WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

ЛАКАЕВ БАХРОМДЖОН БОБОЖОНОВИЧ

ПРЕПАРАТ БРОМДЕЗИН ДЛЯ ДЕЗИНФЕКЦИИ

ОБЪЕКТОВ ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНОГО НАДЗОРА

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Душанбе 2012

Работа выполнена в лаборатории болезней птиц Института ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук, Национальном центре ветеринарной диагностики Службы государственного ветеринарного надзора Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан.

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук

СалимовТоджиддинМухиддинович

Научный консультант:

доктор химических наук, профессор,

член-корреспондент АН РТ

Куканиев Мухамадшо Ахмадович

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук

МуминовАбдуллоМуминович

кандидат биологических наук

Вискова Татяна Константиновна

Ведущая организация:

Таджикский аграрный университет

им. Ш.Шотемура

Защита диссертации состоится « 27 » апреля 2012 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 050.001.01 при Институте ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук по адресу: 734005, Республика Таджикистан, г. Душанбе, ул. А. Каххорова, 43, ИВ ТАСХН, тел. (992-372) 27-39-95.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института ветеринарии ТАСХН.

Автореферат разослан « 27 » марта 2012 г.

Ученый секретарь        

диссертационного совета,        

кандидат ветеринарных наук                                        З.Д. Ашурова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Обеспечение микробиологической безопасности обусловлено увеличением эпидемической и эпизоотической опасности в результате циркуляции возбудителей антропозоонозных инфекций, которые не только длительно сохраняются в окружающей среды, но при способствующих условиях могут естественным образом нарастать (Ю.Е.Шахотин с соавт., 1996; В.П. Урбан, 1998).Эффективное использование технологий инактивации (современные дезинфекционные мероприятия) позволяет предупредить и устранить микробиологическую опасность, выражающуюся как в наличиии неуправляемых, так и управляемых вакцинами инфекций (Н.Х. Мамаев, 2000; М.Г. Шандала, 2002; В.В. Буянов с соавт., 2003; R.D.Harrisetal., 2001).

У микроорганизмов устойчивость к внешним воздействиям, особенно химическими средствами, неодинакова и существенно различается (А.Г. Батиашвилли, 1997; Н.И. Попов с соавт., 1999; М.И. Леви с соавт., 2001; В.М. Бахир с соавт., 2003).

Резистентность может развиваться в результате изменения проницаемости бактериальных мембран, биохимических адаптационных изменений в клетках, образования некультивированных форм неспорообразующих возбудителей (А.Б. Агафонова, 1997; В.В. Буянов с соавт., 1999; Н.Ф. Соколова, 2002; В.Г. Ощепков с соавт., 2003).

Контаминация объектов ветеринарно-санитарного надзорарезистентными к антисептикам и дезинфектантам микроорганизмами определяет выбор дезинфекционной технологии, адекватной соответствующей ситуации (Е.А. Zottolaetal., 1994; N.G.Khalil, 1997; M.S. Faveroetal. 2000; J. Richards, 2002).

Ликвидация источника инфекции во внешней среде, уничтожение возбудителя достигается дезинфекцией, целью которой является уничтожение только патогенных микроорганизмов, а не всех вообще микробов, населяющих объект, подвергающийся дезинфекции, что отличает ее от стерилизации, при которой вместе с патогенными уничтожаются и другие микроорганизмы (А.А. Поляков, 1986).

Различные источники, пути и факторы передачи обусловливают разнообразие дезинфектологических технологий, основанных на применении как антимикробных (дезинфицирующих или стерилизующих) средств борьбы с возбудителями, так и инсектицидных, акарицидных, родентицидных и репеллентных препаратов и устройств для борьбы с членистоногими и грызунами – переносчиками опасных заболеваний (М.Г. Таршис с соавт., 1997; К.Ш. Досанов, 1999).

Отсутствие современного ассортимента дезинфектантов, непрерывно возрастающие требования к их характеристикам, изменение сырьевых возможностей производства, повышением требований и ограничений экологического характера объясняют непрерывный поиск новых дезинфицирующих средств (А.А. Закомырдин, 2004), что обусловливает актуальность настоящей диссертационной работы.

Целью исследований явилось научно-методическое обоснование комплекса мероприятий по обеспечению эпизоотического благополучия объектов ветеринарно-санитарного надзора, разработка и внедрение в ветеринарную практику нового высокоэффективного дезинфектанта, обладающего бактерицидным действием, и способов его применения на объектах ветеринарно-санитарного надзора.

Для достижения поставленной цели решены следующие задачи:

1. Исследовать эпизоотическую обстановку на продовольственных рынках г. Душанбе и птицефабриках Республики Таджикистан.

2. Обосновать состав и технологию изготовления нового дезинфектанта Бромдезин.

3. Определить бактерицидные свойства Бромдезина и устойчивость-чувствительность к нему выделенных микроорганизмов.

4. Изучить токсичность и опасность этого препарата.

5.Обосновать и разработать оптимальные режимы профилактической и вынужденной дезинфекции Бромдезином.

6.Провести производственные испытания его эффективности.

Научная новизна. Впервые осуществлен микробиологический мониторинг продовольственных рынков г. Душанбе и птицефабрик Республики Таджикистан по проблеме ветеринарно-санитарного надзора на этих объектах и установлена значимость этого вопроса для ветеринарной медицины. Для производства нового дезинфектанта Бромдезин в качестве действующего вещества использовали 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тииадиазоло[3,2-а]пиримидин, проявляющий высокую антибактериальную активность, которая сохраняется и в новом препарате.

Разработан состав Бромдезина, изучен его ингибирующий эффект, который проявляется в отношении паспортизированных штаммов E. coli и St. aureus в концентрации 0,039%, а полевых вирулентных штаммов этих культур – 0,019% основного раствора. Изучены токсичность и опасность Бромдезина, который по ГОСТу 12.1.007-76 относится к третьему классу опасности (умеренно токсическое вещество).

Определена эффективность препарата при профилактической и вынужденной дезинфекции, отработан рациональный способ его применения. Производственные испытаниявыявили 100%-ную эффективность Бромдезинав отношении микроорганизмов 1- и 2-ой групп устойчивости.

Практическая ценность. На основании полученных результатов Бромдезин предложен в качестве дезинфицирующего средства при профилактической и вынужденной дезинфекции объектов ветеринарно-санитарного надзора.

Материалы диссертации вошли в нормативную документацию, утвержденную Службой государственного ветеринарного надзора Министерства сельского хозяйства (МСХ) Республики Таджикистан (РТ):

1. Инструкция о мероприятиях по борьбе с сальмонеллезом птиц (утв. СГВН МСХ РТ 11.04.2008 г.).

2. Инструкция о мероприятиях по борьбе с колибактериозом птиц (утв. СГВН МСХ РТ 11.04.2008 г.).

3. Инструкция о мероприятиях по борьбе с пастереллезом птиц (утв. СГВНМСХРТ 11.04.2008 г.).

4. Временное наставление по применению дезинфицирующего средства Бромдезин для дезинфекции объектов ветнадзора (утв. СГВН МСХ РТ 17.09.2011 г.).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Результаты микробиологического мониторинга на продовольственных рынках г. Душанбе и птицефабриках Республики Таджикистан.

2. Состав и технология изготовления нового дезинфектанта Бромдезин.

3. Результаты определения бактерицидных свойств Бромдезина и устойчивости-чувствительности к нему выделенных микроорганизмов.

4. Результаты изучения токсичности и опасности Бромдезина.

5. Схема профилактической и вынужденной дезинфекции Бромдезином.

6. Результаты производственных испытаний его эффективности.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на заседаниях ученого совета Института ветеринарии ТАСХН (2007 – 2011 гг.); республиканских и областных семинарах-совещаниях ветеринарных работников РТ (2007 – 2011 гг.); Международной научной конференции «Ветеринарные проблемы Центральной Азии – продовольственная безопасность: использование современных методов диагностики и профилактики инфекционных болезней животных» (2011 г.).

Публикации.По результатам исследований опубликованы в печати 6 научных работ.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

Диссертация изложена на 125 страницах, иллюстрирована 12 таблицами и 14 рисунками. Список литературы содержит 220 источников. В приложение включены материалы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась с 2006 по 2011 гг. в условиях лаборатории болезней птиц Института ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук, Национальном центре ветеринарной диагностики Службы государственного ветеринарного надзора Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан, в Государственных унитарных предприятиях «Саховат» и «Шохмансур», ООО «Тарз» (район Вахдат), ООО «Фаришта» (район Вахдат), ООО «Дипломат» (район Рудаки), ООО «Паррандапарварии Худжанд» и ЧП «Орипов» (Согдийская область).

В исследованиях использовались паспортизированные тест-культуры, перечень которых изложен в соответствующих разделах диссертации.

Вид возбудителя, питательные среды и методы культивирования выбирали с учетом конкретных задач и условий работы.

Изучение чувствительности выделенных микроорганизмов (из объектов ветеринарно-санитарного надзора) к различным антимикробным средствам и дезинфектантам, проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по ускоренному определению устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам» (10.01.2000 г.)

Определение бактерицидной активности испытуемого препарата проводили впробирочных опытах по методу серийных разведений согласно «Методическим рекомендациям по дезинфекции при туберкулезе животных» Ю.Я. Кассич (1987), а также на тканевых тест-носителях бактериальной взвеси в соответствии с «Методическими указаниями о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики».

Токсикологическую оценку препарата проводили согласно методическим указаниям МУ 1.2.1105-02.Оценка токсичности и опасности дезинфицирующих средств.

В качестве лабораторных животных при постановке биопробы для определения ЛД50; ЛД100; кожно-резорбтивного и местно-раздражающего действия использовали 252 белых мыши, 108 крыс, 72 кролика.

Суммарную площадь помещений, подлежащих дезинфекции, рассчитывали из данных длинны, ширины, высоты с добавлением 30% площади двух боковых стен согласно методике предложенной И.А. Дудницким с соавт. (1989).

Оценку качества дезинфекции помещений проводили согласно методике, изложенной в «Правилах проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» от 15.07.02 г.

Отдельные методические приемы представлены по ходу изложения материала диссертации.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Микробиологический монитринг

3.1.1. Анализ циркуляции условно-патогенной микрофлоры

на продовольственных рынках

Для изучения видового состава условно-патогенной микрофлоры, циркулирующей на продовольственных рынках г.Душанбе (Государственное унитарное предприятие «Саховат», Государственное унитарное предприятие «Шохмансур»), провели сравнительный анализ результатов лабораторных исследований смывов с пола, стен, оборудования и прилавков.

Установлено, что объекты ветеринарно-санитарного надзора обсеменены бактериями родов Staphilococcus, Streptococcus, Escherichia,Proteus, Pseudomonas, Klebsiella, Salmonella, Bacillus. Из 956 смывов, сделанных в Государственном унитарном предприятии «Саховат», в 115 выделена условно-патогенная микрофлора: Staphilococcus – 28, Escherichia – 28, Proteus – 16, Bacillus – 16, Pseudomonas – 12, Salmonella – 8,Streptococcus – 4,Klebsiella – 3. На Государственном унитарном предприятии «Шохмансур» сделано 967 смывов, в которых выделили 147изолятов: Escherichia – 39, Proteus – 26, Bacillus – 23, Pseudomonas – 21, Staphilococcus – 18,Salmonella – 12, Klebsiella – 6, Streptococcus – 2.

Полы и стены продовольственных рынков наиболее контаминированы Escherichia: ГУП «Саховат» – соответственно 4,7%, 2,8%, ГУП «Шохмансур» – 4,9%, 5,1%. Наибольшее количество изолятов, выделенных с оборудования, были представлены Staphilococcus – 4,6% (ГУП «Саховат») и Salmonella– 5,1% (ГУП «Шохмансур»). Прилавки были больше обсеменены Bacillus – 2,6% (ГУП «Саховат») и Pseudomonas – 3,1% (ГУП «Шохмансур»).

Кроме того, на ГУП «Саховат» идентифицированы бактерии родов Staphilococcus (полы – 4,3%, стены – 1,6%, прилавки – 2%), Streptococcus (стены – 1,6%),Escherichia (оборудование и прилавки – по 2%), Proteus (полы – 2%, стены – 1,2%, оборудование – 3,3%, прилавки – 1%), Pseudomonas (полы 2,7%, прилавки – 1,7%), Klebsiella (стены – 0,8%, прилавки – 0,3%), Salmonella (стены – 1,2%, оборудование – 3,3%),Bacillus (полы – 1,2%, стены – 0,4%, оборудование – 2,6%), на ГУП «Шохмансур» – Staphilococcus (полы – 1,1%, стены и оборудование – по 2,8%, прилавки – 1,4%), Streptococcus (стены – 0,9%), Escherichia (оборудование – 4%, прилавки – 2,4%), Proteus (полы – 3,5%, стены – 3,7%, оборудование – 1,1%, прилавки – 2%), Pseudomonas (полы – 4,2%), Klebsiella (стены – 1,9%, прилавки – 0,7%), Salmonella (стены – 1,4%), Bacillus (полы – 1,4%, стены – 4,7%, оборудование – 2,8%, прилавки 1,4%).

Таким образом, установлено, что объекты ветеринарно-санитарного надзора обсеменены условно-патогенной микрофлорой и существует потенциальная опасность заражения человека.

3.1.2. Ветеринарно-санитарная оценка циркуляции

условно-патогенной микрофлоры на птицефабриках

Бактериологические исследования, проведенные в ООО «Тарз» (район Вахдат), ООО «Фаришта» (район Вахдат), ООО «Дипломат» (район Рудаки), ООО «Паррандапарварии Худжанд» и ЧП «Орипов» (Согдийская область), выявили, что на птицефабриках циркулирует условно-патогенная микрофлора родов Staphilococcus, Streptococcus, Escherichia, Proteus, Pseudomonas, Klebsiella, Salmonella, Bacillus.

В ООО «Тарз» были сделаны смывы (по 100) со стен, полов, клеток, кормушек, поилок в птичнике, а также в производственных помещениях и автофургонах, где были выделены изоляты: Staphilococcus – 15, Escherichia – 11, Streptococcus – 7, Klebsiella – 7, Proteus– 6, Pseudomonas – 5, Bacillus – 5, Salmonella – 3.

Результаты микробиологического мониторинга в ООО «Фаришта» свидетельствуют о циркуляции на фабрике условно-патогенной микрофлоры, представленной родами Staphilococcus, Streptococcus, Escherichia, Proteus, Pseudomonas, Klebsiella, Salmonella, Bacillus, изоляты которых были выделены из смывов (по 100) со стен (Staphilococcus, Streptococcus, Escherichia, Proteus, Klebsiella, Salmonella, Bacillus – по 1, Pseudomonas – 2), полов (Staphilococcus, Escherichia, Proteus, Pseudomonas, Klebsiella, Bacillus – по 1, Streptococcus – 2), поилок (Staphilococcus, Streptococcus, Escherichia , Proteus, Pseudomonas, Salmonella, Bacillus – по 1, Klebsiella – 2) и кормушек (Staphilococcus, Streptococcus, Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, Salmonella, Bacillus – по 1).

Аналогичную картину наблюдали в ООО «Дипломат», где на тех же объектах ветеринарно-санитарного надзора выделили 30 изолятов, в том числе по 4 Staphilococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Salmonella, Proteus, 5 Escherichia, 3 Klebsiella, 2 Bacillus.

В ООО «Паррандапарварии Худжанд» и ЧП «Орипов» смывы (по 100) были взяты со стен, пола, оборудования убойного цеха и в инкубатории (инкубационный и выводной шкафы, пол, стены), где также выделены изоляты условно-патогенной микрофлоры (соответственно 62 и 54), представленной родами Staphilococcus, Streptococcus, Escherichia, Proteus, Pseudomonas, Klebsiella, Salmonella, Bacillus.

Следовательно, для птицеводческих предприятий яичного направления, применяющих как клеточное, так и напольное содержание, расположенных в различных регионах Республики Таджикистан, важной является проблема распространения условно-патогенной микрофлоры.

Результаты микробиологического мониторинга, осуществленного на 2 продовольственных рынках города Душанбе (Государственное унитарное предприятие «Саховат», Государственное унитарное предприятие «Шохмансур») и 5 птицефабриках Республики Таджикистан (ООО «Тарз» – район Вахдат, ООО «Фаришта» – район Вахдат, ООО «Дипломат» – район Рудаки, ООО «Паррандапарварии Худжанд» и ЧП «Орипов» – Согдийская область) выявили актуальность проблемы ветеринарно-санитарного надзора для этих предприятий, решение которой имеет значение не только для ветеринарной медицины, но и для здравоохранения.

Микробиологический спектр условно-патогенной микрофлоры определил выбор действующего вещества (2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тииадиазоло[3,2-а]пиримидина, проявляющего высокую противобактериальную активность (Т.М. Салимов с соавт., 2002; М.А. Куканиев с соавт., 2004) для изготовления дезинфицирующего средства Бромдезин.

3.2. Физико-химические свойства Бромдезина

Из изготовленной (19.01.2007 г.) в Институте ветеринарии ТАСХН серии (01) дезинфицирующего средства Бромдезин для проверки его качества сделали выборку (ГФ XI, вып. 2, с. 15 – 17), часть которой для определения стабильности оставили на хранение в складском помещении производственного отдела Института ветеринарии ТАСХН.

Физико-химические свойства дезинфектанта Бромдезин определяли в лаборатории гетероциклических соединений Института химии им. В.И. Никитина АН РТ.

Химический состав Бромдезина определяли согласно действующим методикам. Препарат представляет собой сбалансированную смесь2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тииадиазоло[3,2-а]пиримидина (5%), твина-80 (0,5%), нитрита натрия (0,5%), красителя Е 142 (0,002%) и воды (до 100%).

Органолептические свойства.Бромдезин – прозрачная жидкость зеленого цвета, пенящаяся при взбалтывании. Препарат относится к не воспламеняющимся жидкостям, не взрывоопасен.

Плотность Бромдезина, которую определяли при 20оС с помощью ареометра (ГФ XI, вып. 1, с. 24), составляет 1,014.

рН Бромдезина, определенная потенциометрическим методом (ГФ XI, вып. 1, с. 113), находилась в пределах 6,5 – 7,0.

Подлинность 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина устанавливали методом тонкослойной хроматографии на пластинах с силикагелем (ГФ XI, вып. 1, с. 102 – 105).В качестве растворителя использовали диметилсульфоксид (ДМСО).Стеклянную хроматографическую камеру заполняли на высоту 5 – 8 мм растворителем, герметично закрывали и выдерживали не менее 30 мин для насыщения парами растворителя.

Для приготовления стандартного раствора 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина брали точную навеску 0,0500 г его образца, взвешивали с погрешностью не более 0,0002 г, помещали в мерную колбу объемом 100 мл и растворяли в 50 мл ДМСО. Затем объем содержимого колбы доводили до метки диметилсульфоксидом и тщательно перемешивали. Получали стандартный раствор 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина.

По 10 мкл растворов стандартного образца 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина и исследуемого препарата наносили на линию старта хроматографической пластинки в точки, отстоящие одна от другой на 2 см.Пластину с нанесенными пробами высушивали при 100оС в течение 5 мин, а затем помещали в камеру для хроматографирования. Когда фронт растворителя поднимался на 10 – 12 см, пластинку вынимали из камеры и сушили при 100оС до проявления пятен. Пластинку просматривали в УФ-свете.

Пятна, полученные при хроматографировании растворов стандартного и исследуемого образца, были сходными и совпадали по показателю Rf (овальное пятно с RF около 0,5). В испытуемом образце допускается примесь на старте, других пятен быть не должно.

Массовую долю 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина в Бромдезине определяли микробиологическим методом диффузии в агар с использованием тест-культуры Escherichiacoli АТСС 26, которую выращивали при 37оС в течение 24 ч в пробирках со скошенным мясопептонным агаром (рН 7,0 – 7,2).Затем ее смывали с питательной среды стерильным физиологическим раствором. Полученную взвесь хранили в запаянных ампулах при температуре 4 – 10оС и использовали до тех пор, пока культура давала четкие, резко очерченные зоны задержки роста.Для контроля активности 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина применяли 1-миллиардную взвесь суточной культуры.

Для приготовления основного раствора стандартного образца 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина навеску стандартного его образца (2,0 – 2,5 г), взвешенную с погрешностью не более 0,0002 г, растворяли в 2 мл ДМСО. Полученную смесь растворяли в фосфатном буфере №4 (ГФ XI, вып. 2, с. 223; рН 7,8 – 8,0) до концентрации 1000 мкг в 1 мл. Этот раствор хранили в стеклянной посуде с притертой пробкой при температуре 4 – 6оС не более двух недель.

В день проведения испытания из основного раствора стандарта 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина на фосфатном буфере №4 последовательными разведениями готовили пять растворов с концентрациями 0,078; 0,155; 0,31; 0,62 и 1,24 мкг/мл, которые использовали для построения стандартной кривой. Раствор, содержащий 0,31 мкг/мл 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина, являлся контрольным.

Для приготовления питательной агаровой среды в 1000 мл дистиллированной воды вносили последовательно следующие компоненты: 6,0 г пептона; 4,0 г панкреатического гидролизата казеина, сухого; 3,0 г дрожжевого экстракта, сухого; 1,5 г мясного экстракта, сухого; 10,0 г агар-агара. Агар-агар предварительно замачивали в небольшом количестве из общего объема дистиллированной воды. Среду варили при температуре не выше 100оС, не допуская сильного кипения, до полного расплавления агара. Затем среду фильтровали через ватно-марлевый фильтр, устанавливали рН среды 10% раствором гидроокиси натрия до значения 7,4 – 7,6 разливали в колбы и стерилизовалиавтоклавированием при 0,5 кгс/см3 в течение 30 мин. Значение рН среды после стерилизации было 7,5.

Среду расплавляли на водяной бане, охлаждали до 48 – 50оС, после чего добавляли суспензию суточной культуры E. coli АТСС 26 из расчета 20 – 40 млн микробных тел на 1 мл среды, перемешивали и разливали по 15 мл в каждую чашку Петри. После застывания среды в каждой чашке бором делали по 6 лунок.

Из раствора Бромдезина, содержащего 1,24 мкг 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина в 1 мл путем последовательных разведений на фосфатном буфере №4 готовили рабочие растворы, которые в качестве исследуемых закапывали в чашки.

Для определения 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина концентрация исследуемого раствора соответствует 0,31 мкг/мл.

Дальнейшее получение и обработку результатов проводили по общепринятой методике (ГФ XI, вып. 2, с. 210 – 217).

3.3. Бактерицидные свойства Бромдезина

3.3.1. Определение методом серийных разведений

Общепринятым методом серийных разведений определили минимальные бактерицидные ингибирующие концентрации Бромдезина.При контроле на бактерицидность использовали музейные штаммы E. coli (штамм АТСС-25922), St. aureus (штамм 6538р), Bac. subtilis 6633 и полевые вирулентные штаммы E. coli и St. aureus.

Установлено, что ингибирующий эффект Бромдезина проявляется в очень низких концентрациях: для E. coli (штамм АТСС-25922) и St. aureus (штамм 6538р) она составила 0,039%, а для полевых вирулентных штаммов этих культур соответствующая концентрация была еще меньше – 0,019% основного раствора.

3.3.2. Испытание на тканевых тест-объектах

В лабораторных условиях в соответствии с «Методическими указаниями о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики» (07.01.1987 г.) изучили дезинфицирующую активность Бромдезина, используя в качестве тест-микроорганизмов музейные штаммы E. coli (штамм АТСС-25922), St. aureus (штамм 6538р), Bac. subtilis 6633.

Обсемененные культурой испытуемых микроорганизмов батистовые тест-объекты погружали в рабочие растворы (0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0%) Бромдезина, в течение первых 30 минут каждые 5 мин, затем каждые 10 мин до 60 мин стерильной петлей вынимали из раствора по 2 тест-объекта,дваждыпромывали в стерильной воде и делали посев на среды в зависимости от вида микроорганизма.Исследование проводили в трех повторностях.

Результы проведенных исследований свидетельствуют, что с увеличением времени экспозиции надежный стерилизующий эффект можно достигнуть меньшими концентрациями Бромдезина, бактерицидные свойства 0,5%-ная концентрация рабочего раствора которого проявляла в отношении E. coli (шт. АТСС-25922) и St. aureus (шт. 6538р) соответственно через 50 и 60 мин, 1,0%-ная – через 30 и 50, 2%-ная – через 25 и 30, 3%-ная – через 10 и 15, а 4%-ная – через 5 и 10 мин. Кроме того, 2%-ная концентрации рабочего раствора Бромдезина оказалась бактерицидной для Bac. subtilis 6633 через 60 мин, а 3 и 4%-ные – через 50 мин.

3.4. Токсичность и опасность Бромдезина

3.4.1. Острая токсичность при введении в желудок

Белым мышам и крысам растворы Бромдезина вводили в желудок с помощью металлического зонда и микрошприцав объемах соответстенно1 и 5 мл в дозах 300 мг/кг массы тела (1-я группа), 600 (2-я), 900 (3-я), 1200 (4-я), 1500 мг/кг массы тела (5-я группа). Контрольным животным в соответствующих объемах и дозах вводили дистиллированную воду.

Летальный исход и характер клинической картины служили критериями оценки острой токсичности Бромдезина.

Бромдезин в дозе 300 мг/кг массы тела как у белых мышей, так и у крыс не вызывал каких-либо клинических изменений, при введении больших доз (600, 900, 1200 и 1500 мг/кг массы тела) наблюдали токсикоз.

При изучении острой токсичности Бромдезина на белых мышах и крысах определены параметры острой токсичности: МПД –300 мг/кг, ЛД100 – 1500, ЛД50 – соответственно 840 и 900 мг/кг массы тела.

3.4.2. Острая токсичность при нанесении на кожу

Способность 4 – 6%-ных растворов Бромдезина проникать через неповрежденную кожу и вызывать токсический эффект оценивали на белых мышах и кроликах, которым делали однократные и многократные (12) аппликации.

При однократной аппликации на кожу в соответствии с классификацией опасности по выраженности местно-раздражающих свойств дезинфицирующих средств на коже (1 класс (более 6 баллов) – резко выраженное, 2 (4,1 – 6,0 баллов) – выраженное, 3 (2,1 – 4,0 балла) – умеренное, 4 класс (0 – 2,0 балла) – слабое или отсутствие) оценивали действие Бромдезина.

Максимальную концентрацию Бромдезина, вызывающую минимальный эффект у животных, принимали за порог раздражающего действия. Регистрировали также минимальную концентрацию препарата, не вызывающую раздражение кожи.

При однократных и многократных хвостовых пробах на белых мышах и аппликациях на кроликах функционально-морфологических нарушений кожи, отказа от корма и гибели животных не отмечено.

3.4.3. Местно-раздражающее действие на слизистые оболочки глаз

Местно-раздражающее действие на слизистую глаз оценивали на кроликах (n=3), которым 4 – 6%-ные растворы Бромдезина при помощи пипетки в конъюнктивальный мешок однократно наносили по две капли. Реакцию слизистой глаза учитывали сразу после воздействия препарата, через 1 час, далее ежедневно в течение 10 дней.

В соответствии с классификацией по выраженности раздражающих свойств испытуемого средства на глаз (1 класс (более 11 баллов) – резко выраженное, 2 (7 – 10 баллов) – выраженное, 3 (4 – 6 баллов) – умеренное, 4 (1 – 3 балла) – слабое, 5 класс (0 баллов) – отсутствие) оценивали действие Бромдезина.

Негативным считали действие препарата, выражавшееся гиперемией и отеком конъюнктивы, инъекцией сосудов склеры, учитывали состояние роговицы и радужной оболочки, количество и качество выделений из глаза.

В течение 3 – 4 дней с момента нанесения 6%-ного раствора Бромдезина у кроликов наблюдали отек век, выделения с увлажнением век и шерсти, прилегающей к векам. Помутнения роговицы не отмечено. Других изменений у кроликов в течение срока наблюдения (10 дней) не выявлено.3 – 4%-ные растворы препарата не вызывали видимых изменений слизистых глаза.

3.4.4. Ингаляционная опасность

В герметических емкостях (эксикатор), в котором создавались условия свободного испарения (при комнатной температуре в течение суток), в насыщающих концентрациях оценили ингаляционную опасность Бромдезина. Исследования провели на белых мышах статистическим методом из расчета объема воздуха на одно животное в час (для мышей – 2 л) с экспозицией 3 ч. В соответствии с классификацией химических веществ по степени летучести (t = +20°С) (насыщающая концентрация: а) вызывает гибель – 1 класс опасности – чрезвычайно опасное вещество; б) вызывает отчетливые проявления интоксикации, гибель отсутствует – 2 – высоко опасное;в) вызывает минимальные изменения интегральных показателей при обследовании животных – 3 – умеренно опасное; г) не оказывает токсического действия – 4 класс опасности – малоопасное) по степени проявления интоксикации установили опасность ингаляционного отравления.

Видимых токсических проявлений у белых мышей при проведении опыта не наблюдали.

По классификации степени опасности химических веществ (ГОСТ 12.1.007-76) препарат Бромдезин относится к третьему классу опасности (умеренно токсическое вещество).

3.5. Определение дозировки

и схемы применения препарата Бромдезин

Для экспериментального определения эффективности Бромдезина и разработки схемы применения препарата в зависимости от устойчивости микроорганизмов (1, 2группы), цели дезинфекции (профилактическая / вынужденная: текущая или заключительная), способа обработки (влажный: орошение, погружение или протирание), нормы расхода (0,4; 0,5; 0,6 л/м2) и концентрации (0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0%) рабочего раствора, экспозиции (пробы на наличие микрофлоры отбирали через 30, 60, 120, 180 мин) и объекта дезинфекции (цемент (бетон), стекло, железо, дерево (масляная краска) в 2009 г. на объектах ветеринарно-санитарного надзора провели ограниченные производственные испытания.

В соответствии с «Правилами проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» (15.07.02 г.) перед нанесением рабочих растворов дезинфектанта поверхности помещений были очищены.

Отбор проб-смывов для определения микробной обсемененности объектов ветеринарного надзора производили перед обработкой и после нее.

Установлено, что для микроорганизмов 1-ой группы устойчивости при дезинфекции цемента наиболее эффективна 2% концентрация Бромдезина в количестве 0,6 л/м2 при экспозиции 180 мин (эффективность – 100%), стекла железа и дерева (масляная краска) – та же концентрация в количестве 0,5 л/м2 при экспозиции 120 мин (эффективность – 100%). Эффективная обработка (100%) цемента при контаминации микроорганизмами 2-ой группы устойчивости достигается применением 3% концентрации Бромдезина в количестве 0,6 л/м2 при экспозиции 180 мин, а при дезинфекции стекла, железа и дерева (масляная краска)Бромдезин необходимо использовать в той же концентрации и при той же экспозиции, расходуя 0,5 л/м2.

В резултате проведенных исследований разработана схема применения дезинфицирующего средства Бромдезин:

Профилактическая дезинфекция

- влажный способ (орошение, погружение или протирание)

1%, 0,5 л/м2, 120 мин

неокрашенное дерево, цемент, резина – 0,6 л/м2, 2 раза с интервалом 180 мин

Вынужденная дезинфекция

а) текущая

- влажный способ (орошение, погружение или протирание)

1 группа – 2%, 0,5 л/м2, 120 мин

2 группа – 3%, 0,5 л/м2, 180 мин

неокрашенное дерево, цемент, резина – 0,6 л/м2, 2 раза с интервалом 180 мин

б) заключительная

- влажный способ (орошение, погружение или протирание)

1 группа – 2%, 0,5 л/м2, 120 мин

2 группа – 3%, 0,5 л/м2, 180 мин

неокрашенное дерево, цемент, резина – 0,6 л/м2, 2 раза с интервалом 180 мин.

3.6. Результаты производственных испытаний

дезинфицирующего средства Бромдезин

На предмет оценки специфической дезинфицирующей, бактерицидной активности препарата Бромдезин проведены производственные испытания (2010 г.) в ООО «Тарз» (район Вахдат)и на продовольственном рынке г. Душанбе Государственное унитарное предприятие «Саховат».

Препарат применяли согласно наставлению.

Перед нанесением рабочих растворов Бромдезина поверхности были очищены, а отбор проб-смывов для определения микробной обсемененности объектов ветеринарного надзора производили перед обработкой и после нее.

Вынужденная дезинфекция.Учет специфической активности препарата «Бромдезин» проводили в ООО «Тарз» (район Вахдат) после заключительной обработки препаратом(вынужденная дезинфекция) птичника (стен, полов, клеток, поилок и кормушек), а также производственных помещений и автофургонов.

После обработки формальдегидом и едким натрием в смывах сполов и стен на уровне 1,5 м отмечена низкая, клеток, поилок и кормушек – средняя степень роста бактерий.

После заключительной дезинфекции 3% раствором Бромдезина вколичестве 0,5 л/м2 при экспозиции 180 мин влажным способом в смывах с тех же объектов роста бактерий не выявлено.

В производственных помещениях и для дезинфекции автофургонов Бромдезин применяли в 3% концентрации в количестве 0,6 л/м2 2 раза с интервалом 180 мин.

Посев смывов с указанных объектов на твердые питательные среды показал высокий рост бактерий (из 50 смывов – 50 положительных). Двукратная обработка 3% раствором Бромдезина производственных помещений и автофургонов обеспечила полное уничтожение микрофлоры. Рост на питательных средах при посеве смывов (50 шт.) в этом случае отсутствовал.

Профилактическая дезинфекция.Для обработки полов, стен, оборудования и прилавков в Государственном унитарном предприятии «Саховат» влажным способом применяли 1% раствор Бромдезина в количестве 0,5 л/м2 при экспозиции 120 мин.

Перед применением препарата с объектов ветеринарно-санитарного надзора были сделаны смывы и выявлена условно-патогенная микрофлора в 20% проб, которая была представлена бактериями родов Staphilococcus, Streptococcus, Escherichia, Proteus, Pseudomonas, Salmonella.

Критерием обеззараживания считали отсутствие роста санитарно-показательной микрофлоры из смывов с поверхностей, орошенных растворами испытуемого препарата, при наличии роста микрофлоры из смывов с контрольных (орошение водой) поверхностей.

После дезинфекции Бромдезином ни в одном смыве из 105 роста бактерий не наблюдали, что свидетельствует о 100%-ной эффективности препарата при профилактической обработке объектов ветеринарно-санитарного надзора.

Таким образом, производственные испытания дезинфицирующего средства Бромдезин подтвердили результаты ограниченных производственных испытаний (разработана схема применения препарата при различных видах дезинфекции) и 100%-ную эффективность препарата при профилактической и вынужденной дезинфекции объектов ветеринарно-санитарного надзора.

4. ВЫВОДЫ

1. Результаты микробиологического мониторинга, осуществленного на 2 продовольственных рынках города Душанбе (Государственное унитарное предприятие «Саховат», Государственное унитарное предприятие «Шохмансур») и 5 птицефабриках Республики Таджикистан (ООО «Тарз» – район Вахдат, ООО «Фаришта» – район Вахдат, ООО «Дипломат» – район Рудаки, ООО «Паррандапарварии Худжанд» и ЧП «Орипов» – Согдийская область) выявили актуальность проблемы ветеринарно-санитарного надзора для этих предприятий, решение которой имеет значение не только для ветеринарной медицины, но и для здравоохранения.

2. Для производства дезинфицирующего средства Бромдезин в качестве действующего вещества применили 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тииадиазоло[3,2-а]пиримидин, проявляющий высокую противобактериальную активность, подтвержденную результатами изучения ингибирующего действия Бромдезина.

3. Ингибирующий эффект Бромдезина проявляется в очень низких концентрациях: для E. coli (штамм АТСС-25922) и St. aureus (штамм 6538р) – 0,039%, а для полевых вирулентных штаммов этих культур соответствующая концентрация составила 0,019% основного раствора.

4. С увеличением времени экспозиции надежный стерилизующий эффект можно достигнуть меньшими концентрациями Бромдезина: 0,5%-ная концентрация рабочего раствора проявляла активность в отношении E. coli (шт. АТСС-25922) и St. aureus (шт. 6538р) соответственно через 50 и 60 мин, 1,0%-ная – через 30 и 50, 2%-ная – через 25 и 30, 3%-ная – через 10 и 15, а 4%-ная – через 5 и 10 мин. Кроме того, 2%-ная концентрации рабочего раствора Бромдезина оказалась бактерицидной для Bac. subtilis 6633 через 60 мин, а 3 и 4%-ные – через 50 мин.

5. При изучении острой токсичности Бромдезина на белых мышах и крысах определены параметры острой токсичности: МПД – 300 мг/кг, ЛД100 – 1500, ЛД50 – соответственно 840 и 900 мг/кг массы тела.

6. При однократных и многократных хвостовых пробах на белых мышах и аппликациях на кроликах функционально-морфологических нарушений кожи, отказа от корма и гибели животных не отмечено.3 – 4%-ные растворы препарата не вызывали видимых изменений слизистых глаза. При определении ингаляционной опасности видимых токсических проявлений у белых мышей не наблюдали.По классификации степени опасности химических веществ (ГОСТ 12.1.007-76) препарат Бромдезин относится к третьему классу опасности (умеренно токсическое вещество).

7. Дезинфицирующее средство Бромдезин стабильно в течение 2 лет хранения в интервале температур +10 – +25оС.

8. Для микроорганизмов 1-ой группы устойчивости при дезинфекции цемента наиболее эффективна 2% концентрация Бромдезина в количестве 0,6 л/м2 при экспозиции 180 мин (эффективность – 100%), стекла железа и дерева (масляная краска) – та же концентрация в количестве 0,5 л/м2 при экспозиции 120 мин (эффективность – 100%). Эффективная обработка (100%) цемента при контаминации микроорганизмами 2-ой группы устойчивости достигается применением 3% концентрации Бромдезина в количестве 0,6 л/м2 при экспозиции 180 мин, а при дезинфекции стекла, железа и дерева (масляная краска) Бромдезин необходимо использовать в той же концентрации и при той же экспозиции, расходуя 0,5 л/м2.

9. Производственные испытания дезинфицирующего средства Бромдезин подтвердили его 100%-ную эффективность при профилактической и вынужденной дезинфекции объектов ветеринарно-санитарного надзора.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.Инструкция о мероприятиях по борьбе с сальмонеллезом птиц (утв. СГВН МСХ РТ 11.04.2008 г.).

2.Инструкция о мероприятиях по борьбе с колибактериозом птиц (утв. СГВН МСХ РТ 11.04.2008 г.).

3. Инструкция о мероприятиях по борьбе с пастереллезом птиц (утв. СГВНМСХРТ 11.04.2008 г.).

4.Временное наставление по применениюдезинфицирующего средстваБромдезин для дезинфекции объектов ветнадзора(утв. СГВН МСХ РТ 17.09.2011 г.).

Списокработ, опубликованныхпотемедиссертации

1. Салимов Т.М. Сроки выведения остаточных количеств препаратов 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-a] пиримидина и 7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-a]пиримидин-2-ил-имидотио-карбамат гидробромида из организма птицы / Т.М. Салимов, Б.Б. Лакаев // Веткорм. – М., 2009. – №6. – С. 79.

2. Сангов З.Г. Фармакокинетика соединений 1,3,4-тиадиазоло[3,2-a]пиримидина / З.Д. Ашурова, Т.М. Салимов, Дж.Н. Джамшедов, Б. Лакаев, М.А. Куканиев, С.С. Сатторов, К.Х. Хайдаров // ЗдравоохранениеТаджикистана. – 2009. – №3. – С. 39 – 41.

3. Салимов Т.М. Эпизоотология пастереллеза птиц в Таджикистане / Т.М. Салимов, С.Д. Набиева, Ш.Х. Назаров, Б.Б. Лакаев, С. Мирзоев // Ветеринария. – Душанбе, 2009. – №4. – С. 27– 29.

4. Салимов Т.М. Среднесмертельная доза бромдезина / Т.М. Салимов, Б.Б. Лакаев, М.А. Куканиев, З.Г. Сангов // Ветеринария. – Душанбе, 2011. – №10 – 12 (33). – С. 27– 29.

5. Лакаев Б.Б. Антимикробная активность бромметрина / Х.А. Юсупов, Т.М. Салимов, Д.М. Мирзоев, М.А. Куканиев, З.Г. Сангов // Изв. АНРТ. – 2011. – №3 (144). – С. 83 – 86.

6. Food salmonellas and their pharmacological therapy / T.M Salimov, M.A. Kukaniev, A.N. Mahmadshoev, S. Mirzoev, B. Lacaev // Veterinary Problems of Central Asia – Food Security: The Use of Modern Ways of Diagnostics and Prophylaxis of Infectious Diseases of Animals. – Dushanbe, 2011. – Р. 78 – 79.




© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.