WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

ОДИНАЕВ КУРБОН АМИРШОЕВИЧ

ТУБЕРКУЛЕЗ ПТИЦ В ЮГО-ВОСТОЧНОМ

РЕГИОНЕ ТАДЖИКИСТАНА

(ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ДИАГНОСТИКА И МЕРЫ БОРЬБЫ)

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Душанбе 2012

       Работа выполнена в лаборатории микобактериозов Ветеринарного института Таджикской академии сельскохозяй-ственных наук и в хозяйствах Хатлонской области

Научный руководитель:  доктор ветеринарных наук,

  профессор, член-

  корреспондент ТАСХН

  Мирзоев Давлатали

  Мирзоевич

Официальные оппоненты:  доктор ветеринарных наук, 

  Хабибов Абдужалил

                              Халилович

                              кандидат ветеринарных наук

  Шарипов Абдугани

                               

Ведущая организация:  НПП «Биопрепараты»  ТАСХН

       Защита диссертации состоится «30» мая 2012г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета ДМ  050.001.01 при Ветеринарном институте Таджикской академии сельскохозяйст -венных наук по адресу: 734005, Республика Таджикистан, г. Душанбе, ул. А.Каххарова 43, ВИ ТАСХН, тел. (+992-372) 27-51-92

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИ ТАСХН.

Автореферат разослан «30» апреля 2012г. и размещен на официальных сайтах ВИ ТАСХН www.tajnivi.tj и ВАКа России www.vak2.ed.gov.ru

Ученый секретарь диссертационного

совета, доктор ветеринарных наук,

профессор        Ярбаев Н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

  1.1

Актуальность темы.

На современном этапе борьбы с туберкулёзом, в XXI веке, туберкулёз продолжает оставаться одной из наиболее сложных проблем инфекционной патологии.

Туберкулёзом поражается почти все виды млекопитающих животных, птицы, рыбы, холоднокровные, а также человек.

Важнейшим мероприятием по борьбе с туберкулезом является своевременное выявление и убой всех инфицированных птиц. Куры, также являются источником М.avium для диких птиц, дополняющих природный резервуар (М.К. Юсковец, 1963; Р.В. Тузова, 1983). Изучением  туберкулеза крупного рогоатого скота и птиц в Таджикистане занимались К.И. Михайлова (1969)., Р.К.Каюмов (1972)., Н.Я. Ярбоев (1993)., Д.М.Мирзоев (1998)., А.Х.Хабибов (2000)., Н.Р.Хасанов(2001).

Перевод птицеводства на промышленную основу. сокращении сроков эксплуатации кур, оптимизации условий содержания, кормления и  при постоянном ветеринарно-санитарном контроле, проблема туберкулёза птиц становится менее значимой (В.П.Шишков, В.П.Урбан, 1991).

Одним из основных причин, затрудняющей диагностику туберкулеза птиц, особенно в частном секторе, является совместное содержание разных видов животных и тесный контакт их с людьми.

В настоящее время рост поголовья домашней  птицы в частном секторе и нарушение ветеринарно-санитарных правил при содержании и кормлении их, стала одним из причин заболеваемости кур туберкулезом. Возросла и степень  пораженности синантропной птицы туберкулезом. Следует отметить, что для хозяйств частного сектора более характерны бесконтрольное перемещения птиц, перевозки кормов и птицеводческой продукции и торговля продуктами птицеводства. Указанные выше факторы, как правило, осложняют проведение в полном объеме всего комплекса профилактических и оздоровительных мероприятий.

По данным А.С. Донченко (1998), Д.Д. Новак (2000), в последние годы в ряде хозяйств источником заражения и сенсибилизации крупного рогатого скота стали больные туберкулезом куры.

Успех борьбы с туберкулезом животных определяется уровнем изученности болезни, наличием высокоэффективных методов и средств диагностики, экономическими возможностями хозяйств, материальным обеспечением и организацией профилактических и оздоровительных мероприятий.

Поэтому, учитывая сложившегося  эпидемической и эпизоо- тической ситуации по туберкулезу в стране, а также недостаточной эффективности  традиционных методов диагностики, изучение эпизоотической ситуации туберкулеза птиц в частном и общественном секторе, совершенствование методов диагностики птиц на современном этапе борьбы с этой болезнью является актуальным.

1.2 Цель исследований

Анализ эпизоотической ситуации туберкулеза птиц в частном и общественном секторе Хатлонской области республики Таджикистан, и совершенствование методов диагностики туберкулеза птиц.

1.3. Основные задачи исследований:

Выяснить  эпизоотическую ситуацию туберкулеза птиц .

Установить источники заражения кур М.avium в частном секторе и птицеводческих хозяйств

Уточнить роль и значение совместного подворного содержания различных видов животных и птицы, на проявление эпизоотического процесса туберкулеза в семьях, где имеются люди больные туберкулезом.

Провести сравнительную оценку прижизненных методов диагностики туберкулеза птиц.

Установить диагностическую ценность ПЦР при туберкулезе птиц.

Разработать систему оздоровительных и профилактических мероприятий туберкулеза птиц в условиях Хатлонской области республики Таджикистан.

1.4. Научная новизна исследований.

Проведен анализ эпизоотической обстановки по туберкулезу птиц в хозяйствах Хатлонской области. Дана сравнительная оценка специфичности и чувствительности,  внутрикожной и глазной туберкулиновых проб при туберкулезе кур. Изучена возможность заражения крупного рогатого скота туберкулезом птиц, при совместном их содержании в частном подворье, в семьях, где имеются люди больные туберкулезом. 

Впервые проведены ПЦР исследования помета и носовой слизи у подозрительных в заболевании туберкулезом кур, на наличие ДНК M.avium.

Впервые для республики Таджикистан разработана научно обоснованная система мероприятий по профилактике и борьбе с туберкулезом птиц.

1.5. Практическая ценность.

Результаты проведенных исследований использованы, при составлении системы мероприятий по профилактике и борьбе с туберкулезом птиц в республике Таджикистан.

Для диагностики туберкулеза птиц разработан и предложен ПЦР, как сигнальный метод мониторинга благополучия кур по туберкулезу.

1.6. Личный вклад соискателя.

Заключается в анализе и обобщении эпизоотической ситуации по туберкулезу птиц в Хатлонской области республики. В организации и проведении аллергических и лабораторных методов исследований на туберкулез, а также ПЦР исследований подозрительных в заболевании туберкулезом кур и объектов внешней среды. В разработке научно обоснованной системы мероприятий по профилактике и борьбе с туберкулезом птиц.

1.7. Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

Анализ проявления эпизоотического процесса туберкулеза птиц в хозяйствах Хатлонской области.

Результаты сравнительной оценки диагностической ценности внутрикожной и глазной туберкулиновых проб при туберкулезе кур.

Взаимосвязь зараженности крупного рогатого скота, кур и людей в частных подворье различными видами микобактерий туберкулеза – при наличии  в семье людей, больных туберкулезом.

  Роль и место ПЦР в комплексе диагностических и оздоровительных мероприятий при туберкулезе птиц.

Научно обоснованная система мероприятий по профилактике и борьбе с туберкулезом птиц.

1.8. Апробация работы.

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены:  на заседаниях ученого совета ВИ ТАСХН (2008-2011гг), республиканской конференции «Вклад молодых ученых в развитие сельскохозяйственной науки» посвященной 20 – летаю независимости РТ и 20-летию организации ТАСХН (Душанбе, 2010), научно практической конференции, посвященной 80-летию ТНИИ профилактической медицины «Краевые аспекты инсектологии» (Душанбе, 2011г.).

1.9. Публикации. По материалам исследований опубликовано 5 научных работ, в том числе  4  в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

1.10. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 104 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 9 таблицами и 5 электрофореграммами. Список литературы содержит 212 источников, из них 67 зарубежных. В приложении включены материалы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы

Работа выполнена в 2008-2011гг. в лаборатории микобактериозов ВИ ТАСХН и хозяйствах Хатлонской области республики.

Эпизоотическую ситуацию по туберкулезу птиц изучали методом анализа отчетных данных районных СББЖ  и областного управления ветеринарии, а также по данным архива Службы государственного ветеринарного надзора  МСХ РТ и на основании собственных аллергических, патологоанатомических, бактериоло-гических и ПЦР исследований.

Оценку и анализ эпизоотической ситуации по туберкулезу птиц проводили в соответствии с методологией, изложенных в работах И.А. Бакулова (2000, 2001, 2002, 2008); С.И. Джупины, В. А. Ведерникова (1981); С. И. Джупины, Д.Д. Колосова (1991); и с учетом рекомендаций и разработок  К. А. Щиткова, Д.Д. Дудко (1956); Н. П. Овсянникова (1964);  Д.Д. Новак  с соавт. (1992).

Аллергические, бактериологические и патоморфоло-гические исследования проводили в соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (утвержденного депар-таментом ветеринарии Роспотребнадзора РФ 18 ноября 2002г.), и «Наставлением  по применению туберкулина для млекопитающих и птиц» (республика Беларусь, Витебск 2011г.).

Для аллергических исследований птиц использован ППД-туберкулин для птиц, производства Курской биофабрики.(Серия 16, контроль 16 изготовлена 06.11.2008г )

Аллергические исследования у 2334 голов кур и диких птиц проводили двукратно методом внутрикожной пробы. Для внутри-кожного введения использовали шприцы емкостью 1 мл с бегунком и иглами для внутрикожных инъекций. Для введения ППД-туберкулина на конъюктиву глаз использовали глазные пипетки. При внутрикожном методе туберкулин вводили птицам в соответствие наставление, в дозе 0,1 мл.  Офтальмопробу проводи-ли на 2334 головах двукратно с интервалом  5-6 дней между первым и вторым введением, в конътиктиву глаз по 1 капли.

Учет аллергической реакции при  внутрикожной  пробе проводили через 30-36 часов, а  на глазную пробу через 6, 9, 12 часов после первого введения и через 3, 6, 9, 12 часов после повторного введения туберкулина. Реагирующими считали птицу – при образовании заметной отечности на месте внутрикожного введения туберкулина, а при глазном – при образовании слизисто-гнойного секрета,  гиперемии и отеке  конъюктиве глаз.

При бактериоскопическом исследовании из патологическо-го материала (кровь, слизь, смыв, вода, почва и помет) делали 64 мазков на предметных стеклах, окрашивали по методу Циль-Нильсена, и просматривали под микроскопом МБИ-3.

При  культуральном исследовании, патматериал обрабатывали по методу А.П. Аликаевой. При этом патматериал размельчали стерильними ножницами на мелкие кусочки, растирали в стерильной ступке. В зависимости от степени загрязнения, патмате-риал  заливали 3-6% раствором Н2S04 и оставляли на 10-20 минут закрытым стерильной пергаментной бумагой. Затем кислоту удаляли и кусочки промывали несколько раз в течение 5 минут стерильным физиологическим раствором, меняя его 2-3 раза. После этого патматериал растирали со стерильном песком в 1-2 мл физиологическом  растворе и полученную суспензию высевали на питательные среды (Левенштейна-Йенсена и Петраньяни). Посевы в пробирках выдерживали в термостаты при температуре + 37-380 до 3 месяцев.

Выделенные культуры микобактерий типировали по морфоло-гическим характеристикам, скорость роста на питательных средах и по патогенности на морских  свинках, кроликах и курах.

ПЦР исследование материала от птицы на туберкулёз проводили с использованием тест-системы «АВИУМ» производст-ва ФГНУ ЦНИИЭ Роспотребнадзора.

Для исследования использовали образцы культур микобак-терий,  фарингиальные смывы, помёт, кусочки паренхиматозных органов и  лимфатических узлов.

Жидкость (кроме крови) для исследования отбирали в объеме 20 мл, из тканей и органов, вырезали кусочки размеров 1х1х1 см3, а лимфоузлы брали целиком.

Кровь брали в объеме 2-5 мл в пробирки с 3%-ным раствором трилона Б (ЭТДА) из расчета 1:10.

Пробы жидкой культуры микобактерий и пробы цельной крови, консервировали трилоном Б, и использовали для выделения ДНК без предварительной подготовки.

Пробы фарингиальных смывов в количестве 5-10 мл центрифугировали при 3х100 об/мин в течение 10-15 мин.

Супернатант осторожно отбирали,  так чтобы над осад-ком осталось примерно 0,5 мл жидкости. Осадок суспендировали и оставшуюся надосадочную жидкость переносили в пробирку вместимостью 1,5 мл. Суспензию центрифугировали на микроцент-рифуге при (10-12)х103 об/мин в течение 5 мин. Супернатант отсасывали, оставляя над осадком 0,1 мл жидкости. Осадок ресус-пендировали и оставшуюся жидкость использовали для выделения ДНК.

Помёт массой 0,3-0,8 г тщательно суспендировали в 5 мл физиологического раствора. Суспензию центрифугировали на низкооборотной центрифуге при 1,5х103 об/мин в течение 5 мин и 0,1 мл супернатанта использовали для выделения ДНК.

Пробы паренхиматозных органов размером 1х1х1 см3,  лимфатические узлы целиком, тщательно растирали в отдельных фарфоровых ступках пестиками, добавляли по 1 мл физиоло-гического раствора и тщательно перемешивали. Смесь отстаивали при температуре 18-220С в течение 30 мин, затем верхнюю фазу переносили в пробирки вместимостью 1,5 мл и 0,1 мл и ее использовали для выделения ДНК.

3. Результаты исследований

3.1. Анализ эпизоотической ситуации по туберкулезу птиц в хозяйствах Кулябской зоны Хатлонской области.

Кулябская зона расположена в юго - восточной части Хатлонской области, на северо - западе граничит с РРП, на востоке с ГБАО, на юге и юго-востоке - с Исламской Республики Афган-истаном. Природно-климатические  условия области отличается  неоднородностью, что связано с рельефам  местности, большим диапазоном высот  и горно-долинных систем.

Климат характеризуется большими суточными колебаниями температуры воздуха, интенсивной солнечной радиацией и малой облачностью.

Выпадение большей части осадков приходится в зимнее -весенний период, для летного периода характерны длительные засухи.

Ряд районов региона являлись  неблагополучными по тубер-кулезу, что отрицательно сказывалось на эффективности ведения птицеводства и создавало серьёзные препятствия в производствен-ной деятельности. В числе наиболее распространенных опасных инфекционных болезней животных и птиц в Кулябской группе районов  остаётся туберкулёз.

Впервые туберкулез у сельскохозяйственных животных в республике был диагностирован РВЛ в 1931 году. Данные СГВН МСХ РТ о распространении туберкулеза птиц в Кулябской области с 1957 по1966 годы приведены  таблице 1. 

Таблица 1

Сведения о неблагополучных пунктов по туберкулеза птиц в Кулябской зоне Хатлонской области в РТ (1957-1966 гг.)

Районы

ГОДЫ

Всего

1957

1958

1959

1960

1961

1962

1963

1964

1965

1966

Куляб

1

1

-

1

-

1

7

-

4

2

17

Вoсе

-

1

-

-

3

4

1

-

-

-

9

Хамадони

3

4

-

1

5

3

1

1

-

-

28

Фархор

1

-

-

3

-

3

-

-

5

5

18

Дангара

3

1

2

-

3

1

1

-

1

4

15

Итого

7

7

2

5

11

22

10

1

10

11

87

Из таблицы видно, что наибольшее количество - 22 НП по туберкулезу птиц, в 1962 году было выявлено в пяти указанных  районах. За весь период анализа наибольшее количество инфицированных птиц туберкулезом было выявлено: в районах  М.А.Хамадони– 28 НП и  Фархор – 18 НП (Таблица 1).

Нами изучена динамика распространения туберкулеза птиц в Хатлонской  области в зависимости от сезонов года. (Таблица 2).

.                                                         

  Таблица 2

Динамика распространения туберкулеза птиц в Хатлонской области  в зависимости от сезонов 1957 1966гг.

Сезоны  года

Неблагоп. пункты

Исследование на туберкулёз птиц в благополучных хозяйствах

Выявлено реагирующих на туберкулин

Пало от туберкулеза

Весна

89

843089

13217

1854

Лето

39

461624

17376

955

Осень

63

940370

16579

1287

Зима

86

1129813

111119

1364

Итого

285

3375396

59291

5460

Установлено, что 65-70% неблагополучных пунктов выявлены в зимний и весенний периоды, что объясняется недостаточным уровнем кормления и плохим условием содержания.

Анализ архивных данных и статистическое отчетности по эпизоотической ситуации Кулябской зоны показывают, что в период 1966-2009гг. аллергические исследования на туберкулез среди птиц не проводились. В связи с этим, для выяснения эпизоотической ситуации туберкулеза птиц в некоторых районах Кулябской зоны нами проведены аллергические исследования с  охватом 1044  голов птиц, из них выявлено положительно реагирующих 13 голов, что составляет 1,25% (Таблица 3).

Таблица 3

Рзультаты аллергических исследований на туберкулез птиц в Кулябской группе районов Хатлонской области в 2009-2011гг.

Районы

Поголовье  на 01.01.2010г

Исследовано

голов

Выявлено

голов

в  %

Куляб

38413

211

2

0,95

Муминабад

29537

240

3

1,25

Хамадони

34108

200

2

1,0

Фархор

52624

189

3

1,06

Восе

67751

204

3

1,96

Всего

222433

1044

13

1,25

Из результатов исследования видно, что наибольший процент положительно реагирующих выявлен в Восейском и Муминабадском, а наименьший -  в Кулябском районе.

3.2. Сравнительное изучение диагностической ценности внутрикожной и глазной туберкулиновой пробы у птиц.

Исследования по изучению сравнительной диагностической ценности внутрикожной и глазной туберкулиновой пробы у птиц провели в джамоатах «Ватан» и «Комсомол» Фархорского района Хатлонской области.

При сравнительном изучении внутрикожной и глазной туберкулиновой пробы, курам и цыплят ППД-туберкулин для птиц вводили одновременно:  внутрикожно – в кожу бородки в дозе 0,1мл; а при глазном методе наносили на слизистую глаза 2 капли туберкулина.

В джамоате «Ватан» исследовано этими методами 550 кур и 235 цыплят,  в джамоате «Комсомол» исследовало - 1065 и 415 голов соответственно. В джамоате  «Комсомол» исследовано: индеек – 21 гол, голубей – 15, воробьев – 18, ворон – 15 внутрикожной и глазной пробой. Данные птицы предварительно ловили сетками и в период исследований их содержали в вольерах. Результаты исследований представлены в таблице 4.

 

  Таблица 4.

Диагностическая ценность внутрикожной и глазной туберкулиновой пробы в Фархорском районе

П/н

Вид птицы

Исслед

всего

Внутрикож. проба

Исслед.

всего

Глаз.проба

Реаги-щих

%

Реагиру-ющих

%

джамоат «Ватан»

1

Куры

550

6

1,1

550

2

  0,3


2

Молодняк

птицы

235

-

-

235

-

-


джамоат «Комсомол»

1

Куры

1065

17

1,6

1065

5

0,4


2

Молодняк птицы

415

-

-

415

-

-


3

Индейки

21

-

-

21

-

-


4

Голуби

15

-

-

15

-

-


5

Воробьи

18

-

-

18

-

-


6

Вороны

15

1

6,6

15

-

-


Всего

2334

24

1,0

2334

7

0,6


Из данных таблицы 4 видно, что в джамоате «Ватан» при исследовании кур  внутрикожной туберкулиновой пробой из  550 голов  реагировало – 6 (1,1%), при глазной пробе из 175 кур положительно реагировало 2, что составляет (1,2%). При исследовании внутрикожной и глазной пробой 235 молодняка птиц реагирующих не выявлено.

  В джамоате «Комсомол» при исследовании внутрикожной туберкулиновой пробой 1065 кур и  238 глазной пробой, соответственно  выявлены 17 (1,6%) и 5 (2,1%) реагирующих птиц. При исследовании 415 голов молодняка птицы, этими пробами  реагирующих не выявлено. 

Исследование внутрикожной и глазной пробой с туберкулином, имеют некоторые сложности, так в соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных»  учет результатов глазной пробы следует проводить через 6, 9, 12, 24 часов после первого и через 3, 6, 9 ,12 часов после повторного введения туберкулина. Как показывают опыт, проводить учет результатов глазной пробой, через каждые 3 часа, неоднократно большого количества птиц  при выгульном содержании, практически  невозможен.

При исследовании внутрикожной и глазной пробой  положительно реагирующих среди индеек, голубей и воробьев  не выявлено. Нами выявлено у одной вороны, слабая реакция на внутрикожное ведение ППД-туберкулина для птиц (6,6%). При убое и патологоанатомическом исследований,  реагирующей вороны характерных для туберкулеза изменений не обнаружены и при бактериологическом  исследовании возбудитель туберкулеза не выделен.

Анализ результатов проведенных исследований  показывают, что проводить аллергические исследования большого количества птицы довольно трудоемко и сложно. Глазная проба сложна для учета реакции и длительно по времени для проведения, а внутрикожная с введением туберкулина в бородку кур, сложна в исполнении.

Проведенные нами исследования показали, что диагности-ческая ценность внутрикожной и глазной туберкулиновых проб примерно неодинаковы. Однако, ведение учета реакции  при офтальмопробе сложнее. Аллергические методы  диагностики  туберкулеза птиц, является трудоемким и недостаточно эффективным методом.

В связи с этим, на современном этапе борьбы с туберкулезом животных и  птиц необходимо совершенствовать и изыскивать новые, более доступные для массовых исследований методы прижизненной диагностики.

3.3 Туберкулёз птиц, при совместном содержании различных видов животных в частном подворье, где имеются люди больные  туберкулёзом.

В последние годы, в Кулябской группе районов республики сложилась неблагоприятная эпидемиологическая обстановка по туберкулезу. Так, по данным Кулябской зональной санитарно-эпидемиологической службы  в 2010г. на 100 тыс. населения; в Восейском районе регистрирована  высокая заболеваемость людей туберкулезом – 230 человек,  в  районах Хамадони – 151,  Куляб – 93  и Фархор – 167 человек. При этом довольно часто устанавливали внелегочную форму туберкулеза. Приведенные данные показывают, что эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в населенных пунктах этого региона  продолжает оставаться неблагоприятной. Поэтому, совершенствование мер борьбы с этой болезнью, применительно к местным условиям, являются актуальным. 

Исследования КРС и птицы частного сектора проводили аллергическим методом - внутрикожной симультанной туберкулиновой пробой ППД для млекопитающих и ППД для птиц, а также глазной пробой с применением ППД для млекопитающих и ППД для птиц.

Определение значение совместного содержания КРС и птиц  в частном подворье, где имеются больные туберкулезом люди,  проводили в джамоате «Комсомол»  и «Ватан» Фархорского района, в период 2008- 2011гг. 

Результаты исследований представлены в таблице 5.

 

Таблица 5.

Результаты аллергических исследований крупного рогатого скота и птиц, в неблагополучных семьях по туберкулезу.

п/п

Вид животных

Исследо-вано

Внутри кожная проба

Глазная проба

ППД

млек

%

ППД

птиц

%

ППД

млек

%

ППД

птиц

%

1

Коровы

20

-

-

6

30,0

-

-

-

-

2

Нетели

15

-

-

1

6,6

-

-

-

-

3

Телята

10

-

-

-

-

-

-

-

-

4

Куры

75

-

-

3

4,0

-

-

-

-

5

Молодняк кур

40

-

-

-

-

-

-

-

-

Из таблицы 5 видно, что при исследовании 20 коров на  ППД- туберкулина для млекопитающих, при внутрикожной туберкулиновой пробе, не выявлено положительно реагирующих животных. При исследовании с ППД-туберкулином для птиц внутрикожной пробой выявлено реагирующих 6 (30%) коров, а при исследовании 15 нетелей  – 1 (6,6%).

Реагирующие коровы и нетели на ППД туберкулин  для птиц, (при отсутствии реакций на ППД для млекопитающих) указывают, что исследованные коровы, нетели и телята не заражены возбудителем туберкулеза М. bоvis,  но они были сенсибилизированы микобактериями туберкулеза птичьего вида  (М. avium). 

­­­Отсутствие  реагирующих животных при исследовании глазной пробой с применением ППД для млекопитающих и ППД для птиц указывает на недостаточную чувствительность глазного метода введения туберкулина. Поэтому глазная проба в последние годы изредка применяется при диагностике туберкулеза КРС и не применяется при диагностике туберкулеза птиц.

При исследовании 75 кур внутрикожной пробой с ППД для млекопитающих, реагирующих - не выявлено, но при исследовании с ППД для птиц выявлено 3 (4,0%) реагирующих кур. При диагностическом убое 3 кур, положительно реагирующих и одной головы КРС обнаружены, характерные для туберкулеза, изменения в печени, селезенки и в одном случае в легких. Изменения характеризовались образованием множественных плотных серо-белых казеозных узелков, главным образом в печени и селезенки. Патматериал от убитых кур исследован лабораторными методами. 

При лабораторном исследовании патологического материала от 3-х убитых кур и одной головы КРС выделена одна культура медленно растущей кислото-щелочно-устойчивой микобактерии. В целях идентификации выделенной культуры микобактерий  биопробу ставили на морских свинках, кроликах и курах по 3 головы.  Для заражения лабораторных животных  использовали 4-х недельную культуру  микобактерий; морским свинкам– подкожно во внутреннюю  поверхность бедра, кроликам  – внутривенно в  краевую вену уха и курам  – внутривенно  в подкрыльцовую вену, в дозах по 1 мг, суспендированных в 1 мл физиологического раствора.

Биологическим методом исследование при заражения кролики пали в течение 15-30 суток, с явлениями сепсиса и увеличением селезенке. У кур и коровы  убитых через 3 месяца после заряжения, обнаружены множественные серо-желтые бугорки в печени  и селезенке. При исследовании мазков из органов, окрашенных по Циль-Нильсену обнаружили ярко-красные палочки, что относительно к микобактерии туберкулеза М. avium.

Анализ результатов, проведенных нами исследований показывает, что при  тесном контакте больных туберкулезом людей с крупным рогатом скотом и птицей, животные не заболевают туберкулезом М. bovis, M. tuberculosis, а куры заражаются и болеют только туберкулезом свойственного им вида - М. avium.

3.4. Диагностическая ценность ПЦР при туберкулезе птиц

Исследования методом ПЦР проводили в два этапа. На первом этапе методом ПЦР исследовано 45 проб фекалий и 45 проб крови от крупного рогатого скота, исследованных аллергическим методом. Пробы материала отбирали в соответствии с наставлением к тест-системе. Для выделения ДНК использовали 10% суспензию фекалий, кровь - без предварительной подготовки. Амплификацию проводили по программе амплификации в соответствии с наставлением к тест-системе.

Из 45 исследованных проб крови крупного  рогатого скота  ДНК возбудителя туберкулёза птиц не выделена (электрофореграмма 1).

Электрофореграмма 1.

Результаты ПЦР исследования крови

К+К-123 4 5 6 7 8 9 1011 12 13 14 15

К+16 17 18 19 20 2122 23 24 25 26 27 28 29 30

К+ 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45

Анализ всех проб, показывает на отсутствие в треках специфических полос, что являются отрицательным результатом.

При исследовании 45 проб фекалий в шести пробах (13,3%) выделена ДНК M.avium. По-видимому, эти животные не болея туберкулёзом, являлись носителями возбудителя туберкулёза птичьего вида и выделяли ее во внешнюю среду.

 

Электрофореграмма 2

Результаты исследования фекалий крупного рогатого скота.

 

       

  К+  К- 1 15 16 18  20  45

В треках, соответствующих проб 1, 15, 16, 18, 20 и 45 присутствует специфическая полоса на уровне положительного контроля амплификации и из этих проб выделена ДНК M. avium. В остальных пробах ДНК микобактерий птичьего вида не выделена. На втором этапе проведены исследование проб помёта от кур разных возрастных групп.

Методом ПЦР исследовано 115 проб помёта от кур разных возрастных групп. Пробы помёта отбирали в соответствии с наставлением к тест-системе. Для выделения ДНК использовали 10% суспензию помёта.

В результате проведенных исследований методом ПЦР  выделена ДНК M.avium у 3-х проб, что составляет 2,6% от общего количества исследованных.

Электрофореграмма 3.

Результаты ПЦР - исследования 115 проб помёта кур

К+К-93896

       

Анализ проведенных исследований и полученных результатов показывает, что методом ПЦР можно исследовать фекалий, помет и  объекты внешней среды.

Результаты исследований позволяет нам рекомендовать ПЦР-как контрольный сигнальный метод мониторинга туберкулеза птиц, в связи с этим  у ветеринарных специалистов появляются возможность проводить более целенаправленную работу по диагностике туберкулеза.

4. Научно-обоснованная система мероприятий профилактики

и борьбы с туберкулезом птиц

На современном этапе борьбы с туберкулезом необходимы более совершенные методы борьбы, основанные, прежде всего на изменении технологии ведения птицеводства, учитывающие биологические особенности птиц, природно-климатические условия и максимальную защиту окружающей среды от загрязнения. Специальные противотуберкулезные мероприятия, должны быть направлены на профилактику - оздоровление и органично вписываются в технологию ведения птицеводства.

Возникновению туберкулеза среди кур – несушек способствует их длительная передержка после окончания интенсивной яйценоскости.

Укомплектование поголовья  старой птицей, приводит к возникновению новых очагов заболевания.

Больные туберкулезом птицы, являются источником заражения крупного рогатого скота и свиней. 

       В связи с чрезвычайной устойчивостью туберкулезной палочки к физическим и химическим воздействиям, решающим фактором в борьбе с туберкулезом являются уничтожение возбудителя во внешней среде.

       При замене неблагополучного поголовья вначале проводят дезинфекцию, механическую очистку помещения от мусора, помета а затем заключительную дезинфекцию 3%-ным щелочным раствором формалина или фенолом натрия, подогретого до 60-800С из расчета 1 л на 1 м2 помещения. Зимой для этого необходимо использовать смесь полиэтиленгликолиевой смолы (ПЭГС) и 1 – 2%-ный раствор каустической соды в соотношении 1:10 или смесь ПЭГС с 5%-ным техническим раствором фенола натрия в соотношении 2:3. В помещении нужно создать герметичность и проводить аэрозольную дезинфекцию 38-40%-ным раствором формалина из расчета 40мл/м3.

       В помещениях необходимо снять деревянные полы, убрать слой почвы глубиной 10-15 см. Засыпать глину, известь-пушонку и настилать полы из нового стройматериала.

       Территорию фермы нужно залить раствором, содержащим 3% едкого натрия и 3% формальдегида из расчета 2 л на 1 м2 площади, или раствором хлорной извести, содержащий не менее 5% активного хлора из расчета 10л на 1 м2 площади. Затем почву посыпать сухой хлорной известью содержащей не менее 25% активного хлора, и перепахать на глубину до 25см.

       Выгульные дворы, базы, территорию фермы дезинфицировать хлорной известью-пушонкой, инвентарь – 3%-ным раствором формальдегида.

       Эффективными дезинфицирующими средствами  при туберкулезе являются препараты, выделяющие свободный активный хлор. Из них наибольшего внимания заслуживает хлорная известь, гипохлорид кальция, хлорамин, гипохлор, препарат ДТСГК (двутрехосновная соль гипохлорида кальция).

       Хлорная известь в виде порошка, следует  использовать для обеззараживания влажной почвы (1 часть извести на 3 части почвы), навозной жижи и помета.

       Гипохлорид кальция содержит 80-90% активного хлора. Его применять для дезинфекции в виде 5%-ного водного раствора.

       Хлорамин содержит 26-30% активного хлора, использовать 3-5%-ный раствор хлорамина Б, действие которого усиливается прибавлением аммонийных солей (хлористого или сернокислого аммония) в соотношении 1:1.

       Препарат ДТСГК содержит 47-52% активного хлора и его использовать как хлорную известь.

       Наряду с хлорсодержащими препаратами для обеззараживания птицеводческих объектов применять и другие дезинфицирующие средства. Побелку стен на НП проводить трехкратно, с часовым интервалом 20%-ной взвесью свежегашеной извести (известковое молоко).

       Хорошие результаты дает щелочной раствор формалина, в котором содержится 3% едкого натрия и 3% формалина. Вначале в воде растворить, а затем добавить формалин из расчета 3% к общему количеству необходимого раствора. Дезинфекцию проводить подогретым до 35-40% 0С раствором из расчета 1 л на 1 м2 поверхности.

       Для обеззараживания птицеводческих помещений целесообразно использовать наряду с указанными дезинфекционными средствами 1%-ный раствор глутарового альдегида и 5%-ный раствор фенола натрия.

       Высокоэффективным дезинфекционным средством является феносмолин, представляющий собой смесь фенольной смолы и 20%-ного водного раствора едкого натрия, в соотношении 1:1. Надежное обезвреживание помещений, оборудования и инвентаря достигается при использовании 8%-ной эмульсии феносмолина из расчета 1л/м2.

       Территорию птицефермы в течение лета 2-3 раза обрабатывают дисками на глубину 13-15 см, что позволит санировать почву за счет воздействия естественных физических факторов.

       Необходимо широко использовать возможности санации помещений и территории солнечным светом в летние месяцы. Халаты, полотенца, резиновые сапоги погружать в 3%-ный раствор формалина и 3%-ный раствор едкого натрия на 2 часа.

5. Выводы

1. Ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по туберкулезу птиц в Кулябской группе районов  РТ показывает, что широко  масштабные исследования птиц в республике проводились в 1957-1966 гг.  В этот период выявлено 285 неблагополучных пунктов. Исследовано аллергическим методом в благополучных хозяйствах – 3375396, в неблагополучных – 3341595 птиц, выявлено положительно реагирующих – 59291 птиц, пало от туберкулеза 5460 птиц.

2. Наибольшее количество положительно реагирующих кур на туберкулин, выявлено в летне-осенний период, а наибольшее количество неблагополучных пунктов (до 70%)  выявлено в зимний и весенний периоды.

3. Исследования птиц на туберкулез, в период 1966-2009 гг. проводились с частичным охватом поголовье. При исследовании птиц в Кулябской зоне  Хатлонской области в 2010г. нами установлено НП по туберкулезу в районах: Кулябский–1 , Муминабадский - 2, Хамадони – 3, Фархорский  и Восе  по  5 НП.

4. Специфичность и чувствительность внутрикожной и глазной туберкулиновой пробы идентичны.  Однако, учет реакции  при офтальмопробе значительно сложнее и длительнее по времени. В связи с этим, для аллергического исследования на туберкулез птиц,  целесообразно использовать внутрикожную туберкулиновую пробу с ППД - туберкулином для птиц.

5. При тесном контакте с другими видами животных, при наличии очага куры заражаются М. avium. и заболевают только туберкулезом птичьего вида. При совместном содержании  больных туберкулезом кур, КРС может сенсибилизировать М. avium и являются бактерионосителями и бактериовыделителями этого вида микобактерий.

6. При ПЦР исследований 45 проб фекалий  крупного рогатого скота, находившихся в контакте с больной туберкулезом птицей, у 6 (13,3%) проб выделены ДНК  М. avium., а при исследовании 115 проб помета кур, у 3 (2,6%) проб выделены ДНК  М. avium.

7. ПЦР исследование помета птиц позволяет проводить контроль благополучия кур по туберкулезу кур по выделениям ДНК М. avium, и можно его использовать как контрольный – сигнальный метод мониторинга туберкулеза птиц. 

Практические предложения

1. С целью профилактики и ликвидации туберкулеза кур в частном и общественном секторе  республике Таджикистан, рекомендовать содержание и эксплуатации кур  не более 1,5 – 2 года.

2. Контроль благополучия по туберкулезу птиц следует подтвердить с использованием ПЦР. При этом один раз в год,  отбирать  сборные или индивидуальные пробы помета или носовой слизи из всех клеток и помещений  птиц, и подвергать исследованию методом ПЦР. При выявлении ДНК М. avium, к дальнейшему исследованию на туберкулез, подвергают только птиц из клеток и помещений, где были выделены ДНК возбудителей туберкулеза.

3. Методические рекомендации по профилактике и оздоровлению животных хозяйств от туберкулеза Душанбе - 2010.

Список использованной литературы

Грошева Г.А. – Справочник по инфекционным болезням птиц специализированных промышленных предприятий мелкотоварных ферм и  приусадебных хозяйств / Г.А. Грошева, З.В. Тихонова – изограф / Москва, 2007г. – с.47

Бальчюнас И.И. – Сравнительная оценка прижизненной диагностики туберкулеза и пуллороза кур: Автореферат дисс. докт. вет. наук: 16.00.03 / И.И. Бальчунас  -  Харьков, 1974 – с.46

Душук Г.В. – Трансоварнальная передача возбудителя туберкулеза кур:  Автореферат дисс. докт. вет. наук: 16.00.03  / Р.В. Душук – Москва, 1959 – с.13

Иванесова Б.П. – Данные экспериментальных исследований по аллергической диагностике туберкулеза кур: Автореферат дисс. докт. вет. наук: 16.00.03 / Н.Б. Иванесова – Москва, 1955 – с.15

Плеханов Б.К. – Зональная эпизоотология туберкулеза кур и опыт его искоренения:  Дисс. канд.  вет. наук: 16.00.03. Плеханов Б.П. – Москва – 1968 – с.267.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

*1. Одинаев К.А. Особенности современной диагностики туберкулеза в условиях высокогорья Республики Таджикистан/ Конференция молодых Ученых ТАСХН /Тезисы докладов конференции молодых ученых ТАСХН// Душанбе, 2010.-С.343-350.

*2. Мирзоев Д.М. Туберкулез сельскохозяйственных животных  (Сатторов С.Ф., Одинаев К.А.) /Доклады ТАСХН. – Душанбе, 2010 - № 3 - С.39-42

*3. Мирзоев Д.М. Эпизоотология, диагностика и профилактика туберкулеза птиц (К.А.Одинаев., С.Ф.Сатторов) / Доклады ТАСХН. – Душанбе, 2010 - № 4 - С.61-64.

4. Одинаев К.А. Достоинства и преимущества ПЦР-диагностики инфекционных заболеваний /ТрудыТаджикского НИИ профилактической медицины// Кровь аспекты инфектологии. – Душанбе, 2011 - С.81-85 (Мирзоев Д.М.)

*5. Одинаев К.А. Аллергические методы диагностики туберкулеза животных и птиц /Доклады ТАСХН. – Душанбе, 2011 - № 2 - С.41-45.

Примечание - * публикации в изданиях, рекомендованных ВАК для РФ и РТ.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ:

ВИ – Ветеринарный институт

ТАСХН – Таджикская академия сельскохозяйственных наук

РТ – Республика Таджикистан

ПЦР – полимеразная цепная реакция

СББЖ – станция по борьбе с болезнями животных

СГВН – служба государственного ветеринарного надзора

РРП – районы республиканского подчинения

ГБАО – горно-Бадахшанская автономная область

НЦВД – национальный центр ветеринарной диагностики

МСХ – министерство сельского хозяйства

НП – неблагополучные пункты

ППД – протеин префуит - деравит

ПЭГС – полиэтиленгенколиевая смесь

ДТСГК – двутрехосновная соль гипохлорида кальция




© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.