WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

Шмидт Галина Олеговна

МИКРОБИОЦЕНОЗ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА

ПЕРЕПЕЛОВ В ОНТОГЕНЕЗЕ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ ЭМ-КУРУНГОЙ ПРИ ДИАРЕЙНОМ СИМПТОМОКОМПЛЕКСЕ

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Новосибирск 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина»

Научный руководитель: 

Плешакова Валентина Ивановна,

доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты:

Аликин Юрий Серафимович,

доктор биологических наук, Институт медицинской биотехнологии ФБУН ГНЦВиБ «Вектор», старший научный сотрудник;

Афонюшкин Василий Николаевич,

кандидат биологических наук, ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока, старший научный сотрудник

Ведущая организация

ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится «_06_» июня 2012г. в ____ ч. на заседании диссертационного совета Д 006.045.01 при ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский р-н, пос. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62,

E-mail: dis.ievsidv@list.ru

С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «_____» апреля 2012г.

Ученый секретарь

диссертационного совета  Г.М. Стеблева

  1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Перепеловодство в настоящее время является одним из приоритетных направлений птицеводства, как наиболее интенсивно развивающаяся и экономически выгодная отрасль сельского хозяйства (Р. Карапетян, 2005; А.Н. Белогуров с соавт., 2008; Л. Белякова с соавт., 2006, 2008; I. Yeshwanth, 1990; J. Baumgartner, 1994). Однако смоделированные доместикационные технологии содержания перепелов существенно отличаются от природных условий, что вызывает длительное напряжение адаптационных механизмов птицы и приводит к нарушению гомеостаза, снижению иммунитета и, как следствие, ухудшению качественных показателей выхода продукции – мяса и яиц (А.Н. Белогуров, 2009).

Среди причин отхода молодняка сельскохозяйственной птицы основное место занимают болезни желудочно-кишечного тракта, возбудителями которых является условно-патогенная микрофлора. Микроэкологические изменения бактериального баланса в пищеварительном тракте птенцов приводят к возникновению патологических состояний, что нарушает переваривание и усвоение питательных веществ (И. Егоров с соавт., 2004; Е. Лазуткина, 2007; Н.С. Кухаренко, 2010).

Для повышения сохранности и резистентности птицы применяют различные препараты растительного и животного происхождения: антибактериальные препараты, пробиотики, пребиотики, витаминно-минеральные добавки, органические кислоты, иммуномодуляторы и другие (Л.Т. Даниелян, 2003; Ю.В. Косинцев, 2005; В. Оркин, 2006).

В настоящее время в птицеводстве наблюдается снижение интенсивности использования кормовых антибиотиков в качестве добавок, что связано с решением ЕС (2006). В связи с чем широкое применение в птицеводстве нашли пробиотики, как наиболее доступные на рынке и безвредные для организма птицы препараты (А.Б. Иванова, 2004; В.Г.Денисов, 2009). Одним из таких препаратов является кормовой концентрат ЭМ-курунга.

Актуальность темы исследования обусловлена тем, что в доступной литературе отсутствуют данные о формировании микробиоценоза пищеварительного тракта перепелов в постнатальном онтогенезе, а фрагментарные сведения о влиянии пробиотических препаратов на состав микрофлоры, физиологические и продуктивные показатели птицы немногочисленны.

Цель исследования: изучить микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов в постнатальном онтогенезе при промышленном разведении, а также возможность его коррекции кормовым концентратом ЭМ-курунга при диарейном симптомокомплексе.

Задачи исследования:

  • Изучить видовой состав и биологические свойства микроорганизмов, обитающих в различных отделах пищеварительного тракта клинически здоровых перепелов в постнатальном онтогенезе.
  • Установить количественные и качественные показатели микробиоценоза, а также изменение биологических свойств микроорганизмов, выделенных от перепелов с диарейным симптомокомплексом.
  • Изучить микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов при введении в рацион кормового концентрата ЭМ-курунга.
  • Определить влияние ЭМ-курунги на основные гематологические, биохимические показатели крови и продуктивные качества перепелов.

Научная новизна. Получены новые данные о количественном и качественном составе микрофлоры пищеварительного тракта у перепелов в постнатальном онтогенезе при промышленном разведении. Установлены показатели нормальной микрофлоры различных отделов пищеварительного тракта клинически здоровых перепелов. Изучены биологические свойства отдельных представителей микробиоценоза при диарейном симптомокомплексе и антагонистическая активность лактобацилл и бифидобактерий, содержащихся в кормовом концентрате ЭМ-курунга, в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры пищеварительного тракта больных перепелов. Установлено корригирующее влияние ЭМ-курунги на микробиоценоз и сохранность перепелов при нарушениях функций пищеварительного тракта, а также положительное действие полезных микроорганизмов на продуктивные качества перепелов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Диссертационная работа является разделом комплексной темы научно-исследовательской работы кафедры ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А.Столыпина «Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц» (№ гос. регистрации 01.2.00100602).

Полученные данные об основных представителях микробиоценоза в возрастном аспекте позволили установить количественный и качественный состав микрофлоры пищеварительного тракта клинически здоровых перепелов породы фараон. Использование кормового концентрата ЭМ-курунга в рационе птицы способствовало восстановлению нормальной микрофлоры пищеварительной системы при диарейном симптомокомплексе, оказывая положительное влияние на продуктивные качества перепелов.

Материалы диссертационной работы использованы при разработке методических рекомендаций «Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов и его коррекция пробиотиком», утвержденных на подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Россельхозакадемии (2011 г.).

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на следующих конференциях:

  • Научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМиБ ОмГАУ им. П.А.Столыпина (2009, 2010, 2011 гг.).
  • Международной научно-практической конференции «Основные проблемы и перспективы развития ветеринарной медицины в обеспечении животноводства Прикаспийского региона Российской Федерации» (2009 г.).
  • V Международной научно–практической конференции «Интеллектуальный потенциал XXI: ступени познания» (Новосибирск, 2011г.).
  • V Международной научно-практической конференции молодых исследователей «Наука и молодежь: новые идеи и решения» (Волгоград, 2011 г.).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано шесть научных работ, в том числе две в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ («Ветеринария Кубани», «Ветеринарная патология»).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения материалов собственных исследований, выводов, практических предложений, списка литературы, приложений, иллюстрирована 10 рисунками и 20 таблицами. Список литературы  включает 180 источников, в том числе 43 иностранных.

Основные положения, выносимые на защиту:

        1. Формирование микробиоценоза пищеварительного тракта перепелов в постнатальном онтогенезе.
        2. Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов при диарейном симптомокомплексе и его коррекция кормовым концентратом ЭМ-курунга.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследования

Работа выполнена в 2009-2012 гг. на кафедре ветеринарной микробиологии,  вирусологии и иммунологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет имени П.А.Столыпина» и ЗАО «Иртышское» Омской области. Отдельные исследования проведены на базе лаборатории резистентности животных ФГОУ ВПО ОмГАУ и БУ «Омская областная ветеринарная лаборатория».

Объект исследования – перепела породы фараон с момента вывода до достижения 45 сут. (n=2000), половозрелые перепела и несушки от 45 до 105 сут. возраста (n=279). Все манипуляции с птицей производили согласно Европейской конвенции о защите позвоночных  животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (2003 г.).

На первом этапе изучали качественный и количественный состав микрофлоры различных отделов пищеварительного тракта перепелов с момента вывода до достижения 105 сут. возраста.

На втором этапе изучали состав микробиоценоза пищеварительного тракта у перепелов с диарейным симптомокомплексом и возможность его коррекции ЭМ-курунгой.

В период производственного эксперимента было изучено влияние ЭМкурунги на ряд гематологических и биохимических показателей крови, а также продуктивность птицы. При этом учитывали сохранность молодняка, яйценоскость несушек, после убоя определяли массу тела и внутренних органов.

Определение количественного и качественного состава микрофлоры осуществляли посевом разведений содержимого пищеварительного тракта на дифференциально-диагностические и селективные питательные среды (Эндо, Левина, Плоскирева, элективный солевой агар, агар Сабуро, среда Бликфельдта, бифидум-среда).

Патогенные свойства культур, выделенных от больных перепелов, изучали постановкой биологической пробы на белых мышах. LD50/мл определяли по методу Рида-Менча в модификации В.Л. Троицкого (1950 г.).

Чувствительность выделенных культур к антибактериальным препаратам изучали дискодиффузионным методом (МУК 4.2.1890-04).

Изучение антагонистической активности лактобацилл и бифидобактерий в отношении условно-патогенных культур микроорганизмов, выделенных от перепелов, проводили in vitro методом отсроченного антагонизма (МУК 4.2.2602-10).

Статистическую обработку результатов, полученных в ходе экспериментов и наблюдений, проводили при помощи компьютерной программы Microsoft Excel 2000 и пакета программ Statistica.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Формирование микробиоценоза

пищеварительного тракта перепелов

Установлено, что пищеварительный тракт перепелят сразу после вывода колонизировали микроорганизмы родов Enterococcus, Escherichia. В ротовой полости их количество составило 2,3±0,4102 и 1,8±0,2102 КОЕ/г, а в толстом кишечнике 2,2±0,4102 и 2,0±0,6102 КОЕ/г соответственно.

На третьи сутки появились и другие представители облигатной микрофлоры: Lactobacillus spp. (1103) и Bifidobacterium spp. (1104), а также транзиторные микроорганизмы, такие как Staphylococcus saprophyticus (4,1105) и Staphylococcus aureus (2103 КОЕ/г).

В семисуточном возрасте микробиоценоз значительно изменился в качественном отношении (табл. 1). Увеличилось количество представителей облигатной и транзиторной микрофлоры, появились дрожжеподобные грибы Candida albicans.

В ротовой полости и краниальном отделе пищевода увеличилось количество энтерококков, в частности E. faecium (2,1±0,3106), стафилококков – Staphylococcus aureus (4,2±0,9104), а также Lactobacillus spp. (3,7±6,2103); появились Bifidobacterium spp. (4,0±5,8102).

В мышечном желудке общее количество микрофлоры не превышало 1104. Зарегистрировали появление E. faecalis (7,2102).

Таблица 1 Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов (7 сут.)

Вид микро-организма КОЕ/г

Отдел

рот. полость, краниальный отдел пищевода

каудальный отдел пищевода, зоб

железистый желудок

мышечный желудок

тонкий кишечник

слепые отростки

толстый кишечник, клоака

E. faecalis

1,4±0,4106

9,6±1,6105

2,0±0,4104

7,2±0,3102

5,4±0,5105

1,3±0,4105

1,5±0,4106

E. faecium

2,1±0,3106

7,8±2,4105

3,7±0,1104

5,2±0,1102

4,2±1,2106

3,6±1,2105

1,3±0,3107

E. coli 

2,3±0,8105

1,0±0,7105*

5,4±1,3102

-

7,3±0,6106

1,1±0,2106

5,5±3,5106*

C. albicans

3,2±0,7102

2,3±0,6103

6,2±1,6104

7,1±0,4102

5,7±0,4103

8,3±1,4103

2,1±0,8104

S. saprophyticus

3,9±0,6105

3,4±0,9105

1,7±0,8102*

1,4±0,7101*

2,8±0,8102

6,5±0,7102

4,3±1,5104

S. aureus

4,2±0,9104

3,3±1,1104

-

-

5,1±1,2101

4,7±1,3101

-

Bifidobacterium spp.

4,0±5,8102*

7,0±5,8102*

7,0±5,8102*

4,0±5,8102*

4,0±5,8104*

7,0±5,8105*

3,7±6,2106*

Lactobacillus spp.

3,7±6,2103*

4,0±5,8104*

7,0±5,8103*

4,0±5,8103*

4,0±5,8104*

4,0±5,8106*

4,0±5,8106*

* – р < 0,05

«-» – отсутствие роста

В тонком кишечнике у семисуточных перепелят возросло содержание E. faecalis в 7,3 раза, а  E. faecium в 26 раз, по сравнению с показателями трехсуточных птенцов. В 19 раз снизилось количество S. saprophyticus.

В слепых отростках значительно возросло содержание кишечной палочки, а количество стафилококков, в том числе S. saprophyticus – снизилось.

Из толстого кишечника и клоаки представителей аэробной и анаэробной микрофлоры выделяли в соотношении 1:1.

В процессе дальнейшего формирования микробиоценоза верхних отделов пищеварительного тракта (ротовая полость, пищевод, зоб) превалировали кокковые формы, главным образом Enterococcus faecium, а в кишечнике – Bifidobacterium spp.и Lactobacillus spp.

К двухнедельному возрасту в ротовой полости, пищеводе и зобе менее значительные изменения в составе микробиоценоза по сравнению с показателями семисуточных перепелят (табл. 2). Возросло содержание Candida albicans (3,7±2,8104), а также бифидобактерий, количество которых достигло 1105 КОЕ/г. В то же время содержание E. faecium и S. saprophyticus снизилось до 1,1±0,6105 и 2,7±1,2105 КОЕ/г соответственно.

Таблица 2 - Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов (14 сут.)

Вид микро-организма КОЕ/г

Отдел

рот. полость, краниальный отдел пищевода

каудальный отдел пищевода, зоб

железистый желудок

мышечный желудок

тонкий кишечник

слепые отростки

толстый кишечник, клоака

E. faecalis

1,5±0,9 106*

2,1±0,7106

4,9±0,3104

4,8±0,4102

3,0±0,6 106

5,0±2,2105

2,2±0,5107

E. faecium

1,1±0,6 105*

3,9±2,3105*

6,2±2,4104

3,1±0,2102

7,7±0,5 106

3,8±0,9106

7,3±3,3107*

E. coli 

1,8±1,5 106*

6,2±0,8105

3,7±0,5103

-

9,2±0,8 106

1,6±0,8107*

9,7±3,2106

C. albicans

3,7±2,8 104*

5,6±2,4104*

5,1±0,9104

9,5±1,7102

3,3±0,4103

2,5±0,3103

8,3±1,4103

S.saprophyticus

2,7±1,2 105*

1,4±0,9104*

1,1±0,7102*

4,2±2,6101

4,8±0,8103

2,1±0,9104

3,3±0,6104

S.aureus

1,7±0,9 105*

2,5±0,8104

-

-

6,5±1,5103

6,2±1,5103

1,8±1,3104*

Bifidobacterium spp.

7,0±5,8 103*

4,0±5,8104*

4,0±5,8104*

7,0±5,8103*

3,7±6,2109*

7,0±5,8108*

4,0±5,81011*

Lactobacillus spp.

7,0±5,8 104*

4,0±5,8104*

7,0±5,8105*

4,0±5,8103*

7,0±5,8108*

4,0±5,8108*

7,0±5,81010*

Proteus vulgaris

-

-

-

-

-

-

4,0±1,0101

* – р < 0,05

«-» – отсутствие роста

В железистом желудке количество E. coli увеличилось по сравнению с показателем семисуточным перепелят до 3,7103 КОЕ/г, Bifidobacterium spp. до 4,0±5,8104 и Lactobacillus spp. до 7,0±5,8105 КОЕ/г. Содержание других представителей микробиоценоза изменилось незначительно.

В кишечнике и клоаке значительно возросло содержание Bifidobacterium spp.и Lactobacillus spp., количество которых составило почти 90% всей численности микробиоценоза. В толстом кишечнике их количество достигло 11011 КОЕ/г. Одновременно произошло снижение содержания дрожжеподобных грибов C. albicans (1104 КОЕ/г). В клоаке зарегистрировали микроорганизмы Proteus vulgaris (4,0±1,0101 КОЕ/г).

К 30 сут. возрасту в верхних отделах пищеварительного тракта отмечали снижение количества Enterococcus spp. (до 1,5106 КОЕ/г) и E. coli (до 4,0105 КОЕ/г) (табл. 3).

Таблица 3 Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов (30 сут.)

Вид микро-организма КОЕ/г

Отдел

рот. полость, краниальный отдел пищевода

каудальный отдел пищевода, зоб

железистый желудок

мышечный желудок

тонкий кишечник

слепые отростки

толстый кишечник, клоака

E. faecalis

2,4±0,6105

3,1±0,5105

1,4±0,3104

1,7±0,3102

7,3±3,2 105*

6,1±2,5106*

9,2±3,0106

E. faecium

4,9±1,5106

6,3±1,3105

2,2±0,4104

2,4±0,9102

6,5±0,5 106

4,9±1,2106

5,4±2,5107*

E. coli 

2,8±0,5105

5,2±0,9105

3,0±0,5103

-

4,1±2,8 106*

7,1±3,7107*

4,8±1,2107

C. albicans

8,2±2,3103

3,1±3,2104*

1,2±0,3104

4,8±2,4102*

2,1±0,7 103

4,3±1,6104

1,3±0,9104*

S. saprophyticus

9,3±2,9105

7,6±1,5104

4,1±0,6104

3,3±0,7101

5,3±0,9104

5,5±0,8104

5,2±1,7105

S. aureus

1,5±1,4105*

8,1±2,4103

1,1±0,7103*

-

2,9±3,3 102*

2,7±2,3103*

6,1±0,6104

Bifidobacterium spp.

4,0±5,8 104*

7,0±5,8 103*

4,0±5,8 105*

1,0±0,1105

4,0±5,8 109*

7,0±5,8 107*

4,0±5,8 1011*

Lactobacillus spp.

4,0±5,8 106*

4,0±5,8 106*

1,0±0,1106

4,0±5,8 105*

7,0±5,8 108*

4,0±5,8 107*

4,0±5,8 1010*

Proteus vulgaris

-

-

-

-

-

2,3±0,6102

2,6±1,3102*

* – р < 0,05

«-» – отсутствие роста

Наиболее выраженные изменения микробиоценоза отмечали в ротовой полости и краниальном отделе пищевода, где содержание E. faecalis составило снизилось до 2,4±0,6105, а E. coli – уменьшилось в 6,4 раза по сравнению с аналогичным показателем двухнедельных перепелов и составило 2,8±0,5105 КОЕ/г. Заметно увеличилось содержание Lactobacillus spp. – 1107 КОЕ/г.

В слепых отростках уменьшилось количество E. faecalis в 12,2 раза по сравнению с показателем двухнедельных перепелов, появились микроорганизмы P. vulgaris (2,3±0,6102 КОЕ/г). 

В толстом кишечнике и клоаке количество E. coli снизилось в 5 раз (4,8±1,2107), а S. saprophyticus в 15,7 раза – 5,2±1,7105 КОЕ/г. В клоаке возросло количество P. vulgaris до 2,6±1,3102 КОЕ/г.

У перепелов 45 сут. возраста и старше основу микробиоценоза ротовой полости, пищевода и зоба составили E. faecalis, E. faecium, S. aureus и S. saprophyticus. Общая численность энтерококков в ротовой полости – 4,1±0,6106 КОЕ/г, что в 3 раза превысило содержание других видов микроорганизмов в данном отделе пищеварительного тракта (табл. 4).

Таблица 4 Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов (45 сут.)

Вид микроорганизма КОЕ/г

Отдел

рот. полость, краниальный отдел пищевода

каудальный отдел пищевода, зоб

железистый желудок

мышечный желудок

тонкий кишечник

слепые отростки

толстый кишечник, клоака

E. faecalis

1,2±0,4 106

2,2±0,6105

4,3±0,3104

1,4±0,4102

6,8±0,6 104

5,8±0,4106

3,6±0,8106

E. faecium

2,9±0,9 106

3,3±0,7106

7,1±1,5104

1,8±0,3102

3,1±0,5 106

2,4±0,4107

2,1±0,5107

E. coli 

1,8±0,4 105

8,7±0,5104

5,2±1,4103

2,1±0,5102

8,3±1,8 105

3,8±0,7106

5,2±0,5106

C. albicans

8,2±1,2 104

4,5±0,4104

3,9±0,3103

6,3±2,1102

6,1±0,6 103

4,7±0,5104

7,6±1,7104

S. saprophyticus

7,2±1,3 105

4,1±1,5104*

1,3±0,9104*

7,3±0,7101

3,0±0,8 104

8,2±1,1104

2,7±0,4104

S.aureus

3,5±0,8 105

3,9±0,6103

5,1±0,6102

-

8,4±1,9 102

1,5±0,2103

5,9±1,3104

Bifidobacterium spp.

4,0±5,8 103*

7,0±5,8103*

7,0±5,8102*

4,0±5,8102*

4,0±5,8 109*

7,0±5,8108*

4,0±5,8 1012*

Lactobacillus spp.

4,0±5,8 105*

4,0±5,8105*

7,0±5,8104*

4,0±5,8104*

7,0±5,8108*

4,0±5,8108*

4,0±5,81010*

Proteus vulgaris

-

-

-

-

-

3,7±0,8102

6,4±1,4102

* – р < 0,05

«-» – отсутствие роста

Количество микроорганизмов рода Lactobacillus spp. (4,0±5,8105) в ротовой полости и пищеводе превалировало над Bifidobacterium spp. (4,0±5,8103). Аналогичная тенденция прослеживалась в зобе и каудальном отделе пищевода.

В железистом и мышечном желудках общее количество микрофлоры не превышало 1104 КОЕ/г. Так, в железистом желудке основную массу микрофлоры составляли E. faecium (7,1±1,5104 КОЕ/г) и Lactobacillus spp. (7,0±5,8104 КОЕ/г), а в мышечном Enterococcus spp., Staphylococcus spp., C. albicans, E. coli Bifidobacterium spp. выделяли почти в равном соотношении.

В кишечнике доминирующее положение занимали Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. Если в тонком кишечнике и слепых отростках их численность не превышала 1109 КОЕ/г, то в толстом кишечнике и клоаке достигала 11012 КОЕ/г.

В меньшем количестве в толстом кишечнике и клоаке идентифицировали E. coli (5,2±0,5106), E. faecium (2,1±0,5107) и E. faecalis (3,6±0,8106 КОЕ/г).

Содержание других представителей (C. albicans, S.aureus, S. saprophyticus) не превышало 1% от общего числа микроорганизмов. Proteus vulgaris выделяли из слепых отростков, толстого кишечника и клоаки в количестве не превышающем 6,4±1,4102 КОЕ/г.

2.2.2. Изменение состава микрофлоры

при диарейном симптомокомплексе

Наиболее часто (87%) диарейный симптомокомплекс регистрировали у перепелят первых двух недель жизни. В двух-трехсуточном возрасте микробиоценоз значительно изменен, по сравнению с показателями клинически здоровых перепелят. Отметили увеличение количества E. coli и Enterococcus spp., особенно E. feacalis на фоне полного отсутствия бифидобактерий и снижения количества лактобацилл (табл. 5).

Таблица 5 Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов с диарейным симптомокомплексом (3 сут.)

Вид микро-

организма КОЕ/г

Отдел

рот. полость, краниальный отдел пищевода

каудальный отдел пищевода, зоб

железистый желудок

мышечный желудок

тонкий кишечник

слепые отростки

толстый кишечник, клоака

E. faecalis

1,6±0,9 105

5,6±0,2 104

4,1±0,6 104

-

3,5±0,9 105

5,4±0,6 105

2,9±0,3 105

E. faecium

9,4±0,6 105

3,7±0,1 105

3,9±0,7 104

5,3±0,8102

4,5±0,7 105

1,9±0,3 105

3,3±0,9 106

E. coli 

8,7±1,1 104

6,1±1,2 104

2,7±0,9 103

2,1±0,3102

7,2±1,3 104

5,8±0,4 103

5,7±0,3 106

S.saprophyticus

5,5±0,7 105

8,9±0,5 105

1,6±0,3 103

6,6±0,5102

6,1±1,9 103

2,3±0,4 103

5,2±0,7 104

S.aureus

6,3±1,2 103

5,2±0,4 103

4,3±0,8 102

-

3,8±0,8 102

1,6±1,2 103

4,1±1,1 104

Bifidobacterium spp.

-

-

-

-

-

-

-

Lactobacillus spp.

-

-

4,0±5,8 101*

-

7,0±5,8 101*

4,0±5,8 102*

7,0±5,8 102*

* – р < 0,05

«-» – отсутствие роста

При диарейном симптомокомплексе у перепелов разного возраста количество транзиторных микроорганизмов, таких как стафилококки, изменялось не всегда достоверно, но наиболее значительно в ротовой полости, зобе, а также в слепых отростках, толстом кишечнике и клоаке. Варьировало количество S.aureus, содержание которого в некоторых отделах превышало показатели клинически здоровых перепелов более чем в 10 раз. На этом фоне отмечали значительное снижение количества или полное отсутствие бифидобактерий и лактобацилл.

У перепелов 29-32-сут. возраста причиной диареи чаще служил стресс после пересадки перепелов из брудеров в клетки, а также смена структуры и состава кормосмеси. При этом в ротовой полости (табл. 6) увеличилось количество  S.aureus в 9,3 раза (1,4±0,3106 КОЕ/г). Регистрировали плесневые грибы родов Penicillium и Mucor (5,2±1,3103 КОЕ/г).

Таблица 6 Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов с диарейным симптомокомплексом (30 сут.)

Вид микро-организма КОЕ/г

Отдел

рот. полость, краниальный отдел пищевода

каудальный отдел пищевода, зоб

железистый желудок

мышечный желудок

тонкий кишечник

слепые отростки

толстый кишечник, клоака

E. faecalis

1,3±0,7 107

5,3±0,7 106

1,2±0,3 106

7,5±0,6 102

1,6±0,4 106

4,3±0,6 107

5,6±0,5 107

E. faecium

2,1±0,4 107

2,7±0,6 106

8,6±0,9 105

6,9±1,3102

7,6±2,3 106

1,7±0,3 107

1,1±0,3 108

E. coli 

9,3±1,1 106

1,0±0,2 106

6,1±0,7 103

2,8±0,6 103

5,0±1,1 107

2,6±0,5 108

6,6±1,7 108

C. albicans

2,3±0,5 104

7,5±1,1 104

1,3±0,4 104

7,6±2,5 103

8,9±1,4 103

3,1±0,7 105

5,4±1,2 104

S.saprophyticus

2,2±0,4 105

1,5±0,5 105

7,4±0,9 103

1,1±0,2102

3,3±1,6 104*

2,4±0,5 105

7,9±2,8 104

S.aureus

1,4±0,3 106

6,4±0,9 104

2,8±0,6 103

3,7±0,8101

1,2±0,3 104

3,4±0,9 104

2,5±0,4 105

Bifidobacterium spp.

4,0±5,8 102*

7,0±5,8 102*

-

-

4,0±5,8 103*

4,0±5,8 103*

7,0±5,8 102*

Lactobacillus spp.

4,0±5,8 104*

4,0±5,8 104*

7,0±5,8104*

4,0±5,8102*

7,0±5,8 102*

7,0±5,8 104*

4,0±5,8 104*

Proteus vulgaris

-

-

-

-

2,0±0,6 103

3,0±1,6 103

5,7±1,5 104

Penicillium и Mucor

5,2±1,3 103

2,8±0,7 102

-

-

3,9±0,8 103

4,7±1,4 104

5,2±1,2 104

Klebsiella pneumoniae

-

-

-

-

-

-

3,0±1,0 103

* – р < 0,05

«-» – отсутствие роста

В зобе и каудальном отделе пищевода содержание E. faecalis возросло более чем в 17,5 раз (5,3±0,7 106  КОЕ/г), а S.aureus – в 7,9 раза (6,4±0,9104 КОЕ/г) по сравнению с аналогичными показателями клинически здоровых перепелов (30 сут).

В слепых отростках, тонком, толстом кишечнике и клоаке регистрировали наиболее значительные изменения: обнаруживали плесневые грибы и микроорганизмы Klebsiella pneumoniae (3,0±1,0103). В толстом кишечнике и клоаке численность Penicillium и Mucor достигла 5,0±1,6104, P. vulgaris – 5,2±1,2104 КОЕ/г.

В результате экспериментальных исследований из кишечника перепелов с диарейным симптомокомплексом были выделены следующие культуры:  Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Candida albicans, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae и Escherichia coli.

Из семи выделенных культур микроорганизмов три (42,8%) были патогенны для белых мышей в дозе 0,5х109 м.т./мл (K. pneumoniae, S. aureus, P. vulgaris), три (42,8%) – в дозе 1,0х109 м.т./мл (E. faecalis, E. coli, C. albicans), вызывая гибель более 50% зараженных животных.

Наиболее высокой патогенностью для белых мышей обладали культуры P. vulgaris, S. aureus, K. pneumoniae и E. coli. Меньшей патогенностью обладали E. faecalis и C. albicans. При заражении культурой Enterococcus faecium в дозе 0,5х109 м.т./мл гибели мышей не регистрировали.

2.2.3. Коррекция микробиоценоза пищеварительного тракта

ЭМ-курунгой при диарейном симптомокомплексе

В ходе эксперимента у перепелят двух-трехсуточного возраста и старше с диарейным симптомокомплексом, в рацион которым вносили ЭМ-курунгу (опытная группа), отмечали постепенное улучшение состава микробиоценоза, а к 30ти сут. – качественные и количественные показатели микрофлоры пищеварительного тракта приближались к данным клинически здоровых перепелов (табл. 7).

Гибель птенцов в опытной группе составила 24,2% (восемь гол.) за период эксперимента, а в контрольной пали все заболевшие перепелята (n=34).

При изучении антагонистической активности Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp., содержащихся в кормовом концентрате ЭМ-курунга, в отношении условно-патогенных и патогенных культур, выделенных из кишечника перепелов с диарейным симптомокомплексом, установлено, что антагонистические свойства наиболее выражены у лактобацилл, чем у бифидобактерий. Микроорганизмы рода Lactobacillus проявили наибольшую антагонистическую активность в отношении S. aureus, E. faecalis, P. vulgaris, K. pneumoniae и гемолитических штаммов E. coli; меньшую – в отношении E. faecium, негемолитических E. coli и C. albicans. Наиболее активно микроорганизмы рода Bifidobacterium проявляли антагонизм в отношении S. aureus, гемолитических и негемолитических штаммов E.coli; меньше – в отношении E. faecalis, E. faecium, P. vulgaris, K. pneumoniae и C. albicans. Культивируемые в одном объеме питательной среды Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp. проявляли синергизм антагонистической активности в отношении условно-патогенных и патогенных культур микроорганизмов.

Таблица 7 Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов после коррекции ЭМ-курунгой (30 сут.)

Вид микро-организма КОЕ/г

Отдел

рот. полость, краниальный отдел пищевода

каудальный отдел пищевода, зоб

железистый желудок

мышечный желудок

тонкий кишечник

слепые отростки

толстый кишечник, клоака

E. faecalis

1,9±0,4105

3,3±0,5105

2,6±0,2104

3,2±0,4102

6,3±0,8105

4,4±0,8106

8,9±1,3106

E. faecium

3,6±0,3106

5,9±0,9105

3,5±1,1104

2,5±0,7102

4,6±1,5106

3,3±0,9106

4,8±1,3107

E. coli 

3,2±0,9105

4,1±1,2105

2,1±0,3103

-

5,1±1,3106

6,6±1,1107

5,2±1,4107

C. albicans

6,8±0,8103

2,2±0,3104

8,8±2,6103

1,3±0,3102

1,7±0,5103

7,1±2,2103

4,6±0,6103

S. saprophyticus

8,4±1,3104

2,7±0,6102

7,3±1,4101

3,7±0,9101

2,4±0,6104

5,7±0,8103

1,5±0,4104

S.aureus

6,2±0,7104

4,8±0,8103

-

-

3,8±0,8102

2,9±0,4102

7,7±1,2103

Bifidobacterium spp.

4,0±5,8104*

4,0±5,8103*

4,0±5,8105*

7,0±5,8104*

7,0±5,8109*

7,0±5,8108*

7,0±5,81011*

Lactobacillus spp.

7,0±5,8106*

7,0±5,8106*

4,0±5,8105*

4,0±5,8105*

7,0±5,8109*

4,0±5,8109*

4,0±5,81011*

* – р < 0,05

«-» – отсутствие роста

2.2.4. Влияние ЭМ-курунги на гематологические, биохимические показатели крови и продуктивность перепелов

Гематологическими исследованиями установлено, что у перепелов 45-ти сут. возраста, ежедневно получавших кормовой концентрат ЭМ-курунга в течение всего периода эксперимента, количество эритроцитов было выше на 7,7% по сравнению с контролем. У птиц опытной группы этот показатель был достоверно выше (р < 0,01) и составил 3,49±0,51012/л, а у птиц в контрольной – 3,24±0,41012/л. Содержание лейкоцитов в крови перепелов контрольной группы составило 31,08±3,28109/л, а в опытной группе – 36,13±2,12109/л (р < 0,01). Уровень гемоглобина у птиц в контроле был равен 131,7±9,6 г/л, в опыте – 138,3±8,5 г/л – выше на 5% (р < 0,01).

В производственных условиях установлено, что применение ЭМ-курунги перепелятам опытной группы с суточного возраста в течение всего периода выращивания повысило сохранность молодняка до 96,4%, по сравнению с контролем – 93,2%. В опытной группе снизилось количество заболевшей птицы с патологией пищеварительной системы на 7,65%. При этом перепелята опытной группы были активнее, лучше поедали корм, чем птенцы, не получавшие кормового концентрата.

После завершения эксперимента было проведено взвешивание птицы и установлено, что добавление к основному рациону закваски ЭМ-курунга позволило повысить показатели абсолютного прироста массы тела в опытной группе в среднем на 4,2-6,5%. В 45-ти сут. возрасте масса самцов составила 154,6±5,2 г, в контроле – 148,4±4,8 г (р < 0,05), самок 168,2±7,5 г и 157,9±8,7 г соответственно (р < 0,05). При этом перепела опытной группы были более однородны по массе. Масса потрошеной тушки птиц опытной группы была выше контроля на 8,2-9,6% (р < 0,01). Яйценоскость несушек опытной группы в 45-ти сут. возрасте составила 14%, в контроле – 8%, в 75-ти сут. возрасте: 81% и 76%, а в 105-ти сут. возрасте – 86% и 80% соответственно.

Сумма предотвращенного ущерба от падежа составила 792 руб. из расчета на 1000 голов молодняка в течение первого месяца, прибыль от повышения мясной продуктивности – 1240 руб. на 1000 голов молодняка и 11000 руб. – за первые 60 суток яйценоскости на 1000 несушек.

3. ВЫВОДЫ

  1. Пищеварительный тракт перепелят сразу после вывода колонизировали микроорганизмы родов Enterococcus, Escherichia. В ротовой полости их количество составило 2,3±0,4102 и 1,8±0,2102 КОЕ/г, а в толстом кишечнике 2,2±0,4102 и 2,0±0,6102 КОЕ/г соответственно. На третьи сутки обнаружили Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., а также S. saprophyticus и S. aureus.
  2. Микробиоценоз ротовой полости, пищевода, зоба и желудка у клинически здоровых перепелов (45 сут.) был представлен, в основном, кокковой микрофлорой: E. faecalis (3,2±0,5106), E. faecium (3,3±0,7106), S. saprophyticus (7,2±1,3105), S. aureus (3,5±0,8105), а также E. coli (2,8±0,4105). В меньшем количестве регистрировали C. albicans (8,2±1,2104), Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. (7,0±5,8105 КОЕ/г).
  3. Доминирующее положение в микробиоценозе кишечника, слепых отростков и клоаки перепелов занимали Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. (4,0±5,81012 КОЕ/г). В меньшем количестве выделяли E. coli (5,2±0,5106), E. faecalis (2,4±0,4107), E. faecium (5,8±0,4106), C. albicans (7,6±1,7104) и Staphylococcus spp. (8,2±1,1104 КОЕ/г).
  4. При диарейном симптомокомплексе в кишечнике возросло содержание условно-патогенных микроорганизмов: P. vulgaris (5,7±1,5104), K. pneumoniae (3,6±0,8103) и плесневых грибов родов Penicillium и Mucor – 5,2±1,2104 КОЕ/г, на фоне снижения количества Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp. (до 7,0±5,8102–7,0±5,8104 КОЕ/г).
  5. Условно-патогенная микрофлора, выделенная от перепелов с диарейным симптомокомплексом, обладала выраженной патогенностью. Наибольшую вирулентность проявляли культуры Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae и Escherichia coli, вызывающие гибель белых мышей при заражении в дозе 1,0х109 м.т./мл.
  6. Коррекция микрофлоры кормовым концентратом ЭМ-курунга способствовала увеличению содержания лактобацилл и бифидобактерий при одновременном снижении количества условно-патогенных микроорганизмов во всех отделах пищеварительного тракта перепелов, а также стабилизации основных гематологических и биохимических показателей организма.
  7. Микроорганизмы Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp., содержащиеся в кормовом концентрате ЭМ-курунга, обладали выраженной антагонистической активностью в отношении представителей условно-патогенной микрофлоры пищеварительного тракта больных перепелов. Наибольшую антагонистическую активность регистрировали у смешанной культуры Lactobacillus spp.+Bifidobacterium spp. в отношении K. pneumoniae, гемолитических штаммов E. coli, P. vulgaris, S. aureus и Enterococcus spp.
  8. Добавление в рацион перепелам с суточного возраста кормового концентрата ЭМ-курунга из расчета 1 мл на 1 кг живой массы птицы повысило сохранность молодняка до 96,4%, увеличило на 8,9% мясную и на 6,5% яичную продуктивность.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

  1. Для коррекции микробиоценоза пищеварительного тракта с лечебно-профилактической целью рекомендуем добавлять в рацион перепелам с первого дня жизни кормовой концентрат ЭМ-курунга из расчета 1мл закваски на 1кг живого веса птицы ежедневно в течение периода выращивания.
  2. На основании проведенных исследований разработаны методические рекомендации «Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов и его коррекция пробиотиком», рассмотренные научно-техническим советом ИВМиБ ОмГАУ им. П.А. Столыпина и утвержденные на подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Россельхозакадемии (2011 г.).

5. СПИСОК РАБОТ,

ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Шмидт, Г.О. Оптимизация микробиологических показателей воды, используемой для поения сельскохозяйственных животных и птицы/ Г.О. Шмидт, А.Н. Колотило // Ветеринария Кубани. 2011. 1. С. 2627.
  2. Шмидт, Г.О. Биологические свойства микроорганизмов, выделенных из толстого кишечника перепелов в норме и при дисбактериозе / Г.О. Шмидт, В.И. Плешакова // Ветеринарная патология. 2012. 1. С. 61-64.
  3. Шмидт, Г.О. Микрофлора пищеварительного тракта перепелов / Г.О. Шмидт, В.И.Плешакова // Основные проблемы и перспективы развития ветеринарной медицины в обеспечении животноводства Прикаспийского региона Российской Федерации: Межд. науч.-практ. конф. – Дагестан, 2009. – С. 15-17.
  4. Шмидт, Г.О. Видовой состав и возрастная динамика микроорганизмов пищеварительного тракта перепелов / Г.О. Шмидт // Достижения сравнительной, возрастной и видовой морфологии – практике ветеринарной медицины: сб. науч. тр. / ФГОУ ВПО ОмГАУ. – Омск, 2011. – С. 234-237.
  5. Шмидт, Г.О. Повышение продуктивности перепелов с помощью пробиотика / Г.О. Шмидт // Наука и молодежь: новые идеи и решения: Материалы V Межд. науч.-практ. конф. молодых исследователей. – Волгоград, 2011. – С.55-57.
  6. Шмидт, Г.О. Коррекция микрофлоры пищеварительного тракта перепелов с помощью ЭМ-препарата / Г.О. Шмидт //  Интеллектуальный потенциал XXI века: ступени познания: Материалы V Междунар. студенческой науч.-практ. конф. – Новосибирск, 2011. – С.42-45.

______________________________________________________________

Подписано к печати … Формат бумаги 60х84, 1/16.

Печать оперативная. Гарнитура Times New Roman.

Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз.

Отпечатано в редакционно – полиграфическом отделе

Издательство ФГБОУ ВПО ОмГАУ имени П.А.Столыпина

при институте ветеринарной медицины и биотехнологии

644122, г. Омск, Октябрьская, 92.




© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.