WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

 

На правах рукописи

Горяинова Инга Анатольевна

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ТРОМБОЦИТАРНОГО ГЕМОСТАЗА У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ В НОРМЕ И ПРИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЯХ ПИЩЕВАРЕНИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

доктора биологических наук

03.00.13 - физиология

            1. Москва - 2008

Работа выполнена на кафедре адаптивной физической культуры и спорта  ГОУ ВПО «Курский институт социального образования (филиал) Российского государственного социального университета»

Научный консультант:

доктор медицинских наук  Медведев Илья Николаевич

 

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор  Максимов Владимир Ильич

Доктор биологических наук, профессор Матвеев Валерий Алексеевич

Доктор биологических наук, профессор Грушкин Александр Георгиевич

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский государственный научно-исследовательский институт животноводства»

Защита диссертации состоится «17» декабря 2008г. в12-30  часов на заседании совета по защите кандидатских и докторских диссертаций Д 220.042.04 при ФГОУ ВПО Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К. И. Скрябина (109472, г.Москва, ул.Академика Скрябина, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина»

Автореферат разослан «___» ___________ 200  г.

Учёный секретарь

диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент  Фомина В.Д.

Список принятых сокращений

АА – арахидоновая кислота

АГП – ацилгидроперекиси

АДФ– аденозиндифосфат

АОА – антиоксидантная активность

АТ –  агрегация тромбоцитов

АТФ – аденозинтрифосфат

БАВ – биологически активные вещества

БТП – богатая тромбоцитами плазма

ВАТ – внутрисосудистая активность тромбоцитов

ЖКТ – желудочно-кишечный тракт

ИТА – индекс тромбоцитарной активности

КАП – коллаген-аспириновая проба

КИП – коллаген-имидазольная проба

ОФЛ – общие фосфолипиды

ПОЛ – перекисное окисление липидов

СМ – средние молекулы

СОД – супероксиддисмутаза

СРО – свободно радикальное окисление

ТБК – тиобарбитуровая кислота

ТП – тромбопластин

ТС – тромбоксансинтетаза

Тх А2 – тромбоксан А2

ФНП – функциональные нарушения пищеварения

ХС – холестерин

цАМФ – циклический аденозинмонофосфат

ЦО – циклооксигеназа

ЧДД – частота дыхательных движений

ЧСС – частота сердечных сокращений

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Знания по физиологии взрослых сельскохозяйственных живот­ных опираются на систематический экспериментально-физиоло­гический анализ. Экспериментальный подход к изучению особен­ностей физиологии сельскохозяйственных животных в раннем онтогенезе продолжает еще в большей мере осуществляться лишь эпизодически и по частным поводам. Знания особенностей физиологии сельскохозяйственных животных в раннем онтоге­незе весьма скудны. Почему и сейчас еще дает о себе знать необходимость эмпирического решения многих проблем, касаю­щихся различных сторон развития организма всех видов сель­скохозяйственных животных (Лысов В.Ф., 1977;  Лысов В.Ф. и др., 2003).

Цикл индивидуального развития организма определяется наследственностью. Наследственные возможности в полной мере реализу­ются лишь в том случае, если на каждом этапе развития орга­низму будут обеспечены те условия среды, которые для него специфичны и обязательны (Максимов В.И., 1974). В зависимости от степени отклонений условий среды от требующихся в фазе новорожденности имеет место либо адаптация организма, либо возникновение разнообразных форм патологии.

Крупным достижением ветеринарной науки явилось введение в практику различных средств и приемов, рассчитанных на восстановление нарушенного хода физиологических процессов при болезни животных. Однако использование всех этих средств и приемов не всегда приводит к эффективному резуль­тату, и успех или неуспех коррекции зависит в значительной степе­ни от состояния местной и общей реактивности организма. Местная и общая реактивность организма изменяется в ходе онтогенеза, формирования структур и функций (Карпунь И.М., 1989).

В общей структуре отклонений от физиологического состояния у  животных значимое место занимают функциональные нарушения в системе пищеварения у  молодняка. По данным департамента ветеринарии МСХ РФ на их долю  приходится более 50% случаев отклонений от физиологического состояния,  нередко приводящие  к гибели животного (Мосийко В.И. и др., 1989;  Кондрахин И.П., 2003).

Функциональные нарушения пищеварения молодняка крупного рогатого скота в первые дни жизни широко распространены и  являются одной из основных проблем ветеринарной практики, нанося значительный экономический ущерб (Урбан В.П. и др., 1984). Изучение этих состояний, разработка новых способов их коррекции и профилактики является неотложной проблемой ветеринарии, т.к.  удельный  вес функциональных нарушений пищеварения в заболеваемости молодняка составляет 40-60%, а падеж – 15-70% от общего числа новорожденных (Кибкало Л.И. и др., 2006; Мищенко В.А. и др., 2001). Это связано, прежде всего, с нарушением технологии содержания и кормления животных, несовершенством естественной защиты организма к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды (Зароза В.Г., 1985; Митюшин, В.В., 1988), а также  с отсутствием разработанных подходов к коррекции нарушений первичного гемостаза у новорожденных телят (Волков Г.К., 2003), дисфункции которого часто приводят к внутрисосудистой активации тромбоцитов, агрегации, микротромбозам во внутренних органах. Ущерб от функциональных нарушений пищеварения складывается из падежа, затрат на лечебные мероприятия, снижения продуктивных качеств и племенной ценности животных. Функциональные нарушения пищеварения имеют сложную этиологию, что создает трудности в коррекции и профилактике. Это вызывает необходимость поиска и разработки новых средств и схем коррекции, способных повысить эффективность ветеринарных мероприятий  (Жолондзь Я.З., 1984; Немченко М.И. и др., 1991). Особое значение в связи с высокой частотой возникновения у новорожденных телят функциональных нарушений пищеварения и для снижения причиняемого ущерба приобретает профилактика (Евдокимов С. М., 1997;  Немченко, М.И., 1988;  Субботин В.В. и др., 1998).

В настоящее время становится ясно, что функциональные нарушения пищеварения проявляются не только функциональным расстройством пищеварения, но и ведут к  ряду общих изменений в организме: к дисфункциям тромбоцитов,  обуславливающим  нарушение реологии крови, возникновению гипоксии и нарушениям сердечной недостаточности, снижению резистентности к респираторным болезням, интоксикации, нарушению обмена веществ и др. (Зинкевич, А.М., 1985; В.М. Подкопаев В.М. и др.,1985; Кондрахин, И.П., 2003; Конопаткин, А.А.,1984).

Повышение склонности к агрегации кровяных пластинок у новорожденных телят  ухудшает микроциркуляцию тканей и способствует тромбообразованию. В тоже время, характер возникающих сдвигов в первичном звене гемостаза и тонкие механизмы их реализации у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения изучены недостаточно. При этом патогенез тромбоцитопатии остается не раскрыт и не разработаны патогенетически обоснованные подходы ее коррекции.

  Остается невыясненным влияние различных индукторов и их сочетаний на агрегационные функции кровяных пластинок, имеющее место  в реальных условиях кровотока, не оценена морфологически степень активации тромбоцитов в просвете сосудов у новорожденных телят с риском развития и возникшими функциональными нарушениями пищеварения, не выяснено у них состояние ПОЛ тромбоцитов и активность антиокислительных ферментов кровяных пластинок, состояние тромбопластинообразования, липидный состав тромбоцитарных мембран и особенности обмена арахидоновой кислоты в кровяных пластинках. Не разработана тактика мероприятий, направленных одновременно на восстановление гемостатических нарушений с оптимизацией микроциркуляции, нормализацией обменных процессов и коррекцию функциональных нарушений пищеварения  у новорожденных телят.

Ранее не оценивались в сравнительном аспекте возможности различных методов коррекции с изолированным и сочетанным использованием энтеросорбентов и современных антимикробных препаратов - производных полигексаметиленгуанидина на агрегационную активность кровяных пластинок с различными индукторами и их сочетаниями in vitro и в условиях кровотока (in vivo). Не проводилась их сравнительная оценка по возможности корректировать морфологические изменения тромбоцитов при их активации в просвете сосудов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения. Не выяснено состояние ПОЛ, содержание средних молекул и активность антиокислительных ферментов в тромбоцитах у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения на фоне данной коррекции. Остается не исследованной динамика тромбопластинообразования, липидного состава тромбоцитарных мембран и особенности обмена арахидоновой кислоты в кровяных пластинках у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения с помощью данных видов коррекции.  В этой связи были сформулированы цель и задачи настоящего исследования. 

Цель исследования. Определить динамику параметров тромбоцитарного гемостаза у физиологически зрелых телят в период новорожденности, выявить его особенности при функциональных нарушениях пищеварения для поиска путей эффективной коррекции  тромбоцитопатии.

  Задачи исследования

  1. Изучить состояние тромбоцитарных функций у физиологически зрелых здоровых  новорожденных телят;
  2. Исследовать состояние тромбоцитарных функций у телят имеющих функциональные нарушения пищеварения в фазу новорожденности, находящихся в обычных хозяйственных условиях выращивания;
  3. Определить в плазме крови и тромбоцитах здоровых телят в фазу новорожденности содержание средних молекул, активность перекисного окисления липидов, уровень антиоксидантной защиты и липидный состав кровяных пластинок;
  4. Определить динамику содержания средних молекул, активности перекисного окисления липидов и состояния антиоксидантной защиты  плазмы крови и тромбоцитов, изменения липидного состава кровяных пластинок предрасполагающую к  развитию тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с риском развития функциональных нарушений пищеварения;
  5. Оценить в плазме крови и тромбоцитах телят с функциональными нарушениями пищеварения в фазу новорожденности содержание средних молекул, активность перекисного окисления липидов, состояние  антиоксидантной защиты и липидного состава кровяных пластинок;
  6. Определить степень влияния различных подходов к коррекции тромбоцитарных нарушений  у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения;
  7. Разработать и апробировать способ профилактики тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с риском развития  функциональных нарушений пищеварения.

Научная новизна исследования

  1. Впервые у здоровых физиологически зрелых и  физиологически незрелых новорожденных телят, до возникновения функциональных нарушений пищеварения и после их развития  изучено состояние первичного гемостаза, антиоксидантной защиты тромбоцитов, липидный состав их мембран, активность ПОЛ, и установлено гематологическими исследованиями у телят, подверженных риску возникновения функциональных нарушений пищеварения, что еще до проявления внешне выраженных признаков расстройства пищеварения выявляются повышенный уровень средних молекул, активация ПОЛ и ослабление антиоксидантной защиты  жидкой части крови и тромбоцитов с признаками тромбоцитопатии.
  2. Разработан и апробирован способ коррекции функциональных нарушений пищеварения у новорожденных телят, нормализующий активность тромбоцитов, включающий в себя сочетание «Фосфопага», энтеросорбента «Экос» и кальция глюконата.
  3. Полученные данные о повышенном содержании в плазме крови средних молекул, активизации ПОЛ плазмы и тромбоцитов при наличии мембранопатии кровяных пластинок у новорожденных телят с обязательно развивающимися у них в последующем функциональных нарушений пищеварения и тромбоцитопатии, позволяет считать эти изменения  ранними предвестниками их развития и служить основанием для проведения мер профилактики, направленных на нормализацию свойств тромбоцитов.
  4. Для практического применения предложен способ профилактики развития функциональных нарушений пищеварения и тромбоцитопатии у новорожденных телят с нормализацией  у них субфизиологических нарушений первичного гемостаза, включающий сочетание «Фосфопага», энтеросорбента «Экос» и кальция глюконата.

Практическая значимость работы

  1. Установлено, что у физиологически зрелых телят в течение всей фазы  новорожденности сохраняется стабильность функционального состояния кровяных пластинок, способствуя адаптации организма животного к внеутробному  существованию.
  2. Выяснена патогенетическая роль повышения уровня средних молекул, активации ПОЛ, ослабления антиоксидантной защиты плазмы и тромбоцитов в формировании реологических  нарушений тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения, что открывает новое направление для поиска средств нормализации первичного гемостаза.
  3. Проведенная апробация различных корректирующих подходов  (традиционная коррекция, сорбент «Экос», «Биопаг-Д», «Фосфопаг», сочетание «Фосфопага» и «Экоса», а также сочетание «Фосфопага», «Экоса» и кальция глюконата) позволила выявить наиболее эффективный способ коррекции тромбоцитопатии при функциональных нарушениях пищеварения и их профилактики у новорожденных телят, состоящий из «Фосфопага», «Экоса» и кальция глюконата, способный полностью нормализовывать липидный состав мембран тромбоцитов, антиоксидантную защиту, активность ПОЛ плазмы и кровяных пластинок и  реологические дисфункции тромбоцитов, исключая  тромботические осложнения, нарушения микроциркуляции и ослабление трофики тканей растущего организма.
  4. У новорожденных телят с риском развития  функциональных нарушений пищеварения для профилактики развития тромбоцитопатии необходимо восьмидневное применение сочетания «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция.

Основные положения, выносимые на защиту

  1. Показатели тромбоцитарного гемостаза у здоровых телят характеризуются стабильностью показателей в фазу новорожденности.
  2. При функциональных нарушениях пищеварения у новорожденных телят происходит активация тромбоцитарного гемостаза с усилением агрегации кровяных пластинок in vivo и in vitro.
  3. Реологические свойства кровяных пластинок при функциональных нарушениях пищеварения у новорожденных телят изменяются в результате повышения активности ПОЛ и увеличения содержания средних молекул в плазме крови и тромбоцитах, что способствует ухудшению микроциркуляции.
  4. Применением «Фосфопага», глюконата кальция и сорбента «Экос» у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения можно корректировать уровень средних молекул, активность ПОЛ, антиоксидантную защиту плазмы и тромбоцитов, и тем самым способствовать выздоровлению животных.
  5. Комплекс препаратов, включающий «Фосфопаг», глюконат кальция и сорбент «Экос» у физиологически незрелых новорожденных телят с риском развития функциональных нарушений пищеварения нормализует субфизиологические отклонения в тромбоцитарном гемостазе.

Реализация результатов исследования. Полученные данные внедрены в работу ветеринарной службы Фатежского, Советского, Суджанского, Октябрьского, Золотухинского, Курского, Железногорского, Обоянского, Конышовского районов Курской области и в педроцесс в Белгородской сельскохозяйственной академии.

Апробация. Апробация проведена на расширенном заседании кафедры АФК и спорта КИСО (филиал) РГСУ, кафедры физиологии Курской государственной сельскохозяйственной академии им. И.И. Иванова с привлечением сотрудников Белгородского государственного университета, Белгородской сельскохозяйственной академии  и Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН 27 декабря 2007г.

Публикации. Материалы диссертации доложены на Международной научно-практической конференции «Экология, окружающая среда и здоровье населения Центрального Черноземья (2005), X съезде биохимиков Украины (2006), Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества (2007, 2008), IV научной конференции с международным участием «Проблемы агропромышленного комплекса (2007), XI Международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (2007), 19 Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (2007), научном симпозиуме специалистов, молодых ученых и студентов «Адаптивные реакции в биологии и медицине» (2007, 2008) в рамках Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества».

По теме диссертации опубликованы 62 работы, в т.ч. 2 монографии, 9 статей в журналах, вошедших в перечень, рекомендованный ВАКом, получено 3 патента на изобретение.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя использованной литературы, содержащей 364 отечественных и 78 зарубежных источника,  двух приложений, полностью раскрывающих суть примененных корректирующих подходов. Диссертация изложена на 250 страницах машинописи, включает 57 таблиц и 34 рисунка.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Характеристика обследованных телят

Материалы диссертации получены при работе в Курском институте социального образования (филиал) РГСУ совместно с Медведевым Ильей Николаевичем и Беловой Татьяной Александровной, давших согласие на их оформление в виде диссертационного исследования.

Под наблюдением находились телята хозяйств Курской области. В исследование включались здоровые новорожденные телята сементальской и чернопестрой породы в день отела от здоровых коров 1-2 отела с нормально протекавшей беременностью и не имевших отклонений в результатах лабораторных анализов согласно использованных в настоящей работе методов. Во время беременности коровы, полученные от которых телята были включены в настоящее исследование, находились на рациональном режиме питания (Калашников А.П., 2003). Общее количество телят, прошедших первичный осмотр и обследование, составило 449 голов. Здоровые телята осматривались и обследовались за период новорожденности 5 раз (1-2 сут., 3-4 сут., 5-6 сут., 7-8 сут., 9-10 сут.). Все оставшиеся здоровыми телята были физиологически зрелыми. В случае возникновения признаков ФНП у теленка не позднее, чем через 0,5 суток, определялись все оцениваемые показатели и применялся в течение последующих 10 дней один из используемых в работе видов коррекции с оценкой тех же показателей по ее завершению. Общее число телят, у которых за период новорожденности развились ФНП, составило  153 (36,7%), при этом 296 (63,3%) остались здоровыми, в т.ч. 29  здоровых новорожденных телят с риском облигатного развития ФНП, которым был проведен курс успешной профилактической коррекции. Из новорожденных телят с развившимися ФНП 146 (95,4%) имели признаки физиологической незрелости. Содержание новорожденных животных осуществлялось в стандартных условиях телятника при нередко избыточной выпойке молозивом.

  С учетом способа коррекции тромбоцитарных нарушений новорожденные  телята с ФНП были подразделены на 6 групп. Количество новорожденных животных с ФНП в группах составило соответственно 25(16,4%), 25 (16,4%), 25 (16,4%) 25 (16,4%), 27 (17,4%) и 26 (17,0%).        В первой группе новорожденных телят с ФНП в течение 10 суток коррекцию производили с помощью традиционного для данных хозяйств подхода, включающего голод на 10-12 часов с последующим назначением небольших доз молозива (1/4 от обычного количества) 5-6 раз в сутки с постепенным доведением его объема молозива до нормы. За 15 мин до выпаивания телятам давали  50,0мл натурального желудочного сока, разбавленного 50,0мл теплой воды.

Вторую группу составили телята, которым в схему выпаивания вечером включали в виде водной взвеси гидроалюмосиликатный сорбент – «Экос» (производство Белгородского государственного университета) 150мг/кг живой массы в течение 10 суток на ночь.

  В третьей группе животных коррекцию производили выпаиванием утром 0,01% раствора  полигексаметиленгуанидин хлорида («Биопаг-Д», производства Института эколого-технологических проблем г.Москва) по 100,0 мл в сутки в течении 10 дней.

Четвертая группа новорожденных телят находилась на коррекции с помощью выпаивания утром полигексаметиленгуанидин фосфата («Фосфопаг», производства Института эколого-технологических проблем г.Москва) в растворе 0,01% по 100,0 мл в сутки в течении 10 дней.

  В пятой группе новорожденных телят с ФНП в течение 10 дней применялось сочетание «Фосфопага» и «Экос» с распределением их в течение суток следующим образом: 0,01% «Фосфопага» 100,0 в утренние часы, а «Экос» 150мг/кг на ночь для исключения сорбции «Экосом» «Фосфопага».

  В шестой группе новорожденных телят в течение  10 суток было применено сочетание 0,01% «Фосфопаг» 100,0 мл утром, 10% 10,0 мл глюконата кальция в обед и «Экос» 150мг/кг вечером.

Группа контроля представлена  267 здоровыми новорожденными телятами, не имевшими отклонений в объективном статусе и в результатах лабораторных исследований.

  Группа профилактической коррекции представлена 29 здоровыми новорожденными телятами с риском облигатного развития ФНП, обследованных в суточном возрасте. С целью профилактики ФНП и нивелирования зарегистрированных у них отклонений, проводился 8-дневный превентивный курс коррекции: 0,01% «Фосфопаг» 100,0 мл утром, 10% 10,0 мл кальция глюконат в обед и «Экос» 150мг/кг вечером.

Методы исследования

       Морфо-биологический анализ крови включал определение эритроцитов и лейкоцитов (Битюков И.П. и др., 1990); гемоглобина – гемоглобинцианидным методом; гематокритной величины – по И.Тодорову (1963); общего белка в сыворотке крови (Колб В.Г. и др., 1982).        

       Активность перекисного окисления липидов в плазме оценивалась по содержанию ТБК-активных продуктов набором фирмы ООО „Агат-Мед” и ацилгидроперекисей (Гаврилов В.Б. и соавт., 1983). Для оценки антиокислительного потенциала жидкой части крови определялась ее антиокислительная активность по Волчегорскому И.А. и соавт. (2000). В плазме оценивали уровень средних молекул по Габриелян Н.Г., Липатова В.И. и др. (1985) при 280нм и 254нм.

       Состояние внутритромбоцитарного ПОЛ определяли по концентрации базального уровня МДА в реакции восстановления тиобарбитуровой кислотой в отмытых и ресуспендированных тромбоцитах на основе принципа метода Shmith J.B. et al. (1976) в модификации Кубатиева, А.А., Андреева С.В. (1979) и содержанию ацилгидроперекисей (Гаврилов В.Б. и соавт., 1983). В отмытых и ресуспендированных тромбоцитах определяли содержание средних молекул по Габриелян Н.Г., Липатова В.И. и др. (1985) при 280нм и 254нм.,  уровни общего холестерина энзиматическим колориметрическим методом набором „Витал Диагностикум” и общих фосфолипидов по содержанию в них фосфора (Колб, В.Г. и др., 1982) с последующим расчетом отношения ХС/ОФЛ в тромбоцитах. Активность внутритромбоцитарных антиоксидантных ферментов устанавливали для каталазы и супероксиддисмутазы (Чевари С. и др., 1991).

       Подсчитывали количество тромбоцитов в капиллярной крови в камере Горяева. Агрегационная активность тромбоцитов оценивалась визуальным микрометодом по Шитиковой А.С. (1999) с использованием в качестве индукторов АДФ (0,510-4 М.), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125ед/мл.), ристомицина (0,8 мг/мл.), адреналина (5,010-6 М.), а также сочетания АДФ+адреналин, АДФ+коллаген и коллаген+адреналин в приведенных концентрациях.

       Продукты лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов – активаторы свертывания (Ф3 –тромбоцитов) оценивали по методу Е.Д. Еремина (1974) с вычислением индекса тромбоцитарной активности. Активность и время образования тромбоцитарного тромбопластина выявляли по методу Biggs R., Douglas A.S., Macfarlane R.G. (1953).

       Для косвенной оценки обмена эндогенной арахидоновой кислоты в тромбоцитах, а также активности в них циклооксигеназы  и тромбоксансинтетазы  – ферментов, непосредственно осуществляющих образование тромбоксана в кровяных пластинках, использованы три пробы переноса по методу Ермолаевой Т.А. и соавт. (1992) с регистрацией агрегации тромбоцитов на фотоэлектроколориметре.

       Морфологическое определение внутрисосудистой активности тромбоцитов производилось с использованием фазово-контрастного микроскопа по методу Шитиковой А.С. и соавт. (1997).

Производилось измерение температуры тела животного, подсчет ЧСС, ЧДД при каждом осмотре.

  Статистическую обработку результатов проводили с использованием критерия (t) Стьюдента и коэффициента корреляции (r) (Бредерфорд Хилл  А., 1958;  Углова М.В. и др., 1982).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Динамика состояния здоровых телят в фазу новорожденности

Общая физиологическая характеристика здоровых новорожденных телят

  Все взятые в исследование животные находились под постоянным наблюдением. Перед каждым исследованием в течение всего периода новорожденности у них определяли основные физиологические параметры, проводили морфологический и биохимический анализы крови, показавшие, что оцениваемые общие функциональные и биохимические величины у здоровых новорожденных телят в течение всего периода новорожденности находились в пределах физиологической нормы, достоверно не отличаясь от исследования к исследованию.

Содержание средних молекул и продуктов ПОЛ в плазме крови

здоровых новорожденных телят

  Уровень СМ и ПОЛ плазмы в исходном состоянии определяли у  всех  267 здоровых новорожденных телят.

Уровень СМ у здоровых телят в возрасте (1-2 суток) составлял СМ 280  0,36±0,04 усл. ед., СМ 254  0,28±0,01 усл. ед.,  в последующем  оставался на данном уровне в течение всей фазы  новорожденности.

  Уровень ТБК-активых продуктов в жидкой части крови здоровых новорожденных животных составил: 1-2 сут. -  3,90±0,04 мкмоль/л,  3-4 сут. – 3,98±0,07 мкмоль/л,  5-6 сут. -3,89±0,07 мкмоль/л, 7-8 сут. - 3,95±0,08 мкмоль/л, 9-10 сут.- 3,94±0,03 мкмоль/л. Содержание АГП у них составляло: 1-2 сут.- 1,80±0,06 Д233/1мл, 3-4 сут. - 1,96±0,04 Д233/1мл, 5-6 сут. - 1,99±0,02 Д233/1мл, 7-8 сут. - 1,88±0,09 Д233/1мл, 9-10 сут. – 1,94±0,01 Д233/1мл, соответственно, указывая на отсутствие достоверной динамики уровня ПОЛ плазмы в период новорожденности у телят. Найденный уровень пероксидации был возможен в результате стабильности антиоксидантной защиты организма животных в первые 10 суток жизни  – их  антиоксидантный потенциал плазмы составлял в среднем 28,6±0,04%, колеблясь от  28,0±0,03% до 28,9±0,04%.

Таким образом, у здоровых телят в фазу новорожденности выявлено постоянство содержания СМ и ПОЛ плазмы при отсутствии достоверной динамики АОА плазмы, что указывало на стабильность механизмов их регулирующих у здорового молодняка крупного рогатого скота в первые 10 дней жизни.

Средние молекулы, ПОЛ и антиоксидантная защита тромбоцитов у здоровых новорожденных телят

В течение первых 10 дней жизни у здоровых телят в составе мембран тромбоцитов в среднем содержалось холестерина и ОФЛ 0,73±0,001мкмоль/109тр. и 0,49±0,002 мкмоль/109тр., соответственно, при уровне  соотношения ХС/ОФЛ в тромбоцитах 1,48±0,01, что указывало на стабильность в данный возрастной период жесткости и текучести их мембран. Это создавало условия стабильности уровня ПОЛ в кровяных пластинках и, в конечном счете, активности тромбоцитов, позволяя сохранить у животных микроциркуляцию на оптимальном уровне в течение периода адаптации их организма к условиям внешней среды.

  Концентрация первичных продуктов ПОЛ-АГП в тромбоцитах здоровых телят в возрасте 1-2 суток находилась на уровне 2,90±0,02 Д233/109тр., достоверно не меняясь в течение всей фазы новорожденности, составляя в среднем 2,87±0,04 Д233/109тр. При этом, уровень базального МДА в тромбоцитах – конечного продукта ПОЛ в 1-2 сутки жизни у телят составил 0,86±0,05 нмоль/109тр., также не меняясь в течение всего периода, составляя в среднем за весь период 0,89±0,02 нмоль/109тр.

Стабильность уровня ПОЛ в тромбоцитах здоровых новорожденных телят стала возможной вследствие неизменности в данную фазу их антиоксидантной защиты и, в первую очередь, каталазы и супероксиддисмутазы 10500,0±11,05 МЕ/109тр. и 1780,0±2,06 МЕ/109тр., соответственно.

В течение всей фазы новорожденности количество СМ280 и СМ254 в кровяных пластинках также было стабильным, составляя в среднем 0,050±0,004усл.ед/109тр.  и 0,055±0,004 усл.ед./109тр., соответственно.

  Таким образом, в мембранах тромбоцитов здоровых телят, в течение всей фазы новорожденности содержание ХС, ОФЛ остается стабильным, испытывая слабые незначительные колебания. Это во многом обуславливает постоянный уровень актиоксидантной защиты кровяных пластинок с сохранением стабильности в тромбоцитах содержания СМ, продуктов ПОЛ, обеспечивая адаптацию структур тромбоцитов к условиям внеутробного существования.

Тромбоцитарный гемостаз у здоровых новорожденных телят

Исследование тромбоцитарного гемостаза у здоровых новорожденных телят выявило отсутствие достоверной динамики оцениваемых функций кровяных пластинок при сохранении содержания количества тромбоцитов в кровотоке животных в границах нормы.

  Показатель ИТА, являющийся высоко значимым показателем при оценке активации тромбоцитов при стимуляции процесса свертывания крови, составлял в первые двое суток жизни телят 25,3±0,05%, оставаясь на данном уровне в течение всей новорожденности. У здоровых телят была установлена стабильность  активности тромбопластина за фазу  новорожденности, составляв среднем 14,0±0,05с. при времени его образования 2,40±0,01мин. 

Одной из причин стабильности состояния  АТ у телят в фазу новорожденности можно считать отсутствие динамики уровня обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах при оптимальном уровне  тромбоксанообразования, косвенно зарегистрированного в простой пробе переноса (30,3± 0,01%).

       Стабильный уровень метаболизма АА в кровяных пластинках здоровых новорожденных телят отмечался во многом вследствие отсутствия достоверной динамики двух ключевых ферментов ее превращения в тромбоцитах – циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы. Восстановление АТ в коллаген-аспириновой пробе, косвенно оценивающей активность ЦО в тромбоцитах в среднем в этот возрастной период составляло 78,4 ±0,19%. Восстановление АТ в коллаген-имидазольной пробе, позволяющей косвенно определить состояние ТС в кровяных пластинках, также не испытывало у телят в период новорожденности достоверных колебаний, составляя в среднем 39,2±0,02%.

У новорожденных в 1-2 суточном возрасте время развития АТ под влиянием коллагена составляло 29,4±0,26с., находясь на данном уровне в в течение всей новорожденности. Аналогичная динамика АТ у здоровых новорожденных животных отмечена под влиянием АДФ (в среднем 39,0±0,28с.) и ристомицина (в среднем 41,0±0,26с.). В более поздние сроки развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ, также при отсутствии их достоверной динамики в течение периода новорожденности, составляя в среднем за фазу 54,0±0,2с. и 97,0±0,45 с., соответственно. Установленное отсутствие динамики АТ у новорожденных телят при изолированном применении индукторов согласовалось со стабильностью  у них времени развития АТ на фоне их сочетания,  имеющего место в реальных условиях кровотока, позволило в большей степени приблизить наше представление об АТ in vivo у здоровых  животных к реально возникающему в их кровяном русле агрегационному процессу тромбоцитов в течение всей фазы новорожденности, подтвержденной динамикой ВАТ.

Уровень дискоцитов в крови у здоровых новорожденных телят  в первые 1-2 суток жизни составил  76,1±0,03%, достоверно не меняясь на протяжении всего периода новорожденности (в среднем - 82,0±0,16%). Количество диско-эхиноцитов в их кровотоке (в среднем 10,3±0,1%), а также содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов, также оставалось стабильным на протяжении всей фазы новорожденности. Вследствие этого сумма активных форм тромбоцитов также не претерпела достоверных изменений, составляя в среднем 18,0±0,2%. В кровотоке новорожденных телят уровни свободноциркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов не имели достоверной динамики, составляя в начале периода новорожденности 3,4±0,06 и 0,15±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцита и  в конце 3,8±0,06 и 0,13±0,02 на 100 свободно лежащих тромбоцита, соответственно. Количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования, у здоровых телят  на начало, и конец фазы  новорожденности составило 5,3±0,08% и 5,3±0,02%. Эти данные говорят о достоверной стабильности ВАТ in vivo в течение всего периода новорожденности у здоровых телят, обеспечивая у них оптимальную микроциркуляцию во время адаптации к внеутробному существованию.

  Таким образом, стабильность активности кровяных пластинок у здоровых новорожденных телят обуславливает постоянство у них ВАТ, оптимальный уровень реологии крови и микроциркуляции в тканях, способствуя нормальному росту и развитию животных. Важную роль в этом играет отсутствие достоверной динамики в первые 10 дней жизни у телят  содержание в плазме и тромбоцитах СМ и ПОЛ.

Исходное состояние новорожденных телят с ФНП

Общая характеристика новорожденных телят с ФНП

Уровень СМ у здоровых телят (1-2 суток) до развития у них ФНП был повышен против контроля, дополнительно увеличиваясь при их возникновении.

Наряду с ростом уровня СМ у телят с ФНП обнаружена активация ПОЛ плазмы. Уровень ТБК-активых продуктов в жидкой части крови этих животных был в 1,3 раза выше, чем в группе контроля, причем перед развитием ФНП  он превышал контроль в 1,1 раза. Содержание АГП в плазме также было выше  контрольных значений, нарастая с 2,80±0,01 Д233/1мл до 3,50±0,01 Д233/1мл. Усиление пероксидации стало возможным в результате ослабления антиоксидантной защиты организма животных – антиоксидантный потенциал плазмы на фоне ФНП у них снижался с 23,6±0,03% до уровня 20,3±0,1%.

Таким образом, у телят с ФНП  при исследовании содержания СМ крови и ПОЛ плазмы установлено увеличение данных показателей перед возникновением ФНП, дополнительно повышающихся на фоне их развития.

Биохимические показатели тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения 

Установлено, что в составе мембран тромбоцитов телят с ФНП  было повышено содержание холестерина и снижено ОФЛ, сопровождаясь  увеличением соотношения в них ХС/ОФЛ, что обуславливало повышение жесткости и уменьшение текучести их мембран. Это создавало условия для усиления ПОЛ в кровяных пластинках и в конечном счете активации тромбоцитов (табл. 1).

Таблица 1. Биохимические показатели тромбоцитов у новорожденных

телят с ФНП

Параметры

Здоровые телята (1-2 суток), у которых  в последующем возникали  ФНП,  n=153, M±m

Новорожденные телята с ФНП,

n=153, M±m

Контроль.

n=267,

M±m

ХС тромбоцитов, мкмоль/109тр.

0,80±0,02

0,82±0,001

*

0,73±0,001

Р<0,01

Р2<0,01

ОФЛ тромбоцитов,

мкмоль/109тр.

0,40±0,05

0,38±0,001

*

0,49±0,002

Р<0,01

Р2<0,01

ХС/ОФЛ тромбоцитов

2,00±0,04

2,15±0,02

*

1,48±0,01

Р<0,01

Р2<0,01

АГП тромбоцитов,

Д233/109тр.

3,05±0,04

3,49±0,01

Р1<0,05

2,87±0,04

Р<0,01

Р2<0,01

Базальный МДА тромбоцитов,

нмоль/109тр.

1,20±0,001

1,54±0,004

Р1<0,01

0,89±0,002

Р<0,01

Р2<0,01

Средние молекулы 280 тромбоцитов, усл. ед./109тр.

0,055±0,001

0,061±0,002

Р1<0,05

0,050±0,004

Р<0,01

Р2<0,01

Средние молекулы 254 тромбоцитов, усл. ед./109тр.

0,061±0,002

0,069±0,003

Р1<0,05

0,055±0,004

Р<0,01

Р2<0,01

Каталаза тромбоцитов, МЕ/109тр.

7820,0±26,50

5690,0±21,00

Р1<0,01

10500,0±11,05

Р<0,01

Р2<0,01

СОД тромбоцитов,

МЕ/ 109тр.

1470,0±6,75

1250,0±4,36

Р1<0,01

1780,0±2,06

Р<0,01

Р2<0,01

  Условные обозначения: Р- достоверность различий между группой телят с ФНП и контролем, Р1 – достоверность различий до и после развития ФНП у телят, Р2 – достоверность различий между здоровыми телятами с развившимися в последующем ФНП и контролем. В последующих таблицах обозначения сходные.

  Полученные данные позволяют говорить о врожденной мембранопатии тромбоцитов у телят, с развившимися в последующем ФНП в фазу новорожденности. Нарушение соотношения ХС с ОФЛ мембран кровяных пластинок изменяет рецепторные и пострецепторные механизмы функционирования тромбоцитов, способствуя снижению антиоксидантной защиты кровяных пластинок.

  Концентрация первичных продуктов ПОЛ-АГП в тромбоцитах здоровых телят в возрасте 1-2 суток, до возникновения ФНП оказалось повышенной, еще более увеличиваясь при их развитии. Это свидетельствует об активации свободнорадикальных процессов в их кровяных пластинках. Уровень базального МДА в тромбоцитах – конечного продукта ПОЛ был также достоверно выше контроля еще до развития болезни (1,20±0,001 нмоль/109тр.), дополнительно возрастая при манифестации ФНП– 1,34±0,004 нмоль/109тр.

Усиление ПОЛ в тромбоцитах телят с ФНП стало возможно из-за ослабления их антиоксидантной защиты и, в первую очередь, активности каталазы (снижена в 1,34 раза перед развитием ФНП и в 1,84 раза на его фоне по сравнению с контролем) и супероксиддисмутазы (снижена в 1,21раза и 1,42 раза, соответственно).

  Количество СМ280 и СМ254в кровяных пластинках (0,055±0,01усл.ед/109тр.  и 0,061±0,02 усл.ед./109тр., соответственно) телят до возникновения ФНП  превышал контрольные значения (Р<0,01). Уровни  СМ280 и СМ254 на фоне ФНП у новорожденных телят дополнительно возрастали и были больше контроля в 1,22 и 1,25 раза, соответственно, свидетельствуя об активации беспорядочного протеолиза белков внутри тромбоцитов. 

Корреляционный анализ выявил наличие обратной сильной связи между подавлением активности каталазы и СОД и содержанием СМ280 и СМ254 в кровяных пластинках – r=-0,75 (t=3,42) , r=-0,82 (t=4,20) и r=-0,73 (t=4,29), r=-0,76 (t=4,11), соответственно. Это указывало на один из возможных механизмов активации тромбоцитарного гемостаза посредством продуктов аномального протеолиза, активно идущего  при  функциональных нарушениях пищеварения.

  Таким образом, в мембранах тромбоцитов новорожденных телят с ФНП еще до их развития было увеличено содержание ХС, снижен уровень ОФЛ и ослаблена  актиоксидантная защита кровяных пластинок. Это обуславливает активацию ПОЛ, повреждающего структуры тромбоцитов, дополнительно повышающее их функциональную активность и увеличивающее содержание СМ.

Тромбоцитарный гемостаз у новорожденных телят с ФНП

При ФНП количество тромбоцитов в крови оставалось без изменений. ИТА в группе животных до ФНП возрастал с 32,6±0,03% до 39,2±0,05% на фоне их развития (в контроле – 26,0±0,03%). У телят с ФНП было найдено повышение активности (Р<0,01) тромбопластина с 12,0±0,02с. перед их возникновением  и  9,6±0,02с. на его фоне с компенсаторным замедлением его синтеза до 2,95±0,05 мин. (в контроле – 2,40±0,01мин.).

Одним из механизмов ускорения развития АТ при ФНП можно считать интенсификацию обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах с повышением  тромбоксанообразования. Так до развития ФНП в простой пробе переноса, косвенно зарегистрировано усиление синтеза в тромбоцитах проагрегантных метаболитов АА, в том числе ТхА2 максимально увеличивающееся на фоне ФНП за счет активации ЦО и ТС, активность которых нарастала при развитии ФНП.

Таким образом, одной из причин усиления АТ у  телят с ФНП является  активация метаболизма АА синтезирующих  ТхА2.

       Важную роль в активации самой биферментной системы тромбоксанообразования в кровяных пластинках  играет увеличение СМ в тромбоцитах при ФНП. Рост  СМ280 и СМ254 сильно прямо коррелировал с восстановлением АТ в простой пробе переноса – r = 0,82 (t = 5,86) и r = 0,76 (t = 8,90), что говорит о тесной взаимосвязи повышения уровня СМ в тромбоцитах и активации тромбоцитарных функций в условиях ФНП.        

У телят на фоне манифестации ФНП отмечалось ускорение АТ, особенно под влиянием коллагена (табл.2). Несколько медленнее АТ развивалась у этих животных под влиянием ристомицина и АДФ. Тромбиновая и адреналиновая АТ также развивались быстрее, чем в контроле (Р<0,01). Время развития АТ на фоне сочетания индукторов было еще более укороченным за счет взаимопотенциирующего действия индукторов.

По ранней АТ с ристомицином, который по своей способности влиять на тромбоциты, идентичен субэндотелиальным структурам сосудов косвенно зарегистрировано повышение уровня ФВ при ФНП. Известно, что ФВ способен соединяться одним концом молекулы с коллагеном, а другим с тромбоцитом через рецептор – гликопротеид Iв, формируя „ось адгезии”: коллаген – ФВ – GPIв, что позволяет предполагать повышение числа этих рецепторов на тромбоцитарных мембранах.

Таблица 2. Агрегационная активность тромбоцитов у новорожденных телят с ФНП

  Усиление адгезивной способности тромбоцитов на фоне нормального их количества, реализующейся в мелких и крупных кровеносных сосудах, создает опасность активации агрегации тромбоцитов в сосудах любого калибра. По всей вероятности данный механизм активации тромбоцитов сочетается с интенсификацией внутритромбоцитарных путей активации кровяных пластинок, что было обнаружено при исследовании АТ у новорожденных  животных с ФНП.

Связь сильных агонистов агрегации – коллагена и тромбина в стандартных концентрациях с рецепторами на мембране тромбоцитов ведет к активации фосфолипазы С, стимуляции фосфоинозитольного пути через диацилглицерол и протеинкиназу С с фосфолирированием белков сократительной системы. Инозитолтрифосфат способствует выходу Са2+ из внутритромбоцитарных депо, обуславливая интенсификацию сокращения актомиозина.

       Слабые агонисты агрегации тромбоцитов – АДФ и адреналин взаимодействуют с рецепторами их мембраны и вызывают экспрессию фибриногеновых рецепторов (GPIIв-IIIа), стимулируют фосфолипазу А2, регулирующую выход из фосфолипидов арахидоновой кислоты с усилением образования ТХА2,  стимулирующего АТ  посредством фосфолипазы А2 и С и прямого выхода Са2+ в цитоплазму.

  Не исключено, что видная роль в усилении АТ с сильными и слабыми индукторами играют сдвиги в липидном составе мембран тромбоцитов, связанные с их нагруженностью ХС, снижением ОФЛ  и усилением в них ПОЛ.

  Сочетанное использование двух индукторов агрегации, имеющих место в реальных условиях кровотока позволило приблизить наше представление об АТ in vivo у новорожденных животных с ФНП животных к реально возникающему в их кровяном русле агрегационному процессу тромбоцитов.

Корреляционный анализ выявил статистически значимые обратные сильные и  средней силы связи между содержанием СМ280 и СМ254 , АГП и ТБК-соединений в крови телят с ФНП одной стороны и активностью у них АТ под влиянием всех примененных индукторов и их сочетаний с другой.  При сочетании индукторов статистическая связь АТ с СМ плазмы была выше, чем в случае одного индуктора, причем связь АТ с СМ254 оказалась максимальной.

Статистическая связь  АГП и МДА тромбоцитов и АТ оказалась обратной и для большинства индукторов средней силы.

  Повышение способности кровяных пластинок к агрегации in vitro до возникновения ФНП, усиливающееся при их развитии  у телят сочеталась с усилением АТ in vivo.

Высокая ВАТ косвенно говорит о доступности коллагена сосудистой стенки вследствие повреждения эндотелия и повышения в крови телят с нарушениях пищеварения различных индукторов агрегации (тромбина, АДФ, адреналина). Вероятно, токсические и бактериальные агенты, появляющиеся в крови при ФНП ведут к возникновению микротравм сосудистых стенок, что неизбежно вызывает усиление ВАТ у этих телят.

  Дискоциты в крови у здоровых телят с развивающимися в последующем ФНП составили  70,0±0,3%, при манифестации ФНП - 62,0±0,2%. Количество диско-эхиноцитов на этом фоне увеличивалось до 18,0±0,4%. При этом, содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов при развитии ФНП также значительно превышало контрольные значения. Сумма активных форм тромбоцитов достоверно увеличивалась, число  малых и больших агрегатов в свободной циркуляции в кровотоке телят при функциональных нарушениях пищеварения возросло почти в 2 раза. Количество тромбоцитов в агрегатах при функциональных нарушениях пищеварения достигало 14,6±0,02%, против 5,0±0,2% в контроле (табл. 3).

  Ведущими механизмами этого усиления можно считать рост содержания СМ в тромбоцитах и плазме, происходящий на фоне изменения липидного состава мембран кровяных пластинок с последующей  активизацией обмена арахидоновой кислоты с интенсификацией в них тромбоксанообразования за счет усиления функции тромбоцитарных циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы.

Проведенный корреляционный анализ между суммой активных форм тромбоцитов и уровнем внутритромбоцитарных МДА и АГП  выявил прямую связь средней силы – r = 0,50 (t = 3,60) и r = 0,56 (t = 5,38), соответственно. При этом, между суммой активных форм тромбоцитов и содержанием в кровяных пластинках средних молекул на 280нм и 254 нм найдена сильная прямая корреляционная связь -  r = 0,78 (t = 10,55) и  r = 0,84 (t = 8,65), соответственно.

Таблица 3. Внутрисосудистая активность тромбоцитов у новорожденных телят с ФНП

Таким образом, повышение активности кровяных пластинок у новорожденных телят с ФНП способствует усилению у них ВАТ, ухудшению реологии крови и увеличению риска тромботических осложнений. Особую роль в этом играет увеличение содержания в тромбоцитах СМ и активное  внутритромбоцитарное ПОЛ.

  Выявленные нарушения тромбоцитарных функций у новорожденных телят с ФНП требовали поиска адекватных подходов к их коррекции. С этой целью в хозяйствах, в которых велись исследования, были апробированы - традиционная коррекция, сорбент «Экос», препараты «Биопаг-Д» и «Фосфопаг» и сочетание «Фосфопага» и «Экоса», а также комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция. Полная нормализация всех нарушенных параметров тромбоцитарного гемостаза у телят произошла на фоне комплексной коррекции, тогда как традиционная коррекция и сорбент «Экос» обеспечили весьма скромную динамику оцениваемых показателей, «Биопаг-Д» и «Фосфопаг» оказали более выраженное позитивное влияние, а сочетание «Фосфопага» и «Экоса» приблизило все параметры к уровню контроля, однако не позволило достичь ни по одному из значений уровня, характерного для здоровых животных.

Коррекция состояния новорожденных телят с  ФНП комплексом из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция

Физиологическая характеристика новорожденных телят с ФНП при комплексной коррекции

Все взятые в исследование животные находились под постоянным наблюдением. В начале и в конце применения корректирующего комплекса из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция у животных определяли основные физиологические параметры, проводили морфологический и биохимический анализы крови. Результаты этих исследований показывают, что к 10 дню коррекции ФНП купировались в 100% случаев, а измеряемые функциональные и  биохимические показатели у новорожденных телят соответствовали  физиологической норме.

Астенического синдрома не отмечалось ни в одном случае, что свидетельствует о переводе обмена веществ телят на уровень метаболизма, соответствующего обмену здоровых животных. 

Содержание средних молекул и продуктов ПОЛ в плазме крови телят с ФНП при комплексной коррекции

Уровни СМ280 и СМ254 плазмы крови через 10 дней комплексной коррекции претерпели достоверную положительную динамику,  не отличаясь от контроля.

Наряду со снижением уровня СМ у телят с ФНП при комплексной коррекции обнаружена положительная динамика  ПОЛ плазмы - уровень ТБК-активых продуктов - 3,93±0,06мкмоль/л, АГП в плазме 1,90±0,01 Д233/1мл  соответствовали контрольным значениям. Ослабление ПОЛ стало возможным в результате нормализации антиоксидантного потенциала плазмы с 21,2±0,06% до  28,3±0,02% (в контроле  28,6±0,04%).

  Достижение  уровня  контрольных значений СМ, активности ПОЛ и антиоксидантного потенциала крови у новорожденных телят при комплексной коррекции нивелировало риск патологической стимуляции тромбоцитарного гемостаза. Таким образом, сочетание из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция  можно считать эффективным средством контроля над уровнем СМ и ПОЛ в крови новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения.

Динамика уровня средних молекул, ПОЛ  и  антиоксидантной защиты

тромбоцитов на фоне комплексной коррекции

  При применении «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция достигнута нормализация  липидного состава тромбоцитов у телят с ФНП (табл. 4). Нормализация уровней ХС и ОФЛ в мембранных структурах кровяных пластинок телят обеспечивала полную оптимизацию соотношения ХС/ОФЛ в тромбоцитах (1,48±0,03), что исключало в последующем усиление ПОЛ в кровяных пластинках и рецидивирование роста  активности тромбоцитов.

  Концентрация первичных продуктов ПОЛ-АГП в тромбоцитах на фоне комплексной коррекции снизилась (2,85±0,06 Д233/109тр.), соответствуя контролю – 2,87±0,04 Д233/109тр. Уровень базального МДА в тромбоцитах – конечного продукта ПОЛ также оптимизировался - 0,90±0,03 нмоль/109тр. (табл. 4). Это стало возможным в результате нормализации антиоксидантной защиты тромбоцитов и, в первую очередь, каталазы и супероксиддисмутазы. Полученные данные свидетельствуют о выраженном  позитивном влиянии комплексной коррекции, нормализующей  ПОЛ в кровяных пластинках телят с ФНП  за 10 дней.

Количество СМ280 и СМ254 в кровяных пластинках животных на фоне «Фосфопага», «Экоса» и глюкона кальция нормализовалось (0,050±0,006усл.ед/109тр. и 0,054±0,001усл.ед./109тр, соответственно), что свидетельствовало о нормализации уровня  протеолиза внутри тромбоцитов. 

Таблица 4. Биохимические  показатели  тромбоцитов телят с ФНП на фоне комплексной коррекции

Параметры

Исходное состояние, n=26, M±m

На фоне 10-дневной комплексной коррекции , n=26, M±m

Контроль,

n=267,

M±m

ХС тромбоцитов, мкмоль/109тр.

0,84±0,006

0,73±0,05

Р3<0,01

0,73±0,001

Р<0,01

ОФЛ тромбоцитов,

мкмоль/109тр.

0,40±0,002

0,49±0,06

Р3<0,01

0,49±0,002

Р<0,01

ХС/ОФЛ тромбоцитов

2,05±0,04

1,48±0,03

Р3<0,01

1,48±0,01

Р<0,01

АГП тромбоцитов,

Д233/109тр.

3,52±0,06

2,85±0,06

Р3<0,05

2,87±0,04

Р<0,01

Базальный МДА тромбоцитов,

нмоль/109тр.

1,66±0,001

0,90±0,03

Р3<0,01

0,89±0,02

Р<0,01

Средние молекулы 280 тромбоцитов, усл. ед./109тр.

0,065±0,002

0,050±0,006

Р3<0,01

0,050±0,004

Р<0,01

Средние молекулы 254 тромбоцитов, усл. ед./109тр.

0,072±0,001

0,054±0,001

Р3<0,01

0,055±0,004

Р<0,01

Каталаза тромбоцитов, МЕ/109тр.

562,0±30,60

1045,0±29,22

Р3<0,01

10500,0±11,05

Р<0,01

СОД тромбоцитов,

МЕ/ 109тр.

123,0±1,44

1770,0±2,50

Р3<0,01

1780,0±2,06

Р<0,01

Условные обозначения: Р3 – достоверность различий между исходным состоянием телят с ФНП и их состоянием  в результате  коррекции. В последующих таблицах обозначения сходные.

Таким образом, в мембранах тромбоцитов телят с ФНП на фоне  комплекса из  «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция нормализуется липидный состав тромбоцитов и их актиоксидантная защита. Последнее  способствует нормализации ПОЛ и содержания в них СМ, обеспечивая тем самым оптимальный уровень  активности  кровяных пластинок.

Тромбоцитарный гемостаз у новорожденных телят с ФНП на фоне комплексной коррекции 

Количество тромбоцитов в кровотоке животных до и после коррекции находилось в пределах общепринятой нормы, не отличаясь от такового в группе контроля. С помощью комплексной коррекции стало возможным ввести в границы нормы ИТА (с 41,2±0,01% до 26,0±0,06%),  что косвенно указывало на уменьшение в кровяных пластинках телят продуктов лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов – активаторов свертывания крови. При этом, была получена достоверная нормализация активности тромбопластина с 9,8±0,06с. до 13,9±0,02с. с оптимизацией времени его синтеза – 2,41±0,02 мин. (в контроле – 2,40±0,01мин.). Это указывает на возможность данного вида коррекции выводить активность основного запускающего механизма плазменного гемостаза при ФНП -  усиленного тромбопластинообразования на уровень здоровых телят.

  Комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция оказывал нормализующее влияние на важный  механизм ускорения АТ при ФНП, нормализуя интенсивность  обмена арахидоновой кислоты в  тромбоцитах, обеспечивая оптимизацию тромбоксанообразования  (30,6±0,02%), благодаря нормализации активности обоих ферментов ее превращения – циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы.

  Исследование АТ под действием ряда индукторов и их сочетаний на фоне комплексной коррекции показало возможность нормализации  активности  тромбоцитов телят с ФНП (табл. 5). 

Таблица 5. Агрегационная активность тромбоцитов у новорожденных телят с ФНП  на фоне комплексной коррекции 

    1. Параметры

Исходное состояние, n=26, M±m

На фоне 10-дневной комплексной коррекции , n=26, M±m

Контроль,

n=267,

M±m

Агрегация  тромбоцитов

АДФ, с.

36,0±0,10

39,0±0,05

Р3<0,01

39,0±0,28

Р<0,01

Коллаген, с.

20,3±0,05

31,0±0,05

Р3<0,01

30,0±0,12

Р<0,01

Тромбин, с.

43,6±0,22

54,0±0,03

Р3<0,01

54,0±0,2

Р<0,01

Ристомицин, с.

31,6±0,02

41,0±0,12

Р3<0,01

41,0±0,26

Р<0,01

Адреналин, с.

82,0±0,03

98,0±0,06

Р3<0,01

97,0±0,45

Р<0,01

АДФ+адреналин, с.

22,0±0,05

36,0±0,03

Р3<0,01

36,0±0,5

Р<0,01

АДФ+коллаген, с.

20,0±0,01

27,0±0,05

Р3<0,01

27,0±0,09

Р<0,01

Адреналин+коллаген, с.

19,0±0,02

30,0±0,05

Р3<0,01

30,1±0,12

Р<0,01

       У телят с ФНП на фоне примененной коррекции отмечалось значительное удлинение АТ. Так, наиболее ранняя АТ зарегистрирована под влиянием коллагена,  указывая на нормализацию количества и биодоступности коллагеновых рецепторов - GPIa-IIa и GPVI на мембранах кровяных пластинок, что указывало на восстановление эластичности микрососудов с исключением  контакта тромбоцитов с волокнами коллагена сосудистой стенки.

  На фоне комплексной коррекции  тромбиновая и адреналиновая АТ и АДФ также наступала в те же сроки, как  и в контроле, что обеспечивалось нормализацией активности на поверхности тромбоцитов телят с ФНП рецепторов к АДФ, адреналину и тромбину. Время развития АТ на фоне сочетания индукторов, будучи исходно укороченным, также претерпело позитивную динамику, соответствуя к концу коррекции группе здоровых животных.

Нормализация АТ при взаимопотенциирующем действии индукторов стала возможной благодаря оптимизации обмена веществ в тканях, сосудистой стенке и тромбоцитах, а также функционирования внутритромбоцитарных путей реализации АТ, в т.ч. через ослабление фосфолипаз С и А2, уменьшение экспрессии фибриногеновых рецепторов (GвIIв-IIIa) на мембране кровяных пластинок и депрессию образования в них физиологического агреганта – тромбоксана.

       У телят с ФНП на фоне комплексной коррекции содержание дискоцитов в кровотоке достоверно увеличилось до уровня контроля (82,3±0,6%) (табл.6).

  Количество в крови телят диско-эхиноцитов, сфероцитов и сферо-эхиноцитов на фоне коррекции достоверно снизилось, не отличаясь от контрольных значений. При этом сумма активных форм тромбоцитов нормализовалась (17,7±0,04%). Число  малых и число средних и больших агрегатов в кровотоке телят с ФНП при комплексной коррекции уменьшились до 3,7±0,05 и 0,15±0,02 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, соответственно, не отличаясь от контрольных значений. Нормализация содержания в крови активных свободноциркулирующих форм тромбоцитов и различных размеров агрегатов полностью исключало  травмирование ими сосудистой стенки с обнажением субэндотелиальных структур, что дополнительно ограничивало ВАТ.

Таблица 6. Внутрисосудистая активность тромбоцитов у телят с  ФНП на фоне комплексной коррекции

    1. Параметры

Новорожденные телята с ФНП, M±m

Контроль,

n=267,

M±m

Исходное состояние, n=26

На фоне 10-дневной комплексной коррекции, n=26

Внутрисосудистая активность тромбоцитов

Дискоциты, %

62,3±0,06

82,3±0,08

Р3<0,01

82,0±0,16

Р<0,01

Диско-эхиноциты, %

16,2±0,07

9,4±0,01

Р3<0,01

10,3±0,1

Р<0,01

Сфероциты, %

13,2±0,04

4,6±0,05

Р3<0,01

4,6±0,06

Р<0,01

Сферо-эхиноциты, %

6,8±0,05

2,7±0,03

Р3<0,01

2,6±0,02

Р<0,01

Биполярные формы, %

1,5±0,01

1,0±0,02

*

0,5±0,04

Р<0,01

Сумма активных форм, %

37,7±0,02

17,7±0,04

Р3<0,01

18,0±0,2

Р<0,01

Число тромбоцитов в агрегатах, %

14,0±0,02

5,0±0,09

Р3<0,01

5,0±0,2

Р<0,01

Число малых агрегатов по 2-3 тромбоцита, на 100 свободно лежащих тромбоцитов.

16,2±0,05

3,7±0,05

Р3<0,01

3,6±0,04

Р<0,01

Число средних и больших агрегатов, 4 и более тромбоцита, на 100 свободно лежащих тромбоцитов.

5,5±0,02

0,15±0,02

Р3<0,01

0,12±0,01

Р<0,01

  Таким образом, повышенная активность кровяных пластинок у новорожденных телят с ФНП на фоне комплексной коррекции нормализуется по всем оцениваемым показателям, оптимизируя  реологию крови и исключая тем самым риск тромботических осложнений. Важнейшую роль в этом играют нормализация на фоне комплексной коррекции содержания в тромбоцитах СМ, выход на уровень контрольных значений внутритромбоцитарного ПОЛ и оптимизация рецепторных и пострецепторных механизмов восприятия сигнала кровяными пластинками извне.

Профилактика ФНП и сопутствующих им биохимических и тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят

Общая характеристика здоровых новорожденных телят, предрасположенных к ФНП на фоне профилактических мероприятий

В исследование были взяты 29 здоровых новорожденных телят 1-2 сутки жизни, имеющих предрасположенность к развитию ФНП. Всем телятам проводили стандартное обследование до и после проведения профилактических мероприятий в течение 8 дней, состоящих из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, а также через 4 нед. после их окончания.

  Все взятые в исследование животные находились под постоянным наблюдением. У них перед каждым исследованием определяли основные физиологические параметры, проводили морфологический и биохимический анализы крови. Результаты этих исследований показывают, что измеряемые показатели у новорожденных телят с риском развития ФНП до, после окончания профилактической коррекции и через 4 нед. после нее находились в пределах физиологической нормы.

Динамика биохимических показателей  плазмы крови новорожденных телят с риском развития  ФНП  на фоне профилактических мероприятий

Исходно несколько повышенные уровни СМ280 и СМ254 плазмы крови через 8 дней профилактической коррекции претерпели достоверную положительную динамику,  достигнув уровня соответствующего контролю. У телят с риском ФНП  при профилактической коррекции  обнаружена положительная динамика  ПОЛ плазмы. Уровень ТБК-активых продуктов в жидкой части крови на фоне профилактических мер снизился до 3,90±0,01мкмоль/л. Содержание АГП в плазме уменьшилось до 1,91±0,06 Д233/1мл., соответствуя контрольным значениям. Найденное значительное ослабление пероксидации стало возможным в результате нормализации антиокислительной защиты организма животных – антиоксидантный потенциал плазмы на фоне профилактики возрос с 23,7±0,09% до  28,4±0,09% (у здоровых животных 28,6±0,04%). При этом достигнутый уровень биохимических показателей плазмы на фоне профилактических мер не изменился в течение последующих 4 недель наблюдения.

Профилактическая коррекция у предрасположенных к ФНП новорожденных телят предотвращала развитие «порочного круга»: биохимические нарушения – тромбоцитопатия, поддерживая микроциркуляцию у животных в оптимальном режиме. 

Таким образом, у новорожденных телят с риском ФНП при профилактическом применении «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция содержание СМ крови и ПОЛ плазмы претерпевают выраженную стойкую положительную динамику, выходя на уровень контрольных значений и сохраняясь на достигнутом уровне в течение всего периода наблюдения. Это говорит о высокой эффективности  и предпочтительности данного  подхода для профилактики биохимических  нарушений у новорожденных телят с риском ФНП.

Биохимические показатели тромбоцитов у новорожденных телят с риском развития ФНП на фоне профилактической коррекции

Установлено, что имеющиеся врожденные нарушения в липидном составе мембран тромбоцитов телят с риском ФНП, способные  усилиться без коррекции, испытали положительную динамику – достигнуто снижение содержания холестерина и увеличение ОФЛ в кровяных пластинках, обеспечивавшие снижение соотношения ХС/ОФЛ в них до 1,48±0,06.

  Концентрация первичных продуктов ПОЛ-АГП в тромбоцитах на фоне профилактики сравнялись с контролем (2,88±0,06 Д233/109тр.). Уровень базального МДА в тромбоцитах – конечного продукта ПОЛ также достиг аналогичного уровня - 0,91±0,02 нмоль/109тр.,  сохраняя активность ПОЛ в норме в течение всего периода наблюдения.

Активность каталазы и СОД в кровяных пластинках, находившихся под наблюдением телят, значительно повысились и достигли уровня телят без ФНП.

  Количество СМ280 и СМ254 в кровяных пластинках животных с риском ФНП на фоне «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция достоверно снизилось (0,050±0,006усл.ед/109тр. и 0,053±0,002усл.ед./109тр, соответственно), соответствуя уровню не имевших ФНП животных, что свидетельствовало о нормализации выраженности  протеолиза внутри тромбоцитов. 

Таким образом, в мембранах тромбоцитов телят с риском развития  ФНП на фоне профилактической коррекции нивелируется врожденная мембранопатия тромбоцитов с нормализацией содержания ХС и  ОФЛ, что повышает  их актиоксидантную защиту. Последнее способствует стабилизации ПОЛ и содержанию в них СМ, нарушающих функции тромбоцитов, обеспечивая оптимальный уровень  активности  кровяных пластинок.

Тромбоцитарный гемостаз у новорожденных телят с риском ФНП на фоне профилактической  коррекции

Количество тромбоцитов в кровотоке животных до и после коррекции находилось в пределах общепринятой нормы. С помощью мер профилактики стало возможным вывести и удержать на уровне нормы ИТА, что косвенно указывало на уменьшение в кровяных пластинках телят продуктов лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов – активаторов свертывания крови. Была получена достоверная нормализация активности тромбопластина с 12,7±0,02с. до 14,2±0,06с. с оптимизацией времени его синтеза – 2,42±0,06 мин. (в контроле – 2,40±0,01мин.), что  свидетельствовало о стабилизации активности основного запускающего механизма плазменного гемостаза. 

  Профилактический  комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция нормализовал на весь период наблюдения интенсивность  обмена арахидоновой кислоты в  тромбоцитах и уровень образования в них тромбоксана за счет  циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы.

У телят с риском ФНП на фоне профилактики отмечалось стабильное удлинение АТ. Наиболее ранняя АТ на фоне профилактического лечения зарегистрирована под влиянием коллагена – 29,6±0,03с. (в контроле – 30,0±0,12с.). Несколько медленнее АТ развивалась под влиянием ристомицина (39,9±0,03с.) и АДФ (38,8±0,02с.). Тромбиновая и адреналиновая АТ также наступала в те же сроки, как  в контроле и были равны 53,5±0,06с. и 97,0±0,03с., соответственно (Р<0,01). Время развития АТ на фоне сочетания индукторов будучи исходно укороченным также претерпело позитивную динамику: АДФ+адреналин – 35,8±0,02с., АДФ+коллаген – 27,3±0,08с., адреналин+коллаген –29,8±0,02с., сохраняясь на уровне нормы в течение всего периода наблюдения. Полученные результаты указывали на нормализацию эластичности микрососудов с исключением контакта тромбоцитов с волокнами коллагена сосудистой стенки крови и оптимизации количества и биодоступности рецепторов к индукторам на мембранах кровяных пластинок.

Нормализация АТ при взаимопотенциирующем действии ее индукторов на фоне мер профилактики  стала возможной благодаря оптимальному уровню обмена веществ в тканях, сосудистой стенке и тромбоцитах, а также функционированию путей реализации АТ, в т.ч. фосфолипазы С и А2, экспрессии фибриногеновых рецепторов (GвIIв-IIIа) на мембране кровяных пластинок и образованием в них физиологического агреганта – тромбоксана.

  В результате проведенной профилактической коррекции содержание дискоцитов в кровотоке животных сравнялось с контролем (81,2±0,6%), не испытав отрицательной динамики в течение всего периода наблюдения. Количество диско-эхиноцитов, сфероцитов и сферо-эхиноцитов в крови телят также стабилизировалось на уровне контроля, обеспечив нормализацию суммы активных форм тромбоцитов (18,8±0,06%). Уровень малых, средних и  больших агрегатов в кровотоке телят на фоне «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция стабильно вошел  в границы нормы, составляя 3,5±0,02 и 0,11±0,01 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, соответственно.

  Таким образом, тенденцию к повышению активности кровяных пластинок у телят с риском развития  ФНП можно нивелировать профилактическим применением «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, исключая тем самым риск тромботических осложнений. Учитывая сохраняющейся положительный эффект на уровни СМ, ПОЛ и активность тромбоцитарного гемостаза, применение данного комплекса для профилактической коррекции должно проводиться всем новорожденным телятам с риском возникновения ФНП сразу же после выявления наклонности к ним. 

Выводы

  1. У физиологически зрелых телят отмечается стабильность показателей тромбоцитарного гемостаза в течение всей фазы новорожденности, обеспечивая адаптацию к внеутробному существованию животного (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли в 1-2 сутки 36,3±0,14с, 26,8±0,05с., 28,4±0,03с, 23,9±0,04%,  3-4 сутки 37,5±0,10с, 27,6±0,02с, 32,1±0,07с, 19,6±0,02%,  5-6 сутки 34,8±0,08с, 28,1±0,07с, 29,9±0,10с, 21,0±0,05%, 7-8 сутки 38,1±0,03с, 26,9±0,15с, 31,6±0,09с, 15,8±0,01%, 9-10 сутки 36,4±0,16с, 27,2±0,07с, 30,3±0,14с, 19,0±0,16%, соответственно).
  2. У функционально незрелых новорожденных телят, с риском развития в последующем функциональных нарушений пищеварения, имеется врожденная мембранопатия тромбоцитов (ХС - 0,80±0,02 мкмоль/109 тр, ОФЛ -  0,40±0,05 мкмоль/109 тр, ХС/ОФЛ - 2,00±0,04). 
  3. У новорожденных телят с риском развития функциональных нарушений пищеварения вследствие наличия у них липидного дисбаланса в мембранах тромбоцитов происходит ослабление антиоксидантной защищенности кровяных пластинок (СОД - 7820,0±26,50 МЕ/109 тр., каталаза - 1470,0±6,75 МЕ/109 тр.), что в совокупности с ослаблением антиоксидантного состояния плазмы создает предпосылки к повышению в них перекисного окисления липидов (базальный МДА - 1,20±0,001 нмоль/109 тр., АГП - 3,05±0,04 Д233/109 тр., дополнительно усиливающегося при манифестации функциональных нарушений пищеварения (базальный МДА - 1,54±0,004 нмоль/109 тр., АГП - 3,49±0,01 Д233/109 тр.).
  4. У физиологически незрелых новорожденных телят имеющаяся  врожденная  мембранопатия кровяных пластинок и активация перекисного окисления липидов тромбоцитов обуславливают более высокий уровень функционирования первичного гемостаза, чем у физиологически зрелых животных (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли 28,0±0,08 с.,  23,0±0,06 с., 24,0±0,30 с., 30,0±0,05 %, соответственно), способствуя его дополнительной активации при развитии функциональных нарушений пищеварения (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли  20,0±0,12 с., 18,4±0,09 с., 20,3±0,07 с., 38,0±0,3 %, соответственно).
  5. При развитии функциональных нарушений пищеварения у новорожденных телят отмечается увеличение внутрисосудистой активности тромбоцитов, что способствует увеличению содержания у них в кровотоке активных форм кровяных пластинок (дискоциты - 62,0±0,2%, сумма активных форм - 38,0±0,3%) и их агрегатов различного размера (малые агрегаты - 15,2±0,06 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, средние и большие агрегаты - 4,7±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов), способствуя  усилению риска внутрисосудистого микротромбирования.
  6. Применение у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения традиционной коррекции, сорбента «Экос» и «Биопага-Д» в небольшой степени оптимизирует перекисное окисление липидов плазмы и тромбоцитов, несколько снижая в них уровень средних молекул, не оказывая влияния на липидный дисбаланс в мембранах тромбоцитов, не позволяя достичь нормализации состояния тромбоцитарного гемостаза и исключить риск развития внутрисосудистого микротромбообразования.
  7. Применение в течение 10 суток «Фосфопага» и его сочетания с «Экос» у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения в значительной мере корректирует свободнорадикальное окисление липидов плазмы и кровяных пластинок, оптимизируя липидный состав мембран тромбоцитов, уровень в них средних молекул и активность тромбоцитарного гемостаза, однако, не позволяет достичь контрольного уровня оцениваемых показателей.
  8. Полная нормализация всех исследуемых биохимических и гематологических показателей (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли к концу коррекции 36,0±0,03с., 27,0±0,05с., 30,0±0,05с., 17,7±0,04, соответственно) возможна на фоне 10 суточного применения комплекса из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, нивелирующего  риск микротромбозов с  переводом реологических свойств тромбоцитов на уровень здоровых телят. 
  9. Профилактика развития функциональных нарушений пищеварения и тромбоцитопатии с нормализацией субфизиологических нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят возможна путем применения у них в течение 8 суток  комплекса, состоящего из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли по окончании коррекции 35,8±0,02 с., 27,3±0,08 с., 29,8±0,02 с., 18,8±0,06 %, соответственно).
            1. Практические рекомендации
  1. Для оценки состояния тромбоцитарного гемостаза и прогнозирования его дополнительной активации у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения рекомендуется определять уровень перекисного окисления липидов, средних молекул и антиоксидантной защищенности  плазмы и тромбоцитов, содержание холестерина и общих фосфолипидов в кровяных пластинках, их агрегационную способность с применением ряда индукторов и их сочетаний и проводить оценку внутрисосудистой активности тромбоцитов.
  2. Для коррекции дисфункций первичного гемостаза новорожденным телятам с функциональными нарушениями пищеварения необходимо включать в схему выпаивания комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция на 10 суток.
  3. С целью профилактики тромбоцитопатии у новорожденных телят при обнаружении у них мембранопатии тромбоцитов, увеличения уровня средних молекул и перекисного окисления липидов в них, в схему выпаивания на 8 суток рекомендуется включать «Фосфопаг», «Экос» и глюконат кальция.
  4. Для коррекции активности перекисного окисления липидов, уровня средних молекул плазмы и тромбоцитов, нормализации тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения не рекомендуется изолированное применение традиционной коррекции, «Экоса», «Биопага-Д», «Фосфопага» и  сочетания  «Фосфопага» и «Экоса».
  5. Адекватность проводимой коррекции у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения рекомендуется проверять путем определения у них активности ПОЛ, уровня средних молекул в плазме и тромбоцитах, липидного состава кровяных пластинок, агрегации in vitro с изолированными индукторами и их сочетаниями и внутрисосудистой активности тромбоцитов.
    1. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

  1. Медведев, И.Н. Диагностика агрегационных нарушений у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю. Завалишина / Методические рекомендации, Курск, 2005.-10с. (10/3,3).
  2. Горяинова, И.А. Тромбоцитарные дисфункции у новорожденных телят / И.А. Горяинова, И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина / М., 2005.- 130 с. (130/40).
  3. Медведев, И.Н. Быстрая эффективная коррекция нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Международный вестник ветеринарии. 2006.-№3-4.-С.24-27. (4/2).
  4. Медведев, И.Н. Нарушения тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Международный вестник ветеринарии. 2006.-№3-4.-С.63-67. (5/2).
  5. Медведев, И.Н. Оценка внутрисосудистой активности тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н., Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю.Завалишина // Методические рекомендации, Курск, 2006.-12с. (12/4).
  6. Медведев, И.Н. Нарушения тромбоцитарного гемостаза и подходы к его коррекции у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова /М., 2006.-170с.(170/80).
  7. *Медведев, И.Н. Применение «Биопага-Д» новорожденным телятам при диспепсии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Зоотехния. -2006.-№12.-С.19-20.(2/1).
  8. Медведев, И.Н. Пути возникновения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы IV научной конференции с международным участием «Проблемы агропромышленного комплекса», январь 2007. / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№1.-С.44-45.(2/1).
  9. Медведев, И.Н. Внутрисосудистая активность тромбоцтов здоровых новорожденных телят в регионе Курской магнитной аномалии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы», 2-12 декабря 2006г., Испания, Марокко, Тенерифе, Мадера / Ж.  «Фундаментальные исследования». -2007.-№1-С.83.(1/0,5).
  10. *Медведев, И.Н. Коррекция диспепсии с предотвращением тромботических осложнений у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Молочное и мясное скотоводство.-2007.-№2.-С.42-43.(2/1).
  11. Медведев, И.Н. Воздействие препарата «Биопаг-Д» на агрегационную функцию и перекисное окисление липидов тромбоцитов у новорожденных телят, больных диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы V Международной конференции «Современные наукоемкие технологии», февраль 2007, Египет, г.Хурагда / Ж.  «Успехи современного естествознания». -2007.-№2.-С.53-54.(2/1).
  12. Медведев, И.Н. Коррекция функций тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией с помощью «Фосфопага» / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы V научной конференции с международным участием «Гомеостаз и эндоэкология» 21-28 февраля 2007г. Хургада (Египет) / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№2.-С.37-38.(2/1).
  13. Медведев, И.Н. Тромбоцитарные нарушения у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы V научной конференции с международным участием «Гомеостаз и эндоэкология» 21-28 февраля 2007г. г. Хургада (Египет) / Ж. «Успехи современного естествознания».- 2007.-№2.-С.37.(1/0,5).
  14. Medvedev, I.N  Biological aspects og infringements thrombocyte hemostasis / I.N  Medvedev, Т.А. Belova, I.A. Gorainova // EUROPEAN JOURNAL OF NATURAL HISTORY.- 2007.-№2.-Р.71-73.(3/1).
  15. Medvedev, I.N  Prompt effective correction of thrombocyte hemostasis diaturbances in new-born calves with dyspepsia / I.N  Medvedev, I.A. Gorainova // European Journal academy of natural history. -2007.-№2.-Р.47-50.(4/2).
  16. Медведев, И.Н. Внутрисосудистая активность тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией и ее коррекция «Фосфопагом» / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы IV научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии», 1-11 марта, 2007г. Индия / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№3.-С.91-92.(2/1).
  17. *Медведев, И.Н. Коррекция дисфункции у новорожденных телят с диспепсией сорбентом «Экос» / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Зоотехния. -2007.-№3.-С.26-28.(3/1).
  18. Медведев, И.Н. Диагностика состояния тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения /  И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю. Завалишина //  Методические рекомендации, Курск, 2007.-16с.(16/5,3).
  19. Медведев, И.Н. Нивелирование нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Кардиолог. -2007.-№3.-С.30-32.(3/1).
  20. Медведев, И.Н. Коррекция агрегации тромбоцитов и перекисного окисления их липидов у новорожденных телят с диспепсией Фосфопагом и Экосом / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова //  Материалы научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы по приоритетным направлениям науки и техники», 5-18 января 2007, Тайланд, Сингапур, Малайзия / Ж.  «Современные наукоемкие технологии». -2007.-№4.-С. 99.(1/0,5).
  21. *Медведев, И.Н. Оптимизация показателей гемостаза Фосфопагом у телят при диспепсии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Ветеринария. -2007.-№4.-С.42-44.(3/1).
  22. Медведев, И.Н. Применение сорбента «Экос» для коррекции тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.- Курск, 2007.-С.148-151.(4/2).
  23. Медведев, И.Н. Нормативные значения первичного гемостаза у здоровых новорожденных телят в Курской области / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» Курск, 26-27 марта 2007г. - Курск, 2007.- с.152-153.(2/0,6)
  24. Медведев, И.Н. Формирование тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят при развитии диспепсии / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007.-С.153-155.(3/1).
  25. Медведев, И.Н. Возможности назначения энтеросорбентов при желудочно-кишечной патологии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007.- С.155-158.(4/2).
  26. Медведев, И.Н. Методические подходы по исследованию тромбоцитарного звена гемостаза у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007.- С.158-162.(5/2).
  27. Медведев, И.Н. Эффективный способ коррекции тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» Курск, 26-27 марта 2007г.- Курск, 2007.- С.162-166.(5/2).
  28. Медведев, И.Н. Дисфункция агрегационной способности тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007. - С.166-169.(4/2).
  29. Медведев, И.Н. Профилактика диспепсии и нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Международный вестник ветеринарии.-2007.-№3.-С.43-46 (4/2).
  30. Медведев, И.Н. Механизмы развития тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы XI международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» 14-18 мая 2007г. Белгород, 2007.-С.106.(1/0,5).
  31. Медведев, И.Н. Влияние «Биопага-Д» на агрегационную функцию и перекисное окисление липидов тромбоцитов у новорожденных телят, больных диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы XI международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». Белгород, 14-18 мая 2007г. - Белгород, 2007.-С.107.(1/0,5).
  32. Медведев, И.Н. Дисагрегационные аспекты нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы 19 Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». Санкт-Петербург, 23-24 мая 2007г. – Санкт-Петербург, 2007.-С.92-93.(2/0,75).
  33. Медведев, И.Н. Высокоэффективная коррекция тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы 19 Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». Санкт-Петербург, 23-24 мая 2007г. – Санкт-Петербург, 2007.-С.14-15.(2/1).
  34. Медведев, И.Н. Возможности сорбента «Экос» в коррекции тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят сдиспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Биологический вестник.-2007.-т.11, №1.-С.76-78 (3/1,5).
  35. Медведев, И.Н. Способ лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова. - Патент на изобретение №2324487, приоритет 12 июля 2006 (3/1).
  36. *Медведев, И.Н. Нормализация первичного гемостаза у новорожденных телят при диспепсии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Ветеринария.- 2007.-№9.-С.41-44.(4/2).
  37. Медведев, И.Н. Функциональные нарушения первичного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Ветеринарная практика.- 2007.-№3.-С.14-17.(4/1,5).
  38. *Медведев, И.Н. Тромбоцитарные нарушения у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Зоотехния.- 2007.-№11.-С.19-20.(2/0,7).
  39. Медведев, И.Н. Способ профилактики тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова. Патент на изобретение №2323731, приоритет от 27 ноября 2006г. (5/1,5)
  40. Медведев, И.Н. Способ профилактики развития тромбоцитопатии в первые часы диспепсии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова. Патент на изобретение №2323730, приоритет 27 ноября 2006г. (3/1).
  41. Гориянова, И.А. Профилактика заболеваний при выращивании здорового молодняка / И.А. Горяинова / В кн.: Агроветеринарная сфера жизни общества т.3, семитомного издания «Сферы социальной жизни Курского края». –М., 2007.-С.138-139.(2/2).
  42. Медведев, И.Н. Незаразные болезни молодняка / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова / В кн.: Агроветеринарная сфера жизни общества т.3, семитомного издания «Сферы социальной жизни Курского края». –М., 2007.-С.139-140.(2/0,7).
  43. Горяинова, И.А. Болезни желудочно-кишечного тракта у молодняка / И.А. Горяинова / В кн.: Агроветеринарная сфера жизни общества т.3, семитомного издания «Сферы социальной жизни Курского края». –М., 2007.-С.140-141.(2/2).
  44. Горяинова, И.А. Развитие диспепсии у новорожденных телят / И.А. Горяинова / В кн.: Агроветеринарная сфера жизни общества т.3, семитомного издания «Сферы социальной жизни Курского края». –М., 2007.-С.141-148.(8/8).
  45. Медведев, И.Н. Возможности фармакологической коррекции тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Вестник Оренбургского  государственного университета, 2007.-№12.-С.124-127.(4/1,7).
  46. Горяинова, И.А. Возможности монотерапии фосфопагом нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.А, Горяинова, И.Н. Медведев, Т.А. Белова / Материалы Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Курск, 20-21 марта 2008.-С.120-122.(3/1).
  47. Становление систем в антенатальный период онтогенеза у животных / С.Ю. Завалишина, И.А. Горяинова, И.Н. Медведев, Т.А. Белова /  Материалы Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Курск, 20-21 марта 2008.-С.123-132.(10/3).
  48. Возможности современного полигексаметиленгуанидина на биохимические сдвига у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова / Материалы Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Курск, 20-21 марта 2008.-С.135-138.(4/1).
  49. Горяинова, И.А. Нормализация первичного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.А. Горяинова, Т.А. Белова, И.Н. Медведев // Материалы первого международного конгресса ветеринарных фармакологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства» посвященного 200-летию высшего ветеринарного образования и Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины. Санкт-Петербург, 2008.-С.40-41. (2/0,7).
  50. Медведев, И.Н. Воздействие сорбента «Экос» на тромбоцитарные дисфункции у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова / Материалы международного симпозиума, посвященного 80-летию академика РАМН Н.А. Агаджаняна «Адаптационная физиология и качество жизни: проблемы традиционной и инновационной медицины», Москва, 14-16 мая 2008.- С.212-217. (5/1,5).
  51. Горяинова, И.А. Возрастные особенности новорожденных телят / И.А. Горяинова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-С.127-130. (4/4).
  52. Горяинова, И.А. Этиология и патогенез функциональных нарушений пищеварения / И.А. Горяинова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-С. 130-136 (7/7).
  53. Горяинова, И.А. Возможности монотерапии фосфопагом нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.А. Горяинова И.А., И.Н. Медведев, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-С. 137-140. (4/1,3).
  54. Функциональные особенности физиологически зрелых новорожденных поросят / С.Ю. Завалишина, И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.И. Карцева, Я.В. Киперман, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-С. 140-149. (10/1,6).
  55. Медведев, И.Н. Коррекция реологических нарушений тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-С. 183-186. (4/2).
  56. Медведев, И.Н. Возможности сочетанного применения Фосфопага,  Экоса и глюконата кальция в коррекции нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-С.186-191. (6/3).
  57. Нарушения агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю. Завалишина, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-С.191-195. (5/1,25).
  58. Актуальные проблемы ветеринарии / И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина, И.А. Горяинова, Т.И. Карцева, Я.В. Киперман, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-С. 195-197. (3/0,5).
  59. Механизмы формирования наклонности к тромбообразованию / И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина, И.А. Горяинова, Т.А. Белова, Т.А. / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-С.197-199. (3/0,5).
  60. *Медведев, И.Н. Фосфопаг и экос в коррекции тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Аграрная наука.-2008.-№6.-С.33-35. (3/1,5).
  61. *Медведев, И.Н. Профилактика тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Аграрная наука.-2008.-№7.-С.28-30. (3/1,5).
  62. *Медведев, И.Н. Становление тромбоцитарной активности у телят в раннем онтогенезе / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Аграрная наука.-2008.-№8.-С.38-40. (3/1,5).



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.