матке и придатках матки) и организменном, возникающим при различных гормональных вариациях.

ВЫВОДЫ

  1. Клетки системы макрофагов принимают активное участие в физиологии репродуктивной системы женщины, влияют на течение и исход различных гинекологических заболеваний.
  2. Повышение уровеня ФСГ, пролактина, эстрадиола введет к повышениею адгезивной и поглотительной активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с лабилизации лизосомных мембран, увеличениею секреции и снижению синтеза лизоцима. Тогда как повышенние уровеня ЛГ, прогестерона, тестостерона оказывает обратный эффект.
  3. В зависимости от фазы менструального цикла изменяется уровень стабильности лизосомных мембран, синтеза и секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами.
  4. Увеличение экспрессии рецепторов на клетках эндометрия к эстрадиолу в пролиферативную фазу маточного цикла приводит к лабилизации лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, увеличению в них секреции и снижению синтеза лизоцима. При увеличении экспрессии рецепторов к прогестерону в секреторную фазу маточного цикла происходит стабилизация лизосомных мембран этих клеток, снижение в них секреции и повышение синтеза лизоцима.
  5. Овуляция зрелого фолликула сопровождается лабилизацией лизосомных мембран и повышенной секреции лизосомного фермента лизоцима моноцитами/макрофагами. При ановуляции происходит более высокая лабилизация лизосомных мембран с ещё более высокой секрецией лизоцима. В случае наступления фертилизации и до наступления имплантации сохраняется стойко лабилизированное состояние лизосомных мембран клеток системы макрофагов с повышенной секрецией лизоцима.
  6. При нарушении менструального цикла типа гиперменорреи происходит повышение адгезивных и поглотительных свойств моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, лабилизация лизосомных мембран, увеличение секреции и снижение синтеза лизоцима. При гипоменоррее наблюдается обратный эффект.
  7. При острых воспалительных процессах матки и придатков матки (метроэндометрит и сальпингоофорит) происходит повышение адгезивной и поглотительной способности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, увеличение в них синтеза и секреции лизоцима. При хронических воспалительных процессах имеет место снижение адгезивных и поглотительных свойств клеток, снижение синтеза и повышение секреции лизоцима.
  8. Повышение уровня секреции IL8 моноцитами крови при остром метроэндометрите и сальпингоофорите сопровождается лабилизацией лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, увеличением секреции и синтеза лизоцима. Еще более значительное повышение уровня секреции IL8 моноцитами крови и перитонеальными макрофагами при хроническом воспалительном процессе сопровождается повышением секреции лизоцима при незначительном отставании синтеза этого фермента.
  9. При трубно-перитонеальном бесплодии происходит увеличение секреторной активности моноцитов крови по IL8, снижение адгезивной активности, повышение секреции и снижение синтеза лизоцима, лабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов. Эндокринное бесплодие сопровождается снижением адгезивной способности клеток, стабилизацией лизосомных мембран, повышением синтеза лизоцима. При бесплодии неясного генеза имеет место незначительное повышение секреции IL8 моноцитами крови, снижение секреции и синтеза лизоцима, стабилизация лизосомных мембран моноцитов/макрофагов. При иммунологическом бесплодии особых отклонений не отмечается.

Рекомендации для внедрения результатов исследования
в практическое здравоохранение

1. Для диагностики гинекологических заболеваний и бесплодия рекомендуется определять синтез и секрецию лизоцима, показатель стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов.

2. Под контролем этих же показателей проводить лечение женщин с различными заболеваниями.

А. Воспалительный процесс матки и придатков матки

Исследования показали, что при остром воспалении происходит усиленный выход лизосомных ферментов из лизосомных мембран. Это оценивается по повышению количества лизоцима. При хроническом воспалительном процессе, напротив, идет снижение синтеза лизоцима.

Цель лечения – восстановление уровня ПСЛМ до оптимального значения: 53–58%.

Б. Нарушение менструального цикла

При гипоменоррее снижается синтез лизоцима. При гиперменоррее, напротив, идет повышение синтеза фермента. Соответственно колеблется уровень ПСЛМ:

более 60% при гипоменоррее, менее 50% при гиперменоррее.

В. Трубно-перитонеальное бесплодие

Повышается секреция и снижается синтез лизоцима. При этом ПСЛМ клеток увеличивается до 70–80%. При лечении женщин необходимо использовать терапию, стимулирующую синтез лизоцима и снижающую ПСЛМ. Очень хорошо в этом плане использование физических методов лечения (магнитолазер, грязелечение, синусомодулированные токи), иглорефлексотерапию. Контролем восстановления нор­мальных свойств фагоцитирующих клеток нужно считать снижение по­казателя стабильности лизосомных мембран – ПСЛМ до 53–58%.

Г. Эндокринное бесплодие

Наблюдается повышение синтеза лизоцима и значительное снижение ПСЛМ (30–40%). Контролем лечения в данной группе женщин будет восстановление показателя стабильности лизосомных мембран клеток до оптимального уровня: 53–58%.

Д. Бесплодие неясного генеза

Имеет место снижение синтеза и секреции лизоцима наряду со стабилизацией лизосомных мембран клеток. Дестабилизация лизосомных мембран клеток, повышение синтеза и секреции лизоцимов может расцениваться как хороший прогностический критерий в плане наступления беременности.

Использование контрацептивов

При использовании внутриматочных контрацептивов синтез лизоцима остается неизменным. ПСЛМ равно 53–58 %. При использовании комбинированных оральных контрацептивов идет заметное снижение синтеза лизоцима. ПСЛМ увеличивается до 63–75 %. Это диктует необходимость исследовать уровень данного фермента у женщин, предпочитающих данный вид контрацепции, для определения длительности их применения.

Учитывая современные достижения медицины, наличие высокотех­нологичного оборудования в лечебных учреждениях, можно рекомендовать исследование активности клеток макрофагальной системы для выработки тактики лечения, оценки прогноза заболевания. Иммуномодулирующую терапию гинекологических заболеваний рационально проводить под контролем активности синтеза лизосомных ферментов и ПСЛМ. В плане подготовки к ЭКО целесообразно проводить исследование секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов. Применение консервативной терапии, направленной на коррекцию макрофагального звена иммунной системы перед микрохирургическим лечением женщин с бесплодием, позволяет создать оптимальные условия для овуляции, фертилизации и транспортировки зародыша.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ
ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК
для защиты докторских диссертаций

  1. Шаронов А.С., Храмова И.А., Мальцева Е.А. Сравнительная оценка адгезивных свойств перитонеальных макрофагов крыс и состояние стабильности лизосомных мембран при прикреплении к пластику и стеклу // Тихоокеанский медицинский журнал. – 2005. – № 1. – С. 87–88.
  2. Шаронов А.С., Храмова И.А. Зависимость иммуногенеза на начальных этапах от состояния стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток // Тихоокеанский медицинский журнал. – 2009. – № 4. – С. 37–38.
  3. Шаронов А.С., Храмова И.А., Кольцов И.П. Регуляция иммуногенеза на его начальных этапах путем коррекции стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток // Дальневосточный медицинский журнал. – 2009. – № 3. – С. 87–89.
  4. Храмова И.А., Кольцов И.П., Бурлова Т.К., Гурбанов К.Р. Адгезивные и поглотительные свойства макрофагов в норме, при острой и хронической воспалительной патологии у женщин репродуктивного возраста // Дальневосточный медицинский журнал. – 2010. – № 1. – С. 29–30.
  5. Храмова И.А., Кольцов И.П., Дубняк Н.С., Шаронов А.С. Стабильность лизосомных мембран, синтез и секреция клеток макрофагальной системы у здоровых и с острой и хронической воспалительной патологией женщин репродуктивного возраста // Дальневосточный медицинский журнал. – 2010. – № 2. – С. 16–18.
  6. Кольцов И.П., Дубняк И.Н., Мальцева Е.А., Дубняк Н.С., Храмова И.А., Шаронов А.С. Соотношение стабильности лизосомных мембран (СЛМ), секреции и синтеза лизоцима и уровня секреции IL8 моноцитов крови у здоровых и больных с аллергической и холинэргической крапивницей // Дальневосточный медицинский журнал. – 2010. – № 4. – С. 21–23.
  7. Храмова И.А., Кольцов И.П., Дубняк Н.С., Шаронов А.С. Оценка синтеза, секреции и стабильности лизосомных мембран клеток макрофагальной системы у здоровых женщин // Вестн. Уральской мед. академ.науки. – 2010. – № 2/1 (29). – С. 78.
  8. Храмова И.А., Кольцов И.П., Шаронов А.С., Бурлова Т.К., Гурбанов К.Р. Изучение адгезивных свойств макрофагов у здоровых женщин репродуктивного возраста // Вестн. Уральской мед. академ. науки. – 2010. – № 2/1 (29). – С. 79.
  9. Храмова И.А. Секреторно-синтетическая активность моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин при овуляции и ановуляции // Тихоокеанский мед. журнал. – 2011. – № 2. – С. 32–34.
  10. Кольцов И.П., Храмова И.А. Взаимосвязь секреторно-синтети­ческих процессов в моноцитах/макрофагах с уровнем секреции интерликина – 8 моноцитами крови при эндометрите // Тихоокеанский мед. журнал. – 2011. – № 3. – С. 23–25.
  11. Храмова И.А. Роль лизоцимных ферментов клеток системы макрофагов в процессе овуляции у женщин с овуляторным и ановуляторным менструальным циклом // Дальневосточный медицинский журнал. – 2011. – № 2. – С. 42–44.

Патенты Российской Федерации

Храмова И.А., Кольцов И.П., Шаронов А.С., Мотавкин П.А. Способ определения активации фагоцитирующих клеток / патент на изобретение №2010115177 (021473) от 14.03.2011 г.

Публикации в других изданиях

  1. Храмова И.А. Опыт обследования и лечения женщин с бесплодием // Организация и оказание медицинской помощи: сб. ст. – Влади­восток, 1986. – С. 65–68.
  2. Храмова И.А., Хрущ Т.М., Цуканова А.В Лечение женского бесплодия в условиях стационара // Актуальные аспекты терапии: материалы конференции. – Владивосток, 1991. – С. 83–84.
  3. Шепарев А.А., Татаркин А.Г., Попова Т.С., Сергиенко И.Н., Цуканова А.В., Храмова И.А.Специализированные центры для рационального труда и отдыха беременных женщин // Актуальные аспекты терапии: материалы конференции. – Владивосток, 1991. – С. 85–87.
  4. Ишпахтин Ю.И., Бакшеева Р.И., Храмова И.А. Репродуктивная функция женщин плавсостава предприятий // Социально-медицинские аспекты рождаемости и охраны матери и ребенка: материалы конференции. – Благовещенск, 1991. – С. 15–16.
  5. Ишпахтин Ю.И., Бакшеева Р.И., Храмова И.А. Особенности репродуктивной функции женщин плавпредприятий: материалы Пленума проблемной комиссии, посвященной проблеме реабилитации и рекриации плавсостава. – Владивосток, 1991. – С. 118–119.
  6. Ишпахтин Ю.И., Храмова И.А. Сравнительное исследование эффективности внутриматочных и оральных средств контрацепции: материалы II Международного симпозиума Фонда медицинского обмена Япония-Россия. – Владивосток, 1994. – С. 207.
  7. Шаронов А.С., Дубняк Н.С., Ябурова И.О., Храмова И.А. Аллергия к морепродуктам у работников, занимающихся промыслом в северных регионах Тихого Океана // Тихоокеанский медицинский журнал. – 1999, спец. выпуск № 3. – С. 48–49.
  8. Храмова И.А., Ишпахтин Ю.И., Шаронов А.С. Взаимосвязь иммунного и эндокринного статуса у женщин, применявших различные виды контрацептивов // Тихоокеанский медицинский журнал. – 1999, спец. выпуск № 3. – С. 83–84.
  9. Шаронов А.С., Андрюков Б.Г., Храмова И.А., Слипчук Г.К. Взаимосвязь местной активности фагоцитирующих клеток и гормонального статуса у женщин // Журнал «Здоровье, экология, наука». – 2001. – № 2. – С. 23–25.
  10. Шаронов А.С., Семенцов В.К., Андрюков Б.Г., Храмова И.А. и др. Десинхронизация различных факторов иммунитета в условиях длительного морского плавания // Журнал «Здоровье, экология, наука». – 2001. – № 3 (3). – С. 49–50.
  11. Слипчук Г.К, Храмова И.А. Исследование функциональных нарушений фагоцитирующих клеток у здоровых и больных хламидиозом людей // Журнал «Здоровье, экология, наука». – 2002. – № 1–2 (5–6). – С. 43–44.
  12. Бакшеев К.А, Храмова И.А. Развитие вторичного иммунодефицита при инфекциях, передающихся половым путем // Журнал «Здоровье, экология, наука». – 2002. – № 4–5 (8–9). – С. 64–65.
  13. Храмова И.А., Бакшеев К.А Уровень иммуноглобулинов, лизоцима и фагоцитарная активность клеток у больных ИППП // Журнал «Здоровье, экология, наука». – 2002. – № 4–5 (8–9). – С. 65–66.
  14. Шаронов А.С., Храмова И.А. Макрофаги и их секреторная функция при вирусных инфекциях // Тихоокеанский медицинский журнал. – 2003. – № 2 (12). – С. 57–58.
  15. Храмова И.А., Бакшеева Р.И. Патология репродуктивной системы женщин Приморского края // Журнал «Здоровье, медицинская экология, наука». – 2007. – № 1 (28). – С. 7–9.
  16. Храмова И.А., Кирилюк И.Н. Дифференцированные подходы к консервативной терапии бесплодия женщин // Аллергология и иммунология. – 2008. – Т. 9. – № 1. – С. 81.
  17. Храмова И.А., Кирилюк И.Н., Шаронов А.С. Потенциальная роль фагоцитирующих клеток в процессах созревания фолликула и овуляции // Аллергология и иммунология. – 2008. – Т. 9. – № 1. – С. 81.
  18. Храмова И.А., Кольцов И.П. Показатель стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток крови женщин как критерий наступления беременности // Аллергология и иммунология. – 2008. – Т. 9. – № 3. – С. 306.
  19. Храмова И.А., Кольцов И.П. Изменение стабильности лизосомных мембран моноцитов крови женщин при менструации // Аллергология и иммунология. – 2008. – Т. 9. – № 3. – С. 306.
  20. Шаронов А.С., Храмова И.А., Соловьев А.П. Механизм изменения стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток при активации // Российский иммунологический журнал. – 2008. – Т. 2 (11). – № 2–3. – С. 126.
  21. Шаронов А.С., Храмова И.А. Динамика показателя стабильности лизосомных мембран (ПСЛМ) в зависимости от изменения гормонального статуса женщин в процессе менструального цикла // Российский иммунологический журнал. – М.: Наука, 2008. – Т. 2 (11). – № 2–3. – С. 301.
  22. Шаронов А.С., Храмова И.А. Фагоцитарная активность и состояние стабильности лизосомных мембран мононуклеарных фагоцитов крови у женщин с гипо- и гиперэстрогенэмией // Российский иммунологический журнал. – М.: Наука, 2008. – Т. 2 (11). – № 2–3. – С. 126.
  23. Храмова И.А., Григорьева Л.А., Матюшкина Л.С. Применение иглорефлексотерапии как метода лечения акушерской и гинекологической патологии и регуляции активности фагоцитирующих клеток // Тихоокеанский медицинский журнал. – 2009. – № 4. – Приложение. – С. 163.
  24. Храмова И.А., Костина С.В. Эффективность использования лактофильтрума в комплексном лечении воспалительных заболеваний репродуктивного тракта // Тихоокеанский медицинский журнал. – 2009. – № 4. – Приложение. – С. 164.
  25. Способ фиксации действия лизоцима в геле»: удостоверение на рационализаторское предложение № 2615 БРИЗ ВГМУ от 28.06.2005 г. / И.А. Храмова, А.С. Шаронов, А.И. Аналеев. – Владивосток,2005. – 4 с.
  26. Способ определения активации фагоцитирующих клеток по нарастанию синтеза внутриклеточного лизоцима»: удостоверение на рационализаторское предложение № 2747 БРИЗ ВГМУ от 22.09.2009 г. / И.А. Храмова, А.С. Шаронов. – Владивосток, 2009. – 3 с.
  27. Способ определения лизосомомембранотропных свойств антигенов: удостоверение на рационализаторское предложение № 2749 БРИЗ ВГМУ от 25.09.2009 г. / И.А. Храмова, А.С. Шаронов. – Владивосток, 2009. – 3 с.

На правах рукописи

Храмова Ирина Афанасьевна

ХАРАКТЕРИСТИКА МАКРОФАГАЛЬНОЙ
СИСТЕМЫ У ЖЕНЩИН
ПРИ НАРУШЕНИИ ПРОЦЕССА РЕПРОДУКЦИИ

03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени
доктора медицинских наук




© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.