WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

АРХИПЕНКО Надежда Владимировна

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОРГАНИЗМА

БЕРЕМЕННЫХ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ

ВОЗДЕЙСТВИИ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ШТАММА

BACILLUS SUBTILIS 3

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саранск -2012

Работа выполнена на кафедре анатомии и гистологии в ФБГОУ ВПО «Уральская государственная сельскохозяйственная академия»

Научный руководитель:  заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор

Дроздова Людмила Ивановна

Официальные  оппоненты:  доктор биологических наук, профессор

Пронин Валерий Васильевич

(заведующий кафедрой нормальной, патологической анатомии и ВСЭ ФГБОУ ВПО Ивановской ГСХА имени академика Д.К. Беляева)

доктор биологических наук, профессор

Соловьева Любовь Павловна

(заведующая кафедрой анатомии и физиологии животных ФГБОУ ВПО Костромской государственной сельскохозяйственной академии)

Ведущая организация: ФГБУО ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится 15 декабря 2012 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.117.15 при ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

С   диссертацией   можно   ознакомиться   в  Научной  библиотеке имени

М.М. Бахтина Мордовского государственного университета им.  Н.П. Огарева.

Автореферат диссертации опубликован на сайте Мордовского государственного университета www.mrsu.ru. E-mail: dsov@mrsu.ru

Автореферат разослан  14  ноября 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Т.А. Романова 

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Организм беременного животного – это сложная функциональная система, в которой организм матери и организм плода работают синхронно и все подчинено единой цели – рождению полноценного потомства.

В свою очередь получение здорового молодняка зависит, прежде всего, от состояния здоровья матери и  течения беременности (Боклаженко Е.В. 2009). Поэтому снижение резистентности организма самки в период беременности способствует возникновению  воспалительных процессов и инфекционных  заболеваний, что негативно сказывается  на развитии плода, течении беременности и ее исходе. Следовательно, в этот период организм матери нуждается в поддерживающей терапии.

Иммунный  статус матери, формирующийся при беременности, характеризуется состоянием временного иммунного дефицита, и прежде всего супрессией материнской резистентности (Соколовская И.И., Милованов В.К. 1981; Трунова Л.А. 1984; Говалло В.И. 1987; Воронин Е.С., Петров А.М. и др. 2002). 

В настоящее время для стимуляции иммунитета, профилактики различных заболеваний, повышения эффективности использования корма и продуктивности, увеличения жизнеспособности сельскохозяйственных животных и птицы используют  достаточно большое количество биологически активных веществ и, в первую очередь, пробиотиков (Смирнов В.В, Резник С.Р., Василевская Н.А. 1982; Ронь Г.П., Литусов  Н.В.,  Епишова  А.А. 1999; Сидоров М.А., Субботин В.В. 2000; Береснева Е.В. 2004; Щелгачев В.В. 2006). Однако их применение  не всегда сопровождается положительным эффектом. В ряде исследований получены противоречивые результаты, что обусловлено недостаточной изученностью действия пробиотических препаратов, неудачным подбором входящих в их состав штаммов бактерий, технологическими проблемами при их производстве и другими причинами (Тараканов Б.В. 2000; Малик Н.И. 2002). Поэтому выбор штаммов и создание на их основе иммуностимулирующих препаратов, действие которых было бы направлено на повышение резистентности организма животных в период беременности, является актуальным и заслуживает особого внимания.

Определенный интерес в этом направлении представляют штаммы аэробных  спорообразующих бактерий рода Bacillus.  Это одна из наиболее разнообразных и широко распространенных групп микроорганизмов. Они являются важным компонентом экзогенной флоры человека и животных, а также входят в состав большого числа выпускаемых промышленностью пробиотических препаратов.

Из  бактерий   рода   Bacillus   наибольший   интерес  представляют  штаммы В. subtilis. Данные микроорганизмы экологически безопасны, не патогенны и  организм животного не является для них постоянным хозяином (Бакулина Л.Ф., Тимофеев И.В. и др. 2001; Тетерев И.И., Филатов А.В. 2003; Щелгачев В.В. 2006). Кроме того, они отличаются способностью к быстрой колонизации не только желудочно-кишечного тракта, но и репродуктивных органов.  Многочисленные научные исследования и данные литературы свидетельствуют о том, что пробиотические препараты, в состав которых входят штаммы  B. subtilis,  помимо общего регуляторного воздействия на кишечный биоценоз оказывают заметное стимулирующее влияние на иммунологический статус. Вследствие этого процесса, в органах нормализуется микробиоценоз, что приводит к заживлению слизистых оболочек и увеличению фагоцитарной активности клеток крови, нормализации местного иммунитета органов  животного, что благоприятно сказывается на функционировании всего организма в целом  (Созаева Л.Г. 1999; Похиленко В.Д., Перелыгин В.В. 2007).

Степень разработанности проблемы. Проведенные ранее исследования посвящены изучению влияния пробиотиков на основе микроорганизмов рода Bacillus на физиологический статус  и морфофункциональное состояние органов и тканей организма сельскохозяйственных животных, снижению заболеваемости и повышению их продуктивности, а также  коррекции иммунного статуса животных и птицы (Платонов  А.В. 1985; Сидоров М.А. 1998; Тараканов Б.В., Николичева Т.А. 2000; Субботин В.В., Сидоров М.А. 2001;  Береснева Е.В. 2004).

Однако влияние представителей рода Bacillus на организм беременного животного, морфологические аспекты такого воздействия до сих пор являются малоизученными и требуют дальнейшего исследования.

Цель и задачи исследования. Цель нашей работы –  изучить комплекс морфологических и некоторых иммунологических изменений в организме лабораторных животных в период беременности на фоне применения пробиотического штамма B. subtilis 3.

Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить  морфологические изменения в органах иммунной системы, пищеварительного тракта, матки и плаценты  лабораторных   животных в  период   беременности   при  применении B. subtilis 3.

2. Определить некоторые иммунологические показатели крови белых мышей и морских свинок в  период  беременности  при использовании B. subtilis 3. 

3.  Дать морфологическое обоснование влияния пробиотического штамма B. subtilis 3 на организм лабораторных животных в период беременности и выявить наличие возможных побочных эффектов.

Предмет и объект исследования. Предметом исследования являлась морфологическая   и иммунологическая  оценка   действия пробиотического штамма B. subtilis 3 на организм беременных самок лабораторных животных.

В качестве объекта исследования были использованы белые мыши-самки  массой 25-30 г, морские свинки-самки массой 800-850 г; тимус, селезенка, печень, двенадцатиперстная кишка, матка, кровь лабораторных животных.

Научная новизна исследований. Впервые проведены исследования по изучению влияния штамма B. subtilis 3  на организм лабораторных животных в период беременности.

Проведены морфологические исследования центральных (тимус) и периферических (селезенка) органов иммунной системы, печени, двенадцатиперстной кишки, матки и плаценты беременных белых мышей и морских свинок, а также осуществлен анализ некоторых иммунологических показателей крови (абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов в крови, определены размеры циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови).  Полученные результаты показали, что данный микроорганизм не оказывает отрицательного влияния на организм беременных самок в применяемых дозах. Морфологическими исследованиями органов центральной (тимус) и периферической (селезенка) иммунной системы, печени, двенадцатиперстной кишки и матки подтверждено позитивное действие B. subtilis 3 на организм животных в период беременности.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований, проведенных на беременных лабораторных животных, могут быть использованы для дальнейшего изучения влияния пробиотического штамма B. subtilis 3 на сельскохозяйственных животных с целью повышения резистентности организма самок в период беременности.

Материалы и результаты исследований могут быть использованы в учебных целях при  изучении курса патологической анатомии, акушерства и гинекологии, кормления животных.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Область диссертационных исследований включает изучение морфологии организма лабораторных животных при введении пробиотического препарата B. subtilis 3 с целью повышения резистентности организма животного в период беременности. Указанная область исследования соответствует формуле специальности 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных, а именно п. 9 «Структура и функции клеток, тканей и органов животных, взаимосвязь функциональных, структурных и гистохимических изменений в норме и патологии».

Апробация работы.  Материалы   диссертации   были    представле­ны и обсуждены     на    научно-практических     конференциях    НИЦ ФГКУ «33 ЦНИИИ» МО РФ (Екатеринбург, 2010 г., 2012 г.), на ежегодной научно-практической конференции Уральской ГСХА «Молодежь и наука», 2012 год.

Внедрение результатов исследования в практику. Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедр анатомии, патологической анатомии и хирургии в ФГБОУ ВПО Красноярского государственного аграрного университета; анатомии и гистологии сельскохозяйственных животных Уральской государственной академии ветеринарной медицины; анатомии и физиологии института биотехнологии и ветеринарной медицины Тюменской ГСХА; терапии и фармакологии Алтайского государственного аграрного университета; ветеринарно-санитарной экспертизы Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана; физиологии, хирургии и акушерства ФГБОУ Ставропольского государственного аграрного университета;  анатомии, гистологии, физиологии и патологической анатомии; ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГБОУ ВПО Омского государственного аграрного университета.

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК России.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Комплекс морфологических изменений в органах иммунной и пищеварительной систем лабораторных животных в период беременности при использовании B. subtilis 3 свидетельствуют о положительном воздействии данного штамма.

2.  Иммунологические показатели  крови лабораторных животных в период беременности при использовании пробиотического штамма B. subtilis 3 подтверждают безвредность данного штамма для организма беременных самок.

3.  Морфологические изменения в матке белых мышей и морских свинок при использовании B. subtilis 3  свидетельствуют о нормальном течении беременности,  что способствует рождению полноценного потомства.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы,  собственные исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, библиографический список. Работа иллюстрирована 69 рисунками. Список литературы включает 143 источника, из них 11 работ зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Исследования по теме диссертации проведены в 2008 – 2012 годах на кафедре анатомии и физиологии ФГБОУ ВПО «Уральская государственная сельскохозяйственная академия» и на базе  НИЦ (войсковая часть 47051) ФГКУ «33 ЦНИИИ» МО РФ, г. Екатеринбург. 

Общая схема исследования представлена на рисунке 1.

Рисунок 1. Общая схема исследований

Для проведения экспериментальных исследований были использованы лабораторные животные двух видов: беспородные белые мыши-самки весом 25-30 г (30 голов); морские свинки-самки весом 800-850 г (30 голов). Все животные содержались в стандартных условиях вивария НИЦ (войсковая часть 47051) ФГКУ «33 ЦНИИИ» МО РФ,  при двенадцатичасовом световом режиме, температуре воздуха (22±2,0)0С и свободном доступе к воде и корму.

Работу с животными проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденными приказом МЗ СССР № 75 от 12.08.1977 г.

Самки мышей и морских свинок были разделены на три группы по 10 голов в группе.  Первую контрольную  группу составляли не беременные, вторую контрольную и третью (опытную) – беременные самки.

Мышам опытной  группы  внутрижелудочно  вводили суспензию клеток  штамма B. subtilis 3  в  концентрации  2,4·106кл.см-3,  морским свинкам опытной группы – перорально в концентрации  25·106кл.·см-3. Доза вводимых клеток соответствовала одной разовой дозе для человека в перерасчете на вес животного. Объем вводимой суспензии B. subtilis 3 для морских свинок составил 2,0 см3, для мышей – 0,5 см3. Препарат экспериментальным животным давали  один раз в сутки до кормления в течение 14 дней.

Животным контрольных групп вводили 0,9 % раствор хлорида натрия в тех же объемах.

Использованная в работе культура штамма B. subtilis 3 с 1992 г. официально находится в музейной коллекции НИЦ (войсковая часть 47051) ФГКУ «33 ЦНИИИ» МО РФ, г. Екатеринбург.

Для изучения гистологической структуры  орга­нов, животных опытных и контрольных групп умерщвляли, затем проводили вскрытие и отбор материала.

Материалом для гистологического исследования служили кусочки центральных (тимус) и периферических (селезенка) органов иммунной системы, а также двенадцатиперстной кишки, печени и матки. Фиксирование материала с последующей заливкой в парафин и окраской гематоксилином и эозином проводили по общепринятой методике. Полученные гистологические препараты исследовали в проходящем свете на микроскопе «Micros». Фотографирование осуществляли фотокамерой «Pentax».

Для иммунологических  исследований  использовали кровь лабораторных животных. Кровь у мышей брали путем декапитации, у морских свинок –  рассечением  краевой  вены  уха,  в  пробирки  с антикоагулянтом по  1,0 см3. 

У белых мышей и морских свинок количественное содержания Т- и В-лимфоцитов определяли в реакции розеткообразования (РОК) по  Ю. В. Шигиной (2007).

Размеры  циркулирующих иммунных комплексов  определяли методом неспецифической полиэтиленгликоль-преципитации по В. Гашковой (1978). Метод основан на измерении  находящихся в сыворотке иммунных комплексов.

Полученные в эксперименте результаты подвергали статистической обработке с вычислением среднего арифметического (М) и квадрата отклонения (±m). Оценку достоверности различий определяли по критерию Стьюдента (t) и считали значимым при р < 0,05.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Комплекс гистологических изменений в органах лабораторных животных в период беременности на фоне применения B. subtilis  3

3.1.1. Гистологические изменения в органах иммунной системы 

Первым этапом наших исследований  было приготовление  и изучение гистологических препаратов из органов иммунной системы тимуса и селезенки белых мышей и морских свинок.

Тимус.  Тимус является центральным органом лимфоцитопоэза и иммуногенеза. В нем происходит антигеннезависимая дифференцировка  Т-лимфоцитов, разновидности которых осуществляют (регулируют) реакции клеточного иммунитета.

Поэтому основной целью данного гистологического исследования было изучение изменений, происходящих в тимусе  лабораторных животных в период беременности    на  фоне     применения  пробиотического штамма  B. subtilis  3.

Белые мыши.  При гистологическом исследовании препаратов, приготовленных из тимуса мышей опытной группы, выявлены четко контурированые дольки разной величины. В самой дольке корковый и мозговой слои имеют ярко выраженную границу, причем корковый слой преобладает над мозговым. В мозговой зоне содержится небольшое количество лимфоцитов, а также характерных для тимуса телец Гассаля. Тельца Гассаля четко обозначены и хорошо просматриваются в виде эпителиальных  клеток расположенных послойно. По периферии долек отмечается незначительное количество жировой клетчатки. Кровеносные сосуды органа  умеренно кровенаполнены. Отмеченные нами изменения в тимусе опытных мышей при введении пробиотического штамма, можно характеризовать как умеренную инволюцию.

У мышей второй контрольной группы наблюдаются  более выраженные инволютивные процессы в тимусе, которые характеризовались тем, что в дольках органа нет четкой границы между слоями, а по периферии долек отмечается   значительное   количество жировой   клетчатки.    В поле зрения микроскопа встречаются единичные тельца Гассаля, либо они полностью отсутствуют. Кроме того. наблюдается застойная гиперемия кровеносных сосудов  на фоне равномерного распределения лимфоцитов дольки. В основном все инволютивные процессы, происходящие в тимусе беременных мышей,  связаны с разрастанием жировой или соединительной ткани.

Морские свинки.  У самок морских свинок, использованных в эксперименте, также как и у мышей, выявлены идентичные инволютивные процессы в тимусе, которые более ярко были представлены у животных второй контрольной группы.

Таким образом, проведенное сравнительное морфологическое изучение тимуса беременных  мышей и морских свинок контрольных и опытных групп выявило инволютивные процессы в тимусе животных контрольных групп, но более выраженные у самок в период беременности.  При введении в организм беременных животных пробиотического штамма B.subtilis 3 наблюдали  умеренную инволюцию тимуса.

Селезенка.  Из периферических органов иммунной системы мы иссле­довали селезенку. Она является одним из главных фильтров кровеносной системы, в ней происходит депонирование крови. Именно в селезенке наблюдается развитие не только иммунных реакций, но и активное уничтожение погибающих эритроцитов, тромбоцитов,  а также антигенов.

Белые мыши. При гистологическом  исследовании селезенки беременных мышей опытной группы на фоне применения B. subtilis 3 были выявлены следующие изменения: капсула селезёнки не утолщена, пульпа органа умеренно кровенаполнена, лимфатические фолликулы белой пульпы с центральными артериями хорошо выражены и четко очерчены, вокруг них имеется кольцо просветления – маргинальная зона. Наличие гемосидерина  как в пульпе, так и в просвете кровеносных сосудов свидетельствует о внутрисосудистом разрушении эритроцитов. Стенки центральных артерий фолликулов слегка утолщены. В целом общая структура органа сохранена.

В селезенке беременных белых мышей второй контрольной группы отмечено огрубение стромы органа и наличие значительного количества мегакариоцитов. Пульпа  органа умеренно кровенаполнена и содержит значительное количество лимфоцитов, а капсула органа слегка утолщена. В некоторых участках органа наблюдается гиперплазия  лимфоидных фолликулов. В других – лимфоидные фолликулы  не выражены, выявляются зоны просветления.  Кроме того, в селезенке отмечено отложение  железосодержащего пигмента  гемосидерина.

Морские свинки. При гистологическом исследовании селезенки беременных морских свинок  опытной группы  выявлено интенсивное размножение фолликулов органа. В некоторых фолликулах селезенки наблюдаются  ярко выраженные центры размножения (герминативный центр), выделяющиеся более светлой окраской. Кроме того, в фолликулах отмечается образование нового фолликула, что в свою очередь свидетельствует об усиленной иммунной реакции организма животных.

У беременных морских свинок второй контрольной группы в селезенке  отмечены изменения, характерные для иммунодефицитного состояния: утолщение капсулы, редукция некоторых фолликулов, то есть уменьшение их объёма, что свидетельствует об иммунодефицитном состоянии организма.

У не беременных лабораторных животных в органах иммунной системы не было отмечено патологических процессов.

Таким образом, проведенное сравнительное гистологическое изучение селезенки лабораторных животных показало наличие выраженных лимфоидных фолликулов с четкими центрами размножения у животных опытных групп, получавших B.subtilis 3. Кроме того, у морских свинок опытной группы в фолликулах селезенки наблюдалось развитие нового фолликула, что в свою очередь может свидетельствовать о стимулирующем влиянии пробиотического штамма B.subtilis 3 на иммунные реакции в организме беременных самок. 

3.1.2. Комплекс гистологических изменений в органах  пищеварительной системы лабораторных животных при введении пробиотического штамма B. subtilis 3

Комплекс гистологических исследований проведен на двенадцатиперстной кишке и печени лабораторных животных, поскольку общее состояние организма напрямую зависит от работы органов пищеварительной системы. Так, в тонкой кишке протекают основные процессы переваривания кормов и интенсивное всасывание питательных веществ, необходимых организму. Кроме того, в тонком кишечнике  ассоциирована лимфоидная ткань, в которой содержатся иммунокомпетентные клетки.

Двенадцатиперстная кишка.

Белые мыши. На гистологических срезах  двена­дцатиперстной кишки беременных мышей опытной группы, получавших B. subtilis 3, отмечен гладкий, ровный  и хорошо очерченный эпителий кишечника, что свидетельствует

о нормальном функционировании органа. Пристеночные железы функционируют нормально, рисунок ворсинок четкий. Апикальный  край эпителия ворсинок не изменен и  четко обозначен. Секреция эпителия  хорошо выражена, бокаловидные клетки равномерно распределены в эпителии кишечника. Все слои стенки кишечника хорошо выражены, просматриваются четко очерченные лимфоидные фолликулы, что свидетельствует об активизации защитной реакции кишечной стенки.

При изучении гистологических срезов двена­дцатиперстной кишки  мышей второй контрольной группы отмечена инфильтрация ворсинок кишечника лимфоцитами, а сами ворсинки резко утолщены. Строма ворсинок  содержит  значительное количество пролиферата и фибрина. У некоторых животных наблюдается резко выраженная реакция бокаловидных клеток, проявляющаяся гиперсекрецией, а также отмечается очаговый некроз эпителиоцитов.

Идентичные изменения в двенадцатиперстной кишке отмечены и у мышей первой контрольной группы (не беременные), на что по видимому влияет не правильное кормление.

Морские свинки. Гистологическое исследование двенадцатиперстной кишки морских свинок опытной группы выявили активизацию фундальных (пристеночные) желез. В некоторых участках выявляются активизированные лимфоидные фолликулы. Бокаловидные клетки в состоянии секреции, о чем свидетельствует наличие слизи в просвете кишечника между ворсинками.

У морских свинок второй контрольной группы в двенадцатиперстной кишке беременных наблюдаются патологические процессы воспалительного характера, в виде катарального дуоденита, который выявлен и у животных первой контрольной группы.

Таким образом, гистологические исследования двенадцатиперстной  кишки лабораторных животных выявили элементы катарального воспалительного процесса у самок, не получавших пробиотический препарат в период беременности, а также у не беременных животных.

Печень.

Белые мыши. Паренхима печени мышей опытной группы при окраске гематоксилином и эозином равномерно окрашена. Островки триады, центральной и собирательной  вен хорошо  определяются, балочное строение органа не нарушено. В двуядерных гепатоцитах ядра четко контурированы. Вокруг центральных вен распологаются делящиеся клетки с равномерно окрашенной цитоплазмой. Четко определены зоны не измененных клеток и зоны восстановления печеночной ткани, в которых обнаруживаются двуядерные гепатоциты, контуры клеток подчеркнуты.

В печени беременных мышей второй контрольной группы отмечается некроз  отдельных гепатоцитов, а также зернистая мелко- и крупнокапельная жировая инфильтрация клеток органа.

Морские свинки. В печени морских свинок, использованных в эксперименте, отмечены идентичные гистологические изменения.

Проведенное сравнительное гистологическое исследование двенадцатиперстной кишки и печени лабораторных животных опытных и контрольных групп свидетельствует о  снижение воспалительных процессов в органах пищеварения самок, получавших в период беременности пробиотический штамм B. subtilis 3.

      1. Морфология матки и плаценты лабораторных животных в период беременности  при применении Bsubtilis 3

Исследования матки и плаценты лабораторных животных позволяют понять сущность изменений, происходящих при испытании любых препаратов, выявить их безвредность как для самки, так и для ее детеныша.

Матка.

Белые мыши. При гистологическом исследовании в матке мышей опытной группы четко прослеживается  взаимосвязь детской и материнской частей плаценты.  Видна граница внедрения хориона в материнскую часть плаценты. Сосуды   материнской   части   плаценты   расширены   и   резко   кровенаполнены. В тканях беременной матки  отток крови несколько затруднен, а приток снижен. Эта особенность маточного кровообращения имеет принципиальное значение в бесперебойном обеспечении плода кислородом и различными питательными  веществами  и  не является  патологией.

Гистологическое исследование матки мышей второй контрольной группы показало резкое кровенаполнение сосудов органа. В слизистой оболочке матки наблюдается вакуольная дистрофия клеток. Просветы желез матки расширены и заполнены катаральным экссудатом. Мышечная оболочка отечна, в ней просматриваются запустевшие кровеносные сосуды.

Морские свинки. У морских свинок опытной группы в слизистой оболочке матки, наряду с нейтрофилами обнаруживали значительное количество гистиоцитов и лимфоцитов, что свидетельствует об активации системы клеточного звена естественного иммунитета у животных опытной группы при беременности.

При гистологическом исследовании тканей матки у морских свинок второй контрольной группы в период беременности был выявлен отек хориона, который сопровождался пролиферацией  эпителия ворсин и отеком стромы ворсин.

Таким образом, при введении в рацион беременных животных B. subtilis 3, происходит физиологически полноценный контакт материнской и детской частей плаценты, что свидетельствует о полноценном развитии плода. Рождение жизнеспособного потомства у самок получавших B. subtilis 3 свидетельствует о его безвредности для организма беременных самок.

3.2. Изучение некоторых иммунологических показателей крови лабораторных животных в период  беременности

при применении B. subtilis 3

Одними из основных показателей, характеризующих состояние клеточного и гуморального звена иммунной системы, является определение количества Т- и В-лимфоцитов крови. Данному показателю отводится важная роль при нарушении функций иммунной системы. Поэтому на следующем  этапе нашей работы были проведены иммунологические исследования крови самок лабораторных животных в период беременности на фоне использования B. subtilis 3.

У самок мышей и морских свинок в период беременности на фоне применения B. subtilis 3 отмечены изменения иммунологических показателей крови, которые варьируют в пределах физиологических норм.

3.2.1. Определение абсолютного количества Т-  и В-лимфоцитов в крови

лабораторных животных

Изучение абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов в крови лабораторных животных в разные физиологические периоды позволяет судить о способности организма к иммунному ответу клеточного и гуморального типа.

При проведении иммунологических исследований было изучено абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов  в  крови  лабораторных животных в период беременности  на фоне применения   пробиотического штамма  B. subtilis 3.

Так, абсолютное содержание лимфоцитов, а также количество Т-клеток в крови самок мышей второй контрольной группы снизилось по     сравнению с данными показателями у не беременных   животных   с 7,1·106 кл.·см-3  до  5,6 ·106 кл.·см-3 и с 2,5·106  кл.·см-3 до 2,0 ·106  кл.·см-3 соответственно. Количество В-клеток осталось в пределах нормы. При этом у мышей опытной группы, получавших пробиотик, абсолютное содержание лимфоцитов и Т-клеток составило 6,9·106 кл.·см-3 и 2,7 ·106  кл.·см-3, что  выше показателей животных второй контрольной группы. Количество В-лимфоцитов в опытной группе незначительно превышало этот показатель у обеих контрольных групп, но не выходило за пределы физиологических норм.

У беременных морских свинок также  происходит снижение абсолютного количества лимфоцитов, а также Т- и В-клеток. В тоже время у животных опытной группы абсолютные значения иммунокомпетентных клеток приближались или соответствовали норме,  так,  количество  лимфоцитов  составило  2,3 ·106  кл.·см-3,  Т- и В-клеток – 1,4 ·106  кл.·см-3 и 1,2 ·106  кл.·см-3 соответственно.

Таким образом, введение в рацион беременных самок лабораторных животных пробиотического штамма  B. subtilis 3  активизирует клеточное звено иммунитета, о чем свидетельствует увеличение абсолютного количества лимфоцитов, а также  Т- и В-клеток крови.

3.2.2. Определение размеров циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови лабораторных животных

Для определения размеров циркулирующих иммунных комплексов нами  был использован метод, основанный на том, что при добавлении к исследуемой сыворотке полиэтиленгликоля (ПЭГ) с молекулярной массой 6000 происходит осаждение крупномолекулярных соединений ЦИК. При высоких концентрациях ПЭГ (4%) осаждаются ЦИК всех размеров, при низких (3%) – только более крупные, которые, в отличие от низкомолекулярных (мелкие) иммунных комплексов, легко растворяются и выводятся из организма. Размеры ЦИК  варьируют в следующих пределах: менее 1,1 у.е. – крупные; от 1,1 до 1,5 у.е. – средние; более 1,5 у.е. – мелкие.

Результаты исследования показали, что размеры ЦИК  мышей и морских свинок соответствуют крупным и средним. Следовательно, приведенные размеры иммунных комплексов лабораторных животных способствуют их более быстрому растворению и выведению из организма.

Таким образом, полученные результаты по изучению  размеров иммунных комплексов свидетельствуют о том, что введение в организм лабораторных животных пробиотического штамма B. subtilis 3 не оказывает негативного влияния  на гуморальный иммунный ответ организма самок.

4. ВЫВОДЫ

1. При сравнительном гистологическом исследовании тимуса беременных белых мышей и морских свинок контрольных и опытных групп выявлено значительное разрастание жировой клетчатки, уменьшение коркового слоя в дольках тимуса у животных контрольных групп. У беременных самок получавших B. subtilis 3 наблюдали преобладание коркового слоя над мозговым.

2. Гистологические исследования селезенки белых мышей и морских свинок   в период беременности    на   фоне  применения B. subtilis 3 показали, что применение данного штамма в период беременности не вызывает побочных эффектов, стимулирует процесс формирования лимфоидных фолликулов в органе, чего не было отмечено в селезенке небеременных и беременных самок не получавших пробиотический штамм.

3.  Выявленные катаральные процессы в двенадцатиперстной кишке и дистрофические изменения в печени беременных  самок и отсутствие таковых у беременных самок получавших B. subtilis 3 свидетельствуют о положительном воздействии данного штамма на органы пищеварительной системы. 

4.  При введении в рацион беременных белых мышей и морских свинок пробиотического штамма B. subtilis 3 наблюдается четкая взаимосвязь материнской и детской частей плаценты, что свидетельствует о полноценном развитии плода. Рождение жизнеспособного потомства у животных, получавших B. subtilis 3, свидетельствует о его безвредности для организма беременных самок.

5. У беременных белых мышей и морских свинок происходит снижение абсолютного количества лимфоцитов, а также  Т- и В-клеток крови.  Введение в рацион беременных самок пробиотического штамма  B. subtilis 3  способствует увеличению количества иммунокомпетентных клеток крови.

6. Полученные размеры иммунных комплексов, относящиеся к  крупным (0,9 у.е.) и средним (от 1,3 до 1,5 у.е.) являются показателем того, что введение в организм лабораторных животных пробиотического штамма B. subtilis 3 не оказывает негативного влияния  на гуморальный иммунный ответ организма беременных самок.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты гистологических и некоторых иммунологических  исследований по влиянию пробиотического штамма B. subtilis 3 на организм беременных самок лабораторных животных  могут быть использованы:

- для дальнейшего изучения влияния пробиотического штамма B. subtilis 3 на сельскохозяйственных животных с целью повышения резистентности организма самок в период беременности;

- в учебном процессе на ветеринарных, биологических и зооинженерных факультетах высших учебных заведений;

- при написании соответствующих разделов учебных руководств и пособий по сравнительной анатомии, морфологии и гистологии животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

в рецензируемых журналах, рекомендуемых ВАК РФ

1. Архипенко, Н.В. Исследование некоторых иммунологических показателей сыворотки крови экспериментальных животных в период беременности   [Текст] /   Л.И. Дроздова,    Н.В. Архипенко,   О.Н. Касьянова,

Л.И. Тимина // Аграрный вестник Урала. – 2011. –  № 9 (88). – С. 8-12.

2. Архипенко, Н.В. Исследование морфологии некоторых органов мышей при использовании препарата Bacillus subtilis в период беременности [Текст] / Н.В. Архипенко, Л.И. Дроздова, Л.И. Тимина // Аграрный вестник Урала. – 2011. –  № 10 (89). – С. 8-10.

3. Архипенко, Н.В. Особенности морфологии матки морских свинок при использовании   препарата  Bacillus  subtilis  в   период   беремнности [Текст]/ Н.В. Архипенко, Л.И. Дроздова, О.Н. Касьянова, Л.И. Тимина // Ветеринарная патология. – 2012. –  № 2. – С. 76-79.

в научных изданиях

4. Архипенко, Н.В. Изучение возможного влияния Bacillus subtilis 3 на морфофункциональное состояние тимуса и Т-лимфоциты крови экспериментальных       животных       в       период      беременности   [Текст] / Н.В. Архипенко, Л.И. Тимина // Сборник научных работ студентов и аспирантов, участвовавших в конференции «Молодежь и наука – 2012». – Екатеринбург: УрГСХА, 2012. –  С. 11-15.

5. Архипенко, Н.В. Состояние Т- и В-лимфоцитов крови у морских свинок в разные  физиологические  периоды  и  на  фоне применения Bacillus subtilis 3  [Текст] / Н.В. Архипенко,   Л.И. Дроздова,  О.Н. Касьянова, Л.И. Тимина // Вестник Омского аграрного университета. – 2012. – №2 –  С. 5-7.







© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.