WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Красочко Петр Альбинович

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ

КОНСТРУИРОВАНИЯ и использования ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ МОЛОДНЯКА крупного рогатого скота

03.00.23 – биотехнология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени
доктора биологических  наук

Щелково— 2009 г.

Работа выполнена в отделе вирусных  инфекций  РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского» 

Научный консультант

доктор биологических наук, профессор

Заслуженный деятель науки РФ

Еремец Владимир Иванович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор,

Заслуженный ветеринарный врач РФ

Албулов Алексей Иванович

член-корреспондент РАСХН,  доктор биологических наук, профессор

Девришов Давудай Абдулсемедович

доктор биологических наук, профессор Цыбанов Содном Жамьянович

Ведущая организация:

ГНУ «Всероссийский научно-исследова-тельский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко»

Защита состоится 10 апреля 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета  Д 006.069.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» Россельхозакадемии по адресу: 141142,  Московская область, Щелковский район, п/о Кашинцево, поселок Биокомбината,  ВНИТИБП;

e-mail: vnitibp@mail.ru; тел./факс: (495) 526-43-74

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИТИБП

Автореферат разослан « » марта 2009  года

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук                                        Ю.Д.Фролов



Актуальность темы диссертации

Современное ведение мясного и молочного скотоводства, сопровождающееся концентрацией поголовья на небольшой площади, комплектованием животноводческих ферм и комплексов одновозрастными и одновидовыми животными с генетическим потенциалом, приближенным к однородному, приводит к быстрому распространению инфекционных заболеваний, поражающих  различные половозрастные группы животных.

Среди болезней крупного рогатого скота вирусные респираторные и желудочно-кишечные инфекции наносят огромный экономический ущерб животноводству. Возбудителями таких инфекций являются вирусы инфекционного ринотрахеита,  парагриппа-3,  диареи,  рота- и коронавирусы и т.д. Это так называемые «малые» инфекции, которые у здоровых животных с нормальным функционированием иммунной системы протекают бессимптомно без выраженных клинических признаков или животные вообще не переболевают. Особенно тяжело болеют животные, когда в патологический процесс вовлекается 2 и более вирусов, то есть возникает смешанная или ассоциативная инфекция (В.Н.Сюрин с соавт, 1998; А.Я.Самуйленко с соавт, 2005 и др.).  При тяжелом течении вирусной фазы инфекции наряду с поражением чувствительных клеток наступает значительное угнетение клеточного и гуморального звеньев иммунитета, на фоне чего условно-патогенная микрофлора активизируется и у животных развиваются тяжело протекающие пневмоэнтериты, приводящие к значительному отходу заболевших животных, снижению их продуктивности. По тропизму все вышеуказанные возбудители могут репродуцироваться в клетках респираторного и желудочно-кишечного тракта, половых органов, иммунокомпетентных клетках, то есть они пантропны. Это обуславливает их высокую контагиозность и тяжесть течения болезни.

Важное место в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при пневмоэнтеритах телят, вызванных вирусами инфекционного ринотрахеита, диареи, парагриппа-3,  рота- и коронавирусами играет специфическая профилактика, проводимая с помощью живых  и инактивированных вакцин. Но при современном ведении животноводства, часто связанном с недостатком или несбалансированностью кормления, приводящим к угнетению иммунной системы, вакцинация не всегда достигает нужного эффекта. При этом для снятия иммунодепрессивного эффекта и повышения эффективности иммунного ответа оправдана стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью различных препаратов.

Одним из перспективных направлений в разработке средств иммуностимулирующей терапии и профилактики заболеваний молодняка является использование производных бактерий и продуктов пчеловодства. Из бактериальных имуностимулирующих препаратов особое место принадлежит бактериальным полисахаридам, которые являются поликлональными активаторами Всистемы лимфоцитов, а препараты, изготовленные из продуктов пчеловодства (пыльцы, перги, прополиса),  стимулируют Тсистему лимфоцитов, особенно субпопуляцию Тхелперов, фагоцитарную активность нейтрофилов, увеличивают активность гуморальных факторов иммунной защиты.

В связи с вышеизложенным, изучение эпизоотической ситуации,  разработка новых средств и способов иммунологической профилактики вирусных инфекций является актуальной задачей  ветеринарной науки и практики. Поэтому наши исследования были направлены на разработку и совершенствование существующих биотехнологических методов иммунологической профилактики и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота.

Цель и задачи исследований

Целью настоящих исследований явилась разработка и совершенствование биотехнологических средств и методов иммунологической профилактики и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций молодняка крупного рогатого скота.

Для выполнения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи,  парагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций  крупного рогатого скота в  хозяйствах Республики Беларусь.

2. Изучить состояние иммунной системы и обменных процессов организма  телят при пневмоэнтеритах и коров с заболеваниями репродуктивных органов.

3.  Разработать  иммуностимулирующие препараты на основе непатогенных для теплокровных животных бактерий и продуктов пчеловодства, отработать схемы их применения, изучить их влияние на иммунную систему и лечебно-профилактическую эффективность при вирусных  респираторных и желудочно-кишечных  заболеваниях.

4. Разработать унифицированные технологии изготовления и применения  моно- и ассоциированных живых и инактивированных культуральных вирус-вакцин для профилактики инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи,  парагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций  крупного рогатого скота. 

5. Разработать  комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий по профилактике и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят. 

Научная новизна полученных результатов

Впервые в условиях Республики Беларусь изучены особенности  эпизоотической ситуации по инфекционному ринотрахеиту, вирусной диарее, парагриппу-3, рота- и коронавирусной  инфекциям в животноводческих хозяйствах. Впервые теоретически обоснованы  и практически использованы технологии изготовления и применения новых  иммуностимулирующих препаратов на основе бактериальных липополисахаридов и продуктов пчеловодства при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях крупного рогатого скота (Патенты Республики Беларусь № 2889, 3913, Республики Молдова № 889, 890, 891). Установлено явление спонтанной персистенции генома инфекционных вирусов в бактериальных клетках, что приводит к биосинтезу вирусспецифических белков в бактериях (диплом  на открытие № 291 от 18.10.2005 г.). Разработаны унифицированные технологии изготовления и применения моно- и ассоциированных живых и инактивированных  вакцин для профилактики  вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят (патенты Республики Беларусь № 5304, 10696, 10697). Впервые изучено влияние на иммунную систему телят моно- и ассоциированных вакцин против респираторных заболеваний и предложены способы стимуляции иммунитета с помощью препаратов бактериального происхождения и препаратов из пчелиной перги. По результатам собственных исследований разработана научная концепция изготовления и  применения вакцин и иммуностимуляторов  в промышленном животноводстве, предусматривающая регламентированное их использование  с учетом состояния иммунной системы  организма. Разработана научная основа оптимизации вакцинопрофилактики респираторных  и  желудочно-кишечных инфекций телят. Результаты исследований позволяют дополнить  и систематизировать научную теорию превентивного применения вакцин и иммуностимуляторов  в промышленном животноводстве.

Практическая значимость и реализация результатов исследований

Результаты экспериментальных исследований обогащают современные знания по вопросам патогенеза, лечения и профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота, что позволяет с достаточно высокой точностью и эффективностью производить борьбу с данными заболеваниями. Изучена этиологическая структура возбудителей респираторных и желудочно-кишечных инфекций в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь, состояние иммунной системы и обмена веществ при данной патологии  у телят. Разработанные средства, способы и схемы применения иммуностимулирующих и вакцинных препаратов для  профилактики и терапии респираторных заболеваний телят позволяют  значительно сократить их заболеваемость и непроизводительное выбытие. На основании проведенных  исследований утвержнеа нормативная документация на 7 живых и инактивированных  вакцин, 14 методических  рекомендаций и указаний по совершенствованию ветринарно-санитарных мероприятий при пневмоэнтеритах телят. 

Применение указанных разработок в условиях производства позволяет в 3-5 раз сократить заболеваемость и непроизводительное выбытие молодняка крупного рогатого скота от вирусных респираторных и желудочно-кишечных  инфекций.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

— распространение  вирусных респираторных и желудочно-кишечных  инфекций крупного рогатого скота в Республике Беларусь, что позволяет рационально  осуществлять планирование противоэпизоотических мероприятий;

— состояние обмена веществ и иммунитета у телят при вирусных респираторных и желудочно-кишечных  инфекциях; 

— результаты разработки, апробации и внедрения иммунокорригирующих препаратов из продуктов пчеловодства, сапрофитных бактерий, тканей животных и препаратов серебра;

— результаты конструирования и  внедрения моно-, би-, трех- и четырехвалентных  живых  и инактивированных вирус-вакцин для специфической профилактики  вирусных респираторных и желудочно-кишечных  инфекций крупного рогатого  скота; 

— закономерности иммунного ответа у телят после иммунизации их вакцинами при раздельном и комбинированном применении со стимуляцией поствакцинального иммунитета, позволяющие получать у животных напряженный иммунитет и  снижать заболеваемость телят респираторными инфекциями;

Личный вклад соискателя

Исследования по разработке средств и методов иммунологической профилактики и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций, отработке параметров изготовления иммуностимулирующих  и вакцинных препаратов, разработке схем их применения проводились лично соискателем. При выполнении комплексных разработок – иммуностимулирующих и вакцинных  препаратов личный вклад соискателя составлял  от 60 до 100%.

Апробация результатов диссертации

Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены: на заседаниях и РУП «Институт эксперментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского (1991-2008 гг.); Международных, Всесоюзных и Республиканских конференциях, симпозиумах  и конгрессах:

Научной конференции «Болезни молодняка сельскохозяйственных животных и их профилактика на комплексах», Таллин: 1984; Научной конференции «Вопросы интенсификации и научно-обоснованного ветеринарного обслужива­ния промышленного жи­вотноводства», Кишинев, 1987; Всесоюзной научной конференции «Стресс и иммунитет», Ростов-на-Дону, 1989; Первом иммунологическом съезде Сочи, 1989; Научно-практической  конференции «Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных», Минск, 1990; Всесоюзной научно-технической конференции «Современные проблемы иммунологии, биотехнологии и клеточной инженерии в ветеринарной медицине», Нижний-Новгород, 1990; Научной конференции «Siuolaikines veterinarijos problemos», Kaisiadorys, Литва, 1993; Научной конференции «Апитерапия и пчеловодство», Вильнюс, 1993; Научно-практической  конференции «Збереженiсть молодняка с/г тварин – запорука розвитку твариництва Украiни», Харькiв, 1994; Научно-практической  конференции «Бiотехнологiя ветеринар­них препаратiв», Харькiв, 1993; Международной научной конференции «Общая эпизоотология: им­мунологические, экологи­ческие и методологиче­ские проблемы», Харьков, 1995; Международной научной конференции  «Иммунодиагностика и иммунотерапия», Витебск, 1995;  Международной научно-практической  конференции «Актуальные проблемы ве­теринарной медицины»,  Смоленск, 1996; 5-й Научно- практической  конференции  по апитерапии “Пчелы и ваше здоровье”, Сочи, 1996; Международном координационном совещании «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных», Воронеж, 1997; Международной научно-практической  конференции «Научно-технический про­гресс в сельскохозяйствен­ном производстве», Минск, 1997; Международной научно-практической  конференции «Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы» Гродно, 1997; 6-й научно-практической  конференции  по апитерапии “Пчелы и ваше здоровье” Рыбное, 1997; Международной научно-практической  конференции «Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве», посвященной 100-летию со дня рождения академиков АНБ Х.С.Горегляда и М.К.Юсковца, Минск, 1998; 1 итоговой научно-прак­тической конференции Бел­НИИЭМ, Минск, 1998; Республиканской  научно-практической  конференции «Инфекция и иммунитет», посвященная  75-летию БелНИИЭМ,  Минск, 1999; Учредительной конференции Междуна­родной ассоциации парази­тоценологов, Витебск, 1999; Международной научно-практической  конференции «Актуальные проблемы па­тологии сельскохозяйст­венных  животных», посвященной 70-летию Бел­НИИЭВ им. С.Н.Выше­лесского,  Минск, 2000; II Международной научно-практической конферен­ции «Апитерапия сегодня – с  биологической аптекой пчел в XXI век», Уфа, 2000; 1 Международной научно-практической конференции и пчеловодству и пчелоте­рапии «От медоцелительства до научной пчелотерапии III тысячелетия» Минск, 2002; Научно-производственной конференции «Внедрение достижений ветеринарной науки в сельскохозяйственное производство», Смоленск, 2002; Международной научно-практической конференции «Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных», Минск, 2003; Шестом Международном форуме по глобальной вакцинологии «Вакцины и иммунизация», Минск, 2003; Международной научно-практической конференции. «Современное состояние и актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства», Ялта, 2005; Simpozionul stiintific international consacrat jubileului de 50 ani de la fondarea Institutului de Zootehnie si Medicina Veterinara "Realizari si perspective in cresterea animalelor", Chisinau, 2006; III з’iзд апiтерапеватiв Украiни. Апiтерапiя: досягнення та перспективи розвитку.  Харкiв, 2006.

       Опубликованность результатов.

По теме диссертации опубликовано 105 научных работ, в том числе 7 монографий, 11 статей в изданиях, рекомендованных ВАК Российской Федерации, 32 статьи в журналах  и сборниках трудов СНГ, 39 статей и тезисов докладов в материалах конференций, 1 свидетельство на научное открытие, 15 патентов и авторских свидетельств, 14 рекомендаций.
Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 483 страницах машинописного текста и состоит из: введения, общей характеристики работы, обзора литературы по теме и выбора направления исследований, изложения общей методики и основных методов исследований, 8 глав собственных исследований, анализа и обобщения результатов исследований, выводов и практических предложений. Список использованной литературы включает 467 наименование работ отечественных и зарубежных авторов. Материалы диссертации иллюстрированы 115 таблицами, 42 фотографиями и рисунками. В приложении  на 82 страницах, приводятся документы и таблицы, подтверждающие результаты отдельных работ, их научную и практическую значимость.

Материалы и методы исследования 

Работа выполнена в условиях отдела вирусных инфекций  РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» и в животноводческих хозяйствах РБ в период с 1991 по 2008 год.

Для конструирования вакцин и проведения иммунологических исследований и получения бактериальных липополисахаридов, пробиотиков использованы штаммы вирусов – инфекционного ринотрахета КМИЭВ-6, диареи  КМИЭВ-7, парагриппа-3 КМИЭВ-8, ротавирус КМИЭВ-3, коронавирус КМИЭВ- 1 и бактерий: E. coli, St. epidermidis № 56, M. lysodeicticus, Bac. subtilis, Bacillus alvei КМИЭВ-11.

В качестве основного объекта исследований были использованы коровы и телята черно-пестрой породы из животноводческих хозяйств Республики Беларусь. Для диагностики ИРТ использовано 7068 сывороток крови от крупного рогатого скота из хозяйств Республики Беларусь; к вирусу диареи - соответственно 7692, ПГ-3 – 3159, ротавирусу –  1165, коронавирусу – 1165.

В опытах по изучению состояния иммунитета у телят и иммунологической перестройки организма после обработки иммунобиологическими препаратами (иммуностимуляторами,  вакцинами), лечебной и профилактической эффективности испытуемых средств в производственных условиях использовано 23799 телят в возрасте от 1 дня до 6-месяцев, 14025 коров., 290  кроликов породы шиншилла и белый великан массой 1 – 4 кг, 295  белых мышей, 152  белых крыс.

Выполнено более 3800  серологических, 5000 вирусологических,  5250  иммунологических и 750 биохимических исследований.

Для решения поставленных задач по изучению эпизоотической ситуации, разработке, изучению и внедрению  средств и методов профилактики и терапии вирусных  пневмоэнтеритов телят был использован комплекс различных методов исследований.

1. Клинико-эпизоотологическое обследование животноводческих хозяйств, в которых эпизоотическая обстановка по массовым желудочно-кишечным и респираторным заболеваниям телят была  напряженной, проводили по Бакулову (1982),. Эпизоотическая обстановка учитывалась с использованием статистического, описательно-исторического, клинико-гематологического, патологоанатомического, серологического и иммунологического методов исследований по общепринятым методикам.

Диагноз желудочно-кишечных и респираторных болезней телят вирусной и бактериальной этиологии  устанавливали, используя метод эпизоотического обследования, в комплексе с клиническим исследованием животных, патолого-анатомическими изменениями у вынужденно убитых и павших животных. Для оценки эпизоотического процесса определяли заболеваемость и смертность.

Для определения эффективности иммуностимулирующих и вакцинных препаратов при  пневмоэнтеритах телят проводили клиническое обследование животных - температуру тела, пульс и дыхание определяли выборочно у отдельных животных в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств. Всего общему клиническому обследованию и наблюдению было подвергнуто более десяти тысяч голов крупного рогатого скота в хозяйствах Республики Беларусь.

2. Серологические методы включали исследование сывороток крови от здоровых  и больных животных с различным клиническим состоянием и после введения сывороток и иммунизации вирус-вакцинами. С целью установления противовирусных антител использовали следующие серологические реакции:

а) реакцию нейтрализации (РН) ставили  с целью выявления антител к вирусам ИРТ, ВД, ПГ-3, рота-  и коронавирусам в исследуемых сыворотках крови кроликов для оценки иммуногенности вакцин по общепринятой методике (В. Н. Сюрин с соавт., 1986);

б) реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) ставили с целью выявления антител к вирусам ИРТ,  ВД, рота-  и коронавирусам в сыворотках крови с помощью эритроцитарных диагностикумов (П. А. Красочко с соавт., 1988, 1995); 

в) реакцию задержки гемагглютинации (РЗГА) для диагностики парагриппа-3  и установления уровня поствакцинальных антител ставили с помощью набора диагностикумов производства Приволжской биофабрики (В. Н. Сюрин с соавт., 1986);

г) иммуноферментный анализ (ИФА, Elisa) ставили по В. Н. Сюрину с соавт. (1983) в нашей модификации;

4. Иммунологические исследования проводили по следующим направлениям:

а) оценка специфического гуморального иммунитета  по содержанию иммуноглобулинов М- и G-классов;

б) оценка состояния клеточного иммунитета по содержанию Т и Влимфоцитов,  фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса;

в) оценка состояния неспецифического гуморального иммунитета путем определения бактерицидной активности сыворотки крови, бета-лизинов, титра интерферона, концентрации лизоцима, общего белка.

Количественное определение содержания иммуноглобулинов в сыворотках крови крупного рогатого скота проводили с помощью простой радиальной иммунодиффузии в агаровом геле  по Манчини (1964).

Содержание Тлимфоцитов определяли путем постановки реакции спонтанного розеткообразования со стабилизированными эритроцитами барана, а  Влимфоцитов - с эритроцитами мыши по Д. К. Новикову и В. И. Нови­ковой (1979).

Фагоцитарное число и фагоцитарный индекс нейтрофилов устанавливали по Н. С. Кисляк и Р. В. Ленской (1978) с помощью тест-культуры кишечной палочки или суспензии полистиролового латекса диаметром 0,1 – 0,2 мкм.

Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по О. В. Смирновой и Т. А. Кузьминой (1966) упрощенным нефелометрическим методом по отношению к кишечной палочке (референтный тест-штамм 0 55).

Содержание лизоцима в сыворотках крови определяли нефелометрическим методом по В. Г. Дорофейчуку (1968) по изменению оптической плотности микробной взвеси референтного штамма M. Lysodeictius.

Бактериальный титр интерферона определяли нефелометрическим методом по Н.С.Мурашовой с соавт. (1986) с помощью тест-штамма Staphilococcus epidermidis № 56.

Общий белок сыворотки крови определяли рефрактометрически с помощью рефрактора РПЛ-2.

5.Физико-химические методы исследований включали:

а) выделение иммуноглобулинов классов M и G из сыворотки крови крупного рогатого скот проводили по Й. Броку (1987),  а их очистку  методом гель-филь­тра­ции на ультрагеле АсА22; 

  б) выделение бактериального липополисахарида из Bacillus alvei КМИЭВ-11проводили путем  термогидролиза с помощью уксусной кислоты по В. М. Никитину (1982) в модификации П.А.Красочко с сотавт. (1989). Полученный липополисахарид стерилизовали  автоклавированием.

6. Гематологические исследования выполнялись на гематологическом анализаторе «Medonic CA 620» (Швеция) с использованием  реактивов производства фирмы «Cormey» (Польша). Биохимические исследования крови проводились на бихимическом анализаторе «Соrmey-Lumen» с использованием наборов Сormay serum HN производства фирмы «Cormey»  (Польша).

7. Биометрическая обработка цифрового материала, полученного в экспериментальных исследованиях, проводилась по Р.Б. Стрелкову (1966) с учетом рекомендаций П. Ф. Рокицкого (1967), а  также  с использованием персонального компьютера ISA/PCI 80486DX2-66 и программы Microsoft Exel, графическое обеспечение – с помощью программы Graph Exel.

Экономическую эффективность применения научных разработок рассчитывали согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий», утвержденной ГУВ МСХ и П РБ в 2000 г., а также в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ новой техники, изобретений и рационализаторских предложений», утвержденной МСХ СССР в 1983 г.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение причин возникновения  респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота

в Республике Беларусь

На основе анализа результатов исследований нами установлено,  что в возникновении респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота играют роль следующие факторы:

-основными возбудителями респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят являются вирусы инфекционного ринотрахеита, диареи,  парагриппа-3, рота- и коронавирусы, а также условно-патогенная бактериальная микрофлора, осложняющая течение заболевания;

- иммунодефицитное состояние организма  новорожденных телят (первичный иммунодефицит) или у телят старше 1-месячного возраста под воздействием неблагоприятных технологических и экологических факторов (вторичный приобретенный иммунодефицит);

-способность вирусов инфекционного ринотрахеита, диареи, парвовирусов, проникать через плацентарный барьер и внутриутробно инфицировать плод с его дальнейшей  иммунотолерантностью и вирусоносительством;

-создание стрессовых ситуаций (нарушения технологии  содержания и кормления животных,  несбалансированность рационов по основным питательным веществам, микро- и макроэлементам, витаминам, низкоэнергетическое питание скота, малый фронт кормления животных, скученное содержание телят  на ограниченной площади);

- влияние неблагоприятных экологических факторов внешней среды;

-комплектование групп животных на комплексах или крупных фермах сборными телятами без учета степени инфицированности хозяйств-поставщиков или ферм-поставщиков;

-содержание в одном помещении разновозрастных животных с различным клиническим и иммунологическим состоянием;

-нарушение принципа “пусто-занято” при заполнении помещений новыми телятами;

-генетическая однородность стад, вызванная использованием одних и тех же производителей при осеменении коров;

Наличие антител к вирусам-возбудителям респираторных инфекций в сыворотках крови крупного рогатого скота различных половозрастных групп и клинического состояния свидетельствует о степени инфицированности стад (у взрослых животных), а также о переболевании  молодняка  вирусными инфекциями. В процессе работы для диагностики ИРТ использовано 4456 сывороток крови от коров из хозяйств Республики Беларусь; к вирусу диареи - соответственно 4678, ПГ-3 – 1646. Кроме того, от переболевших респираторными инфекциями телят 3-4 месячного возраста для диагностики ИРТ было происследовано 1955,  ВД -2357, ПГ-3 - 1031 сывороток крови. Также были происследованы сыворотки крови от клинически здоровых телят 6-месячного возраста соответственно 657, 657, 482 проб.

В табл.1. представлены результаты  исследований сывороток крови от  крупного рогатого скота  на наличие антител к вирусам ИРТ, ВД  и ПГ-3.

Таблица 1. Результаты исследования сывороток крови от крупного рогатого скота на наличие антител к вирусам-возбудителям респираторных инфекций

Вирус

Показатели

Клиническое состояние и возраст

Коровы, 3—10 лет, клинически здоровые

Телята, 3-4 мес., переболевшие респираторными болезнями

Телята старше 6 мес., клинически здоровые

Инфекционный ринотрахеит

К-во исслед. проб/процент

4456 / 67,6

1955/65,8

657/68,8

Вирусная диарея

К-во исслед. проб/процент

4678 / 86,6

2357 / 84,1

657 / 88,9

Парагрипп-3

К-во исслед. проб/процент

1646 / 55,9

1031 / 71,5

482 / 59,6

Из представленных данных видно, что в стадах крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь  в этиологической структуре вирусных респираторных инфекций основное место принадлежит вирусам ИРТ, ВД  и ПГ-3.

Полученные результаты по распространению вирусов ИРТ, ВД, ПГ-3 среди  коров свидетельствуют о широком распространении данных возбудителей среди воспроизводящего поголовья. Тем самым инфицированные животные способствуют перезаражению новорожденных телят еще в раннем пренатальном периоде развития. Это приводит к массовым вспышкам пневмоэнтеритов телят, особенно при возникновении каких-либо нарушений в кормлении, содержании животных, стрессовых ситуациях.

В табл. 2 представлены результаты диагностических исследований биологического материала при диагностике на вирусные энтериты.

Таблица 2. Результаты диагностических исследований телят

на вирусно-бактериальные энтериты

Инфекция

Вид материала

Количество проб

Положительные пробы, %

вирусная диарея

сыворотка крови от переболевших телят

1270

64,8

фекалии

574

35,1

ротавирусная

сыворотка крови от переболевших телят

1165

90,9

фекалии

492

67,4

коронавирусная

сыворотка крови от переболевших телят

1165

80,6

фекалии

492

33,7

колибактериоз

патологический материал

152

42,4

псевдомоноз

патологический материал

152

5,8

сальмонеллез

патологический материал

152

1,9

стафилококкоз

патологический материал

152

7,7





Анализ результатов диагностических лабораторных исследований показал, что при серологическом исследовании антитела к вирусу диареи выявлялись у 64,8% обследованных переболевших энтеритами телят из хозяйств, в которых отмечались массовые заболевания телят энтеритами, к ротавирусу – 90,9%, коронавирусу – 80,6%. У больных энтеритами телят установлено наличие антигенов ротавирусов у 67,4% от обследованных животных, коронавирусов –  у 33,7%, вируса диареи - у 35,1%.

Состояние иммунной системы и обмена веществ у телят при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях

Переболевание телят вирусными респираторными и желудочно-кишечными инфекциями сопровождалось значительным угнетением клеточного и гуморального звеньев иммунной системы. Наиболее характерным являлось уменьшение количества Т-лимфоцитов (в 1,2 раза меньше, чем у клинически здоровых), В-лимфоцитов ( в 1,28 раза), фагоцитраной активности нейтрофилов периферической крови (в 1,23 фагоцитраное число и 1,56 - фагоцитарный индекс).

Изучение состояния гуморального иммунитета  показывает, что в 2,7 раза снижается количество лизоцима, в 1,3 раза бактерицидная активностьт сыворотки крови, 1,6 раза титр интерферона,  в 4,3 раза увеличивается количество циркулирующих иммунных комплексов. Кроме того, отмечен повышенный титр противирусных антител. К вирусу ИРТ у больных телят он был в 2,5 раза выше, чем у здоровых, к  ПГ-3 в 2,53 раза.

Наряду с изменениями в иммунной системе переболевание телят вирусными респираторными инфекциями сопровождалось значительными изменениями в белковом, азотистом, углевордном, липидном и пигментном обменах организма животных при респираторных инфекциях. Содержание низкомолекулярных азотистых веществ (мочевины, креатинина и мочевой кислоты) в сыворотке крови у больных и переболевших телят  превышало уровень здоровых животных в 1,2-2,2 раза. Это взаимосвязано с повышенным содержанием циркулирующих иммунных комплексов (в 4,3 и 5 раз выше чем у здоровых), которые  воздействуют на фильтрующую способность почечных канальцев. Концентрация биллирубина в крови у больных и переболевших телят была в 1,3-1,5 раза выше, чем у здоровых, а концентрация глюкозы в 1,23-1,27 раза и липидов в  1,1-1,47 раза ниже. Была повышена активность аспартатаминотрансферразы в 3,14 (у больных) и в 3,2 раза (у переболевших), аланинаминотрансферразы соответсвено 2,7 и 5,09 раза; креатининкиназы в 4,6 и 1,8 раза, понижена активность амилазы в 1,05 и 1,16 раза, щелочной фосфатазы в 1,73 и 1,6 раза, холинэстеразы в 1,28 и 1,05  раза. Значительные изменения отмечены и при изучении минерального обмена - у больных  ОРЗ  телят отмечено повышение концентрации меди в 1,23, калия в 1,13 раза, снижение концентрации кальция в 1,07 раза, железа в 1,72 раза, цинка в 1,4 раза.

Полученные данные свидетельствуют о том, что при переболевании респираторными и желудочно-кишечными заболеваниями в патологический процесс вовлекаются не только органы дыхания и пищеварения, но и угнетаются основные звенья иммунитета, обмена веществ, а также поражаются жизненноважные системы организма теленка - сердечно-сосудистая и выделительная. 

Иммуностимулирующие препараты в терапии и профилактике вирусных респираторных инфекций телят.

Стимуляция иммунной системы телят при вирусных респираторных инфекциях с помощью бактериальных липополисахаридов. 

Известно, что для стимуляции иммунной системы организма животных  используются бактериальные липоплисахариды (ЛПС), являющиеся поликлональными активаторами В-системы лимфоцитов. Обладая высокой иммунологической активностью, данный вид иммуностимуляторов, особенно полученных из грамотрицательных бактерий нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта организма животных и человека, обладает высокой реактогенностью. Поэтому, путем  экспериментальных исследований, из 22 различных штаммов микроорганизмов с использованием таких иммунологических тестов, как реакция бласттрансформации лимфоцитов, нагрузочные тесты с лейкоцитами, взятыми от животных с иммунодефицитами, был отобран ЛПС из спорообразующей  аэробной бактерии - Bac.alvei КМИЭВ-11 - возбудителя европейского гнильца пчел. Данный микроорганизм  не имеет контакта с теплокровными животными и поэтому его применили  в диагностических целях для оценки  функционального состояния В-системы лимфоцитов, а также для повышения резистентности организма  сельскохозяйственных животных. В целях диагностики бактериальный ЛПС из Bac.alvei КМИЭВ-11  использован для постановки реакции бласттрансформации в концентрации 20-50 мкг/мл. При сравнении  результатов РБТЛ, поставленной с ЛПС из Bac.alvei и Bact.prodigiosum и E.coli, фитогемагглютинином, конканавалином-А установено, что он по своей активности не уступает общепринятым митогенам и его можно с успехом использовать в комплексных исследованиях при оценке функционального состояния Т- и В-лимфоцитов.

При использовании вышеуказанного ЛПС для телят наиболее оптимальной явилась доза 5-10 мкг/кг живой массы. После однократной обработки телят ЛПС  в этих дозах к 5 дню отмечено увеличение Т-лимфоцитов  на 47%, В-лимфоцитов на 37%, фагоцитарного числа на 15% по сравнению с исходными данными. К 14 дню указанные показатели снизились и пришли к уровню исходных данных. После трехкратной обработки телят ЛПС из Bac.alvei с интервалом в 7 дней  отмечена значительная стимуляция клеточного и гуморального иммунитета, продолжающаяся до 18 дня наблюдения. Так, к 4 дню отмечено возрастание  фагоцитарного числа на 22%, фагоцитарного индекса на 108%, к 8-му дню - соответственно на 25 и 52%, к 18-му дню – на 5 и 27%, Т-лимфоцитов - соответственно на 37%, 45%,  33%; В-лимфоцитов на 62%, 87%, 55%, лизоцима на 94% (5-й день), 215% (8-й день). Другие показатели гуморального иммунитета у обработанных телят не отлачилсь от уровня контрольных животных.  Обработка телят бактериальным ЛПС оказывает активизирует белковый, углеводный, липидный, азотистый, пигментный, минеральный обмены. Производственные испытания бактериального ЛПС на телятах с целью повышения резистентности организма  показали высокую его эффективность. Заболеваемость телят ОРЗ снизилась в 2,3 раза, прирост живой массы увеличился на 80 г, окупаемость ветмероприятий составила 10,86 рублей на 1 рубль затрат.

Иммунологическая эффективность препарата, полученного на основе пчелиной перги.

Нами разработана технология изготовления инъекционной формы иммуностимулирующего препарата  “Апистимулина-А” на основе пчелиной перги с  низкой себестоимостью и высокой эффективностью. Проведенные токсикологические исследования показали его низкую токсичность и отсутствие аллергенных свойств, стимулирущее воздействие на обмен веществ организма лабораторных животных.  В результате проведенных исследований на животных установлена терапевтическая доза, которая составила  1 мг/кг живой масы  при 3-4-х кратном введении с интервалом в 3-4 дня. При обработке больных пневмоэнтеритами телят отмечалось восстановление угнетенных звеньев иммунитета до уровня клинически здоровых животных. При изучении влияния на клеточный и гуморальный иммунитет препарата “Апистимулин-А” в оптимальной терапевтической дозе  (1 мг/кг массы) у клинически здоровых (подопытная группа № 1) и больных пневмоэнтеритами (подопытная группа № 2) телят установлено, что введение препарата способствует увеличении Т- и В-лимфоцитов, активизации фагоцитарной активности нейтрофилов, повышении активность интерферона и лизоцима. Проведенные производственные испытания препарата “Апистимулин-А” показали, что его применение способствует  снижению заболеваемости телят респираторными инфекциями с 66,7-95% до 20-32,5%, отхода с 17,3-23,35 до 4,8-7%. Окупаемость ветмероприятий при его использовании составляет 40,39 рублей на 1 рубль затрат.

Иммунологическая перестройка организма телят и лечебно-профилактическая эффективность Т-активина при респираторных заболеваниях. 

В ряду известных иммуностимулирующих препаратов, нашедших применение в профилактике и терапии респираторных заболеваний телят особое место принадлежит Т-активину, представляющему собой комплекс полипептидов из тимуса крупного рогатого скота. Проведенные исследования по изучению  лечебно-профилактической эффективности и влияния на клеточный иммунитет больных ОРЗ телят показали его высокую активность. В частности, отмечено стимулирующее влияние на лимфоциты периферической крови (на общее их количество, на Т-и В-систему лимфоцитов). Установлено, что в результате заболевания у телят отмечается значительное угнетение Т- и В-звеньев лимфоцитов -  до 10,0+0,95 и 10,2+0,84%. Но через 7 дней  после обработки Т-активином отмечается значительное увеличение их количества - соответсвенно  до 19,4+1,29% и 13.0+0,9%. К 28 дню наблюдения количество Т-лимфоцитов возросло до 24,8+0,9% и В-лимфоцитов до 15,4+1,72%. У контрольных животных значительных колебаний в содержании Т- и В-лимфоцитов не обнаружено. Обработка телят Т-активином восстанавливала угнетенные звенья клеточного иммунитета у телят, больных ОРЗ, что способствовало быстрейшему их выздоровлению.

Лечебно-профилактическая эффективность Т-активина была проверена на 2-х группах телят, заболеваемость в которых  составляла 50%. После обработки Т-активином, число больных телят через 4 дня снизилось до 25%, а через 20 дней - до 4,5%, тогда как среди телят контрольной группы к 10 дню больных было 63,6%. К 20 дню число заболевших было 36,4%, а к 40 дню  - 9,1%. Полное выздоровление  телят  контрольной группы произошло к 45 дню наблюдения. Экономическая эффективность от применения Т-активина составляет 2,54 рубля на 1 рубль затрат.

Иммунологическая и лечебно-профилактическая эффективность  протаргола при вирусных респираторных инфекциях.

Из имеющихся антибактериальных  химиотерапевтических препаратов известны препараты серебра - протаргол и колларгол, которые обладают противовирусными и иммуностимулирующими свойствами. В результате проверки раствора протаргола в различных концентрациях на культуре клеток отмечено угнетение репродукции вирусов ИРТ и ВД при 0,25-0,5%-ной его концентрации. Проведенные исследования влияния 0,5%-ного раствора протаргола на иммунную систему позволили установить его иммуностимулирующий эффект. Так, через 14 дней после обработки у телят отмечено увеличение Т-лимфоцитов на 49%, В-лимфоцитов на 55%, фагоцитарного числа на 15%, фагоцитарного индекса на 58%, бактерицидной активности сыворотки крови в 2 раза, общего белка сыворотки крови на 34%. Это позволило применить его для лечения вирусных респираторных инфекций животных. Протаргол для лечения телят использовали в 0,5%-ной концентрации, растворенный на неспецифическом иммуноглобулине. Применялось интратрахеальное и аэрозольное введение препарата. Интратрахеально раствор протаргола вводили 3-4-х кратно с интервалом в 3-5 дней, аэрозольно- в дозе 2 мл на 1 кубический метр помещения 1 раз в 3-5 дней с экспозицией не менее 60 минут. В результате проведенных исследований коэффициент заболеваемости интратрахеально обработанных телят снижается с 0,24 до 0,08, аэрозольно обработанных - с 0,42 до 0,24. Окупаемость ветеринарных мероприятий  соответственно составляла 12,01 и 8,81 рублей на 1 рубль затрат.

Специфическая профилактика вирусных респираторных и желудочно-кишечных  инфекций телят

Общие подходы к конструированию вакцин для профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных  инфекций телят.

В комплексе лечебно-профилактических мероприятий при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях крупного рогатого скота специфическая профилактика занимает одно из ведущих мест.

Специфическая профилактика  этих инфекций в современных условиях  осуществляется по следующим направлениям:

  1. Активная специфическая профилактика живыми и инактииврованными  моно- и ассоциированными вакцинами;
  2. Активная специфическая профилактика с использованием рекомбинантных  штаммов бактерий, имеющих в своем геноме геном вирусов;
  3. Активная специфическая профилактика с использованием маркерных штаммов  вирусов;

Вакцинация телят позволяет создать напряженный специфический иммунитет (как местный, так и общий), а также неспецифический противовирусный иммунитет из-за высокой интерфероногенной активности некоторых вакцинных штаммов вирусов, обусловленный созданием невосприимчивости к ряду возбудителей, не входящих в вакцину. Такое положение характерно для иммунизации живыми вирус-вакцинами. Постоянная иммунизация как молодняка крупного рогатого скота, так и взрослых животных способствует вытеснению из стада эпизоотических штаммов вирусов вакцинными и тем самым снижению степени инфицированности возбудителями респираторных инфекций. Это относится к таким вирусным инфекциям, как инфекционный ринотрахеит, вирусная диарея, парагрипп-3, респираторно-синцитиальная инфекция.

Но механизм действия инактивированных  вакцин  несколько иной. В основном инактивированные вакцины при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях используют:

-для иммунизации племенных животных, которым нежелательно применять живые вакцины;

- для иммунизации глубоко стельных коров с целью создания напряженного колострального иммунитета  у телят;

- на заключительных стадиях оздоровления хозяйств от вирусных инфекций. 

Современное ведение животноводства, связанное с нарушениями в кормлении, содержании животных, постоянными стрессами приводит к значительному угнетению иммунной системы. В идеальных условиях профилактическая эффективность вакцин должна быть 90-100%, однако при современных условиях содержания животных, иммунизация крупного рогатого скота, у которого отмечены нарушения обменных процессов и угнетение иммунной системы сопровождается  значительным снижением эффективности вакцин. Для решения вопроса повышения эффективности иммунизации наряду с улучшением технологии содержания и кормления животных, важным моментом является стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью иммуностимулирующих препаратов.

В связи  с вышеизложенным, нами проведен комплекс исследований по разработке технологии изготовления живых  и инактивированных  моно- и ассоциированных вирус-вакцин для  иммунизации крупного рогатого скота различного возраста и физиологического состояния, а также принципа стимуляции иммунной системы при иммунизации вирус-вакцинами.

Исследования по разработке  живых  и инактивированных  моно- и ассоциированных вирус-вакцин  против ИРТ, ВД, ПГ-3,  рота-  и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота проводились в несколько этапов:

- Подбор и отработка режимов культивирования вакцинных штаммов  вирусов;

- Отработка оптимальных методов инактивации  вирусов для конструирования инактивированных  вакцин;

- Изучение антигенной активности живых  и инактивированных штаммов вирусов  на лабораторных и сельскохозяйственных животных;

- Подбор оптимальных адъювантов для конструирования инактивированных  вакцин;

- Отработка оптимальных доз и соотношений компонентов при конструировании ассоциированных  живых и инактивированных  вирус-вакцин;

- Изучение иммунологической перестройки  организма коров и телят  после иммунизации  живыми и  инактивированными вирус-вакцинами;

- Определение иммуногенности живых  и инактивированных культуральных вирус-вакцин  против вирусных  инфекций крупного рогатого скота на лабораторных животных.

- Изучение профилактической эффективности живых  и инактивированных культуральных вирус-вакцин против вирусных инфекций при респираторных и желудочно-кишечных болезнях телят,  заболеваниях репродуктивных органов коров.

Подбор, селекционирование, отработка режимов культивирования и антигенная активность вакцинных штаммов  вирусов крупного рогатого скота для конструирования вакцин

Как правило, для изготовления вирус-вакцин  накопление вирусной массы осуществляется на  первично трипсинизированных  культурах  клеток почки  эмбриона теленка или тестикул бычка, а в последние годы - перевиваемых культурах  клеток  (ПТ-линия "Таурус", МДБК, ПТ-80).  В  качестве  питательных  культуральных сред применяли среду 199, 0,5% лактальбумина гидролизат, среду Игла, ферментный гидролизат мышечных  тканей (ФГМС). Для повышения эффективности культивирования и удешевления вакцин нами для накопления вирусной массы использованы перевиваемые культуры  клеток  ПТ-линия "Таурус", МДБК, ПТ-80, которые адаптированы к 5%-ному гемогидролизату, изготавливаемому на предприятии «Диалек» (Белбиофарм Республики Беларусь). Данная питательная среда в 3-4 раза  дешевле вышеуказанных и  по своим ростовым свойствам им не уступает. 

Для конструирования живых вакцин против ИРТ крупного рогатого скота в Республике Беларусь и странах  СНГ  с 70-х годов  используются аттенуированные штаммы ТК-А и МВА 2/81, а инактивированных – «4016», «Оренбург» и «Молдавский», диареи -  крупного рогатого скота в Республике Беларусь и странах  СНГ  используются аттенуированный штамм ВК-№ 28, а инактивированных – «Орегон С-24», парагриппа-3 крупного рогатого скота в Республике Беларусь и странах  СНГ  используются аттенуированные штаммы ПТК-45, SF-4, «Белорусский-9», ротавирусной инфекции  - эпизоотические  штаммы ротавирусов  243,  «Белорусский-7», коронавирусной инфекции  - эпизоотические  штаммы коронавирусов «Линкольн»,  F-17 и  «Белорусский-11».

При  этом проведена работа по адаптации референтных штаммов вирусов ИРТ, ВД,  ПГ-3, коронавируса, в основном культивируемых на первичных клетках почки эмбриона коровы (ПЭК) к перевиваемым клеткам - почки теленка (ПТ, линия “Таурус”), (ПТ-80) и МДБК, адаптированных к 5%-му гемогидролизату. Ротавирус адаптировали к перевиваемыем линиям клеток почек зеленой мартышки – Vero, почки теленка – МДВК, перевиваемые клетки почки поросенка – СПЭВ. Проведение 12 пассажей каждого вируса на новых клеточных линиях показали,  что  вышеуказанные перевиваемые культуры можно с успехом использовать для накопления вирусной массы при конструировании вакцины.

Особенно высокий инфекционный титр установлен при культивировании вирусов на  перевиваемых клетках МДБК (до 6,5 -8,0 lg ТЦД 50/мл). 

Для идентификации ДНК и РНК вирусов и подтверждения их специфичности нами проведено типирование нуклеиновых кислот в полимеразной цепной реакции в условиях отдела биотехнологии Института Сибири и Дальнего Востока РАСХН, диагностической лаборатории Белорусского государственного ветеринарного центра.

На рис. 1 - 4 представлены результаты постановки ПЦР с штаммами  вирусов ИРТ, ВД,  рота- и коронавируса

Рисунок 1. Постановка ПЦР с различными штаммами вируса ИРТ

Рисунок 2. Постановка ПЦР с различными штаммами вируса диареи

1 2  3

Маркеры - стандартные  олигонуклеотидные  праймеры ротавируса. 2 - отрицательный контроль; 1 – РНК из ротавируса КМИЭВ 3, 3 – положительный контроль

1  2  3

Маркеры - стандартные  олигонуклеотидные  праймеры коронавируса. 2 - отрицательный контроль; 1 – РНК из коронавируса КМИЭВ 1, 3 – положительный контроль

Рисунок 3. Постановка ПЦР с ротавирусом крупного рогатого скота

Рисунок 4. Постановка ПЦР с коронавирусом крупного рогатого скота

В дальнейшей работе нами использованы адаптированные и аттенуированные штаммы вирусов, которые депонированы в Республиканской коллекции микроорганизмов и им присвоены номера: инфекционного ринотрахеита - КМИЭВ – 6, диареи - КМИЭВ – 7, парагриппа-3 – КМИЭВ- 8, ротавирус – КМИЭВ – 3, коронавирус - КМИЭВ – 1.

Следующим этапом работы при разработке культуральных вирус-вакцин против ИРТ, ВД,  ПГ-3 рота-  и кронавирусной инфекций крупного рогатого было изучение возможности отдельного и совместного культивирования аттенуированных и адаптированных к перевиваемым культурам клеток вакцинных штаммов вирусов.

Первоначально была проведена работа по  изучению возможности одновременного культивирования аттенуированных штаммов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 при раздельном и совместном инфицировании культуры клеток МДБК. Заражение культуры проводили вирусами ИРТ — штамм «КМИЭВ-6», ВД — «КМИЭВ-7», ПГ-3 – «КМИЭВ-8» в разных дозах и соотношениях. О репродукции  вирусов  судили по их титру. Так,  при совместном культивировании на культуре клеток штаммов вирусов ИРТ,  ВД и ПГ-3 они  репродуцируются не в одинаковой степени. Так, вирус диареи способствовал угнетению накопления вирусов ИРТ и ПГ-3 вследствие его быстрой репродукции. Это не позволяет использовать метод одновременного культивирования вирусов ИРТ,  ВД и ПГ-3 на культуре клеток, т.к. получаемый низкий титр вирусов снижает экономическую эффективность промышленного  производства вакцины. 

Также была проведена работа по  изучению возможности одновременного культивирования аттенуированных штаммов рота- и коронавирусов при раздельном и совместном инфицировании культуры клеток МДБК. Заражение культуры проводили ротавирусом – штамм «КМИЭВ-3» и коронавируса – штамм «КМИЭВ-1»  в разных дозах и соотношениях. При совместном культивировании на культуре клеток штаммы рота- и коронавирусов также репродуцируются не в одинаковой степени. Ротавирус, репродукция которого проходила за 24 часа, способствовал угнетению накопления коронавируса. Это не позволяет применять метод одновременного культивирования рота- и  коронавирусов на культуре клеток, т.к. получаемый низкий титр коронавируса снижает экономическую эффективность промышленного  производства вакцины. 

При накоплении монокомпонентов вакцин на матрасах и на роллерах  ЦПД, характерное для вируса ИРТ наступало через 36-48 часов,  вируса диареи - 24-36 часов, вируса парагриппа-3 - 60-72 часов, ротавируса – через 24 часа, кронавируса -  через 72-96 часов. К этому сроку отмечалась полная деструкция клеточного монослоя, его сползание со стекла и наличие в вируссодержащей жидкости взвеси клеток.  Титрация вируссодержащей жидкости по Риду и Менчу показала, что после культивирования на матрасах титр вируса ИРТ составлял 5,5-6,0 lg ТЦД 50/ 1,0 мл, вируса диареи - 6,0-6,5 lg ТЦД 50/ 1,0 мл, вируса парагриппа-3 - 5,0-5,5 ТЦД lg 50/1,0 мл, ротавируса – 7,5-8,0 ТЦД lg 50/ 1,0 мл, коронавиурса – lg 5,0  ТЦД 50/ 1,0 мл.  Но при культивировании на роллерах - титр вируса был выше на 1,5-2.0 lg ТЦД 50/ 1,0 для каждого вируса.

Изучение  антигенной активности  адаптированных нами штаммов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3, рота-  и коронавирусов на кроликах и телятах в сравнении с исходными проводилось путем двукратного внутримышечного введения кроликам  по 2 мл  вируссодержащей жидкости каждого из вирусов при  инфекционном титре 6,0 lg ТЦД 50/мл и телятам  - интратрахеального или внутримышечного по 2 мл вирусов при этом же титре. Кровь у животных брали до введения вирусов и через 14 дней после введения. В сыворотках крови титр антител определяли в реакции нейтрализации на культуре клеток. 

Результаты исследований показали, что адаптация вирусов ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и коронавирусов на клеточных линиях МДБК и СПЭВ не влияет на их антигенную активность в сравнении с исходными штаммами. Штаммы не реактогенны, вызывают активную выработку противовирусных антител сельскохозяйственными (крупный рогатый скот) и лабораторными (кролики) животными в достаточно высоких титрах.

Конструирование, иммунологическая и профилактическая эффективность  живых  и инактивированных  моно- и ассоциированных вакцин против респираторных  и желудочно-кишечных  инфекций крупного рогатого скота. 

Вирусвакцина живая культуральная против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. При разработке моновакцины против ИРТ была отработана оптимальная доза вируса и кратность его введения. Доза вируса  составляла 1-2 мл при  инфекционном титре от 5,5 до 6,0 lg ТЦД 50/мл, кратность - 21-28 дней, что вызвало максимальную выработку противовирусных  антител. При изучении иммунологической перестройки организма животных после иммунимзации моновакциной против ИРТ установлено, что титр антител к 4 дню возрос в 3,25 раза, к 11 дню — в 4 раза, а к 42 дню — в 6,75 раза по сравнению с исходными данными. У контрольных животных также отмечалось увеличение титра антител, однако их уровень был значительно ниже, чем у иммунизированных животных. При этом наиболее активно происходит биосинтез иммуноглобулинов M-класса. Так, после вакцинации увеличение количества иммуноглобулинов этого класса происходило до 11 дня с 5,68±0,13 до 6,8±0,13 г/л, после чего отмечено их некоторое уменьшение. Биосинтез иммуноглобулинов G-класса начинался несколько позднее — с 11 дня и его увеличение отмечалось до 42-65 дня -  количество иммуноглобулинов G-класса возросло к 11 дню с 14,6±0,25 до 16,4±0,2 г/л, а к 65 дню достигло 17,0±0,24 г/л. У контрольных телят в биосинтезе иммуноглобулинов Ig G и Ig M значительных колебаний не отмечалось.

У иммунизированных телят количество Т-лимфоцитов к 11 дню возросло с 29,2±1,7% до 44,4±1,7%.  Затем произошло  снижение их количества к 21 дню  до 40,4±1,29%, к 42 до 29,4±1,5%. Аналогично изменялось количество и В-лимфоцитов у телят этой же подопытной группы. К 11 дню наблюдения их количество возросло с 15,2±1,3% до 23,2±0,8%, а к 21 дню  снизилось до 20,6±1,07%, к 42 дню  до 18,6±1,5 г/л.

Установлено, что вакцина против  ИРТ обладает высокой интерфероногенной активностью - титр интерферона у вакцинированных телят возрос к 11 дню с 29,1±5,96 до 59,7±5,6%, после чего отмечалось его снижение,  к  65 дню титр  составил 43,3±9,6%.

Вакцина против ИРТ обладает высокой профилактической эффективностью, котрая составляет 88,2-91% и широко используется в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина живая культуральная против вирусной диареи крупного рогатого скота. В результате проведения исследований по разработке моновакцины против ВД отработана оптимальная доза вируса и кратность его введения, что составляло 1-2 мл при  инфекционном титре от 5,5 до 6,0 lg ТЦД 50/мл, кратность - 21-28 дней. При изучении иммуногенеза у телят  после иммунизации моновакциной против ВД установлено, что титр антител к 4 дню возрос с 0,8 log2 до 4,2±0,4 log2 к 21 дню и до 5.2±0.4 log2 к 42 дню.  У контрольных животных отмечалось увеличение титров антител, но их уровень был значительно ниже, чем у иммунизированных животных. При этом активно происходит биосинтез антител Ig M и Ig G -классов. Так, количество антител Ig M  класса возросло по сравнению с исходными данными в 1,27 раза, к 11  — в 1,34 раза, а к 42  — в 1,59 раза.

При иммунизации телят вакциной против ВД отмечено увеличение Т-лимфоцитов их количество возросло к 11 дню с 25,6±1,7 до 37,6±2,6%, к 21  до 39,0±1,1% и к 42 дню снизилось до 27,8±1,72%. Количество В-лимфоцитов к 11 дню возросло с 16,4±1,3 до 26,0±0,86%, к 21  до 22,4±1,7% и к 42 дню снизилось  до 18,4±0,6%.

Установлено, что вакцина против  ВД обладает высокой интерфероногенной активностью - титр интерферона у вакцинированных телят возрос к 21 дню с 32,6±8,37 до 70,1±6,29%. К 42 дню его титр снизился до 50,8±3,52%.

Вакцина против ВД обладает высокой профилактической эффективностью, котрая составляет 91-96,9% и широко используется в неблагополучных по данной инфекции животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина живая культуральная против парагриппа-3 крупного рогатого скота.

Разработка моновакцины против ПГ-3 включала отработку оптимальной дозы вируса и кратности его введения, что составляло 1-2 мл при  инфекционном титре вируса от 5,5 до 6,5 lg ТЦД 50/мл, двукратно с интервалом  21-28 дней. При изучении иммунного ответа у телят  после иммунизации моновакциной против ПГ-3 установлено, что титр антител к 4 дню возрос в 3,0 раза, к 11 дню — в 3,2 раза, а к 42 дню — в 5,2 раза по сравнению с исходными данными.  После вакцинации активно происходит биосинтез антител Ig M -класса. На 4 день после иммунизации их количество возросло по сравнению с исходными данными в 1,19 раза, к 11  — 1,35 раза, к 42 дню — в 1,45 раза. У телят этой  группы уровень антител Ig G-класса был несколько ниже, чем уровень антител Ig M-класса.  К 14 дню отмечено  увеличение уровня Ig G-антител в 1,1 раза, к 21 дню  - в 1,18 раза,к  42 дню - в 1,39 раза.

При иммунизации телят вакциной против ПГ-3 отмечено увеличение количества Т-лимфоцитов -  их количество  возросло к 11 дню с 26,4±1,7 до 42,4±0,9%, к 21  до 38,8±1,5%, но к 42 дню снизилось до 28,8±0,9%. Количество В-лимфоцитов к 11 дню возросло с 17,13% до 22,60±0,86%, к 21 дню - до 20,8±1,7%, а к 42 дню снизилось  до 19,8±1,3%. Вакцина также обладает интерфероногенной активностью. При иммунизации телят возрастание интерферона продолжалось до 21 дня с 22,7±9,9% до 42,1±3,0%. К 42 дню его титр снизился до 32,9±2,47%.

Вакцина обладает высокой профилактической эффективностью, которая составляет 88,2-91%% и широко используется в неблагополучных по парагриппу-3 животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина бивалентная живая культуральная против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота Инфекционный ринотрахеит  и вирусная диарея имеют широкое распространение среди крупного рогатого скота в различных странах мира -  инфицированность стад крупного рогатого скота этими вирусами составляет от 25 до 70%. Животные в основном переболевают  ассоциациированной ринотрахеитно-диарейной инфекцией, удельный вес которой  составляет 32,8-61,3%, тогда как моноинфекции выявляются значительно реже: ИРТ - 1,6-4,3%, ВД - 10,0 - 30,2%.

При отработке соотношения монокомпонентов вакцины  оптимальным соотношением монокомпонентов бивалентной вирус-вакцины против ИРТ и ВД крупного рогатого скота является 1:1 при инфекционном титре вирусов 5,0 lg ТЦД 50/мл. При этом, уже начиная с 10-го дня наблюдения титры антител к вирусу ИРТ возрастали в с 0,2 до 2,5 log2  , а ВД - с 0,4 до 4,8 log2.  Титр поствакцинальных антител продолждал увеличиваться до 60-го дня наблюдения и составил соответсвенно 7,6 и 7,9 log2. 

У телят, иммунизированных бивалентной и моновакцинами против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, наиболее активно шел биосинтез антител, относящихся к Ig M-классу.  На 10-й день после иммунизации их количество было максимальным.  После этого отмечается снижение биосинтеза антител Ig M-класса, но увеличение биосинтеза  антител Ig G-класса. 

Изучение динамики Т- и В-лимфоцитов у телят, иммунизированных бивалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота отмечено увеличение Т-лимфоцитов к 11 дню с 26,4±1,7 до 42,4±0,9%, В-лимфоцитов – с 17,0±1,3 до 23,6±0,9%, после чего происходило их снижение к 42 дню соответственно до 28,0±0,9 и 19,8±1,3. У телят контрольной группы соджержание Т- и В-лимфоцитов было практически на одном уровне на протяжение всего срока наблюдения.  При иммунизации телят бивалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи  возрастание интерферона продолжалось до 11 дня с 32,3±2,8 до 62,3±1,7%, а затем к 28 дню его титр снизижался до 23,1±1,24%. У телят контрольной группы титр  интерферона был на уровне  25,7±6,9 – 35,5±4,14%.Бивалентная вакцина против ИРТ и ВД  обладает высокой профилактической эффективностью, которая составляет 88,0-90,8%  широко используется в неблагополучных животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина трехвалентная живая культуральная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота.  На основании проведения анализа результатов серологических исследований было установлено, что в хозяйствах  Республики Беларусь животные в основном переболевают ассоциацией вирусов ИРТ+ВД+ПГ-3, удельный вес которой составляет 32,8-61,3%, тогда как моноинфекции выявляются значительно реже: ИРТ - 1,6-4,3%, ВД - 10,0 - 30,2%, ПГ-3 - 5,5-11,2%. Это послужило основанием для разработки трехвалентной живой культуральной вирус-вакцины против данных инфекций. При определении  различных соотношений монокомпонентов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 нами установлены оптимальные соотношения монокомпонентов 1:1:1 при инфекционном их титре каждого вируса 5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл. При этом  биосинтез антител ко всем трем вирусам начинается уже после первого ведения вакцины и на 10-й день его уровень в 3-5 раз выше исходного – титр возрастал с 1:2-1:4 до 1:8-1:16.  Дальнейшее возрастание титров антител продолжалось до 45 дня наблюдения  и достигало 1:32-1:128. Отмечается также и увеличение количества Т-и В-лимфоцитов. Так, количество Т-лимфоцитов к 21 дню увеличилось с 28,4±3,05 до 41,2±5,3%, но к 45 дню снизилось до 38.1±4.91%. Количество В-лимфоцитов увеличилось к 21 дню с 16,4±1,76 до 25,4±3,33%, а к 45 дню снизилось до 22,3±2,87%. Биосинтез имуноглобулинов начался уже с первых дней после вакцинации. Их концентрация к 10-му дню у имунизированных телят возросла  с 14,8 до 16,5 г/л, а к 45 дню - до 17,1 г/л. К 65 дню произошло некоторое их снижение до 16,2 г/л. У контрольных животных титры антител, концентрация глобулинов оставались практически на одном уровне. При изучении бактерицидной активности сыворотки крови у иммунизированных  телят отмечено ее увеличение с 55,6+7,0 до 78,7+14,2% к 30 дню, после чего отмечено ее снижение к 45 дню до 50,8+8,3%; концентрация лизоцима возросла к 10 дню с 1,99+0,3 до 2,88+0,5 мкг/мл,  после чего произошло его снижение к 45 дню до 1,05+0,4 мкг/мл; титр интерферона возростал  к 21 дню с  35,6+8,3 до 70,1+6,1%, после чего отмечалось снижение до 56,9+9,1%. У контрольных животных эти показатели имели недостоверные колебания по сравнению с исходными данными.

Производственные испытания трехвалентной вакцины  против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота показали, что после иммунизации  телят в условиях животноводческих комплексов  заболеваемость с признаками пневмоэнтеритов  составляла от  4,3% до 11,4%, тогда как в группе  неиммунизированных телят заболеваемость была 95,5%- 97,1%. В опытных группах телят падежа и вынужденного убоя не было, а в контрольной - отход составлял от 7,1% до 14,5%.

У телят, полученных от  иммунизированных коров, с признаками пневмоэнтеритов заболевало от 5,9% до 7,1% животных, отход составлял  от 0,88% до 2,1%. Среди телят, полученных от  неиммунизированных коров  заболеваемость составляла от 77,9 до 90,8%, отход от 8,3% до 11,4%. Профилактическая эффективность  вакцины на телятах составляла 95,7%, на коровах - 92,9%.

Ассоциированная вакцина против рота-  и коронавирусной инфекций  крупного рогатого скота. При исследовании материала от больных энтеритами новорожденных  телят в биологическом материале обнаруживаются антигены рота- и коронавирусов у 42 - 64% обследованных животных,  у переболевших пневмоэнтеритами телят количество положительных проб было на 24-33,5% больше, чем у больных, что указывает на этиологическую роль вышеуказанных вирусов в возникновении заболевания.

При отработке режимов инактивации рота-  и коронавирусов было установлено,  что инактиванты формалин, теотропин в небольших концентрациях (0,125% - 0,3%) вызывают их полную инактивацию. 

При изучении эффективности инактивации  вакцинных штаммов, установлено, что наиболее эффективным явился способ инактивации с помощью 0,2% раствора теотропина. 

На основании проведенного изучения иммунного ответа после введения кроликам и крысам инактивированных рота- и коронавирусов крупного рогатого  с различными адъювантами установлено, что оптимальными адъювантами являются: для ротавирусов – 1 и 2% суспензия целлюлозы (титр антител 3,5 и 4,5 log2 у кроликов и 3,5 log2  у крыс) и 10%-ный  эмульсиген (3,5 log2 у кроликов и 4,0 log2  у крыс); для коронавирусов  - 2% суспензия целлюлозы (титр антител 4,38 log2 для кроликов и 3,38 log2  для крыс) и 10% эмульсиген (титр антител 4,50 log2 для кроликов и 4,80 log 2 для крыс). Оптимальной дозой монокомпонентов при инфекционном титре 6,5 lg ТЦД 50/мл является  2,5 мл на голову, что дает максимальное возрастание титров антител после введения монокомпонентов вакцины. Оптимальное соотношение монокомпонентов  1:1 при титре каждого вируса 6,5 lg ТЦД 50/мл в дозе 2,5 мл. При этом отмечается максимальная выработка антител ко всем изучаемым вирусам. При изучении иммуногенеза установлена активизация биосинтеза иммуноглобулинов: их количество возросло с  42,31+2,1 до 56,08+3,95 г/л  на 60 день после вакцинации. Вакцинация коров ассоциированной инактивированной вакциной против рота- и коронавирусной инфекции способствует существенному биосинтезу противовирусных антител к вышеуказанным вирусам: так к 45 дню титр антител к ротавирусу возрос с  5,2 до 7,8, коронавирусу – с 2,2 до 5,9 log2.

У новорожденных  телят, родившихся от  коров, иммунизированных инактивированной вакциной против рота- и коронавирусов и  получавших  молозиво в течение первых 2 часов, формируется напряженный колостральный иммунитет, способствующий защите организма теленка от вышеуказанных инфекций – так титр антител через 12 часов после рождения составлял 1:512-1:1024 и оставался на этом уровне на протяжении всего срока наблюдения.

Профилактическая эффективность ассоциированной вакцины  против рота- и коронавирусной инфекции новорожденных телят в животноводческих хозяйствах Беларуси составила от  85,0  до 95,6 %. 

Поливалентная инактивированная культуральная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной  инфекций крупного рогатого скота «Тетравак»

Конструирование поливалентной инактивированной культуральной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной  инфекций крупного рогатого скота «Тетравак»  проводилось по описанной выше последовательности:

При конструировании вакцины «Тетравак» вирусы ИРТ, ВД и коронавирусы культивировали  на перевиваемых клетках почки теленка (МДБК); ротавирусы – на перевиваемиых клетках почки свиней (СПЭВ). Преимущественное культивирвоание -  роллерное, при  котором титр вируса возраста на  1,0-2,0 lg ТЦД 50/мл по сравнению со стационарным методом. При отработке инактивации вакцинных штаммов установлено, что оптимальным инактивантом является теотропин. В ходе подбора адъюванта установлено, что оптимальными являются 2% суспензия активированной целлюлозы (производства БГУ, Республика Беларусь) и 10% эмульсиген (производство США). На основании результатов отработки технологии изготовления вакцины установлено, что инфекционный титр монокомпонентов должен быть не менее 6,5 lg ТЦД 50/мл,  оптимальное соотношение монокомпонентов – 1:1:1:1, вирусы подвергают инактивации теотропином в концентрации 0,2% в течение 24 часов при 37 С и добавляют адъювант – 2% суспензию активированной целлюлозы с 4 – 5% СООН-групп или эмульсиген до 10% концентрации. При исследовании сывороток крови коров, которым вводили вакцину, выявлен высокий уровень биосинтеза иммуноглобулинов – их уровень повывсился  на 60-й день после вакцинации на 7,8%, титры антител к каждому из вирусов  увеличились на 4-6 log2. 

При условии выпойки в течение первых 2 часов молозива от матерей, иммунизированных поливалентной инактивированной вакциной против инфекционного ринотрахеита, диареи, рота- и коронавирусов у телят формируется напряженный колостральный иммунитет, способствующий защите организма теленка от вышеуказанных инфекций. При исследовании уровня антител с помощью РНГА, их титр через 12 часов после рождения составлял 9 – 10  log2 и оставался на этом уровне на протяжении всего срока наблюдения.

При проведении производственных испытаний поливалентная инактивированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, коронавирусной инфекций крупного рогатого скота имеет 93,3 – 95,1%-ю профилактическую эффективность. 

Рекомбинантная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота  с использованием  генетически модифицированных штаммов бактерий

На первом этапе конструирования вакцины установлено норвое явление в биологической науке -  спонтанная персистенция генома вирусов ИРТ и ВД в бактериальных клетках. Наличие общих антигенов бактерий и вирусов было установлено при изучении антигенного родства  Bacillus alvei с вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого и  Bacillus subtilis с  вирусом диареи крупного рогатого скота с использованеим иммунологических  реакций – РА, РТНГА, ИФА. Подтверждение наличия  генома вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота  в бактериальной клетке установлено с помощью точечной гибридизации с радиоактивной меткой, с использованием ДНК-зонда, постановкой полимеразной цепной реакции (ПЦР) при установлении комплементарности участков ДНК вируса инфекционного ринотрахеита в Bac. аlvei и участков РНК вируса диареи в Bacillus subtilis.

Исследования, проведенные с использованием ПЦР показали, что в этом же штамме Bac.alvei (КМИЭВ-11) имеются участки ДНК, идентичные вирусу ИРТ (рисунок 5). Для сравнения использовали ДНК, выделенную из вируса ИРТ (штамм 4016) и ДНК из  Bac.alvei (КМИЭВ-11). Маркеры – участки ДНК – стандартные  олигонуклеотидные  праймеры вируса ИРТ. Аналогично в Bac. Subtilis (КМИЭВ-39) установлены участки РНК, комплементарные вирусу диареи крупного рогатого скота. На рис. 6 представлены результаты ПЦР при выявлении комплементарных участков РНК вируса диареи в Bac. Subtilis (КМИЭВ-39).Для сравнения использованы различные штаммы бацилл из коллекции микроорганизмов РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского»

Примечание:

Маркеры - стандартные  олигонуклеотидные  праймеры вируса ИРТ;

« - » - отрицательный контроль;

I – ДНК из Bac.alvei (КМИЭВ-11),

II – ДНК из вируса инфекционного ринотрахеита  (штамм 4016).

Рисунок 5. Результаты постановки ПЦР при выявлении комплементаных участков ДНК вируса ИРТ в Bac.alvei (КМИЭВ-11).

Примечание:

№1 - Bacillus 100b(НИИП), №2 - Bacillus 200а (НИИП),

№3 - Bacillus Бел НИИЭВ-2, №4 - Bacillus Subtilis Бел НИИЭВ,

№5 - Bacillus Subtilis ВВИ-1, 6 - Bacillus alvei ВВИ – 1,

K+VD – положительный контроль вируса диареи

Рисунок 6. Результаты постановки ПЦР при выявлении комплементаных участков РНК вируса диареи в Bacillus Subtilis (КМИЭВ-39).

В результате проведенных исследований доказано, что инфекционные вирусы животных способны проникать в бактериальную клетку и участки их генома интегрироваться в геном бактерий, что в дальнейшем приводит к биосинтезу вирусспецифических белков в бактериальной клетке, а введение бактерий животным позволяет вырабатывать вирусспецифические антитела у животных, иммунизированных данными бактериями. Так, у мышей,  которых иммунизировали Bac.alvei (КМИЭВ-11) титр антител к вирусу ИРТ составлял 3,5+0,3 log 2, а у животных, получавших вирус ИРТ - 4,25+0,5 log2. При иммунизации мышей Bac.Subtilis (КМИЭВ-39), титр противодиарейных антител был 3,0+0,2 log2, а вирусом диареи - 4,5+0,6 log2. Полученные данные свидетельствуют о выработке противовирусных вируснейтрализующих антител у животных, иммунизированных бактериями с геномом вирусов и  экспрессированными вирусспецифическими белками.

На основании доказательства наличия  бактерий, несущих на своей поверхности вирус-специфические белки  для специфической профилактики вирусных инфекций животных нами разработан бактериальный препарат, названный нами "Бактерин-3". Его  готовили из 48-часовой агаровой культуры бактерий Bac.alvei  (КМИЭВ-11) и Bac.Subtilis (КМИЭВ-39) при концентрации бактерий 1,0 млрд. микробных  тел в мл, которые инактивировали формальдегидом. Телятам  вводили препарат в дозе 5,0 мл двукратно с интервалом в 14 дней        .

При определении уровня -глобулинов у подопытных телят, по­лучавших "Бактерин-3", были получены довольно существенные результаты, свидетельствующие об активном образовании антител-иммуноглобулинов у телят подопытной группы - к концу 3-го месяца их количество составляло 16,26+1,3-17,84+1,35% (Р<0,01), тогда как в контроле не превышало 13,59+0,64% (Р< 0,001). При изучении иммуноглобулинов различных классов установлено довольно значительное увеличение количества Ig G у телят, полу­чавших "Бактерин-3". Так, если в контроле максимальное их количество не превышало 18,59+1,48 г/л, то у  иммунизированных телят  их количество на 14 сутки после введения препарата со­ставило 24,17+2,31 г/л (Р<0,01) - 3 группа и 21,00+2,38 г/л (Р< 0,01) – контрольная группа. Количество Ig  A и Ig М у подопытных животных не отличалось от контрольной группы. Результаты постановки РНГА, поставленной с целью выявления противовирусных антител  свидетельствовали, что через  35-40 дней после иммунизации «Бактерина-З» титры антител к вирусам ИРТ  и ВД у животных были в наиболее высоких титрах 7,8-6 (ИРТ) и 7-7,5 log2 (ВД). Результаты исследования форменных элементов крови - количе­ства лейкоцитов, а такажее анализ лейкоформулы показал, что у всех привитых "Бактерином-З" телят отмечен лейкоцитоз. В первые 14 дней - нейтрофилия, а к концу опыта (35-30 дни) - лимфоцитоз. Профилактическая эффективность «Бактерина-З» составила в среднем 70%; за­болеваемость не превышала 30%, тогда как в контрольной группе заболеваемость составила 62%

Стимуляция поствакцинального иммунитета  с помощью иммуностимулирующих препаратов природного происхождения.

Для решения вопроса повышения эффективности иммунизации наряду с улучшением технологии содержания и кормления животных, важным моментом является стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью иммуностимулирующих препаратов. Для этого нами были проведены исследования по изучению стимуляции поствакцинального иммунитета с помощью «Апистимулина-А» при вакцинации крупного рогатого скота против  инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи бивалентной вакциной. Нами изучен иммунный ответ организма телят на введение бивалентной вакцины против ИРТ и ВД на фоне стимуляции поствакцинального иммунитета с помощью препарата “Апистимулин-А”.

При изучении динамики антител Ig M и Ig G-классов в ИФА после вакцинации против ИРТ и ВД на фоне обработок “Апистимулином-А” установлено, что  биосинтез антител Ig M-класса активно происходит у как телят, иммунизированных одной вакциной, так и на фоне активизации иммунитета.  Показатель ΔE (отношение показателя оптической плотности исследуемой сыворотки к показателю оптической плотности  отрицательной сыворотки) у телят, иммунизированных  одной вакциной начал постепенно возрастать уже с 4 дня с 1,68 до 1,71. К 21 дню этот показатель достиг 1,91, к 28 — 1,94; к 65 дню — 2,01. У телят, получавших вакцину на фоне обработки “Апистимулином-А”, биосинтез антител Ig M-класса был несколько выше, чем у телят, получавших чистый вирусный антиген. При этом показатель ΔE до иммунизации составил 1,63, к 4 дню — 1,93, к 21  — 1,93, к 28 — 1,98, к 65  — 2,03. Биосинтез антител Ig G-класса был значительно слабее, чем Ig M. Так, до иммунизации показатель ΔE составил 1,45,  к 4 дню  снизился до 1,31, к 21 дню несколько повысился до 1,39, к 42 дню он составил 1,74, к 65  — 1,64. После иммунизации телят вакциной  на фоне обработки “Апистимулином-А” наблюдалось некоторое увеличение количества антител к вирусу ИРТ, относящихся к иммуноглобулинам G-класса. Так, к 4 дню их количество увеличилось в 1,14 раза, к 11  — в 1,26 раза, к 42-му -  в 1,53 раза по сравнению с исходными данными.

У телят после иммунизации одной вирус-вакциной отмечается активизация  биосинтеза иммуноглобулинов M-класса.  После вакцинации увеличение количества иммуноглобулинов этого класса происходило с 5,68±0,13 до 6,8±0,13 г/л к 11 дню, после чего отмечено их некоторое уменьшение. 

Иммунизация телят вирус-вакциной на фоне активизации иммунитета “Апистимулином-А”  наряду с биосинтезом противовирусных антител активизирует и биосинтез всех иммуноглобулинов. Так, при иммунизации телят вакциной  на этом фоне количество иммуноглобулинов M-класса было значительно выше, чем у телят, привитых одной  вакциной. Их концентрация к 4 дню возросла с 5,56±0,09 до 7,8±0,1 г/л, а к 11 дню — до 8,0±0,21 г/л, тогда как у телят, получавших моновакцину, к 11 дню концентрация Ig M была 6,8±0,13 г/л. После 11 дня биосинтез Ig M снижался. Однако биосинтез иммуноглобулинов Gкласса был значительно активнее и их концентрация продолжала возрастать до 65 дня наблюдения. Количество Ig G начало возрастать уже начиная с 4 дня  с 14,4±0,09 до 15,2±0,3 г/л, к 11 дню — до 17,4±0,15 г/л, а к 42 дню — до 18,4±0,37 г/л.

У телят, иммунизированных вакциной без иммуностимулятора, количество Т-лимфоцитов к 11 дню возросло с 29,2±1,7% до 44,4±1,7%.  Затем произошло  снижение их количества к 21 дню  до 40,4±1,29%, к 42 до 29,4±1,5%. Аналогично изменялось количество и В-лимфоцитов у телят этой же подопытной группы. К 11 дню наблюдения их количество возросло с 15,2±1,3% до 23,2±0,8%, а к 21 дню  снизилось до 20,6±1,07%, к 42 дню - до 18,6±1,5 г/л. У телят, иммунизированных вакциной против ИРТ и ВД на фоне обработки “Апистимулином-А”, также происходило увеличение как Т-, так и В-лимфоцитов. Количество Т-лимфоцитов у телят, получавших вакцину на фоне активизации иммунной системы, возросло с 28,8±3,9 до 48,8±1,7% к 11 дню, но к 21 дню  снизилось до 42,2±1,7%, и к 42 дню  до 29,2±1,5%. Аналогично изменялось и количество В-лимфоцитов. К 11 дню оно возросло с 16,8±1,3 до 30,0±1,7%, к 21 дню снизилось до 21,8±1,0 и к 42 дню — до 20,2±1,93%.

Установлено, что на фоне активизации иммунитета титр интерферона возрастал также до 11 дня с 40,0±7,29 до 65,6±5,3%. К 65 дню его титр снизился до 44,3±2,85%. Иммунизация телят на фоне активизации иммунитета  способствовала усилению активизации специфических клеточных и гуморальных звеньев иммунитета — Т- и В-лимфоцитов, концентрации антител и иммуноглобулинов, антигенсвязывающих клеток. Это свидетельствует о формировании более напряженного иммунного ответа на введение вакцин после активизации иммунитета.

Комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий по применению иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии инфекционных пневмоэнтеритов у телят 

Проведенные исследования по разработке  иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят позволили обобщить и составить схему их использования для выращивания  здоровых животных и получения от них экологически безвредной животноводческой продукции.

А. Обработка сухостойных  коров и нетелей:

1а. Контроль качества кормов, нормализация и балансирование рационов премиксами в соответствии с потребностями;

2а. Вакцинация коров по схеме:

- поголовная двукратная иммунизация  коров во второй половине стельности живыми моно- и ассоциированными вакцинами против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3 (в зависимости  от эпизоотической ситуации хозяйств);

-иммунизация сухостойных  коров ассоциированной инактивированной вакциной  против рота- и коронавирусной инфекции  новорожденных  телят или  поливалентной инактивированной вакциной  против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции (в зависимости  от эпизоотической ситуации хозяйств);

3а. Содержание глубокостельных  коров изолированно в родильных отделениях;

4а. Обработка разработанными иммуностимулирующими препаратми глубокостельных  коров и нетелей за 10-15 дней до отела для достижения у новорожденных телят высокого уровня иммуноглобулинов. 

Б. Обработка новорожденных телят:

1б. Обработка телят с лечебной и профилактической целью  иммуностимулирующими препаратами - бактериальным липополисахаридом из Bacillus alvei или «Апистимулином-А»;

2б. Содержание телят в изолированных пластмассовых домиках для разрыва  эпизоотической цепи;

В. Выращивание телят старше 2025 дней:

1в. Антистрессовые обработки  телят  иммуностимулирующими препаратами - бактериальным липоплисахаридом из Bacillus alvei или «Апистимулином-А»; 

2в. Двукратная иммунизация телят живыми моно- и ассоциированными вакцинами против инфекционного ринотрахеита,  вирусной диареи, парагриппа-3 (в зависимости  от эпизоотической ситуации хозяйств).

Применение данного комплекса в хозяйствах Республики Беларусь позволило в 2–3 раза снизить заболеваемость и в 1,5–2 раза – отход телят по причине заболевания их инфекционными пневмоэнтеритами.

ВЫВОДЫ

1. Основными причинами  возникновении респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах  Республики Беларусь являются  предрасполагающие факторы (иммунодефицитное состояние организма  новорожденных телят,  создание стрессовых ситуаций,  влияние неблагоприятных экологических факторов внешней среды,  нарушение технологии содержания и кормления, генетическая однородность стад, вызванная использованием одних и тех же производителей при осеменении коров)  и способствующие факторы (возбудителями респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят вирусной и бактериальной этиологии, способность вирусов инфекционного ринотрахеита, диареи, проникать через плацентарный барьер и внутриутробно инфицировать плод с дальнейшей его  иммунотолерантностью и вирусоносительством).

2.  В этиологической структуре вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота в Республике Беларусь основной удельный вес занимают вирусы инфекционного ринотрахеита - 67,6% у коров,  65,8% у телят переболевших пневмоэнтеритами,  68,8 у клинически здоровых телят старше 6 мес.,  диареи соответственно  86,6, 84,1 и 88,9%, парагриппа-3 – 55,9, 71,5, 59,6%. При инфекционных  энтеритах  антитела к вирусу диареи выявлялись у 64,8% переболевших телят, к ротавирусу – 90,9%, коронавирусу – 80,6%. У больных энтеритами телят установлено наличие антигенов ротавируса - 67,4% (от обследованных), коронавируса – 33,7%, вируса диареи - 35,1%.

3. У больных и переболевших пневмоэнтеритами телят отмечается угнетение Т-лимфоцитов (в 1,2 раза), В-лимфоцитов ( в 1,28 раза), фагоцитраной активности нейтрофилов периферической крови (в 1,23 фагоцитраное число и 1,56 - фагоцитарный индекс), в  2,7 раза снижается количество лизоцима, в 1,3 раза бактерицидная активность сыворотки крови, 1,6 раза титр интерферона,  в 4,3 раза увеличивается количество циркулирующих иммунных комплексов, в 1,2-2,2 раза конценрарция низкомолекулярных азотистых веществ (мочевины, креатинина и мочевой кислоты), активность аспартатаминотрансферразы в 3,14 (у больных) и в 3,2 раза (у переболевших), аланинаминотрансферразы соответсвено 2,7 и 5,09 раза; креатининкиназы в 4,6 и 1,8 раза превышало уровень здоровых животных, но отмечается снижение активности амилазы в 1,05 и 1,16 раз, щелочной фосфатазы в 1,73 и 1,6 раза, холинэстеразы в 1,28 и 1,05  раза, что  указывает  на системный процесс.

4. Разработанные иммуностимулирующие препараты -  препарат из пчелиной перги “Апистимулин-А” воздействующие на Т-систему лимфоцитов, бактериальный липополисахарид из Bac.alvei, влияющие на В-систему способствуют активизации угнетенных звеньев иммунитета и обмена веществ при респираторных и желудочно-кишечных  заболеваниях телят.

5. При конструировании живых  и инактивированных моно- и ассоциированных  вакцин против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций  выделены и селекционированы  производственные штаммы вирусов крупного рогатого скота: ИРТ – КМИЭВ-6, диареи – КМИЭВ-7, парагриппа-3 КМИЭВ-8, ротавируса – КМИЭВ-3, коронавируса – КМИЭВ-1, которые наиболее активны в антигенном отношении и  по своим генетическим характеристикам не отличаются от референтных  штаммов, оптимальным является раздельное культивирование вирусов в роллерных установках  на перевиваемых культурах клеток  МДБК или СПЭВ  с использованием гемогидролизата  в качестве ростовой (с сывороткой) и поддерживающей питательной среды, что позволяет достигнуть инфекционного титра вышеуказанных вирусов до 6,5 – 8,0 lg ТЦД 50/мл, для инактивации вируса использован теотропин в 0,2% концентрации, а адъювант – эмульсиген или суспензия активированной  целлюлозы.

6. Введение живых  и инактивированных моно- и ассоциированных  вакцин  крупному рогатому скоту приводит к биосинтезу противовирусных антител (до 5,5 – 7,0 log2), активизации клеточного и гуморального иммунитета, основных показателей обмена веществ. Профилактическая эффективность вакцин в производственных условиях составляет от 88,2 до 97,5%.

7. Вирусы нфекционного ринотрахеита и диареи, способны проникать в бактериальную клетку, участки их генома интегрироваться в геном бактерий, что в дальнейшем приводит к биосинтезу вирусспецифических белков в бактериальной клетке, а введение бактерий животным позволяет вырабатывать вируснейтрализующие антитела у лабораторных животных в титрах от 3,0+0,2 log2, до  3,5+0,3 log2.  Препарат, изготовленный на основе  Bac.alvei (КМИЭВ-11) и Bac. Subtilis (КМИЭВ-39)  приводит к выработке у телят  антител к вирусам ИРТ  и ВД в титрах 7,8-6 (ИРТ) и 7-7,5 log2(ВД) в РНГА. Профилактическая эффективность препарата составила в среднем 70%; за­болеваемость животных не превышала 30%, тогда как в контрольной группе заболеваемость составила 62%

8. Иммунизация телят на фоне активизации иммунитета  иммуностимуляторами природного происхождения способствовала усилению активизации специфических клеточных и гуморальных звеньев иммунитета — Т- и В-лимфоцитов, концентрации антител и иммуноглобулинов, антигенсвязывающих клеток, что  свидетельствует о формировании более напряженного иммунного ответа. 

9. Научно-обоснованные подходы к профилактике и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных  инфекций у телят, включающие комплекс организационно-хозяйственных,  технологических, ветеринарно-санитарных и терапевтических мероприятий с  использованием иммуностимуляторов, живых  и инактивированных  вакцин, при использовании в животноводческих хозяйствах  позволяют в 2–3 раза снизить заболеваемость и в 1,5–2 раза – отход телят по причине инфекционных пневмоэнтеритов.

Предложения производству

Проведенные исследования позволяют рекомендовать производству следующие нормативные документы:

1. Вирусвакцина живая культуральная  про­тив инфекционного ринотрахеита круп­ного рогатого скота,  ТУ РБ 00028493.223-97;

2. Вирусвакцина живая культуральная  про­тив вирусной диареи крупного рогатого скота, ТУ РБ 00028493.224-97;

3. Вирусвакцина живая культуральная  про­тив  парагриппа-3 крупного рогатого скота; ТУ РБ 00028493.225-97;

4.Бивалентная живая культуральная вирус­вакцина против инфекционного ринотра­хеита и вирусной диареи крупного рога­того скота; ТУ РБ 00750971.006-98;

5. Вирусвакцина трехвалентная живая куль­туральная против инфекционного ринот­рахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота; ТУ РБ  600049353.033-2002;

6. Поливалентная инактивированная  культуральная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота «Тетравак», ТУ BY 600049853. 099 – 2007;

7 Ассоциированная вакцина против рота- и коронавирусной инфекций  новорожденных телят, ТУ BY 600049853. 093 – 2008;

8. Рекомендации по диагностике, профилактике и терапии инфекционных заболеваний телят. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 24.07.1991 г.

9. Методические рекомендации по диагностике и профилактике инфекционных заболеваний молодняка крупного рогатого скота. Рассмотрены и утверждены секцией ветеринарии НТС Агропромсоюза ССР Молдова 10 июля 1990 г., протокол № 1.

10.  Методические рекомендации по оценке функциональной активности В-лимфоцитов сельскохозяйственных животных. Утверждены на заседании секции иммунологии и биотехнологии ВАСХНИЛ 27 ноября 1991.  Москва, 1991.

11. Использование протаргола с глобулином для профилактики и терапии смешанных вирусных респираторных инфекций мо­лодняка крупного рогатого скота (Рекомендации). Рассмотрены и утверждены секцией ветеринарии НТС Агропромсоюза ССР Молдова 10 июля 1990 г., протокол № 1.

12. Методические рекомендации по комплексной профилактике и терапии пневмоэнтеритов телят. Утверждены отделом ветеринарии управления сельского хозяйства Смоленской области 6 апреля 1994 г.

13. Методические рекомендации по иммунологической диагностике, профилактике и терапии пневмоэнтеритов телят вирусно-бактериальной этиологии. Рассмотрены и одобрены НТС секции производства и переработки продуктов животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь  29 декабря 1996 г., протокол № 4.

14. Методические указания по профилактике и мерам борьбы с рота- и коронавирусой инфекцией телят. Утверждены НТС секции производства и переработки продуктов животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь, протокол №1 от 27.01.1998.

15. Методические рекомендации по профилактике, лечению и мерам борьбы с пневмоэнтеритами телят. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 20.12.1999 г.

16. Методические рекомендации по дифференциальной диагностике респираторных и желудочно-кишечных заболеваний телят вирусной и бактериальной этиологии. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 20.12.1999 г. 

17. Ветеринарно-санитарные требования для племенных животноводческих хозяйств (ферм) Республики. Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь  9 августа  2002 г.,  протокол № 2.

18. Ветеринарно-санитарные требования для элеверов и госплемпредприятий Республики Беларусь.  Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 25 октября 2002 г.,  протокол № 3.

19. Ветеринарно-санитарные требования для племенных заводов Республики Беларусь, поставляющих ремонтных бычков на элеверы. Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 25 октября 2002 г.,  протокол № 3.

20. Методические указания по эпизоотологическому обследованию животноводческих предприятий. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 10.04.2005 г.

21. Методические рекомендации по профилактике пневмоэнтеритов телят  технологическими методами. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 10.04.2005 г. 

22. Экологические методы профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят (методические указания). Утверждены Комитетом Правительства Республики Дагестан по ветеринарии Российской Федерации 07.02.2006 г. 

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ  ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в рецензируемых  изданиях, рекомендованных ВАК  РФ

  1. Красочко П.А.. Помирко Т.И. Выявление антител к респираторным вирусам у крупного рогатого скота // «Ветеринария», М.:  1988, № 4.- С. 63-64.
  2. Красочко П.А., Помирко И.И., Яровой П.И. Применение Т-активина и протаргола для лечения респираторных болезней телят // «Ветеринария».  М.: 1990, № 11. - С.22-23.
  3. Красочко П., Пузына Г. Вакцины против бесплодия  // «Молочное и мясное ското­водство». М.: 1991, № 1.- С.37-38.
  4. Красочко П.А.  Чувствительность ИФА и РНГА при ди­агностике вирусной диареи крупного ро­гатого скота // «Ветеринария». М.: 1991, № 5. - С. 58-59.
  5. Красочко П.А. Эффективное средство при респираторных заболеваниях // «Молочное и мясное ското­водство». М.: 1992,  № 2.- С.7-8.
  6. Многослойная керамика на  алюмосиликатной основе  для фильтрации ветеринарных препаратов /  С.М.Азаров, Т.А.Азарова, П.А.Красочко, А.И.Ратько, Е.С.Журавлева // «Стекло и керамика». М.: 2004, № 7. –С.15-17
  7. Красочко П.А. Бойчук С.В. Изучение иммунного ответа у животных после введения инактивированных вирусов инфекционного ринотрахеита, диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота с различными адъювантами //  «Ветеринарная патология». М.: 2005, № 2. - С. 54-55
  8. Красочко П.А., Журавлева Е.С., Курбанмагомедов К.Б. Метаболизм и состояние иммунитета у телят при энтеритах вирусно-бактериальной этиологии // «Международный вестник ветеринарии». Санкт-Петербург: № 5-6,  2006. - С.12-17.
  9. Влияние  инактивированной бивалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота  на метаболизм иммунизированных коров / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Е.С.Журавлева, А.Н.Притыченко // «Ветеринарная патология». М.: 2007, № 3. С.213-220
  10. Красочко П.А., Красочко И.А., Мосин В.М. Иммунотропное действие  препарата из пчелиной  перги «Апистимулина-А»  на организм телят и поросят

// «Ветеринарная патология». М.: 2007, № 3. С.220-224.

Монографии

  1. Красочко П.А., Зелютков Ю.Г.,  Красочко И.А. Вирусные пневмоэнтериты телят.  Издательское товарище­ство “Хата”. Минск: 1999.- 166 с.
  2. Иммунитет и его коррекция в ветеринар­ной медицине / П.А.Красочко, В.С.Прудников, О.Г.Новиков  и др. Под ред. Красочко П.А.  // Смоленская городская ти­пография. Смоленск: 2001.-324 с.
  3. Инфекционные и инвазионные заболева­ния молодняка /  П.А.Красочко,  А.С.Ястребов, О.Г.Новиков и др. Под ред. Красочко П.А.  // Смоленская городская ти­пография. Смоленск: 2001.-380 с.
  4. Болезни крупного рогатого скота и свиней /  П.А.Красочко, О.Г.Новиков, А.И.Ятусевич и др. Под ред. Красочко П.А.  // Издательство «Технопринт, Минск: 2003. –464 с.
  5. Болезни сельскохозяйственных животных // П.А.Красочко М.В.Якубовский,  А.И.Ятусевич и др. Под ред. Красочко П.А. Изд. „Бизнесофсет” Минск: 2005. – 800 с.
  6. Болезни крупного рогатого скота и овец // П.А.Красочко, З.Д.Джамбулатов, К.Б. Курбанмагомедов и др. Под ред. Красочко П.А.  Махачкала: 2007 -  657 с.
  7. Иммунокоррекция в клинической ветеринарной медицине / П.А.Красочко, М.В.Якубовский, И.А. Красочко и др. Под ред. Красочко П.А. Изд. „Техноперспектива” Минск: 2008. – 520 с.

Открытия и изобретения

  1. Свидетельство на открытие № 291 Российской академии естественных  наук и Международной академии авторов научных  открытий и изобретений./ Явление спонтанной персистенции генома инфекционных вирусов в бактериальных  клетках /  Красочко П.А., Лысенко А.П., Волосянко Е.В. Москва, 18 октября 2005 г. Москва: 2005. 25 с.
  2. Авторское свидетельство СССР № 1554590. Способ определения функциональной ак­тивности лимфоцитов крупного рогатого скота. П.А.Красочко, Е.В.Баева Т.И.Помирко, Заявл. 1.08.1988 № 4471085/30-13, опубл. 1.12.1989. Москва: 1989. – 4 с.
  3. Патент Российской Феде­рации № 1835659 / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, С.А.Жидков, В.И.Корольков / Способ приготовления эритроцитарного диагностикума на основе вируса диареи крупного рогатого скота. Заявл. 04.12.1990 № 4887098, опубл. 10.09.1993. Москва: 1991. - 5 с.
  4. Патент Республики Бела­русь № 763 / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, С.А.Жидков, В.И.Корольков / Способ приготовления эритроцитарного диагностикума на основе вируса диареи крупного рогатого скота.  МКИ А 61 К 39/15, заявл. 04.12.1990 № 238-4887098, опубл. 15.08.1995. Минск: 1995. - 2 с.
  5. Патент Республики Мол­дова № MD 889. Remediu pentru stimularea sistemului imun al animalelor (Средство для стимулирова­ния иммунной системы животных)  Красочко Петр, Ковалев Николай, Еремия  Николай, Иванов Анатолий, Малиновский Иван, Красочко Ирина, Новиков Олег,  Грибко Станислав, Кашко Леонид, Иванов Василий, Лукьянчик Станислав,  Усов Сергей // Заявл. 26.12.1996 № 96-0314, опубл. 31.12.1997. Кишинев: 1998. -  4 с.
  6. Патент Республики Мол­дова № MD 890.  Metoda de stimulare a sistemului imun al animalelor (Метод стимулирования им­мунной системы животных) Красочко Петр, Ковалев Николай, Еремия  Николай, Иванов Анатолий, Малиновский Иван, Красочко Ирина, Новиков Олег,  Грибко Станислав, Кашко Леонид, Иванов Василий, Лукьянчик Станислав,  Усов Сергей, Еремия Нина // Заявл. 26.12.1996 № 97-0075, опубл. 31.12.1997. Кишинев: 1998. -  6 с.
  7. Патент Республики Мол­дова № MD 891. Procedeu de obtinere a remediului pentrustimularea suistemului imun al animalelor (Cпособ получения средства для стимулирования иммунной системы животных) / Красочко Петр, Ковалев Николай, Еремия  Николай, Иванов Анатолий, Малиновский Иван, Красочко Ирина, Новиков Олег,  Грибко Станислав, Кашко Леонид, Иванов Василий, Лукьянчик Станислав,  Усов Сергей, Еремия Нина // Заявл.  26.12.1996 № 97-0076, опубл. 31.12.1997. Кишинев: 1998. -  5 с.
  8. Патент Республики Бела­русь №  BY 2889 . Средство для стимуляции иммунной сис­темы организма животных Апистимулин-А, способ его получения и способ стиму­ляции иммунной системы организма жи­вотных  / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, Н.Г.,Еремия, А.Т. Иванов, И.Ф.Малиновский, И.А.Красочко, О.Г.Новиков, С.М.Грибко, Л.С.Кашко,  В.Е.Иванов,  С.А.Лукьянчик, С.М.Усов. Заявл. 24.061996 № 960314, опубл. 25.02.1999. Минск: 1999. -  7 с.
  9. Патент Республики Бела­русь №  BY 3913. Способ повышения резистентности организма молодняка крупного рогатого скота / П.А.Красочко. А 61К 31/739, А 61 35/74 Заявл. 12.04.1996 № 960174 опубл. 15.01.2001. Минск: 2001. - 5 с.
  10. Патент Республики Беларусь № 5304.  Бивалентная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, способ ее получения и способ ее применения / П.А.Красочко,  Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, С.А.Жидков, Т.В.Белявская, Е.Г.Колоницкая, О.Г.Новиков, С.М.Грибко, Л.С.Кашко.  заявл. 11.12.1997 № 970693, Опубл. 17.03.2003. Минск: 2003. – 10 с.
  11. Патент Республики Беларусь № 6091 . Штамм Bacillus alvei  КМИЭВ-11, используемый для получения вирусспецифических белков вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота / П.А.Красочко,  П.П.Фукс, Е.В.Волосянко, И.А.Красочко. Заявл. 30.06.1999 № а1999651, Опубл. 29.12.2003. Минск: 2004. – 4 с.
  12. Патент на корисну модель України  № 26673. Штамм  Bacillus subtilis (КМИЭВ -39) для одержання вірусопецифічних білків вірусу діареі великоі рогатоі худоби / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Е.В.Волосянко, Еремия Н.Г.  – Заявлено 09.10.2006; № u 200610644 опубл. 10.10.2007. Бюл. № 16 –  Киев: 2007. – 2 с.
  13. Патент на корисну модель України  № 26677. Штам Infectious bovine rhinotracheitis (КМИЭВ-6) вipycy інфекційного ринотрахеіту великоі рога­тоі худоби для виготовлення вакцинних i діагностичних препаратів / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Е.В.Волосянко, Кассіч В.Ю.  – Заявлено 20.10.2006; № u 200611089 опубл. 10.10.2007. Бюл. № 16 –  Киев: 2007. – 2 с.
  14. Патент на корисну модель України  № 26676.  Штам вірусу діароеі bovine viral diarrhea  (КМИЭВ-7) великоі рога­тоі худоби для виготовлення вакцинних i діагностичних препаратів / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Е.В.Волосянко, Кассіч В.Ю.  – Заявлено 20.10.2006; № u 200611084 опубл. 10.10.2007. Бюл. № 16 –  Киев: 2007. – 2 с.
  15. Патент Республики Беларусь № 10696 Трехвалентная живая культуральная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота, способ ее получения и способ иммунизации крупного рогатого скота /П.А.Красочко, И.А.Красочко, Н.А.Ковалев,  Е.Г.Колоницкая, Г.И.Жих, И.П.Иванова, Н.И.Кот.  Заявл. 08.10.2004 № а20040924, Опубл. 06.03.2008. Минск: 2008. – 4 с.
  16. Патент Республики Беларусь № 10697. Поливалентная инактивированная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота  / П.А.Красочко, И.А.Красочко, С.С.Кабась,  Г.И.Жих, И.П.Иванова, Н.А.Ковалев, В.А.Машеро, С.В. Бойчук, Ф.Н. Капуцкий, Е.В. Герт,  В.И. Торгашов, О.В.  Зубец Заявл. 08.10.2004 № а20040925, Опубл. 06.03.2008. Минск: 2008. – 8 с.

Список статей в журналах СНГ

  1. Профилактика и терапия респираторных заболеваний телят / П.А.Красочко,  Т.И.Помирко, В.И.Стародуб, А.В.Жовтан // Сельское хозяйство Молдавии. Кишинев: 1988.- № 11.- С.35-36.
  2. Состояние иммунитета при вакцинации телят бивалентной вакциной против ин­фекционного ринотрахеита и вирусной диареи /  П.А.Красочко,  Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Т.В.Белявская // Весцi Акадэмii аграрных навук Рэпублiкi Беларусь, Минск: 1998, № 2- С. 81-84.
  3. Красочко П.А., Красочко И.А., С.М.Усов Влияние препарата “Апистимулин-А” на состояние иммунитета и обменные про­цессы  организма здоровых телят //Весцi Акадэмii аграрных навук Рэпублiкi Беларусь, Минск: 1998, № 3- С. 87-90.
  4. Красочко П.А., Борознов С.Л.Профилактика инфекционных энтеритов  новорожденных телят технологическими методами // Вiсник Сумського национального аграрного университету. Науково-методичний журнал № 1-2 (13-14). Сумы: 2005.  –С.70-72.
  5. Красочко П.А., Машеро В.А.  Реактогенность и иммунологическая эффективность инактивированных вакцин для специфической профилактики энтеритов новорожденных телят // Вiсник Сумського национального аграрного университету. Науково-методичний журнал № 1-2 (13-14). Сумы: 2005.  –С.240-241
  6. Красочко П.А., Журавлева Е.С., Мацинович А.А.Состояние иммунитета  и обменных процессов у телят при вирусно-бактериальных  энтеритах // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 3, 2004. – С.38-42.
  7. Красочко П.А., Машеро В.А. Иммуностимуляторы и современные способы коррекции иммунного ответа // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 1, 2004. – С.3-11.
  8. Красочко П.А., Лысенко А.П., Волосянко Е.В. Спонтанная персистенция  генома инфекционных  вирусов в бактериальных клетках, приводящая к биосинтезу  вирус специфических белков  // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 2, 2004. – С.34-40
  9. Красочко П.А. Современные подходы к классификации иммуномодуляторов // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 2, 2006. – С.35-40
  10. Красочко П.А., Ламан А.М. Научные основы изучения этиологии, патогенеза и разработка мер борьбы  с вирусными  инфекциями молодняка крупного рогатого скота // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 3, 2006. – С. 3-8.

Список статей в сборниках  трудов СССР и  СНГ

  1. Этиология, профилактика и лечение ост­рых гастроэнтеритов новорожденных те­лят / П.А.Красочко, А.И.Ерошов, В.М.Бондарь, Т.И.Помирко // Научное обеспечение жи­вотноводства Молдавии, Кишинев: Штиинца. 1989. - С. 100-103.
  2. Спатарь Ф.В., Шитту Мохаммед, Красочко П.А. Комплексная терапия острых респира­торных болезней крупного рогатого скота // Диагностика и специфиче­ская профилактика инфек­ционных болезней живот­ных и птиц. Сб. научн. тр. Кишиневский СХИ им. М.В.Фрунзе, Кишинев: 1989. - С.86-91.
  3. Красочко П.А. Роль вирусов в этиологии респираторных инфекций телят //  Биотехнологические аспекты развития животно­водства. Сб. научн. статей.  Кишинев: Молдаг­роинформ реклама, 1991. - С.125-130
  4. Иммуностимулирующие свойства пыльцы и перги  // П.А.Красочко, Н.Г. Еремия,  Н.М.Еремия, Е.В.Баева, Т.М.Есауленко // Апитерапия и пчелово­дство. Сб.научных трудов, Гадяч: 1991.- С.183-186
  5. Использование ИФА для изучения дина­мики противовирусных антиител Ig М и  Ig G-классов /  П.А.Красочко, Н.А. Ковалев, И.А. Красочко, Ю.Г.Зелютков,  Ю.Н.Федоров // Ученые записки Витебского ордена “Знак По-чета” ветеринарного института им. Октябрьской революции,  Т.30. Витебск: 1993.- С.62-64.
  6. Состояние колострального иммунитета у телят при пневмоэнтеритах  / П.А.Красочко, И..А. Красочко, Т.В. Белявская, С.М. Грибко, И.В.Шаденко // Ученые записки Витебской Государственной ака­демии ветеринарной меди­цины,  Т.32. Витебск: 1995.- С. 26-27
  7. Красочко П.А., Машеро В.А.Бактериальный липополисахарид - сти­мулятор поствакцинального иммунитета при вирусных респираторных инфекциях телят // Ученые записки Витебской Государственной академии ветеринарной медицины, Том 34. Витебск: 1998.- С.144-146
  8. Красочко П.А., Машеро В.А., Гласкович А.А. Сравнительная иммунологическая эффек­тивность бактериальных липополисаха­ридов в зависимости от способов выделе­ния // Ученые записки Витебской ордена "Знак Почета" Го­сударственной академии ветеринарной медицины,  т.35, ч.1. Витебск: 1999. - С.66-68.
  9. Красочко П.А. Красочко И.А. Усов С.М.Иммунодефицит и его коррекция при ин­фекционном ринотрахеите и вирусной диарее у телят // Ветеринарная наука – про­изводству. Научные труды БелНИИЭВ. Т.34. –Бел. изд. Товарищество “Хата”. Минск: 2000. - С.40-50.
  10. Состояние клеточного и гуморального иммунитета у телят при иммунизации против инфекционного ринотрахеита, ви­русной диареи и парагриппа-3 /  П.А.Красочко Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Е.Г.Колоницкая, И.П.Иванова // Ветеринарная наука – про­изводству. Научные труды БелНИИЭВ. Т.34. –Бел. изд. Товарищество “Хата”. Минск: 2000.- С.51-57.
  11. Красочко П.А.Ковалев Н.А. Красочко И.А.Перспективы профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят  // Аграрная наука на рубеже ХХI века. Материалы об­щего собрания ААН РБ, Минск: 2000. –С. 238-240.
  12. Эффективность трехвалентной вак­цины против инфекционного ринот­рахеита, вирусной диареи и пара­гриппа-3 крупного рогатого скота / П.А.Красочко,  Н.И.Кот, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Е.Г.Колоницкая // Ученые записки ВГАВМ: Сборник научных трудов по материалам Междуна­родной конференции «Ак­туальные проблемы вете­ринарной медицины и ин­тенсивного животновод­ства», Т.38, ч. 1. Витебск: 2002. – 58-61.
  13. Состояние клеточного иммунитета у телят при иммунизации против инфекционного ринотрахеита, вирусной диреи и парагриппа-3 / П.А.Красочко,  Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Н.И.Кот Е.Г.Колоницкая, Иванова И.П. // Ветеринарна медицина. Мiжвидомчий тематичний навуковий збiрник , при­свячений 80-рiчницi Iнституту експериментальноi i клiнiчноi ветеринарноi медицини. Харькiв: 2002. –С.337-341.
  14. Сравнительная эффективность инактивации вирусов - возбудителей  пневмоэнтеритов телят / П.А.Красочко,И.А.Красочко, В.А.Машеро, Е.Г.Колоницкая, С.В.Бойчук // Ученые записки Учреждения образования «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины».  Т. 39, Ч. 1. Витебск: 2003. - С.63-64.
  15. Жих Г.И., Красочко П.А., Иванова И.П. Иммунопрофилактика вирусных гастроэнтеритов молодняка крупного рогатого скота //  Ученые записки Учреждения образования «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины».  Т. 40, Ч. 1. Витебск: 2004. - С. 205-206.
  16. Использование теотропина для инактивации вирусов при конструировании инактивированных вакцин / П.А.Красочко,  И.П.Иванова, Г.И.Жих, А.А.Губаревич //  Ученые записки Учреждения образования «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины».  Т. 40, Ч. 1. Витебск: 2004. - С. 223-224.
  17. Красочко П.А., Машеро В.А.Использование бактериального липополисахарида из Вас. Larvei для оценки состояния В-системы лимфоцитов у телят //  Сельское хозяйство – проблемы и перспективы. Сб.научных  тудов  УО «Гродненский государственный аграрный университет». Т.4, ч.2. Гродно: 2005. – С.56-58.
  18. Красочко П.А., Борознов С.Л. Технологические методы в профилактике респираторных заболеваний телят  // Сельское хозяйство – проблемы и перспективы. Сб. научных  тудов  УО «Гродненский государственный аграрный университет». Т.4, ч.2. Гродно: 2005. – С.233-236.
  19. П.А.Красочко, И.А.Красочко, Г.И.Жих, И.П.Иванова. Босинтез противовирусных антител у животных после иммунизации бактериями, имеющими участки генома инфекционных  вирусов // Ветеринарная наука-производству. Научные труды РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского НАН Беларуси», выпуск 38 по материалам Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины в условиях современного животноводства», посвященной 75-летию института и 100-летию со дня рождения академика Р.С.Чеботарева,  Минск: 2005. – С.291-295.
  20. Специфическая профилактика вирусно-бактериальных пневмоэнтеритов молодняка крупного рогатого скота / П.А.Красочко,  Ю.В.Ломако, И.А.Красочко, С.С.Кабась, С.Л.Борознов, Л.Д.Андросик, Е.С.Журавлева, Г.И.Жих, И.П.Иванова, А.А.Губаревич, В.К.Карпович, А.М.Ламан // Ветеринарная наука-производству. Научные труды РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского НАН Беларуси», выпуск 38 по материалам Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины в условиях современного животноводства», посвященной 75-летию института и 100-летию со дня рождения академика Р.С.Чеботарева,  Минск : 2005. – С.302-306.
  21. Красочко П.А. Жих Г.И., Иванова И.П.. Определение иммуногенной активности экспериментальной поливалентной инактивированной вакцины против ИРТ, ВД, рота- и коронавирусной инфекции на лабораторных животных// Ученые записки Учреждения образования «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины».  Т. 41, Вып.2, ч. 1. Витебск: 2005. – С. 28-29.
  22. Борознов С.Л., Красочко П.А. Сравнительное изучение эффективности  профилактики диарейных болезней телят с применением иммунобиологических  препаратов // Ученые Записки УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины», том 43, Вып. 1, 2007г.  Изд. УО ВГАВМ.  Витебск: 2007. – С.33-35.

Материалы конференций

  1. Красочко П.А., Зелютков Ю.Г.Антигенсвязывающие клетки у телят по­сле вакцинации против респираторных инфекций // Siuolaikines veterinarijos problemos. Матер.научн. конф. Kaisiadorys: 1993.- S. 20-22.
  2. Красочко П.А., Еремия Н.Г.  Иммунологическая оценка цветочной пыльцы и перги // Апитерапия и пчеловодство. Матер. научн. конф. Ална литера, Вильнюс: 1993 -  С.40-44.
  3. Изучение этиологической структуры ви­русных респираторных инфекций телят в Беларуси // П.А.Красочко, И.А.Красочко,  И.В.Шаденко, Т.В.Белявская // Збереженiсть молодняка с/г тварин – запорука розвитку твариництва Украiни. Зб.статей наук.-практ.конф., Харькiв: 1994.- 10-12.
  4. Дiя вакцин проти iнфекцiйного рино-тра­хеiту  та вiрусноi  дiареi на имунну сис­тему телят / П.А.Красочко, Н.А. Ковалев, И.А. Красочко, С.М. Усов // Бiотехнологiя ветери-нар­них препаратiв. Ма­тер. наук.-практ. конф., Харькiв: 1993. - С.85-86.
  5. Изучение вопроса идентичности антиге­нов условно-патогенных  бактерий и ви­русов животных / П.П.Фукс, В.А.Бусол,  П.А.Красочко, В.В.Шимко // Общая эпизоотология: им­мунологические, экологи­ческие и методологиче­ские проблемы.  Ма­тер. Межд. науч. конф., Харьков: 1995. - С.197-200.
  6. Интерферонообразование у телят, имму­низированных против вирусных респира­торных инфекций /П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Ю.Г.Зелютков // Иммунодиагностика и иммунотерапия. Труды 1-й Междун. научн. конф., Витебск: 1995.- С.211-212.
  7. Красочко П.А., Ковалев Н.А., Грибко С.М. Сравнительная эффективность иммуно­стимуляторов при респираторных инфек­циях телят // Актуальные проблемы ве­теринарной медицины. Матер. межд.научн.-практ.конф., Смоленск: 1996.- С.37-38.
  8. Красочко П.А. Иммунологическая и профилактическая эффективность перги // Апитерапия сегодня (сбор­ник 5). Матер. 5-й научн.-практ.конф. по апитерапии “Пчелы и ваше здоровье”,  Рыбное: 1997. - С.107-109.
  9. Красочко П.А., Грибко С.М.  Состояние клеточного иммунитета у те­лят при респираторных заболеваниях в условиях промышленной технологии вы­ращивания // Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных. Матер. Междунар. координац. совещания, Воронеж: 1997, с.99-100.
  10. Технологические основы изготовления вакцинных препаратов для профилактики заболеваний телят / П.А.Красочко Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Т.В.Белявская // Научно-технический про­гресс в сельскохозяйствен­ном производстве. Матер. Междунар. научно-практич. конф., посв. 50-ле­тию, Минск: 1997. - С.136-137.
  11. Красочко П.А., Усов С.М. Влияние иммуностимулятора “Апистимулин-А” на показатели обмена веществ телят // Научно-технический про­гресс в сельскохозяйствен­ном производстве. Матер. Междунар. научно-практич. конф., посв. 50-ле­тию. БелНИИМСХ, Минск: 1997. - С.138-139.
  12. Красочко П.А., Белявская Т.В., Колоницкая Е.Г.  Специфическая  профилактика инфекци­онного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота ассоциирован­ной вакциной // Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы. Матер. Межд.научн.-практ. конф.,  Минск: 1997. - С.36-37.
  13. Красочко П.А., Усов С.М. Белки крови телят после обработки иммуностимулятором “Апистимулин-А” // Апитерапия сегодня. Ма­тер. VI научно-практ. конф. по апитерапии,  Рязань: 1998.- С.67-70.
  14. Красочко П.А., Красочко И.А Диагностика, профилактика и терапия респираторных  и желудочно-кишечных заболеваний молодняка // Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве. Матер. Междунар. научно-практич. конференции, посвященной 100-летию сот дня рожд. академиков АНБ Х.С.Горегляда и М.К.Юсковца, Минск: 1998. -С.15-18
  15. Красочко П.А., Красочко И.А., Кашко Л.С. Теоретические аспекты возникновения вирусных респираторных заболеваний и желудочно-кишечных инфекций телят // Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве. Матер. Междунар.научно-практич. конференции, посвященной 100-летию сот дня рожд. академиков АНБ Х.С.Горегляда и М.К.Юсковца,  Минск: 1998. - С 39-41.
  16. Красочко П.А. Машеро В.А.Имммунологическая оценка бактериаль­ных полисахаридов, полученных из ба­цилл // "Инфекция и имунитет". Материалы Республ. на­учно-практ. конф., посв. 75-летию БелНИИЭВ, БИТ "Хата", Минск: 1999. - С.505-507.
  17. Красочко П.А., Машеро В.А., Ю.Г.Зелютков Иммунный ответ телят при иммунизации против вирусной и бактериальных ин­фекций с различной технологией выра­щивания // Материалы Учредительной конференции Междуна­родной ассоциации парази­тоценологов, Витебск: 1999.- С.89-91.
  18. Красочко П.А., Иванова И.П. Инфицированность стад крупного рога­того скота возбудителями респираторных инфекций в хозяйствах Минской области // Актуальные проблемы па­тологии сельскохозяйст­венных  животных. Мате­риалы Междунар. научно-практ. конференции,  по­свящ. 70-летию Бел­НИИЭВ им. С.Н.Выше­лесского,  БИТ “Хата”, Минск: 2000. – С. 105-106.
  19. Профилактическая эффективность трех­валентной вакцины против инфекцион­ного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота /  П.А.Красочко,  Н.А.Ковалев,  И.А.Красочко, Е.Г.Колоницкая, И.П.Иванова, Г.И.Жих, Н.И.Кот // Актуальные проблемы па­тологии сельскохозяйст­венных  животных. Мате­риалы Междунар. научно-практ. конференции,  по­свящ. 70-летию Бел­НИИЭВ им. С.Н.Выше­лесского,  БИТ “Хата”,Минск: 2000. – С. 115-117.
  20. Красочко П.А., Машеро В.А.Активизация поствакцинального имму­нитета у телят с помощью препарата аль­веозан // Актуальные проблемы па­тологии сельскохозяйст­венных  животных. Мате­риалы Междунар. научно-практ. конференции,  по­свящ. 70-летию Бел­НИИЭВ им. С.Н.Выше­лесского,  БИТ “Хата”, Минск: 2000. – С. 120-123.
  21. Сравнительная характеристика иммуно­стимуляторов природного происхожде­ния / П.А.Красочко, В.А.Машеро, И.Н.Дубина, А.А.Гласкович, С.А.Большаков // Актуальные проблемы па­тологии сельскохозяйст­венных  животных. Мате­риалы Междунар. научно-практ. конференции,  по­свящ. 70-летию Бел­НИИЭВ им. С.Н.Выше­лесского,  БИТ “Хата”, Минск: 2000 – С. 123-125.
  22. Иммунодефициты при респираторных за­болеваниях телят и их коррекция продук­тами пчеловодства / П.А.Красочко, И.А.Красочко, В.Е.Иванов, С.М.Усов // Апитерапия сегодня – с  биологической аптекой пчел в XXI век. Матер. II Международной научно-практической конферен­ции, Уфа: 2000. – С.152-155.
  23. Красочко П.А. Новиков О.Г., Грибко С.М. Митогенная активность Апистиму­лина-А в системе in vitro // От медоцелительства до научной пчелотерапии III тысячелетия / Материалы  1 Международной научно-практической конференции и пчеловодству и пчелоте­рапии  “Белорусский мед-2002”, Минск: 2002.- С. 153-154.
  24. Профилактическая эффективность бивалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи при  пневмоэнтеритах телят, мастите и эндометритах коров / П.А.Красочко, О.Г.Новиков, Л.С.Кашко, И.А.Красочко,  С.М.Грибко // Внедрение достижений ветеринарной науки в сельскохозяйственное производство. Материалы научно-производственной конференции, Смоленск: 2002. – С.21-22.
  25. Красочко  П.А. Современные аспекты  профилактики и терапии  вирусных пневмоэнтеритов телят в Республике Беларусь// Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных. Материалы Международной научно-практической конференции, Минск: 2003. -  С.13-15
  26. Красочко П.А., Бойчук С.В., Кабась С.С. Иммуногенность компонентов поливалентной инактивированной вакцины  против инфекционного ринотрахеита, диареи, рота и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота // Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных. Материалы Международной научно-практической конференции, Минск: 2003. -  С.160-163.
  27. Иммуногенная эффективность поливалентной инактивированной  вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-  и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота /  П.А.Красочко,  И.А.Красочко, С.С.Кабась, И.П.Иванова, Г.И.Жих  //  Ветеринарная медицина – 2005: Сборник научных трудов Международной научно-практической конференции. «Современное состояние и актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства». Ялта, 30 мая –4 июня 2005 г. Том 1. Харьков: 2005. – С. 620-623.
  28. Красочко П.А., Красочко И.А.,  Ламан М.А. Отработка оптимальных способов инактивации вирусов для изготовления инактивированных противовирусных вакцин  // Realizari s.i perspective in cres.terea animalelor", simpoz. st. (2006;). Simpozionul stiintific international consacrat jubileului de 50 ani de la fondarea Institutului de Zootehnie si Medicina Veterinara "Realizari si perspective in cresterea animalelor". - Ch. : Elena-VI SRL. Chisinau: 2006. – С. 464-468.
  29. Возбудители инфекционных заболеваний пчел - источники иммунотропных препаратов  для животных и птиц /П.А. Красочко, Е.В.Волосянко, Н.Г.Еремия, В.А.Машеро, Е.А. Капитонова // Матерiали III з’iзду апiтерапеватiв Украiни. Апiтерапiя: досягнення та перспективи розвитку. м. Харкiв, 28-30 вересня 2006 року,  Харьков: 2006. – С.214-219.
  30. Красочко П.А., Машеро В.А., Е.А.Капитонова. Сравнительная иммунологическая эффективность бактериальных липополисахаридов в зависимости от способов выделения // Материалы научно-практической конференции, посвященной  80-летию со дня рождения И.А. Хорькова - «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково: 2006. – С.147-150.

Тезисы докладов

  1. Смирнова Н.И., Жавненко В.М, Красочко П.А.. Экспериментальные данные о способности бактерий предохранять телят против инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3//  Болезни молодняка сельскохозяйственных животных и их профилактика на комплексах. Тез. Докл. научн. конф. Тарту, 27 сентября 1984 г.  Таллин: 1984. - С.  29-31.
  2. Помирко Т.И., Красочко П.А., Красочко И.А. Иммунная реактивность телят, больных вирусными респираторными инфекциями// // Вопросы интенсификации и научно-обоснованного ветеринарного обслужива­ния промышленного жи­вотноводства. Тезисы докладов научной конференции. Ки­шинев, 27 августа 1987 г. Кишинев: 1987. - С.20-21
  3. Смирнова Н.И., Красочко П.А. К вопросу о возможности повышения ре­зистентности организма телят при по­мощи бациллы альвей-3 //// Вопросы интенсификации и научно-обоснованного ветеринарного обслужива­ния промышленного жи­вотноводства. Тезисы докладов научной конференции. Ки­шинев, 27 августа 1987 г. Кишинев: 1987. - С.21-22.
  4. Красочко П.А., Помирко Т.И. Промышленная технология выращивания телят и иммунный ответ их организма на респираторные вирусы // Стресс и иммунитет. Тез. Докл. Всес. конф. Ростов-на-Дону, 31 августа - 1 сентября  1989 г. Ленинград: 1989.- С.236.
  5. Красочко П.А. Определение антител к вирусу диареи в сыворотках крови крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа // Первый иммунологический съезд.  Тезисы докладов  Сочи, 15-17 ноября 1989 г. Т.1. М.: 1989. - С- 226.
  6. Красочко П.А. Стимуляция иммунной системы телят бактериальным липополисахаридом для профилактики респираторных инфекций // Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных. Тез. докл. научн.-произв. конф. Витебск, 12-13 сентября 1990 г. Минск: 1990.- С.112-113.
  7. Красочко П.А. Использование Т-активина для коррекции приобретенного иммунодефицита при респираторных инфекциях телят // Современные проблемы иммунологии, биотехнологии и клеточной инженерии в ветеринарной медицине. Тез. докл Всес. на­учн.-техн.конф. г. Нижной-Новгород. 5-7 декабря 1990 г. М.: 1990. - С.75-77.
  8. Иммунологическая  эффективность трех­валентной вакцины против инфекцион­ного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота / П.А.Красочко Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Е.Г.Колоницкая, И.П.Иванова, Т.В.Белявская // Современные проблемы инфекционной патологии человека (эпидемиология, клиника, микробиология, вирусология и иммуноло­гия./ Статьи и тезисы докл. 1 итоговой научно-прак­тич.конф. - Минск (Бел­НИИЭМ) ). 8-9 апреля 1998 г. Минск: 1998. -  С.457-458.
  9. Красочко П.А., Иванова И.П.Изучение инфицированности возбудите­лями респираторных инфекций стад крупного рогатого скота в Республике Беларусь// Современные проблемы инфекционной патологии человека (эпидемиология, клиника, микробиология, вирусология и иммуноло­гия./ Статьи и тезисы докл. 1 итоговой научно-прак­тич.конф. - Минск (Бел­НИИЭМ)  8-9 апреля 1998 г.Минск, Минск: 1998.- С.506 -508
  10. Красочко П.А., Красочко И.А., Колоницкая Е.Г.Иммуногенность вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота// Вакцины и иммунизация. Шестой Международный форум по глобальной вакцинологии. Минск, 25-26 сентября 2003 г. Минск: 2003.- С.39





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.