WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

САИДОВ ШАМСУЛЛО ХУРСАНДОВИЧ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ПРОБИОТИКА СУБТИЛБЕН В ФОРМЕ ТАБЛЕТОК

И ЕГО ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ

ПРИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗЕ ТЕЛЯТ

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Душанбе – 2012

Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском ветеринарном институте ТАСХН и Таджикском аграрном университете им. Ш. Шотемура.

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор, академик ТАСХН Саттори И.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Муминов А.М.

кандидат ветеринарных наук Каримов М.Ш.

Ведущая организация: НПП «Биологические препараты»

Таджикской академии сельскохозяйственных наук

Защита диссертации состоится 24 ноября 2012 г. в 10 ч на заседании диссертационного совета ДМ 050.001.01 при Ветеринарном институте Таджикской академии сельскохозяйственных наук по адресу: 734005, г. Душанбе, ул. Каххорова, 43, тел. (992-372) 27-39-95.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ветеринарного института Таджикской академии сельскохозяйственных наук по адресу: 734005, г. Душанбе, ул. Каххорова, или на официальных сайтах ВИ ТАСХН www.tajnivi.tj и ВАКа России www.vak2.ed.gov.ru

Автореферат разослан 29 сентября 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук,

профессор

Ярбаев Н.Я.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Ведущее место среди причин гибели телят занимают желудочно-кишечные болезни, наносящие огромный ущерб животноводству. В новых экономических условия хозяйствования проблема повышения эффективности лечебно-профилактических мероприятий при желудочно-кишечных болезнях различной этиологии (незаразные, бактериальные, вирусные, при воздействии микотоксинов и др.) является актуальной для ветеринарной медицины (Архангельский И.И. и др., 1960; Анохин Б.М., 1980; Коромыслов Г.Ф., 1980; Аликаев В.А. и др., 1981; Самохин В.Т., 1981; Соколова Н.Л. и др., 1982; Урбан В.П., 1985; Воронин Е.С. и др., 1990; Шахов А.Г., 2000; Гаффаров Х.З. и др., 2002 и др.).

Для борьбы с инфекционными энтеритами телят широко применяют антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны и другие химиопрепараты, бесконтрольное использование которых имеет вредные последствия: отрицательное влияние на формирование иммунитета и характер иммунологических реакций, нефротоксическое и гепатотоксическое действия, неблагоприятное влияние на нервную и кроветворную системы, аллергия и дисбактериозы, возникновение устойчивости микроорганизмов к этим лекарственным средствам.

Увеличение устойчивых к антибиотикам и сульфаниламидам бактерий в организме животных и окружающей среде снижает эффективность лечебных и профилактических мероприятий и приводит к тяжелым экологическим последствиям.

В последние годы для борьбы с желудочно-кишечными и респираторными болезнями и повышения продуктивности молодняка сельскохозяйственных животных широко применяют различные симбиотические микроорганизмы, среди которых наиболее перспективными признаны молочнокислые, пропионовокислые, бифидобактерии, Bacillus subtilis и др., проявляющие избирательную антагонистическую активность в отношении патогенной кишечной флоры, эффективно и быстро восстанавливающие микробиоценоз кишечника (Антипов В.А., 1991; Панин А.Н. и др., 1993, 1999; Паршин П.А. и др., 1997; Малик Н.И. и др., 2000, 2001 и др.).

Основные преимущества пробиотиков в сравнении с другими антимикробными препаратами – высокая эффективность, отсутствие побочных эффектов и экономичность (Шахназаров В.Ю., 1990; Проскурин Ю.Н., 2000; Стечин Б.Т. и др., 2005 и др.).

Установлено, что использование пробиотиков из представителей эндогенной микрофлоры для лечения и профилактики энтеритов животных недостаточно эффективно из-за слабой противобактериальной активности этих препаратов, которая значительно выше у препаратов на основе спорообразующих бактерий B. subtilis.

Вышеизложенное обусловливает актуальность настоящей работы, целью которой явились разработка эффективного при сальмонеллезе телят пробиотического препарата на основе местных штаммов B. subtilis и исследование профилактическое эффективность этого препарата.

Для достижения поставленной цели решены следующие задачи:

1. Изучить распространение сальмонеллеза телят в животноводческих хозяйствах Республики Таджикистан.

2. Разработать таблетированную форму пробиотика Субтилбен, изучить ее антагонистическую активность и исследовать физико-химические и биологические свойства препарата.

3. В экспериментальных и производственных условиях определить профилактическую эффективность пробиотика Субтилбен при сальмонеллезе телят.

Научная новизна. Изучены особенности распространения сальмонеллеза телят в животноводческих хозяйствах республики в новых условиях хозяйствования.

Разработан способ изготовления пробиотического препарата Субтилбен на основе местных штаммов B. subtilis (Патенты TJ 390, TJ 391), отработаны методы изготовления и контроля таблетированной формы препарата, изучены его антимикробные свойства, безвредность и стабильность.

Определена профилактическая эффективность Субтилбена при сальмонеллезе телят и отработан рациональный способ применения препарата.

Практическая ценность. На основании полученных результатов пробиотик Субтилбен предложен в качестве противобактериального препарата.

Материалы диссертации вошли в:

- Наставление по применению иммунобиотика Субтилбен для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней животных и пчел (утв. ГУВ МСХ РТ 25.11.2004 г.),

- Решение 26-го заседания Межправительственного совета по сотрудничеству в области ветеринарии СНГ от 24.11.2004 г. (Душанбе) о практическом использования препарата Субтилбен в ветеринарной практике СНГ.

- Рекомендации по профилактике пневмоэнтеритов телят (утв. ГУВ МСХ РТ, 2012).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- результаты изучения распространения сальмонеллеза телят в животноводческих хозяйствах Таджикистана;

- технология изготовления и методы контроля физико-химических и биологических свойств таблетированной формы пробиотика Субтилбен;

- результаты изучения антибактериальной активности и безвредности Субтилбена;

- результаты экспериментальных и производственных испытаний эффективности препарата при сальмонеллезе телят.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института (ТаджНИВИ) (2003 – 2005гг) и Таджикского аграрного университета (2006 – 2010 гг.); республиканских конференциях и семинарах-совещаниях (Душанбе, 2005 – 2010 гг.); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней животных в современных условиях», посвященной 60-летию ТаджНИВИ (Душанбе, 2003 г.); 26-ом заседании Межправительственного совета по сотрудничеству в области ветеринарии СНГ (Душанбе, 2004 г.), Международной конференции посвященной 80-летию образования ТАУ им. Ш. Шотемура (Душанбе, 2011).

Публикации. По результатам исследований опубликованы 6 научных работ, получены 2 патента РТ.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

Диссертация изложена на 108 страницах, иллюстрирована 8 таблицами и 7 рисунками. Список литературы содержит 209 источников. В приложение включены материалы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в 2000 – 2010 гг. в лабораториях вирусологии ТаджНИВИ и микробиотехнологии Таджикского аграрного университета (ТАУ) в соответствии с республиканской научно-технической программой «Разработать и внедрить новые высокоэффективные комплексные препараты по профилактике и терапии респираторно-кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных» на 2001 – 2005 гг., зарегистрированной в Национальном патентно-информационном центре (НПИЦентр) РТ (№ госрегистрации 00000967).

Научно-производственные опыты, апробация и производственная проверка полученных результатов проведены в 13 животноводческих хозяйствах РТ.

Диагностические исследования. Сальмонеллез диагностировали на основании анализа эпизоотологических данных с учетом клинических признаков болезни, патологоанатомических изменений и результатов бактериологического исследования патологического материала от больных, павших и вынужденно убитых больных телят.

Животные. Эксперименты проводили на 162 белых мышах (массой 18 – 20 г), 81 кролике породы шиншилла (массой 2,5 – 2,7 кг), 326 телятах черно-пестрой породы (массой 31 – 33 кг), производственные испытания – 590 телятах черно-пестрой породы (массой 31 – 33 кг). Разброс в экспериментальных группах по исходной массе тела не превышал 10%.

В работе применяли разработанный пробиотик Субтилбен, представляющий собой комплекс взвеси микробных клеток местных штаммов (BS TJ 09, BS TJ Д 24, BS TJ Д 26) B. subtilis и минеральных и растительных веществ.

При разработке Субтилбена использовали 3 штамма B. subtilis: BS TJ 09, BS TJ Д 24, BS TJ Д 26.

Для стандартизации и контроля качества таблетированной формы Субтилбена, а также изучения его стабильности при хранении разработаны методы качественного и количественного контроля препарата.

Физико-химические свойства таблетированной формы Субтилбена

Внешний вид, наличие механических примесей, плесени определяли визуально при рассмотрении отобранных образцов при хорошем естественном освещении на белом фоне на расстоянии 25 – 30 см от глаз.

Концентрацию водородных ионов (рН) 10% водной суспензии определяли потенциометрически (ГФ XI, вып. 1, с. 175).

Массовую долю влаги определяли по ГОСТу 24061-89.

Биологические свойства Субтилбена

Однородность определяли методом микроскопии.

Подсчет количества микробных клеток (м.к.) B. subtilis. Культуру разводили физиологическим раствором в 10 – 15 раз и заправляли суспензией подготовленную камеру Горяева, в 5 квадратах которой под микроскопом определяли количество м.к. и рассчитывали их число в 1 см3.

Определение количества жизнеспособных клеток B. subtilis. В пробирку, содержавшую 1 г Субтилбена добавляли 9 см3 стерильного физиологического раствора, после тщательного перемешивания 0,5 см3 суспензии переносили во вторую пробирку с 4,5 см3 физиологического раствора, из которой 0,5 см3 разведенной суспензии – в третью, из третьей – в четвертую, из четвертой – в пятую, из пятой – в шестую пробирку с 4,5 см3 физиологического раствора.

Из последней (шестой) пробирки по 0,5 см3 суспензии пипеткой засевали в шесть чашек Петри с агаром СБД (комплекс минеральных и растительных компонентов), колебательными движениями распределяя суспензию по всей поверхности агара. Культивировали 36 ч при 37оС, после чего учитывали результаты исследования (определяли количество больших и малых по диаметру колоний).

Стерильность Субтилбена определяли по ГОСТу 28085-89.

Для исключения контаминации микоплазмами производили посевы проб Субтилбена на среду Эдварда (жидкую, полужидкую и твердую), обогащенную 20% сыворотки крови лошади, 10% дрожжевого экстракта, 0,5% глюкозы с добавлением фенол-рота в конечной концентрации 0,001%.

Изучение антагонистических свойств Субтилбена в сравнительном аспекте (контроль – бактерин-SL) проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой и плотной питательной средах на музейных штаммах (3) и изолятах S. dublin (3), выделенных от больных телят в животноводческих хозяйствах РТ.

Идентификацию сальмонелл, изучение антагонистической активности B. subtilis в отношении S. dublin проводили при участии Хасанова Н.Р.

Динамику антагонистической активности Субтилбена в отношении односуточной бульонной культуры S. dublin (концентрация – 1 млрд м.к./мл) определяли методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (контроль – силикат алюминия с примесью силикатов магния и кальция).

Токсические свойства Субтилбена

Безвредность Субтилбена изучали в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (М., 1988).

Испытание на токсичность проводили по ГФ XI (вып. 2, с. 182).

Для изучения профилактической эффективности Субтилбен вводили перорально с водой или молоком в дозе 0,2; 0,4 и 0,6 г/кг массы тела один раз в сутки в течение 15 дней.

Экономическую эффективность научных разработок рассчитывали согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (утв. ГУВ МСХ СССР в 1982 г.), а также в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений» (утв. МСХ СССР в 1983 г.).

Методики отдельных экспериментов изложены в соответствующих разделах диссертации.

Цифровой материал диссертации обработан статистически по критерию Стьюдента для проверки достоверности различий. Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при p≤0,05 (Лакин Г. Ф., 1990).

За основу выводов и практических предложений взяты результаты контролируемых опытов в лабораторных и производственных условиях.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Распространение сальмонеллеза телят

в хозяйствах Республики Таджикистан

Бактериологическим исследованием патологического материала больных телят с симптомокомплексом расстройства желудочно-кишечного и респираторного тракта доказано, что в возникновений этих болезней на молочно-товарных фермах Таджикистана большую роль играет S. dublin. Вероятность возникновения и тяжесть течения болезни определяют внешние факторы, влияющие на естественную резистентность и иммунологическую реактивность организма телята.

Результаты исследования 382 проб патологического материала (фекалии, кровь, паренхиматозные органы) от телят из 13 животноводческих хозяйств районов республиканского подчинения (РРП), Хатлонской и Согдийской областей РТ представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты бактериологического исследования
патологического материала от телят

Кол-во

хозяйств

проб

всего

неблагополучных

всего

положительных

РРП

7

5

265

107 (40,3)

Согдийская область

3

1

40

4 (10,0)

Хатлонская область

3

2

77

16 (20,7)

Итого

13

8

382

127 (33,2)

Примечание. В скобках указано процентное значение.

Наибольшее количество больных телят (40,3%) выявлено в хозяйствах РРП, наименьшее (10,0%) – Согдийской области.

E. coli в ассоциации с Pr. vulgaris выделена в 68,2% случаев, E. coli с S. dublin – 20,4% и ассоциации трех патогенов (E. coli, Pr. vulgaris и S. dublin) обнаружены в 11,4% случаев (рис. 1).

Рис. 1. Соотношение ассоциаций патогенов болезней телят

в хозяйствах Таджикистана, %.

Возбудителей болезней желудочно-кишечного и респираторного тракта телят в отдельности выделяли в 71,9, в ассоциации – 28,1% случаев. Как видно из рисунка 2, E. coli обнаружена в 49,9, S. dublin – 12,1 и Pr. vulgaris – 9,9% случаев ассоциаций патогенов.

Рис. 2. Соотношение возбудителей болезней телят в отдельности и в ассоциации, %.

Таким образом, S. dublin как в отдельности, так и в ассоциации с другими патогенами являются возбудителями желудочно-кишечных и респираторных болезней молодняка КРС, что обусловливает актуальность разработки новых противобактериальных лекарственных средств и рациональных способов их применения.

3.2. Технология изготовления пробиотика Субтилбен в форме таблеток

3.2.1. Состав

Для успешной профилактики и лечения бактериальных желудочно-кишечных и респираторных болезней необходима одновременная обработка большого поголовья, поэтому наиболее удобной и эффективной лекарственной формой являются таблетки для перорального применения.

В состав Субтилбена входят: бентонит, пектин, взвесь м.к. штаммов B. subtilis BS TJ 09, BS TJ Д 24, BS TJ Д 26 (1:1:1) в концентрации 25 – 30 млрд м.к./г, формообразующие компоненты – остальное.

3.2.2. Технология

Основные технологические стадии производства Субтилбена в форме таблеток следующие:

1. Получение матричных культур. С полужидкого агара культуру производственных штаммов B. subtilis засевают в пробирку с питательным бульоном СДБ и выращивают в течение 1 – 24 ч при 37оС. Культуры проверяют на чистоту и вновь засевают в матрасы, наполненные питательной средой не более 2/3 объема. Через 18 – 24 ч инкубирования культуры B. subtilis проверяют на чистоту и используют для изготовления производственной серии биомассы.

2. Изготовление производственной серии биомассы. Чистые культуры 24-часового роста в количестве 5%-ного объема засеваемой среды инокулируют в 10-литровые бутыли, наполненные средой СДБ (рН 7,4 – 7,6), и выращивают при 37оС в течение 48 ч. Затем культуры штаммов BS TJ 09, BS TJ Д 24 и BS TJ Д 26 B. subtilis смешивают в равных количествах. Полученный гомогенат перемешивают с бентонито-пектиновой смесью.

3. Сушку производственной серии биомассы осуществляют методом контактно-сорбционного обезвоживания на бентонитопектиновой смеси в сушильном шкафу при 40 – 50оС в течение 48 – 72 ч. Концентрация биомассы культур B. subtilis в порошке – 25-30 млрд м.к. с содержанием 90 – 100% спор.

4. Изготовление таблетки Приготовленную смесь гранулировали через сито с диаметром отверстий 3 мм и равномерно распределяли по поддону с толщиной слоя не более 10 мм.

Массу выдерживали в течение 24-36 часов при температуре 37°С, а затем гранулировали через сито с диаметром отверстий 2 мин. В качестве вспомогательных веществ использовали крахмал, сахарный сироп и кальция стеарат.

Полученные таблетки имели минимальное отклонение по массе (от 2 до 2,6%), высокие значения по прочности (от 0,8 то 1,5 МПа) и соответствующее количество бацилл.

Результаты оценки качества таблеток Субтилбена в соответствии с требованиями ФС 42-34 76-98 и ГФ показали, что таблетки по внешнему виду является круглой формы беловато-серого цвета, мраморного характера. КОЕ достигает 7,5 млрд. кл/дозе, распадаемость не более 15 мин., РН – 6,8, массовая доля влаги 4,1%, посторонней микрофлоры не имели, антимикробная активность достигает 15,6-31,2 млн м.к. и безвреден для животных.

3.3. Изучение стабильности свойств таблеток Субтилбена
в процессе их хранения

С целю изучения стабильности свойств Субтилбен в таблетках заложили на хранение в сухом защищенном от света месте при температуре не выше 30оС. В результате проведенных исследований образцов в течение 36 месяцев было установлено, что сохранность штаммов B. subtilis составила 65 – 70%, остальные показатели не изменялись.

Таким образом, можно сделать заключение, что таблетки Субтилбена после хранения в течение 24 месяцев соответствуют представленным требованиям ФС 42-34 78-98 и ГФ.

3.4. Изучение воспроизводимости технологии получения

таблеточной формы Субтилбена

Для определения воспроизводимости технологии получения Субтилбена в форме таблеток и оценки их свойств изготовили 5 серий препарата.

Приготовление Субтилбена в форме таблеток проводили в соответствие с разработанной технологической схемой.

Результаты исследования качества таблеток Субтилбен, как видно из таблицы 3, отвечают требованиям ФС 42-3476-98 и ГФ.

Разработанный регламент получения таблеток Субтилбен включен в НТД на пробиотик Субтилбен.

Таблица 3

Показатели качества Субтилбена в форме таблеток

Показатель

Требования

Серия таблеток

1

2

3

4

5

Внешний вид

таблетки круглой формы, беловато-серого цвета мраморного характера

соответствует

КОЕ, млрд кл/дозе

1,5 – 2,0

2,2

2,2

2,5

2,0

2,6

Распадаемость, мин

60 не более

15

16,0

20

15

10

рН

5,5 – 8,0

5,9

6,5

6,8

6,0

7,0

Массовая доля влаги, %

8,0 не более

3,0

3,5

3,2

4,0

4,5

Контаминация посторонней микрофлорой

не допускается

отсутствует

Бактерицидная активностьв отношении B. dublin, млн м.к./мл

31,2 – 62,4

31,2

31,2

15,6

62,4

31,2

Безвредность

безвреден

соответствует

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют, что Субтилбен в форме таблеток соответствует нормативным требованиям и обладает высокой бактерицидной активностью.

3.5 Антагонистические свойства Субтилбена

Борьба с инфекционными болезнями приобретает в последние годы все большее значение в связи с развитием резистентности микроорганизмов к широко применяемым антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам, что обусловливает необходимость изыскания эффективных лечебно-профилактических средств, в том числе биологических.

Изучение антагонистических свойств Субтилбена в сравнительном аспекте (контроль – бактерин-SL) проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой и плотной питательной средах на музейных штаммах (3) и изолятах S. dublin (3), выделенных от больных телят в животноводческих хозяйствах РТ. При МПК в мазках тест-культуры, окрашенных по Граму, наблюдали задержку роста, МБцК (после пересева на агаровую или бульонную среды СБД) через 24 – 72 ч инкубации – гибель тест-микроба.

МПК Субтилбена для S. dublin – 7,8 – 15,6 млн м.к./мл, МБцК – соответственно 15,6; 31,2 млн м.к./мл, что свидетельствует о высокой бактериостатической и бактерицидной активности препарата (рис. 3).

Рис. 3. Антибактериальная активность Субтилбена, млн м.к/мл:

а) минимальная подавляющая концентрация,

б) минимальная бактерицидная концентрация.

Известный препарат бактерин-SL вызывал гибель S. dublin в концентрации 250 млн м.к./мл.

Динамику антагонистической активности Субтилбена изучили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде в отношении односуточной бульонной культуры S. dublin (концентрация – 1 млрд м.к./мл). Оценку бактерицидной активности проводили через 1, 3, 6, 12, 18, 24, 36 и 48 ч.

Установлено (рис. 4), что изменение морфологии S. dublin начинается спустя 6 ч после контакта с препаратом: клетки тест-культуры увеличивались в размере и принимали различную форму. Через 18 ч количество клеток S. dublin начинало уменьшаться, а через 48 ч после контакта с препаратом лизис тест-бактерий заканчивается.

Рис. 4. Динамика лизиса S. dublin после контакта с B. subtilis.

В контрольных пробирках (минеральные и растительное вещества) изменение морфологии тест-культуры не наблюдали, что свидетельствует о связи бактерицидной активности Субтилбена с выделением B. subtilis биологически активных веществ.

Таким образом, Субтилбен обладает высокой антагонистической активностью в отношении музейных штаммов и изолятов S. dublin, которая обусловлена выделением B. subtilis биологически активных веществ.

3.6. Безвредность Субтилбена

Безвредность Субтилбена изучали на белых мышах (массой 18 – 20 г, n=10), кроликах породы шиншилла (массой 2,5 – 2,7 кг, n=5) и новорожденных телятах черно-пестрой породы (массой 31 – 33 кг, n=5), которым препарат в ориентировочно-терапевтической дозе (0,5 г/кг массы тела) вводили с водой перорально в объемах соответственно 0,5; 10 и 30 мл 2 раза в сутки в течение 7 дней.

В опытах на белых мышах (массой 18 – 20 г, n=10) и новорожденных телятах черно-пестрой породы (массой 31 – 33 кг, n=5), из которых по принципу парных аналогов сформировали по 11 групп, изучали острую токсичность Субтилбена.

Белым мышам Субтилбен в виде 10%-ной суспензии на физиологическом растворе вводили однократно перорально в объеме 0,5 мл в дозах 0,25 г/кг массы тела (1-я группа), 0,5 (2-я), 0,75 (3-я), 1,0 (4-я), 1,25 (5-я), 1,5 (6-я), 1,75 (7-я), 2,0 (8-я), 2,25 (9-я), 2,5 г/кг массы тела (10-я); телятам – в объеме 30 мл в тех же дозах. Контрольным животным в соответствующих объемах вводили физиологический раствор.

За лабораторными животными и телятами наблюдали в течение 14 дней, учитывая общее состояние, внешний вид, поведенческие реакции, прием пищи и воды, ритм и частоту сердцебиения, количество дыхательных движений.

Гибели опытных животных не наблюдали, клиническое состояние опытных и контрольных животных не отличалось.

Таким образом, Субтилбен относится к малотоксичным веществам.

В опытах по скармливанию Субтилбена в течение 20 суток трем группам (n=10) белых мышей (массой 18 – 20 г) и трем группам (n=10) кроликов породы шиншилла (массой 2,5 – 2,7 кг) в 2-, 5- и 10-кратной ориентировочно-терапевтической дозе (0,5 г/кг массы тела) изучали хроническую токсичность препарата. Животные контрольных групп Субтилбен не получали. За лабораторными животными наблюдали в течение 30 дней.

Установлено, что длительное введение Субтилбена в дозах 1,0; 2,5 и 5 г/кг массы тела не влияет на поведение, аппетит, прием воды, состояние слизистых оболочек и шерстного покрова опытных и контрольных животных.

Установлено, что применение Субтилбена в дозах 1,0; 2,5 и 5 г/кг массы тела не влияет на динамику массы тела, которую определяли на 5, 10, 15 и 20 сутки, у опытных и контрольных животных (величины статистически не отличались). Применение препарата не вызывало повышения температуры тела и не влияло на характер локомоторной активности, стереотипное поведение и выносливость животных.

Влияние Субтилбена на кожу и слизистые оболочки изучали методом однократной аппликации 10% суспензии Субтилбена на кожу мышей (массой 18 – 20 г, n=6).

Повторное местное раздражающее действие препарата исследовали на белых мышах (самках, массой 18 – 20 г, n=6) и кроликах (самках, массой 2,5 – 2,7 кг, n=6), которым ежедневно на выстриженный участок кожи в межлопаточной области наносили соответственно по 1 и 2 капли Субтилбена в течение 14 и 21 дня соответственно. Животным контрольных групп (n=6) по той же методике наносили подсолнечное масло. Наблюдение за белыми мышами вели в течение 30, кроликами –60 дней.

На кроликах (самках, массой 2,5 – 2,7 кг), которых разделили на две группы (n=6) изучали действие Субтилбена на слизистую оболочку глаза.

Местное раздражающее действие Субтилбена на кожу и слизистые глаз при однократном и повторном введении выражено слабо.

3.7. Профилактическая эффективность Субтилбена

при сальмонеллезе телят

В экспериментальных условиях профилактическая эффективность Субтилбена исследована в сравнении с препаратом-аналогом (биоспорин) на 4 молочно-товарных фермах, стационарно неблагополучных по сальмонеллезу.

Субтилбен телятам выпаивали с молозивом (молоком) в дозах 0,2 (1-я группа, n=25), 0,4 (2-я группа, n=25) и 0,6 г/кг массы тела (3-я группа, n=25) в течение 15 дней 1 раз в сутки; биоспорин (4-я группа, n=25) использовали в соответствии с наставлением по применению препарата.

В течение месяца за животными вели клиническое наблюдение, учитывая общее состояние, заболеваемость и сохранность. Результаты клинических наблюдений свидетельствуют о высокой профилактической эффективности Субтилбена, выразившейся в предотвращении сальмонеллеза (2 и 3-я группы), полной сохранности и хорошем общем состоянии телят, увеличении прироста массы тела.

В опытной группе, телятам которой Субтилбен выпаивали в дозе 0,2 г/кг массы тела в течение 15 дней 1 раз в сутки, заболело 1 (5%) животное; в контрольной группе заболело 2 (10%).

Профилактическая эффективность Субтилбена в экспериментальных условиях составила 96 – 100%, что по сравнению с препаратом-аналогом (биоспорин) на 10% выше (рис. 5). В опытных группах телят среднесуточный прирост живой массы был выше по сравнению с контрольной на 8,0 – 20%.

Рис. 5. Профилактическая эффективность Субтилбена

в экспериментальных условиях в сравнении с биоспорином, %.

При производственном испытании Субтилбена на 520 телятах в 5 хозяйствах районов республиканского подчинения, Согдийской и Хатлонской областей РТ в 2005 – 2010 гг. профилактическая эффективность препарата составила 95,4%. Профилактические мероприятия, проводившиеся по схеме принятой в хозяйствах, предотвращали сальмонеллез телят (190 гол.) на 92,7%.

Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что эффективность новой лекарственной формы Субтилбена при профилактике сальмонеллеза телят достигает 95,4%.

Экономическая эффективность Субтилбена в форме таблеток в расчете на один сомони затрат при профилактике сальмонеллеза телят составила 2,2 сомони, что больше в 1,5 раза чем соответствующий показатель биопрепарата биосиорин. Определение суммарного индекса показало, что при профилактике сальмонеллеза телят Субтилбен эффективнее препарата-аналога.

ВЫВОДЫ

1. Бактериологическими исследованиями установлено, что в возникновении болезней телят на молочно-товарных фермах Республики Таджикистан большую роль играет S. dublin. Из обследованных хозяйств сальмонеллез выделен в 8 (61,5%).

2. Установлено, что сухая биомасса B. subtilis, полученная контактно-сорбционным обезвоживанием может использоваться в качестве основы таблеточной формы препарата.

3. Разработанная технология приготовления таблетированной формы Субтилбена из штаммов B. subtilis позволяет получить пробиотик, соответствующий требованиям фармакопейной статьи 42-3476-98.

4. Новая лекарственная форма пробиотика Субтилбен обладает высокой бактериостатической (7,8 – 15,6 млн м.к./мл) и бактерицидной (15,6 – 31,2 млн м.к./мл) активностью. Антибактериальное действие пробиотика по отношению к S. dublin начинается спустя 6 часов после контакта и заканчивается полным лизисом патогена к 48 часам.

5. Установлена стабильность физико-химических и биологических свойств пробиотика Субтилбен при естественном хранении (30оС) в течение 3 лет.

6. Субтилбен в форме таблеток относится к категории малотоксичных пробиотиков и не оказывает местного раздражающего и аллергенного действий.

7. Показано, что эффективность Субтилбена в форме таблеток при профилактике сальмонеллеза телят достигает 95,4%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Наставление по применению иммунобиотика Субтилбен для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней животных и пчел (утв. ГУВ МСХ РТ 25.11.2004 г.).

2. Рекомендации по применению пробиотиков для профилактики и лечения пневмоэнтеритов телят (утв. ГУВ МСХ РТ 11.09.2012 г.).

Список работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Патент TJ 391. Республика Таджикистан. Лечебно-профилактический препарат Субтилбен / Сатторов И.Т., Джуманкулов Х.Д., Сангинов Б., Султонова М.Х., Каландаров З.С., Саидов Ш.Х. – Бюлл. Тадж НИПЦ, 2004. – №35.

Патент TJ 390. Республика Таджикистан. Способ получения лечебно-профилактического препарата Субтилбен / Сатторов И.Т., Джуманкулов Х.Д., Сангинов Б., Султонова М.Х., Махмудов К.Б., Каландаров З.С., Саидов Ш.Х., Бюлл. Тадж НИПЦ. – 2005. – №38.

Технология изготовления Субтилбена в форме таблеток / Ш.Х. Саидов [и др.] // Кишоварз. – 2012. – №3. – С. 30 – 31.

Саидов Ш. Х. Эффективность микробных препаратов при сальмонеллезе телят / Ш. Х. Саидов, Н.Р. Сатторов, Н.Р. Хасанов // Кишоварз. – 2012. – №3. – С. 31 – 32.

Саттори И. Рациональный способ выращивания B. subtilis на питательной среде / И. Саттори, Ш.Х. Саидов, Н.Р. Хасанов // Инновационные биотехнологии в странах ЕврАзЭС: матер. Междунар. конф. – Санкт-Петербург, 2012. – С. 84.

Сдано в набор __________ г. Подп. к печ. __________ г.

Формат бум. 60×841/16.

Зак. 116. Тираж 100 экз. Объем 11/4 п.л.

Гарнитура Times New Roman.

Типография Таджикского аграрного университета им. Ш. Шотемура.

Душанбе, пр. Рудаки, 146.




© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.