WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

ЗУЕВ НИКОЛАЙ ПЕТРОВИЧ

КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ

ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ ТИЛОЗИНА В ВЕТЕРИНАРИИ


06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, 

  эпизоотология, микология с  микотоксикологией

  и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

Краснодар – 2012

Диссертационная работа выполнена в ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии

Научные консультанты: доктор ветеринарных наук, профессор,

член-корреспондент РАСХН,

заслуженный деятель науки РФ

Антипов Валерий Александрович

доктор ветеринарных наук, профессор,

член-корреспондент РАСХН,

заслуженный деятель науки РФ

Шахов Алексей Гаврилович


Официальные оппоненты:  Болоцкий Иван Александрович

доктор ветеринарных наук, профессор,

заведующий лабораторией эпизоотологии ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии

Малышева Людмила Александровна

доктор ветеринарных наук, профессор,

Почетный работник науки и техники РФ,

заведующая кафедрой микробиологии, вирусологии и патанатомии ФГБОУ ВПО Донской государственный аграрный университет

Папуниди Константин Христофорович

доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ и РТ,

Почетный работник высшего профессионального образования РФ, зам. директора Федерального центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности


Ведущая организация: Северо-кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт

Защита состоится 17 мая 2012 года в 10-00 на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу 350044 г. Краснодар, ул. Калинина, 13

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу 350044 г. Краснодар, ул. Калинина, 13

Автореферат размещен на сайте ВАК РФ - http/www.vak.et.gov.ru.

Автореферат разослан «____»______________2012г.

Ученый секретарь

диссертационного совета  Родин И.А.


  1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ



Актуальность исследований. Перевод животноводства на промышленную основу, характеризующуюся качественно новыми методами содержания и эксплуатации, такими как длительным пребыванием животных в закрытых помещениях, высокой концентрацией их на ограниченных производственных площадях, воздействием на организм многочисленных стресс-факторов, отрицательно сказывается на физиологическом состоянии животных, снижая уровень их естественной резистентности, что приводит к возникновению ряда болезней (П.И. Притулин, 1971; А.И. Карелин с соавт., 1974; В.Е. Чумаченко, 1982; В.П. Урбан, 1983; А.Г. Шахов, 1986, 2005 и др.)

Одной из трудно разрешимых проблем крупных животноводческих хозяйств являются желудочно-кишечные и респираторные болезни молодняка, занимающие ведущее место в патологии сельскохозяйственных животных.

В связи с этим дальнейшее изучение этиологии и патогенеза массовых заболеваний животных c гастроэнтеральным и респираторным синдромами, разработка новых эффективных средств терапии больных животных и их профилактики являются весьма актуальными.

Одним из перспективных путей создания новых фармакологических средств является конструирование композиций препаратов. Это направление представляет собой основу ветеринарной фармакологии (Г.В. Кирюткин с соавт.,1997,  М.Д. Машковский, 1998, Т.Н. Ракова, 1999, С.В. Шабунин, 2007;).

Перспективной основой для разработки комбинированных антимикробных средств является группа тилозинсодержащих препаратов, включающая тилозина тартрат, высокоактивные формы фрадизина-40 и 50, повышение антимикробной активности которых за счет синергидного или потенциирующего действия других совместимых с ними компонентов позволит повысить эффективность этиотропной и патогенетической терапии больных животных при указанных патологиях.

Цель и задачи научных исследований. Основной целью настоящей работы было: изучение и внедрение в ветеринарию тилозина тартрата и фрадизина-40(50), эффективных при гастроэнтеритах и пневмониях, а также разработка на их основе комбинированнных препаратов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить влияние технологических стресс-факторов на этиологическую роль бактерий при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка сельскохозяйственных животных.

2. Определить in vitro и in vivo антимикробную активность тилозина тартрата и фрадизина-40(50) в отношении потенциально патогенных бактериальных возбудителей гастроэнтеритов и пневмоний.

3. Провести конструирование препаратов на основе разработанных композиций и изучить их основные фармакотоксикологические свойства.

4. Обосновать возможность применения тилозинсодержащих препаратов при желудочно-кишечных и респираторных болезнях животных и изучить их лечебную и профилактическую эффективность при гастроэнтеритах и пневмониях.

Научная новизна исследований. Впервые разработаны отечественные тилозинсодержащие препараты (тилозина тартрат и фрадизин-50) и их композиции (биофрад и фрадифур) и дано клинико-экспериментальное обоснование использования их для профилактики и лечения телят, ягнят и поросят при желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях, включая кишечные и респираторные инфекции - сальмонеллез, колибактериоз, пастереллез, дизентерию, бордетеллез, стрептококкоз и стафилококкоз. Определена чувствительность возбудителей инфекций к разработанным препаратам и показано in vitro замедление развития к ним устойчивости микроорганизмов в рекомендуемых дозах.

Новизна исследований подтверждена патентами РФ на изобретения  № 2412702 и 2372982.

Практическая значимость исследований. В ветеринарную практику для борьбы с гастроэнтеритами и пневмониями молодняка сельскохозяйственных животных предложены новые препараты: тилозина тартрат, фрадизины-40 и 50, фрадифур и биофрад, обладающие высокой профилактической и (70-95%) и лечебной эффективностью (72-95%).

Практическая значимость проведенных научных исследований подтверждается:

1. Наставлениями на применение тилозина тартрата и фрадизина в ветеринарии, утвержденными ГУВ МСХ СССР (1990г).

2. Утверждением ГУВ МСХ СССР «Методических указаний по диагностике, профилактике и лечению респираторных болезней телят» (1987г) и одобрением Отделением ветеринарной медицины РАСХН «Методических рекомендаций по диагностике, профилактике и лечению дизентерии свиней» (2008г).

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ветфармсовета Департамента ветеринарии МСХ СССР, Межвузовских («Новые фармакологические средства в ветеринарии», Ленинград, 1989; «Новые методы диагностики, способы профилактики и лечения незаразных болезней животных», Воронеж, 1990 «Животноводство и ветеринария», Белгород, 1995); Межрегиональных («Производственный потенциал агропромышленного комплекса и пути улучшения его использования», Воронеж, 1991); Республиканской («Проблемы интенсификации производства молока», Минск, 1991); Всесоюзных («Разработка и применение антибиотиков немедицинского назначения», Москва, 1987; «Повышение продуктивности сельскохозяйственных животных и совершенствование мер борьбы с болезнями в условиях интенсивного ведения животноводства и создания фермерских хозяйств», Харьков, 1991; «Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных», Москва 1991); Межгосударственных («Новые фармакологические средства в ветеринарии», Санкт-Петербург, 1991; 1992; 1993) конференциях и Международном координационном совещании «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных (Воронеж, 1997), Международных («Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения», Белгород, 1997, 1998, 1999; 2000 г; 2001, 2002, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007, 2010, 2011).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 53 научные работы, в том числе 14 в ведущих научных изданиях, рекомендуемых ВАК Минобразования РФ, 2 патента и 1 монография.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 287 страницах компьютерного набора, иллюстрирована 69 таблицами, 29 рисунками и 14 диаграммами. Список литературы включает 415 источников, из них 300 отечественных и 115 иностранных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Этиологическая структура желудочно-кишечных и респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных.

2. Клинико-экспериментальное обоснование применения тилозинсодержащих препаратов.

3. Разработка и результаты изучения комбинированных тилозинсодержащих препаратов биофрад и фрадифур.

4. Лечебная и профилактическая эффективность препаратов тилозина при болезнях молодняка сельскохозяйственных животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. 1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования по теме диссертации проведены на 2347 лабораторных животных, в том числе на 1525 мышах, 780 крысах, 152 кроликах. Исследования в крупных промышленных хозяйствах проведены на 34525 сельскохозяйственных животных и птиц, в т.ч. 17570 свиньях, 11450 телятах, 1525 овцах, 3980 курах.

Лабораторных животных получали из питомников ВАСХНИЛ и АМН СССР, референтные штаммы микоплазм, ахолеплазм из Украинского НИВИ. При изучении антимикробной активности препаратов были использованы также референтные (музейные) и полевые штаммы эшерихий, сальмонелл, пастерелл и стафилококков.

При проведении исследований использовали зарубежные и отечественные простые и комбинированные тилозинсодержащие препараты: фармазин, тилан, тилозина тартрат, фрадизин, фрадифур и биофрад.

Этиологию гастроэнтеритов и пневмоний животных изучали комплексно на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных, результатов бактериологических, серологических, гематологических и иммунобиохимических методов исследований. Для характеристики клинического состояния у животных измеряли температуру тела (ректально), определяли частоту пульса и дыхания, характер носовых выделений и кала. Перед каждым опытом для проведения предварительных морфологических и бактериологических исследований проводили убой двух больных гастроэнтеритами и пневмониями поросят. Кроме того, до и после применения препаратов от 3-5 животных каждой группы брали носовые выделения для изоляции и идентификации микроорганизмов. Тампоны с материалом помещали в пробирки со средой для выращивания микоплазм. Посевы проводили на МПБ, МПА с 5 % крови барана, шоколадный агар, казеиноугольный агар (КУА), агар Эндо, среду Китт-Тароцци, модифицированную среду ВИЭВ с ингибиторами для выделения микоплазм и ахолеплазм. Посевы инкубировали в термостате при 370С. После 18-24 часовой инкубации изучали культурально-биохимические, морфологические и тинкториальные свойства выделенных культур. Патогенность бактерий, кроме микоплазм и ахолеплазм, определяли на белых мышах. Видовую принадлежность изолированных бактерий устанавливали с помощью определителя D. Bergey (1997) и определителя зоопатогенных микроорганизмов под редакцией М.А Сидорова (1995). Типизацию кокковой микрофлоры проводили согласно «Рекомендациям по индикации и идентификации стафилококков и стрептококков» (1976); пастерелл  согласно «Методическим рекомендациям по лабораторной диагностики инфекционных пневмоний свиней, вызванных микоплазмами, пастереллами и бордетеллами» (1983); выделение микоплазм и ахолеплазм в соответствии с «Методическими рекомендациями по выделению, культивированию и идентификации микоплазм, ахолеплазм и уреаплазм» (1981); энтеробактерий с учетом «Наставления по бактериологической диагностике колибактериоза сельскохозяйственных, промысловых животных и птиц» (1974); брахиспиры выделяли и культивировали на ПЖТСЛА (полужидком триптиказослизистом агаре); серологическую типизацию сальмонелл и эшерихий в РА с О-и Н-агглютинирующими сальмонеллезными сыворотками, изготовленными Краснодарской биофабрикой и О-коли сыворотками, изготовленными Армавирской биофабрикой согласно «Наставлению по применению агглютинирующих О-коли сывороток» (1980) и «Методическим указанием по применению сальмонеллезных монорецепторных О-и Н-аглютинирующих адсорбированных сывороток для идентификации сальмонелл» (1978).

Для выявления антител к возбудителям вирусных и хламидийной инфекций использовали стандартные биофабричные антигены: в РСК на хламидиоз и аденовирусную инфекцию - Одесского предприятия по производству бактерийных препаратов, в РТГА на грипп и парагрипп - Ленинградского научно-исследовательского института вакцин и сывороток и Свердловского института вирусных вакцин, для энтеро- и коронавирусов в РН-штаммы вирусов, полученных в Украинском НИВИ и ВГНКИ, а для РНГА- эритроцитарный диагностикум ВИЭВ. Диагностикумы применяли согласно прилагаемым к ним наставлениям.

Для изучения физиолого-биохимических изменений в организме сельскохозяйственных животных при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка сельскохозяйственных животных, а также влияния технологических факторов (транспортировки и перегруппировки) на возникновение и распространение гастроэнтеритов и пневмоний до стрессового воздействия и спустя 1, 10, 15, 30, 35 и 60 дней из кровеносных сосудов брали кровь, в которой исследовали содержание эритроцитов и лейкоцитов на счетчике частиц Культер Каунтер (Франция), гемоглобина - гемометром Сали и гемоглобинцианидным методом, гематокрита на спиральной центрифуге MPV-310 (Польша), СОЭ - по Панченкову, лейкограмму - методом подсчета 200 клеток, окрашенных по Романовскому-Гимза, с вычислением процентного содержания каждого вида, бактерицидную активность сыворотки крови по методу О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), комплементарную активность - по О.В. Бухарину и Н.В. Васильеву (1974), лизоцимную активность по К.А. Каграмановой и З.В. Ермольевой (1966), фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число - по В.С. Гостеву (С.И. Плященко, В.Г. Сидоров, 1979), содержание общего белка - рефрактометрически, белковых фракций сыворотки крови - методом Олла и Маккорда в модификации Карпюка (1962), количественное определение классов иммуноглобулинов - радиальной реакцией преципитации по Манчини (1983), содержание суммарных иммуноглобулинов - по А.Д. Мак Юан с соавторами (1970).

Для установления взаимосвязи зоогигиенических показателей воздуха помещений свиноводческих комплексов с заболеваемостью поросят пневмониями определяли температуру и относительную влажность воздуха психрометром Асмана (МВ-4М), скорость воздуха – кататермометром, содержание аммиака при помощи прибора УГ-2, углекислого газа по Прохорову, бактериальную загрязненность-методом осаждения.

Антимикробную активность тилозинсодержащих и других препаратов (фрадизина, фармазина, тилозина, левомицетина, тетрациклина, пенициллина, стрептомицина, неомицина, мономицина, гентамицина, эритромицина, полимиксина) в отношении референтных штаммов микоплазм, ахолеплазм, а также полевых культур эшерихий, пастерелл и золотистого стафилококка изучали на жидких и плотных питательных средах с применением индикатора 2,3,5 - трифенилтетразолий хлорида с определением бактерицидного и бактериостатического действия препаратов. МБцК определяли путем высева из двух-трех последних пробирок, в которых наблюдали отсутствие роста. Фракционно-ингибирующую концентрацию (ФИК) определяли делением активности композиции препаратов на активность компонента в чистом виде и умножали на долевое содержание компонента в композиции. Чем она меньше, тем сильнее потенцируется данное средство другим, входящим в композицию. Индекс создаваемого соединения определяли сложением ФИК составляющих ингредиентов композиции. Если он меньше единицы, то имеет смысл применять такое средство, чем в отдельности его составляющие.

Фармацевтические исследования проведены в соответствии с принятой технологией лекарственных форм (Н.А. Муравьев, 1988) и требованиями Государственной фармакопеи 10 и 11. Сконструировано 2 порошкообразных тилозинсодержащих препарата.

Оценку безвредности препаратов проводили в соответствии с ГФХ на беспородных белых крысах со средней массой тела 160-250 г. Испытуемые препараты вводили в дозах и сроки, в три раза превышающие терапевтические.

Комплекс токсикологических исследований включал определение острой и хронической токсичности, тератогенного и эмбриотоксического действия. По этим показателям изучено 4 препарата.

В начале, середине и конце экспериментов в крови и сыворотке определяли вышеуказанные морфологические и иммунобиохимические показатели, а у телят, поросят, ягнят и цыплят, кроме того, основные показатели углеводного, липидного, минерального и белкового обменов: глюкозу - ферментативным методом, общие липиды - сульфофосфованилиновым реактивом, мочевину - по реакции с диацетилмонооксимом, бета-липопротеиды-турбодиметрическим методом, холестерол - по Ильку, аминокислоты и другие биологически активные соединения: гидроксипролин, серин, треонин, бета-аминоизобутиловую кислоту, аргинин, триптофан, 3-метилгистидин, гистидин, 1- метилгистидин, лизин, орнитин, аланин, фенилаланин - на автоматическом аминокислотном анализаторе ААА-339 (Франция). Активность щелочной фосфатазы определяли по гидролизу бета-глицерофосфата (по Боданскому), а аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы по Райтману и Френкелю (1957).

Фармакокинетику тилозинсодержащих препаратов изучали на лабораторных - ( крысы) и сельскохозяйственных ( поросята) животных с определением действующего вещества тилозина. Препарат назначали в течение 10 дней в терапевтической дозе. Через 3, 6, 12, 24 и 48 часов после прекращения его введения проводили убой животных и отбирали пробы внутренних органов (печени, почки, селезенки, легких, сердца, желудка, тонкого и толстого кишечника), тканей (кожи, мышцы, крови), содержимого желудка и ободочной кишки. В качестве контроля использовали гомогенаты тех же органов от животных, не получавших препараты. Исследования ДВ - тилозина было проведено спектрофотометрическим методом на спектрофотометре СФ-26 по модифицированной нами методике, ранее разработанной в лаборатории фармакологии и фармации ВНИВИПФиТ Антиповым В.А.(1982г.) совместно с сотрудниками лаборатории химической очистки ВНИИБП (Е.Б. Кругляк, Л. Слепова, Л.М. Апенянская, Г.В. Дембо).

Ветеринарно-санитарная оценка качества мяса включала органолептическую оценку вкусовых качеств мяса и бульона, определение концентрации водородных ионов с помощью рН-метра через 1 час после убоя, бактериальной обсемененности туши методом мазков отпечатков с поверхностных и глубоких слоев мышц, реакций на пероксидазу, формольной и с сернокислой медью.

В опыте на белых мышах изучали влияние тилозинсодержащих препаратов на развитие и течение бордетеллезной, сальмонеллезной, пастереллезной и стафилококковой инфекций. Для воспроизведения инфекций использовали минимальную летальную дозу (DLM). Для определения DLM сальмонелл, пастерелл, бордетелл и стафилококков были подобраны 128 белых мышей. Использовали суточные агаровые культуры, которые смывали физиологическим раствором. Определяли концентрацию микробных клеток по оптическому стандарту мутности и доводили ее для бордетелл и сальмонелл до 1 млрд., пастерелл - 1 млн., стафилококков - 4 млрд. Суспензии микроорганизмов вводили внутрибрюшинно в дозах 0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25; 0,3; 0,35; 0,4. На каждую дозу брали по 4 мыши. При определении индекса защиты (эффективности) препарата использовали формулу В.Д. Белякова (1961):





Е =  100 (А - В),  где Е - индекс защиты;

в

A - процент выживших мышей в опыте;

B - в контроле; в - процент павших мышей в контроле;

В основной опыт по каждому препарату взято 200 белых мышей (20 групп по 10 животных). Минимальная летальная доза для сальмонелл и бордетелл составила 200 млн., пастерелл 250 тыс. и стафилококков 1,6 млрд. микробных клеток. Животных 1 - 5 групп заражали внутрибрюшинно бордетеллами, а 6 - 10 групп - сальмонеллами в дозе 0,2 мл, 11 - 15 пастереллами в дозе 0,25 и 16 - 20 стафилококками в дозе 0,4 мл. Животным 2, 7, 12, 17 групп за 3 часа до заражения, белым мышам 3, 8, 13, 18 одновременно с ним, животным 4, 9, 14 и 19 через 3 часа, мышам 5, 10, 15 и 20 групп одновременно с ним и через 7 часов после заражения вводили в желудок с помощью шприца с иглой с оливой в крахмальной суспензии исследуемые препараты. Кроме того, мышам 5, 10, 15 и 20 групп продолжали вводить препараты 2 раза в день в течение 7 суток. Животные контрольных групп (1, 6, 11 и 16) препараты не получали. За подопытными животными вели наблюдение до гибели, а при ее отсутствии в течение 10 дней, учитывали заболеваемость, падеж и выздоровление. Павших мышей вскрывали и проводили бактериологические исследования крови сердца, почек, печени, селезенки.

Экономическую эффективность применения препаратов тилозина определяли в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (1982).

Полученный цифровой материал подвергали математической обработке с использованием методов математической статистики, принятыми в биологии и медицине (Е.К. Меркурьев, 1964 и пакета прикладных программ Microsoft Excel 97).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Этиологическая структура гастроэнтеритов и пневмоний

молодняка сельскохозяйственных животных

3.1.1. Влияние различных технологических стресс-факторов на

возникновение и распространение болезней молодняка

Для определения влияния различных стресс-факторов на возникновение и распространение заболеваний молодняка с желудочно-кишечным и респираторным синдромами было проведено три серии опытов.

В первом опыте изучали влияние внутрихозяйственных перегруппировок, во втором и третьем - транспортировки и связанных с ними смены условий содержания и кормления на естественную резистентность организма поросят.

Транспортировку животных осуществляли автотранспортом из хозяйств-поставщиков на межхозяйственное предприятие, удаленных друг от друга во 2-ом опыте на 45 и в 3-ем - 15 километров.

У животных до воздействия стресс-факторов и через 15 и 30 дней после него проводили морфологические, биохимические и иммунологические исследования крови.

Проведенными исследованиями установлено, что у поросят под действием перегруппировок (I опыт) происходило снижение бактерицидной активности cыворотки крови через 4 часа исследований на 3,0 и 4,0% (15 и 30 день), фагоцитарного индекса и содержания эритроцитов на 14,0% (15 день). После транспортировки у животных отмечено уменьшение содержание гемоглобина на 17,0 (I опыт, 60 день), 18,0 и 5,0% (2 опыт, 20 и 30 дни), эритроцитов на 16,0 и 13,0% (2 и 3 опыты, 20 дни), лейкоцитов 75,0% (3 опыт), при увеличении их на 38,0% во 2-ом опыте (20 дни), уменьшение фагоцитарного числа на 22,0% (2 опыт,10 день), комплементарной активности на 33,0% (2 опыт, 35 день), лизоцимной 62,0% (2 опыт, 35 день), 48,0 и 59,0% (3 опыт, 10 и 20 дни), бактерицидной активности через 2 часа исследований на 33,0% (2 опыт, 20 день) через 4 часа - 6 и 6 часов - 4,0%, бактерицидной напряженности - 13,0% (2 опыт, 20 день), снижение содержания юных нейтрофилов на 150,0; 48,0 и 100,0% (2 опыт, 10,20, 35 дни) с увеличением последних к 60 дню в 4 раза, а в 3-ем опыте в 3 и 2 раза (10 и 20 дни), уменьшение содержания моноцитов на 64,0 (2 опыт, 10  день), сегментоядерных нейтрофилов на 70,0% (3 опыт, 20день), лимфоцитов 9,0% (2 опыт, 20 день) при возрастании последних на 29,0% (3 опыт, 20 день), а также эозинофилов и палочкоядерных нейтрофилов на 88,0 и 15,0% (2 опыт, 10 и 20 дни).

Во 2-ом опыте гастроэнтеритами и пневмониями заболело 15 (43%), из них пало 9 (60,0%), в 3-ем 12 (76,0%), пало 7 (58,0%), в 1-ом 5 (25,0%), пало 2 (40,0%). Среднесуточные приросты массы тела составили соответственно 276,0; 230,0 и 243,0 г.

Изучение влияния различных зоогигиенических показателей на заболеваемость животных гастроэнтеритами и пневмониями проведено на поросятах групп доращивания. Установлено, что температура воздуха составляла 20,3 (первый корпус) и 21,7 С (второй корпус) относительная влажность 68,1 и 68,4%, скорость движения воздуха 0,16 и 0,12 м/с, содержание углекислого газа 0,18 и 0,15%, аммиака 7,6 и 7,71 мг/м3, бактериальная загрязненность воздуха 90,9 и 111,3 тыс. микробных клеток/м3. Заболеваемость поросят в них соответственно составила 21,1 и 29,8%.

Проведенными исследованиями установлено, что заболеваемость поросят групп доращивания гастроэнтеритами и пневмониями в наибольшей степени зависела от уровня бактериальной загрязненности воздуха помещений.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что перегруппировки и транспортировка снижают естественную резистентность поросят в хозяйствах с промышленной технологией: происходит уменьшение содержания эритроцитов и насыщения их гемоглобином; комплементарной; лизоцимной; бактерицидной активности сыворотки крови и опсонофагоцитарной лейкоцитов.

Проведенными исследованиями периферической крови у больных пневмониями и гастроэнтеритами поросят и телят установлено снижение содержания эритроцитов и гемоглобина при увеличении количества лейкоцитов и гамма-глобулинов.

3.1.2. Роль бактерий в этиологии гастроэнтеритов и пневмоний

молодняка животных

Для определения роли микрофлоры в этиологии и патогенезе болезней молодняка проводили бактериологические исследования каловых масс, носовых выделений от 5 больных гастроэнтеритами и пневмониями телят, ягнят, поросят и цыплят и паренхиматозных органов от убитых с диагностической целью больных животных (n - 5). Из каловых масс больных гастроэнтеритами животных были изолированы и идентифицированы следующие микроорганизмы:

- от поросят - энтеропатогенные эшерихии, сальмонеллы, стафилококки, стрептококки, энтеробактер;

- телят - патогенные эшерихии, сальмонеллы, протей, стафилококки, стрептококки;

- ягнят - патогенные эшерихии, сальмонеллы, стафилококки и пастереллы;

- цыплят - патогенные эшерихии, сальмонеллы и стафилококки;

Из паренхиматозных органов больных гастроэнтеритами выделены:

- от поросят из крови сердца стрептококки; печени - сальмонеллы и неидентифицированная микрофлора; брыжеечных лимфоузлов - патогенные  сальмонеллы;

телят - из крови сердца - пастереллы; печени - сальмонеллы; почек - эшерихии; селезенки - сальмонеллы, стафилококки, протей;

ягнят -из крови сердца патогенные пастереллы; почек - сальмонеллы; селезенки - стафилококки;

цыплят - из крови сердца - стафилококки; печени - сальмонеллы, эшерихии и нетипированная микрофлора; брыжеечных лимфоузлов - сальмонеллы.

При бактериологическом исследовании носовых выделений больных пневмониями животных была изолирована и идентифицирована следующая  микрофлора:

от поросят - эшерихии и сальмонеллы, стафилококки и стрептококки, пастереллы и клебсиеллы, сенная палочка. Патогенными из них оказались первые пять видов;

телят - эшерихии, сальмонеллы, стафилококки, стрептококки, пастереллы, обладающие патогеными свойствами и непатогенная сенная палочка. Из 80% проб была изолирована не дифференцируемая микрофлора, которая в 50% случаев обладала патогенными свойствами;

от ягнят - в 20% случаев эшерихии, сальмонеллы, пастереллы, стрептококки, сенная палочка, в 60% случаев неидентифицированная микрофлора. Первые четыре вида микроорганизмов обладали патогенными свойствами в 20% случаев, а нетипированная микрофлора в 30%.

При бактериологическом исследовании патологического материала (пораженные участки легких, бронхиальные и средостенные лимфоузлы, паренхиматозные органы) от убитых с диагностической целью больных пневмониями животных, была выделена различная микрофлора: из легких поросят были изолированы эшерихии, сальмонеллы, пастереллы, стафилококки, стрептококки, из них сальмонеллы, пастереллы и стрептококки обладали патогенными свойствами в 100% случаев, а эшерихии и стафилококки в 50%; телят - эшерихии, сальмонеллы, пастереллы, стрептококки. Патогенность их была выявлена в 100, 100, 60 и 50% случаев соответственно.

Из легких больных пневмонией ягнят были выделены и идентифицированы эшерихии (патогенные), сальмонеллы (50% патогенные); стрептококки (патогенные).

Проведенными исследованиями установлено, что при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка сельскохозяйственных животных микрофлора каловых масс, носовых выделений и паренхиматозных органов представлена практически одними и теми же таксономическими единицами, отличаясь лишь частотой выделения и степенью патогенности.

Таким образом, в этиологии гастроэнтеритов и пневмоний молодняка сельскохозяйственных животных принимают участие грамположительные (стафилококки) и грамотрицательные (эшерихии, сальмонеллы и т.д.) микроорганизмы, которые, как правило, выделяются в различных сочетаниях.

Несмотря на сходство микрофлоры, выделяемой при указанных патологиях следует отметить, что видовой состав бактерий, изолированных при гастроэнтеритах, более разнообразен. Патогенность возбудителей, выделяемых из каловых масс при гастроэнтеритах была менее выражена по сравнению с таковой у возбудителей пневмоний, выделяемых из носовой слизи. Патогенность микрофлоры изолированной из паренхиматозных органов при гастроэнтеритах и пневмониях мало чем отличалась. На основании клинических наблюдений установлена закономерность в возникновении гастроэнтеритов и пневмоний. Последние, как правило, регистрируются вслед за гастроэнтеритами и часто патология протекает в виде пневмоэнтеритов.

До 70% выделенных бактерий были слабочувствительными или устойчивыми к ранее применяемым с целью лечения препаратам: фармазину, левомицетину, тетрациклину, пенициллину, стрептомицину, неомицину, мономицину, гентамицину, эритромицину, полимиксину, тетрациклину.

Резистентные к химиотерапевтическим средствам штаммы выявлялись у всех микроорганизмов и ко всем применявшимся в опытах препаратам, кроме сульгина и фуразонала. В отдельных случаях регистрировалась перекрестная устойчивость стафилококков, эшерихий и сальмонелл.

Полученные данные по преодолению фуразоналом адаптации возбудителей к препаратам тилозина и другим химиотерапевтическим средствам свидетельствуют о том, что фуразонал препятствует формированию резистентности возбудителей к тилозину и является перспективным с точки зрения создания комбинированных препаратов тилозина.

Установлено, что антимикробная активность тилозина тартрата в комбинации с фуразоналом в отношении возбудителей гастроэнтеритов и пневмонии поросят не изменяется и после 30 пассажей, что свидетельствует об ингибировании плазмид резистентности у исследуемых микроорганизмов с помощью фуразонала.


3.2. Разработка антимикробных композиций на основе тилозина

3.2.1. Антимикробная активность препаратов тилозина, нитрофуранов

и антибиотиков

Результаты изучения антимикробной активности различных модификаций тилозина представлены в таблице 1.

Очищенный от мицелия и культуральной жидкости тилозина тартрат проявляет высокую антимикробную активность в отношении золотистого стафилококка и микоплазм (1,2-5,2 мкг/мл). Представители семейства Enterobacteriaceae - (E. coli, S. ch.suis), а также P. multocida были более устойчивы к препаратам. При пересчете на действующее вещество фрадизины (особенно их концентрированные формы) по сравнению с тилозином были более активны как в отношении грамположительной, так и грамотрицательной микрофлоры, что, по видимому, связано с большим содержанием в них фосфолипидных фракций, обладающих антимикробной активностью.

Кроме того, нами была определена чувствительность возбудителя дизентерии к различным тилозинсодержащим препаратам.

Установлено, что брахиспиры оказались чувствительны к отечественному тилозину в концентрации 15,92±1,59 мкг/мл и слабо чувствительны к фрадизину, фармазину. МБСК колебалась от 18,75±0,00 до 75,00±0,00 мкг/мл).



Таблица 1

Антимикробная активность различных модификаций тилозина

Наименование культур

Кол-во

исследованных культур

Бактериостатическое действие в пересчете на

тилозин в мкг/мл

фрадизин-10

фрадизин-20

фрадизин-50

тилозин тартрат

политилозин-

карбоксилат

E.coli

5

145-190

140-185

125-175

150-200

150-200

S.ch.suis

5

135-145

125-130

120-125

130-190

130-190

P.multocida

5

135-140

120-135

115-125

140-160

140-160

St.aureus

5

1,2-2

1-2

1-2

2-5

2-5

M.hyorhinis

3

3,5-5,2

3,5-5,2

3,5-5,2

3,5-5,2

3,5-5,2

Следовательно, для обеспечения полного терапевтического эффекта тилозина тартрата у свиней со средней тяжестью течения болезни достаточно довести его содержание в толстом отделе кишечника до брахиспиростатической (25,87 мкг/мл). В этом случае организм больного животного способен освободиться от возбудителя дизентерии, подвергшегося воздействию антибиотика.

Выполненные нами 10-кратные пассажи культур брахиспир на полужидком триптиказослизистом агаре (ПЖТСЛА), содержащем возрастающие концентрации тилозина тартрата, показали достаточно медленное формирование устойчивости. Так, через пять пассажей его бактериостатическая концентрация повысилась в 2,9 раза (75,00±0,00 мкг/мл) и через 10 - в 17,4 раза (450,00±0,00 мкг/мл).

Исходя из вышеизложенного можно сделать вывод, что препараты тилозина наиболее эффективны в отношении стафилококков, микоплазм и возбудителя дизентерии свиней Brachispira hyodysenteriae. Активность их в отношении сальмонелл, эшерихий, пастерелл и бордетелл оказалась ниже. Для повышения их антимикробной активности наиболее приемлемым в композиции оказался биовит-120.

Учитывая полученные ранее данные, для дальнейшего изучения были отобраны две композиции: фрадизин плюс фуразонал и фрадизин плюс биовит.

Методом выявления фракционных ингибирующих концентраций и вычисления фракционно-ингибирующей концентрации индекса рассчитаны их оптимальные соотношения.

Установлено, что фракционные ингибирующие концентрации и индекс фрадизина и фуразонала составили для кишечной палочки – 0,1; 0,1; 0,2; сальмонелл – 0,1; 0,1; и 0,2; пастерелл – 0,1; 0,1; и 0,2 соответственно, а аналогичные показатели фрадизина и биовита для кишечной палочки – 0,25; 0,2; 0,45; сальмонелл – 0,3; 0,2; и 0,5; пастерелл – 0,2; 1,9; и 2,1.

На основании представленных выше исследований соотношения для фрадизина и биовита установлены как 1: 1, а для фрадизина и фуразонала 3:1 по действующему веществу.

Исходя из того, что биовит и фуразонал потенцируют антимикробную активность фрадизина и его ДВ тилозин более чем на 50%, его терапевтическая доза по действующему веществу в композиции определена как 5 мг/кг.

Фрадизин также обладает потенцирующим влиянием на фуразонал и биовит и поэтому их дозы в предлагаемых к клиническому изучению композициях также уменьшены на 50% от рекомендуемых существующими наставлениями.

С учетом полученных данных созданы препараты биофрад (фрадизин 40 + биовит-120) и фрадифур (фрадизин-40 + фуразонал).

Проведенными исследованиями установлено, что антимикробная активность фрадифура и биофрада выше, а формирование устойчивости к ним у возбудителей болезней развивается значительно медленнее, чем к фрадизину. Так, после 30 пассажей резистентность кишечной палочки, сальмонеллы и стафилококка к фрадизину увеличилась в четыре, тогда как к фрадифуру-только в два раза.


3.2.2. Фармакотоксикологические свойства тилозинсодержащих

препаратов

Результаты токсикологических исследований тилозинсодержащих препаратов свидетельствуют о том, что они являются малотоксичными, наиболее безопасным способом их введения является энтеральный, а их комбинированные формы в расчетных терапевтических дозах не вызывают каких-либо осложнений в организме животных.

Разработанные препараты при длительном их применении в дозах, трехкратно превышающих терапевтические, не оказывают отрицательного влияния на показатели крови телят, поросят, ягнят. Более того, они способствуют увеличению массы тела лабораторных (крысы) и сельскохозяйственных (поросята, телята, ягнята) животных, а также повышают содержание в крови гемоглобина и комплементарную активность сыворотки крови у поросят группы доращивания.

Препараты тилозина в повышенных дозах не оказывали отрицательного влияния на основные физиологические системы организма. При их применении клинически не регистрировались синдромы и симптомы сердечной недостаточности, на вскрытии не обнаруживали патологоанатомических признаков поражения сердца, верхних и нижних дыхательных путей, легких, различных отделов пищеварительного аппарата, печени, почек и других органов.

Они не обладали местнораздражающими свойствами, эмбриотоксическим и тератогенным действием, препараты не увеличивали показатели пред- и постимплантационной гибели эмбрионов. Однако, при энтеральном применении крысам и поросятам группы доращивания токсических доз (30 мг/кг по ДВ) изучаемых нами препаратов тилозина (тилозина тартрата, фрадизина-40, биофрада и фрадифура) в кале появлялся с-реактивный белок. При использовании профилактических и терапевтических доз экссудативного белка не обнаруживали.

При вскрытии лабораторных животных морфологических изменений органов и тканей не выявляли.

После применения изучаемых препаратов тилозина биохимический состав скелетных мышц лабораторных (крысы) и сельскохозяйственных (поросята) животных существенно не изменялся. Было отмечено лишь увеличение содержания суммы гидролизных аминокислот за счет изолейцина и метионина. Основные показатели, учитываемые при ветеринарно-санитарной экспертизе мышц и органов сельскохозяйственных животных (пробы формольная, пероксидазная и с сернокислой медью), оказались без существенных изменений.

Проведенными исследованиями по изучению фармакокинетики препаратов тилозина установлено, что, тилозин из изучаемых препаратов медленно всасывается в желудочно-кишечном тракте, но, поступив в кровь, равномерно распределяется по органам и тканям. Выделяется он в основном с желчью и тем самым создает в ней повышенные концентрации, которые достигают максимального содержания через 24 часа (второй пик) после применения.

При назначении препаратов тилозина больным дизентерией свиньям концентрации его в сыворотке крови колеблются в незначительных брахиспиростатических пределах. В кале повышенные его количества регистрируются через 3 и 24-48 часов после введения.

После перорального применения препаратов в дозах 5; 10 и 20 мг/кг массы тела установлено, что уже первые две дозы (5 и 10 мг ) создают в кишечном химусе необходимые антимикробные концентрации, губительные для находящихся здесь микроорганизмов, участвующих в патологическом процессе.

3.2.3. Изучение профилактической и химиотерапевтической

эффективности тилозинсодержащих препаратов при

экспериментальных инфекциях белых мышей

Для воспроизведения бордетеллезной, сальмонеллезной, пастереллезной и стафилококковой инфекций использовали минимальную летальную дозу (DLM) возбудителей, которая, для бордетелл и сальмонелл составила 200 млн. микробных клеток в объеме 0,2 мл., пастерелл 250 тыс. - 0,25 мл. и стафилококков 1,6 млрд. в 0,4 мл.

Проведенными исследованиями установлено, что индекс защиты тилозина тартрата, фрадизина, биофрада и фрадифура при их применении за 3 часа до заражения белых мышей был максимальным. При однократном введении препаратов одновременно с заражением он был ниже. Индекс защиты  снижался при однократном применении препаратов через 3 часа после заражения. Введение препаратов одновременно с заражением и спустя 7 часов после него и последующее назначение их в течение 7 суток 2 раза в день обеспечивало довольно высокий индекс защиты. От павших животных из крови миокарда, печени, почек и селезенки реизолировали исходные культуры.

Индекс защиты комбинированных препаратов (биофрада и фрадифура) был выше, чем тилозина тартрата и фрадизина.

Таким образом, применение тилозина тартрата, фрадизина, биофрада и фрадифура за 3 часа до заражения обеспечивает наиболее высокий эффект при профилактике изучаемых инфекций. При однократном введении препаратов тилозина одновременно с заражением и через 3 часа после него индекс защиты меньше, а назначение лекарств одновременно и через 7 часов после заражения и последующее введение его в течение 7 суток обеспечивает сравнительно высокий терапевтический эффект.

3.2.4. Разработка показаний к применению тилозинсодержащих препаратов

3.2.4.1. При гастроэнтеритах и пневмониях бактериальной

этиологии

Основываясь на данных антимикробной активности препаратов тилозина in vitro и in vivo и фармакотоксикологической характеристики проведено изучение их лечебно-профилактической эффективности при массовых болезнях телят, поросят, ягнят и цыплят, сопровождающихся желудочно-кишечными и респираторными расстройствами.

Профилактическую эффективность тилозина тартрата и фрадизина определяли при 7-суточном их введении в дозе 5 мг/кг массы тела животных, а биофрада и фрадифура - 2,5 мг/кг по ДВ (тилозину).

Лечебная эффективность изучена при 10-суточном введении тилозина тартрата и фрадизина в дозе 10 мг/кг массы тела, а биофрада и фрадифура - 5 мг/кг по ДВ (тилозину).

Эффективность препаратов при профилактике гастроэнтеритов изучена в двух сериях опытов. В первой серии эффективность фрадизина, фрадифура и биофрада при профилактике гастроэнтеритов поросят составила от 75 до 85% при 40 %-ой заболеваемости в контроле, гастроэнтеритов телят-75-80% при заболеваемости в контроле 95%; ягнят 80-90% (40%) и цыплят 65-70% (75%).

Во второй серии опытов изучали эффективность фрадизина и тилозина в сравнении с фармазином при профилактике гастроэнтеритов телят. Установлено, что фрадизин и тилозин оказывали профилактический эффект соответственно в 80 и 85% случаев, а фармазин - в 75% при заболеваемости в контроле 45%. Скорость роста телят при использовании тилозина тартрата и фрадизина (250 и 270г) была больше, чем у животных, получавших фармазин (260г) и в контроле (230г). При применении препаратов для профилактики пневмоний у поросят эффективность составила 80-90% , пневмоний телят - 80-85 % и пневмоний ягнят – 70 - 88 % при заболеваемости в контрольных группах 35, 30 и 29% соответственно.

Лечебную эффективность препаратов тилозина определяли при гастроэнтеритах телят, поросят и ягнят. Применение тилозинсодержащих препаратов в дозе 10 мг/кг по ДВ два раза в сутки обеспечило выздоровление 50-60% телят, 73-80 % поросят и 50-70% ягнят (таблица 2).

Под влиянием биофрада в крови телят отмечено увеличение содержания эритроцитов, гемоглобина, общего белка, альбуминов и уменьшение к 15 и 30 дням количества лейкоцитов в зависимости от тяжести воспалительного процесса за счет палочкоядерных нейтрофилов.

В двух других опытах на больных пневмонией поросятах выздоровление наступало в 88 и 80 % случаев. К окончанию курса применения препаратов показатели температуры тела, пульса и дыхания нормализовывались. Рецидивы не наблюдались.

В следующем опыте лечебная эффективность тилозина тартрата и фармазина при пневмониях поросят составила 73-76 %.

При изучении лечебно-профилактической эффективности препаратов тилозина при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка определяли влияние их на функции органов пищеварения и мочеотделения.

Проведенными исследованиями установлено, что физические свойства кала не отличались от таковых контрольных животных. Запах фекалий был естественным, цвет их не изменялся, форма и консистенция до- и после применения препаратов были идентичными.

Таблица 2

Лечебная эффективность тилозинсодержащих препаратов при

гастроэнтеритах и пневмониях молодняка

Применяемые препараты

Было подвергнуто обработке

Количество здоровых животных на конец

опыта

Лечебная эффективность (%)

телят

поросят

ягнят

телят

поросят

ягнят

телят

поросят

ягнят

при гастроэнтеритах

  1. фрадизин

10

15

10

7

11

7

70

75

70

  1. фрадифур

10

15

10

7

12

8

80

80

80

  1. биофрад

10

15

10

8

12

8

80

80

80

  1. биовит

10

15

10

6

7

6

60

46

60

при пневмониях

  1. фрадизин

10

15

10

6

10

7

60

61

70

  1. фрадифур

10

15

10

6

11

8

60

75

70

  1. биофрад

10

15

10

7

11

7

70

75

70

  1. биовит

10

15

10

6

10

6

60

61

60

Химическими исследованиями в кале не установлено увеличения количества желчных (проба с соляной кислотой и полуторахлористым железом, Фуше и Шлезингера) и кровяных (проба с пирамидоном, Вебера, Адлера и Грегенсена) пигментов, не выявлено также положительной реакции на нарушение структуры белков и наличия в сыворотке грубодисперсных глобулинов (пробы Вельтмана, сулемовая и тимоловая). Результаты, полученные указанными качественными реакциями на состояние белкового и пигментного обменов, подтверждались количественными методами исследований (метод Френкеля и Райтмана), результаты которых свидетельствуют об отсутствии токсического действия препаратов на печень.

Установлено, что акты мочеиспускания у поросят и телят всех опытных групп были регулярными, произвольными, безболезненными, в естественной позе. Моча у животных светло-желтого цвета, прозрачная (без примеси слизи и крови), водянистой консистенции, специфического запаха, с концентрацией водородных ионов у свиней 6,5-7,8; а у телят 7,0 – 7.3.


3.2.4.2. При инфекционных болезнях молодняка

Исследуемые препараты были эффективны при колибактериозе, сальмонеллезе, пастереллезе, бордетеллезе, стафилококкозе, дизентерии и стрептококкозе животных. Так, в испытаниях на поросятах профилактическая эффективность тилозина тартрата при пастереллезе составила 93%, при 80%-ной заболеваемости в контроле, а фрадизина-40 при бордетеллезе поросят 95% при заболеваемости в контрольной группе 32% (таблица 3).

Лечебная эффективность тилозина тартрата при эшерихиозах поросят и стрептококкозах цыплят составила 80 и 84%, а контрольного препарата - тилана при эшерихиозе - 73,3 и фрадизина-50 при стрептококкозе цыплят - 89%.

Опыты по изучению лечебно-профилактической эффективности тилозина тартрата были проведены на 126 больных дизентерией поросятах и 309 поросятах, контактировавших с больными животными.

С лечебной целью 10%-ный раствор препарата вводили внутримышечно один раз в день в течение трех суток, а с профилактической - однократно.

Доза антибиотика составляла 20 м/кг массы тела. Диагноз на дизентерию устанавливали с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков болезни, патологоанатомических изменений и световой микроскопии фецес.

Таблица 3

Профилактическая эффективность тилозинсодержащих препаратов

при инфекционных болезнях молодняка

Применяемые препараты

Количество животных в опытной группе

Количество заболевших животных

Количество павших животных

Профилактическая эффективность

Среднесуточный прирост массы тела

Профилактика сальмонелеза поросят

  1. тилозина тартрат

20

3

1

85

220

  1. фрадизин

20

2

-

90

245

  1. фармазин

20

4

1

80

230

  1. контроль

20

10

5

50

210

Профилактика колибактериоза ягнят

  1. тилозина тартрат

15

3

-

80

150

  1. фрадизин

15

2

-

86,7

170

  1. фармазин

15

3

-

80

140

  1. контроль

15

6

2

60

100

Установлено, что на второй день лечения у животных вместо диареи с примесью в фекалиях крови наблюдали жидкие или водянистые испражнения, а в их ректальных пробах обнаруживали единичные брахиспиры. Некоторые животные выздоравливали полностью. На третий день лечения все животные были здоровы. Кал был оформлен, брахиспиры в мазках из фецес не выявлялись, аппетит восстанавливался. Во время опыта два поросенка пало. Причиной их гибели явилось несвоевременное выявление болезни и к моменту лечения, животные были ослаблены, плохо принимали корм и воду. Терапевтическая эффективность тилозинa тартрата составила 98,4%. После проведенного лечения в течение 3-недельного периода наблюдения рецидива заболевания не отмечали.

Контролем эффективности тилозинa тартрата служила группа больных поросят (n-22), которых лечили метронидазолом. Клинические признаки болезни у них исчезли на третий день лечения.

Профилактической обработке при дизентерии подвергли 309 поросят, контактировавших с больными животными. Из секций свинарника удаляли клинически больных поросят и подвергали их лечению, а остальным - одно-кратно инъецировали тилозина тартрат в дозе 20 мг/кг массы тела. Аналогичным животным (n-23) контрольной группы антибиотик не вводили. При клиническом исследовании случаев заболевания свиней дизентерией в опытной группе не регистрировали в течение 3-недель, а в контрольной заболело дизентерией 26% поросят.

Таким образом, поросятам с острым течением дизентерии 10%-ный водный раствор антибиотика целесообразно вводить внутримышечно один раз в день в течение трёх суток в дозе 20 мг/кг массы тела. Однократная инъекция тилозина тартрата в дозе 20 мг/кг массы тела свиньям, подозреваемым в заражении возбудителем дизентерии, профилактирует возникновение заболевания.


4. Выводы

1. Широкое распространение желудочно-кишечных и респираторных болезней (25-76%) в крупных животноводческих хозяйствах обусловлено воздействием на организм животных многочисленных технологических стресс-факторов (транспортировка, перегруппировки, повышенная контаминация помещений микроорганизмами и др.), снижающим естественную резистентность организма, патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, как в отдельности, так и в различных ассоциациях.

В этиологии желудочно-кишечных болезней чаще всего принимают участие: у поросят St.аureus, Е.соli. S.ch. suis, Str.pyogenes и патогенные представители рода Enterobacter; у телят: St.аureus, Е.соli. S.dublin, Str.pyogenes и P.vulgaris; у ягнят: St.аureus, Е.соli, S.dublin, P.multocida; у цыплят: Е.соli, St.аureus.

Причинами респираторных болезней являются: у поросят - St. аureus, Е.соli. S.ch.suis, Str.pyogenes, P.multocida; у телят - St.аureus, Е.соli. S.dublin, Str.pyogenes, P.multocida, B.bronchiseptica; у ягнят - St.аureus, Е.соli. S.dublin, B.bronchiseptica.

2. Выделяемая микрофлора при желудочно-кишечных и респираторных болезнях животных слабочувствительна и нечувствительна к большинству применяемых в ветеринарной практике препаратам (пенициллину, эритромицину, тетрациклину, фармазину, гентамицину, мономицину, неомицину

и т.д.) и часто проявляла к ним множественную устойчивость.

3. Тилозина тартрат и фрадизин обладают широким спектром антимикробного действия, проявляя высокую активность в отношении грамположительной микрофлоры St.аureus, Str.pyogenes и менее выраженную в отношении грамотрицательных бактерий Е.соli. S.ch. suis и представителей рода Enterobacter, а также S.dublin, P.vulgaris, P.multocida, B.bronchiseptica и возбудителя дизентерии Brachispira hyodisenteriae.

Тилозина тартрат и фрадизин обладают профилактической и терапевтической эффективностью при экспериментальных инфекциях белых мышей, вызванных St.аureus, S.ch.suis, P.multocida и B.bronchiseptica. Индекс защиты у тилозина тартрата и фрадизина при профилактике бордетеллезной инфекции составил 63,0 и 71,0%, сальмонеллезной 56,0 и 50,0%, пастереллезной 50,0 и 50,0% и стафилококковой инфекции 80,0 и 67,0%, при лечении соответственно 60,0 и 44,0%; 44,0 и 38,%; 44,0 и 38,0%; 40,0 и 43,0%.

4. Комбинированные препараты биофрад, содержащий тилозина тартрат и тетрациклин в соотношении 1:1 и фрадифур, состоящий из фрадизина и фуразонала в соотношении 3:1 по ДВ, обладают широким спектром антимикробного действия, проявляя более высокую активность, чем тилозина тартрат и фрадизин в отдельности в отношении грамположительной микрофлоры (St.аureus) и менее выраженную в отношении грамотрицательных микроорганизмов (Е. соli,  S. chоlerasuis, S. dublin, P. vulgaris, P. multocida, B. bronchiseptica).

Биофрад и фрадифур обладают более выраженной, чем тилозина тартрат и фрадизин профилактической и лечебной эффективностью при экспериментальных инфекциях белых мышей, вызванных St. аureus, S. chоlerasuis,

P. multocida и B. bronchiseptica. Индекс защиты биофрада и фрадифура при профилактике бордетеллезной инфекции составил 71,0 и 66,0%, сальмонеллезной 78,0 и 75,0%, пастереллезной 78,0 и 43,0% и стафилококковой инфекции 78,0 и 66,0%, а при лечении 57,0 и 50,0%; 33,0 и 62,%; 33,0 и 43,0%; 40,0 и 43,0%.

При комплексном применении тилозинсодержащих препаратов в комбинации с фуразоналом и биовитом-120 медленнее и в меньшей степени формируется устойчивость у изучаемых микроорганизмов (St.аureus, Е.соli, S. chоlerasuis).

5. Препараты тилозина тартрат, фрадизин-40(50), биофрад и фрадифур относятся к 4 классу токсичности при энтеральном способе введения и не оказывают вредного воздействия на организм животных.

При энтеральном введении LD50 для тилозина тартрата составляет 4500 мг/кг, фрадизина-40(50) - 4700 мг/кг, биофрада 5000 мг/кг, фрадифура 4800 мг/кг; подкожном соответственно 1500 мг/кг; 2100 мг/кг; 2500 мг/кг; 2100 мг/кг. При внутрибрюшинном введении тилозина тартрата LD50 составляет 700 мг/кг и внутривенном - 550 мг/кг.

Тилозина тартрат, фрадизин-40(50), биофрад и фрадифур не вызывают тератогенных и эмбриотоксических эффектов, не проявляют вредного действия на организм при энтеральном применении в дозах и сроки в три раза превышающие рекомендуемые для лечения.

Биофрад и фрадифур обладают меньшей токсичностью по сравнению c монотилозиновыми, содержащими один тилозин. Ветеринарно-санитарная оценка мышц и органов животных, длительное время получавших препараты тилозина, позволяет считать мясо и органы безвредными и не имеющими противопоказаний к употреблению их в пищу спустя 5 суток после окончания применения всех изученных средств.

6. Тилозинсодержащие препараты обладают широким фармакологическим действием на организм клинически здоровых и больных животных, характеризуещемся:

- стимуляцией у здоровых и нормализацией у больных животных белкового ( увеличением содержания общего белка на 5-17% и глобулиновых фракций белка у здоровых животных и уменьшением уровня бета- и гамма-глобулиновых фракций до физиологических границ у больных; повышением содержания свободных аминокислот в крови) обмена веществ;

- увеличением показателей клеточной и гуморальной защиты (опсонофагоцитарной реакции лейкоцитов, комплементарной, лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови) на 5 - 15 %;

7. Фармакокинетика тилозинсодержащих препаратов характеризуется достижением максимальной концентрации действующего вещества - тилозина - в органах и тканях спустя 3-6 часов после применения и выведением его с желчью, мочой и калом в течение 24-48 часов.

Высокая концентрация тилозина при внутреннем назначении препаратов в дозах 5 и 10 мг/кг массы тела (по ДВ) сохраняется в желудочно-кишечном тракте в течение суток, а в органах и тканях она значительно ниже и неравномерна распределена.

В печени высокая концентрация тилозина наблюдается в первые 3-12 часов, которая более стабильна и по сравнению с уровнем в других органах сохраняется в последующие 24 часа, что свидетельствует о разрушении препарата и выведении его из организма с желчью.

8. Применение тилозинсодержащих препаратов клинически здоровым животным после воздействия технологических стресс-факторов сопровождается повышением общей неспецифической резистентности организма и приростом массы тела на 5-15%.

Препараты тилозина предупреждают возникновение гастроэнтеритов у поросят в 75 - 80%, телят в 85 - 90%, ягнят в 75 - 85% , цыплят в 80 - 85% и кроликов в 85 и 90% случаев; (при назначении тилозина тартрата и фрадизина-40);

гастроэнтеритов поросят в 85-95%, телят 90-95%, ягнят 85-90% , цыплят  85-90% случаев; пневмоний поросят в 85-95%, телят 80-95%, ягнят 85-90% случаев, (биофрад и фрадифур). 

9. Применение тилозинсодержащих препаратов в стационарно неблагополучных хозяйствах предупреждает возникновение: стрептококкоза кур в 89% при назначении тилозина тартрата; в 88% случаев - фрадизина-40; колибактериоза ягнят в 80% при использовании тилозина тартрата и в 87% случаев фрадизина-40; сальмонеллеза поросят: в 85% - тилозина тартрата, в 90% случаев - фрадизина-40, дизентерии поросят в 100% случаев при применении тилозина тартрата, пастереллеза телят в 72% - тилозина тартрата и в 80% фрадизина-40(50) случаев, энзоотической пневмонии поросят - в 90% тилозина тартрата и 95% при использовании фрадизина-50 случаев.

Тилозинсодержащие препараты обладают выраженной терапевтической эффективностью, которая составляет при гастроэнтеритах поросят бактериальной этиологии 90-95%, телят 85-90%, ягнят 80-85%, цыплят 85-90%, при пневмониях поросят 72-80%, телят 80-85%, ягнят 75-85% ( при применении тилозина тартрата и фрадизина-40); при гастроэнтеритах поросят 95-100%, телят 90-95%, ягнят 80-90% (биофрада и фрадифура) ; при стафилококкозе кроликов 80% тилозина тартрата и 85% фрадизина-50, стрептококкозе поросят 80%, эшерихиозе кроликов в 85% тилозина тартрата, дизентерии поросят 98,4% тилозина тартрата, эшерихиозе поросят 80% тилозина тартрата. Выздоровление животных сопровождается увеличением содержания в крови эритроцитов, гемоглобина, лимфоцитов, бета-глобулинов, повышением фагоцитарной активности лейкоцитов, комплементарной, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови на 5,0-15,0%.


Практические предложения

Применение препаратов тилозина (тилозина тартрата, фрадизина, биофрада и фрадифура) рекомендуется:

- при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка в соответствии с разработанными и утвержденными ГУВ МСХ СССР наставлениями (1990г) и «Методическими указаниями по диагностике, профилактике и лечению респираторных болезней телят» (1988).

- при дизентерии свиней согласно «Методическим рекомендациям по диагностике, лечению и профилактике»(2009).

- при колибактериозе, сальмонеллезе, пастереллезе, бордетеллезе, стафилококкозе, стрептококкозе в разработанных дозах и схемах.


Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Зуев Н.П. Профилактическая эффективность фрадизина-50 и влияние его на организм поросят/ Н.П. Зуев//Тезисы докладов Всесоюзной конференции г. Москва, 9-10 декабря 1987 г. «Разработка и применение антибиотиков немедицинского назначения». – С. 67-69.

2. Шахов А.Г. Лечебная эффективность фрадизина-40 при респираторных болезнях свиней/ А.Г. Шахов, Н.П. Зуев //Сборник научных трудов «Терапия и профилактика незаразных болезней сельскохозяйственных животных при их интенсивном использовании» Воронеж, 1988 г., С. 116-119.

3. ОСТ «Поросята. Технология ветеринарного обеспечения при получении и выращивании»./М., 1988; Утверждено Госкомитетом СССР по стандартам.

4. Зуев Н.П. Применение фрадизина - 50 при болезнях свиней/ Н.П. Зуев, А.Г. Шахов, В.А. Антипов.//Тезисы докладов к 1-ой межвузовской научно-практической конференции», Ленинград, 1989. – С. 8-9.

5. Шахов А.Г. Фрадизин - 50 при пневмонии поросят (профилактика, лечение)/ А.Г. Шахов, В.А. Антипов, Н.П. Зуев, Ю.Н. Бригадиров, Э.Г. Положенко // Ветеринария. - Ноябрь 1991. С. 54 56.

6. Зуев Н.П. Влияние фрадифура на структуру тканей и органов лабораторных животных/ Н.П. Зуев,//Тезисы докладов к 5-ой межгосудартсвенной межвузовской научно-производственной конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии».// Санкт-Петербург, 1993г. – С. 111.

7. Шахов А.Г. Эффективность биофрада при пневмониях поросят/ А.Г. Шахов , Г.И. Сергеев, Н.П. Зуев, Ю.Н. Бригадиров// Материалы межвузовской конференции «Животноводство и ветеринария, Белгород, 1995г. – С. 87.

8. Зуев Н.П. Влияние фрадизина -40(50) на иммунологические показатели крови свиней/ Н.П. Зуев // Материалы межвузовской конференции «Животноводство и ветеринария, Белгород, 1995 г. – С. 78.

9. Зуев Н.П. Иммунологические исследования сыворотки больных пневмонией поросят/ Н.П. Зуев, П.И. Бреславец //Тезисы докладов международной научно-произвоственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». Белгород. 1997 г. – С. 129.

10. Зуев Н.П. Влияние фрадизина-50 на основные метаболические процессы в организме поросят/ Н.П. Зуев, М.В. Розовенко//Тезисы докладов международной научно-произвоственной конференции». Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. Белгород. 1997. – С. 19.

11. Зуев Н.П. Взаимосвязь зоогигиенических показателей животноводческих помещений с заболеваемостью поросят бронхопневмонией /Н.П. Зуев, М.Е. Павлов, Р.А. Мерзленко, В.А. Сыровицкий// Тезисы докладов 2-международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. Белгород, 1998 г. – С. 63.

12. Павлов М.Е. Определение уровня обмена веществ и неспецифической устойчивости организма свиней в условиях совхоза «Губкинский»/ М.Е. Павлов, В.В. Концевенко, Н.П. Зуев// Тезисы докладов 2-международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». Белгород, 1998 г. – С. 119-120.

13. Зуев Н.П. Влияние фрадизина 40-(50) на микрофлору носовой слизи больных бронхопневмонией поросят/ Н.П. Зуев// Тезисы докладов 2-международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». Белгород, 1998 г. – С. 92.

14. Зуев Н.П. Влияние тилозинсодержащих препаратов на аминокислотный обмен у поросят/ Н.П. Зуев, В.В. Дронов//Материалы межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов посвященной 30-летию ВГАУ им. Н.Д. Глинки. Воронеж 2003г. – С. 18-119.

15. Зуев Н.П. Сравнительная клинико-морфологическая характеристика больных гастроэнтеритами, пневмониями и пневмоэнтеритами молодняка сельскохозяйственных животных/ Н.П. Зуев//Материалы конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» 7-я международная научно-производственная конференция (25-28 марта 2003 г), Белгород, Россия. – С. 167.

16. Зуев Н.П. Изучение привыкания микроорганизмов, выделенных от больных гастроэнтеритами, пневмониями и пневмоэнтеритами, к наиболее часто применяемым препаратам/ Н.П. Зуев//Материалы конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» 7-я международная научно-производственная конференция (25-28 марта 2003 г).Белгород, Россия. – С. 168.

17. Зуев Н.П. Этиология желудочно-кишечных болезней молодняка/ Н.П. Зуев//Материалы конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» 7-я международная научно-производственная конференция (25-28 марта 2003 г), Белгород, Россия. – С. 169.

18. Зуев Н.П. Этиология пневмоэнтеритов молодняка сельскохозяйственных животных/ Н.П. Зуев//Материалы конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» 7-я международная научно-производственная конференция (25-28 марта 2003 г), Белгород, Россия. – С. 170.

19. Зуев Н.П. Кожно-резорбтивное, аллергенное и раздражающие свойства тилозинсодержащих препаратов/ Н.П. Зуев, Р.А. Мерзленко//Материалы конференции «Проблемы с.-х. производства на современном этапе и пути их решения» 27-31 октября 2003г. – С. 105.

20. Зуев Н.П. Состав препарата фрадизин-40/ Н.П. Зуев,//Материалы конференции «Проблемы с.-х. производства на современном этапе и пути их решения». 27-31 октября 2003 г. – С. 107.

21. Зуев Н.П. Сравнительная антимикробная активность различных препаратов тилозина /Н.П. Зуев// Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003г, Ульяновск. – С. 170.

22. Зуев Н.П. Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия препаратов тилозина /Н.П. Зуев //Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003г, Ульяновск. – С. 174.

23. Зуев Н.П. Основные фармакотоксикологические свойства препаратов тилозина / Н.П. Зуев // Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003 г. Ульяновск. – С. 180.

24. Зуев Н.П. Влияние тилозинсодержащих препаратов на структуру органов и тканей животных/ Н.П. Зуев// Материалы международной научно-практической конференции. «Актуальные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003 г, Ульяновск. – С. 182.

25. Зуев Н.П. Влияние препаратов тилозина на электрофизиологическую активность сердечной мышцы/ Н.П. Зуев// Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003г, Ульяновск. – С. 184.

26. Зуев Н.П. Влияние токсических доз тилозинсодержащих препаратов на элементы физиологических систем организма животных/ Н.П. Зуев// Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин». 25-26 октября 2003 г, Ульяновск. – С. 185.

27. Зуев Н.П. Применение препаратов тилозина при гастроэнтеритах и пневмониях кроликов/Н.П. Зуев, В.Г. Плотников//«Кролиководство и звероводство» №3, 2004г. С. 25.

28. Зуев Н.П. Влияние фрадизина-50 на функции органов пищеварения и мочеотделения / Н.П. Зуев, В.Д. Буханов//Материалы конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» 10-я международная научно-производственная конференция (15-19 мая 2006 года), Россия, Белгород. – С. 16.

29. Зуев Н.П. Чувствительность возбудителя дизентерии к тилозинсодержащим препаратам / Н.П. Зуев, В.Д. Буханов, А.В. Логачев// Россия, Белгород, Бюллетень научных работ, 2006г, выпуск 5. – С. 47.

30. Зуев Н.П. Терапевтическая эффективность композиционных тилозинсодержащих препаратов в остром опыте/ Н.П. Зуев, В.Д. Буханов//Материалы первого съезда ветеринарных фармакологов России (21-23 июня 2007 года), Воронеж, 2007 г. – С. 307-311.

31. Зуев Н.П. Совместимость и свойства ингредиентов при создании комбинированных тилозинсодержащих препаратов/Н.П. Зуев, В.Д. Буханов //Материалы первого съезда ветеринарных фармакологов России (21-23 июня 2007 года), Воронеж, 2007г. – С. 316-319.

32. Шахов А.Г. Применение тилозинсодержащих препаратов при дизентерии свиней/ А.Г. Шахов, Н.П. Зуев, В.Д. Буханов// Ветеринария, 2007г, №7. С. 22-27.

33. Зуев Н.П. Разработка антимикробных композиций на основе тилозинсодержащих препаратов и изучение их профилактической и лечебной эффективности при желудочно-кишечных и респираторных болезнях животных бактериальной этиологии/ Н.П. Зуев, А.Г. Шахов, В.Д. Буханов//Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях», г. Воронеж, 17-19 сентября 2008 года. – С. 137-143.

34. Зуев Н.П. Экспертиза мяса кроликов при применении препаратов тилозина/ Н.П. Зуев, В.Г. Плотников, Зуев С.Н. и др.// «Кролиководство и звероводство» №3, 2008 г.  С. 31.

35. Зуев Н.П. Экологическая безопасность применения тилозинсодержащих препаратов в овцеводстве/ Н.П. Зуев, П.П. Корниенко, и др.// Научно-производственный журнал «Овцы, козы, шерстяное дело» №2, 2008 г. С. 76-79.

36. Зуев Н.П. Получение и разработка антимикробных композиций на основе тилозинсодержащих препаратов/ Н.П. Зуев //Международный научно практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии «Ветеринарная патология» №3 (26), 2008 г. С. 97100.

37. Зуев Н.П. Экологическая безопасность применения тилозинсодержащих препаратов в животноводстве/ Н.П. Зуев// Международный научно - практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии «Ветеринарная патология» №4 (27), 2008 г. С. 85-89.

38. Зуев Н.П. Экологическая безопасность применения тилозинсодержащих препаратов в свиноводстве / Н.П. Зуев, Г.С. Походня, С.Н. Зуев // Свиноводство, 2008 г. С. 31-32.

39. Патент на изобретение № 2372982 «Способ удаления белковых соединений из водных растворов». В.Д. Буханов, А.И. Везенцев, А.И. Шапошников, Н.П. Зуев и др. // М.,  ФГУ ФИПС, 2009г., Бюл. №32.

40. Зуев Н.П. Методы профилактики и лечения при желудочно-кишечных и респираторных болезнях молодняка сельскохозяйственных животных. Учебное пособие для самостоятельной работы студентов /Н.П. Зуев, Н.В. Безбородов, С.Н. Зуев и др.// Белгород, БелГСХА, 2009г. – 108 с.

41. Антипов В.А. Биологическое действие и использование тилозина/ В.А. Антипов, Е.М. Ахламов, Н.П. Зуев, А.Г. Шахов.// Ростов-на Дону, 2009г. – 45 с.

42. Скворцов В.Н. Дизентерия свиней. Методические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике/ В.Н. Скворцов, Д.В. Юрин, А.А. Титов, Н.П. Зуев и др. // г. Москва: ВИЭВ, 2009 г. Одобрены и рассмотрены на заседании секции «Инфекционная патология животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН «26» августа 2008 г, протокол №2. – 29 с.

43. Шахов А.Г. Система ветеринарно-санитарных мероприятий в промышленном молочном скотоводстве/ А.Г. Шахов, В.А. Антипов, Н.П. Зуев и др. - Белгород, БелГСХА, 2010 г. – 89 с.

44. Буханов В.Д. Применение фитоаскоминералосорбента при колибактериозе телят и дизентерии свиней/ В.Д. Буханов, А.И. Везенцев, А.А. Шапошников, В.Н. Скворцов, Н.П. Зуев, Л.А. Козубова, Н.А. Воловичева, Г.В. Фролов Белгород, Научно рецензируемый журнал Научные ведомости Белгородского государственного университета; Серия Естественные науки.2010г. №9(80). Выпуск 11. С. 99-103.

45. Зуев Н.П. Экологическая безопасность применения тилозинсодержащих препаратов в скотоводстве/ Н.П. Зуев, Г.С. Походня, Я.П. Масалыкина, С.Н. Зуев // Журнал «Зоотехния», 2011 г., Москва, № 10. С. 19.

46. Зуев Н.П. Применение тилозина при гастроэнтеритах у ягнят/ Н.П. Зуев, В.Ю. Ковалева и др.// Материалы конференции (23-26 мая 2011 года) Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. – С. 105.

47. Зуев Н.П. Фармакокинетика препаратов тилозина/ Н.П. Зуев, В.Ю. Ковалева и др.// Материалы конференции (23-26 мая 2011 года) «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». – С. 104.

48. Патент на изобретение №2412702 Композиционный препарат для профилактики и лечения гастроэнтеритов поросят, Зуев Н.П., Безбородов Н.В., Буханов В.Д., Скворцов В.Н., Зуев С.Н. и др. // М., ФГУ ФИПС, 2011 г., Бюл. №6.

49. Зуев Н.П. Создание комбинированных препаратов тилозина/ Международный научно - практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии «Ветеринарная патология» №3, 2011 г. С. 131-133 .

50. Зуев Н.П. Влияние фрадизина-50 на общую неспецифическую резистентность свиней/ Н.П. Зуев, С.Н. Зуев //Международный научно - практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии «Ветеринарная патология» №3, 2011 г.    С. 128-130.

51. Зуев Н.П. Применение тилозинсодержащих препаратов в пчеловодстве/Зуев Н.П., Зуева Е.Н.// Вестник Алтайского государственного аграрного университета № 1 (88), 2012. С. 54.4

52. Зуев Н.П. Изучение химиотерапевтического действия препаратов тилозина/Зуев Н.П., Зуева Е.Н.// Вестник Алтайского государственного аграрного университета № 2 (88), 2012. С. 77

53. Антипов В.А. Клинико-экспериментальное обоснование применения препаратов тилозина в ветеринарии/ В.А. Антипов, Н.П. Зуев, В.М. Бреславец, С.Н. Зуев // Монография, Белгород, 2011 г. – 136 с.
























Отпечатано в ООО Издательско-полиграфический центр
«ПОЛИТЕРРА»

Подписано в печать 12.04.2012 г. Формат 60х90116

Печать офсетная. Усл. печ. л. 2,0, Тираж 120 экз. Заказ № 883

г. Белгород, пр. Б.-Хмельницкого, 137, корпус 1, офис 357

тел.: 35-88-99*401, 8-910-360-14-99






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.