WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

Юрин Дмитрий Васильевич

Экспериментальное и клиническое обоснование применения ципрофлоксацина при лечении сальмонеллеза и колибактериоза свиней

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Белгород - 2012

Работа выполнена в Белгородском филиале Государственного научного учреждения «Всероссийский научно – исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии)»

Научный руководитель:                доктор ветеринарных наук

                                               Скворцов Владимир Николаевич

Официальные оппоненты:

Карайченцев Виктор Николаевич, доктор ветеринарных наук, ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я. Горина», кафедра научно-технического прогресса, профессор

Скогорева Анна Михайловна, кандидат ветеринарных наук, доцент, ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. императора Петра I», кафедра паразитологии и эпизоотологии, доцент

Ведущая организация:         ГНУ «Всероссийский научно - исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН»

Защита состоится «16» мая 2012 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.02 при ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я. Горина» по адресу: 308503, Белгородская обл., Белгородский р-н, пос. Майский, ул. Вавилова 1.

Тел./факс – (4722) 39–22–62

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я. Горина»

Автореферат разослан « » апреля 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Резниченко Людмила Васильевна

  1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Значительную проблему для современного животноводства представляют желудочно-кишечные болезни свиней бактериальной этиологии. Доминирующее положение среди этой группы заболеваний занимают сальмонеллез и колибактериоз свиней. Наносимый ими экономический ущерб может достигать больших размеров за счет высокой смертности, снижения приростов, а также затрат на лечение и профилактику (М.А. Сидоров, 1991; С.И. Прудников и Т.М. Прудникова, 1998; Е.В. Колотова, 2008). На долю этой патологии приходится 60-70 % от общего числа заболеваний поросят.

Общепринятая система мер борьбы с данными заболеваниями предусматривает наряду с применением специфических средств широкое использование различных химиотерапевтических средств, как в отдельности, так и в различных сочетаниях. Зачастую лечение осложняется тем, что возбудители приобретают устойчивость к широко применяемым антимикробным препаратам (Н.А. Солдатенко, 1996; Л.И. Ефанова, 1997; Б.В. Виолин и соавт., 2001; А.Г. Шахов, 2003; Н.А. Лагуткин, 2006; Garau J. et all., 1999; Oppegaard H., 2001; Wasyl D. and Hoszowsri A., 2004). В связи с этим постоянно возникает необходимость разработки и внедрения новых, более эффективных этиотропных препаратов.

Большой интерес в этом плане представляют антимикробные препараты группы фторхинолонов, одним из представителей которых является ципрофлоксацин.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы явилась разработка метода терапии сальмонеллеза и колибактериоза свиней ципрофлоксацином. Исходя из этого, перед нами были поставлены следующие задачи:

  1. Изучить чувствительность эпизоотических штаммов сальмонелл и эшерихий к ципрофлоксацину и определить его бактерицидное действие в отношении этих микроорганизмов.
  2. Определить некоторые параметры фармакокинетики ципрофлоксацина в организме поросят при различных способах введения.
  3. Установить сроки выведения остаточных количеств ципрофлоксацина из организма свиней.
  4. Определить острую токсичность ципрофлоксацина для лабораторных животных.
  5. Выяснить терапевтическую и профилактическую эффективность ципрофлоксацина при экспериментальном сальмонеллезе и колибактериозе лабораторных животных.
  6. Определить терапевтическую эффективность ципрофлоксацина при сальмонеллезе и колибактериозе поросят.

Научная новизна. Определена чувствительность микроорганизмов, выделенных от животных, к ципрофлоксацину. Изучено бактериостатическое и бактерицидное действие ципрофлоксацина в отношении возбудителей сальмонеллеза и колибактериоза поросят. Установлена перекрестная устойчивость между различными фторхинолонами в отношении сальмонелл и эшерихий. Изучены особенности распределения ципрофлоксацина в организме свиней при парентеральном и пероральном введении. Выяснены сроки выведения остаточных количеств препарата из организма свиней. На моделях экспериментального сальмонеллеза и колибактериоза белых мышей, а также на поросятах, больных сальмонеллезом и колибактериозом, изучена терапевтическая эффективность ципрофлоксацина.

Практическая значимость. Апробирован антимикробный препарат – ципрофлоксацин для лечения сальмонеллеза и колибактериоза свиней. Материалы диссертации вошли в методические рекомендации «Фармакологические аспекты применения фторхинолонов при бактериальных болезнях животных» (Рассмотрены и одобрены на заседании секции «Инфекционная патология животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН 30 сентября 210 г., протокол №3).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных статей, в том числе 3 - в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 145 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 20 таблицами и 2 рисунками. Список использованной литературы включает 294 источника, в том числе 143 иностранных авторов.

       На защиту выносятся следующие положения:

  1. Антимикробная активность ципрофлоксацина, в отношении микроорганизмов, выделенных от животных.
  2. Некоторые параметры фармакокинетики ципрофлоксацина в организме свиней.
  3. Терапевтическая активность ципрофлоксацина при экспериментальных инфекциях белых мышей.
  4. Лечебная эффективность ципрофлоксацина при сальмонеллезе и колибактериозе поросят.

2. Собственные исследования

2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в Белгородском филиале ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко РАСХН (ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии) в соответствии с планом НИР по «Программе фундаментальных и прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ на 2006-2010 гг. в соответствии с заданием 08.02.01.05 «Разработать химиотерапевтический препарат для лечения желудочно - кишечных и респираторных болезней животных бактериальной этиологии».

В исследованиях было использовано 454 поросенка в возрасте от 1,5 до 2,5 месяцев, а также 348 беспородных белых мышей массой 19-22 грамма.

Бактериологические исследования проводили в соответствии с общепринятыми нормами в микробиологии (Д.И. Скородумов с соавт., 2005).

Видовую принадлежность выделенных микроорганизмов изучали с помощью набора «ENTEROtest 16» («PLIVA – Lachema a.s.», Brno, Чехия).

Серологическую принадлежность выделенных культур сальмонелл и эшерихий определяли с помощью набора соответствующих агглютинирующих сывороток (Б.И. Антонов с соавт.,1986).

Определение чувствительности выделенных микроорганизмов к ципрофлоксацину проводили диско-диффузионным методом в соответствии с методическими указаниями «Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам» МУК 4.2.1890-04 (2004).

Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) антимикробных препаратов определяли методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде, а также при использовании HiComb Strip – теста (HiMedia Laboratories Pvt. Limited, Индия).

Бактерицидное действие фторхинолонов определяли методом отмывания с помощью центрифугирования (Г.Н. Першин, 1971).

Развитие устойчивости микроорганизмов к ципрофлоксацину проводили методом многократного пассирования с возрастающими концентрациями препарата в питательной среде.

Параметры фармакокинетики ципрофлоксацина исследовали на здоровых поросятах 1,5-2,5-месячного возраста.

Определение концентрации ципрофлоксацина в биологических субстратах проводили методом диффузии в агар с помощью тест-культуры Bacillus subtilis ATCC 6633.

Острую токсичность ципрофлоксацина изучали на 108 беспородных белых мышах, массой 19–22 г. при различных методах введения (А.Д. Третьяков с соавт., 1988). Вычисление параметров острой токсичности производили по методу Литчфилда и Уилкоксона (М.Л. Беленький, 1959).

Терапевтическую и профилактическую эффективность ципрофлоксацина in vivo определяли в предварительных опытах на модели генерализованной инфекции белых мышей, вызванной Salmonella choleraesuis, Salmonella typhimurium и Escherichia coli.

Терапевтическую эффективность ципрофлоксацина изучали на 203 больных сальмонеллезом поросятах 1,5-2 - месячного возраста.

Опыты по определению терапевтической эффективности ципрофлоксацина при колибактериозе поросят проведены на 178 животных 2-7 - дневного возраста.

Расчеты по определению экономической эффективности применения ципрофлоксацина при сальмонеллезе и колибактериозе свиней проведены согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (Ю.Е. Шатохин и др., 1997).

Полученные результаты обработаны общепринятыми методами математической статистики.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Антимикробная активность ципрофлоксацина в отношении

микроорганизмов, выделенных от животных

Исследования по изучению чувствительности микроорганизмов к ципрофлоксацину показали, что все выделенные культуры сальмонелл (Salmonella choleraesuis и Salmonella typhimurium) были высокочувствительны к препарату. Аналогичные данные были получены и в отношении штаммов Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus spp., Staphylococcus aureus и Staphylococcus intermedius.

Анализируя результаты исследований, проведенные со штаммами Escherichia coli, можно констатировать, что из 72 штаммов, выделенных от свиней, 63 (87,5%) были чувствительны к ципрофлоксацину, 5 (6,9%) – имели промежуточные значения чувствительности, и 4 штамма (5,6%) оказались устойчивыми.

Значительно менее чувствительными к препарату были культуры Staphylococcus hyicus. Из 42 выделенных штаммов только 25 (59,5%) были чувствительны к ципрофлоксацину, один (2,4%) имел промежуточную чувствительность и 16 (38,1%) оказались резистентными.

Полученные in vitro результаты свидетельствуют о высокой чувствительности выделенных микроорганизмов к ципрофлоксацину, что позволило продолжить его изучение.

Результаты исследований показали, что МПК ципрофлоксацина для выделенных сальмонелл (Salmonella choleraesuis и Salmonella typhimurium) составила 0,008-0,015 мкг/мл.

Высокочувствительными к препарату оказались культуры Pasteurella multocida, Proteus vulgaris и Klebsiella pneumoniae (МПК 0,004–0,008 мкг/мл), а также эшерихии и псевдомонады (МПК 0,01-0,47 мкг/мл).

Установлена высокая антимикробная активность ципрофлоксацина и в отношении грамположительных микроорганизмов. Так, в концентрациях от 0,001 до 0,01 мкг/мл препарат задерживал развитие штаммов Erisipilotrix rhusiopatiae и Streptococcus spp. МПК ципрофлоксацина для чувствительных стафилококков колебалась в пределах 0,01-0,5 мкг/мл.

Несколько меньшую чувствительность к антимикробному препарату имели штаммы Streptococcus parauberis и Listeria monocytogenes, для которых МПК равнялась 0,25 мкг/мл.

Таким образом, можно сделать вывод, что ципрофлоксацин проявляет высокую антимикробную активность в отношении сальмонелл, эшерихий, пастерелл, стрептококков, стафилококков стрептококков и возбудителя рожи свиней.

Определяя минимальные бактерицидные концентрации (МБК) ципрофлоксацина в отношении возбудителей сальмонеллеза и колибактериоза поросят, нами установлено, что они для Salmonella choleraesuis и Salmonella typhimurium превышали МПК в 3-4 раза и составляли 0,16-0,24 и 0,03-0,06 мкг/мл соответственно. Аналогичные показатели для штаммов Escherichia coli находились в пределах 0,2 - 0,92 мкг/мл, и превысили значение МПК в два раза. Полученные данные свидетельствуют о том, что ципрофлоксацин обладает выраженным бактерицидным действием.

       Проведенными исследованиями по изучению перекрёстной устойчивости установлено, что в отношении сальмонелл и эшерихий между ципрофлоксацином, энрофлоксацином и норфлоксацином наблюдается перекрестная резистентность.

2.2.2.  Концентрация ципрофлоксацина в сыворотке крови поросят после однократного внутримышечного и перорального введений

В первом опыте было определено содержание ципрофлоксацина после внутримышечного введения в дозах 2,5 и 5 мг/кг массы тела. В исследованиях находилось 8 поросят (2 группы по 4 головы) 2,5-месячного возраста. Кровь для определения концентрации ципрофлоксацина брали через 1, 2, 4, 8, 12, 24 и 36 часов после введения препарата.

Полученные данные показали, что максимальные концентрации ципрофлоксацина в сыворотке крови наблюдались в первые 4 часа после инъекции независимо от дозы. В дальнейшем наблюдалось постепенное снижение уровня препарата. Так, через восемь часов после введения его концентрация равнялась 0,76 и 0,84 мкг/мл соответственно. К 12 часам уровень препарата понизился до 0,56 и 0,52 мкг/мл соответственно. Спустя сутки после инъекции ципрофлоксацина он регистрировался в концентрациях 0,18 и 0,22 мкг/мл. Через 36 часов препарат в сыворотке крови не обнаруживался.

Во втором опыте была определена концентрация ципрофлоксацина в сыворотке крови поросят после однократного перорального введения. Опыт был проведен на 8 здоровых поросятах 2,5-месячного возраста. Животные были разделены на 2 группы (по 4 головы), которым препарат вводили перорально через желудочный зонд в дозах 5 и 10 мг/кг массы тела.

Данные опыта свидетельствуют о том, что всасывание препарата происходило несколько медленнее, чем при внутримышечном введении. Так, через один час после перорального введения ципрофлоксацина его не удалось обнаружить в сыворотке крови. Через два часа после введения препарата он регистрировался в крови в концентрации 0,32 и 0,46 мкг/мл соответственно. Максимальные концентрации препарата регистрировались через 4 часа после введения и составляли соответственно 0,58 и 0,84 мкг/мл. В дальнейшем происходило снижение уровня ципрофлоксацина. Через 12 часов после введения в дозе 10 мг/кг массы тела концентрация препарата в сыворотке крови была ещё на довольно значительном уровне (0,48 мкг/мл). В то же время при назначении препарата в дозе 5 мг/кг массы тела его концентрация составляла 0,12 мкг/мл.

Спустя сутки после введения препарата в дозе 5 мг/кг массы тела его не удалось обнаружить в сыворотке крови. Вместе с тем, при введении этого химиотерапевтического средства в дозе 10 мг/кг массы тела его удалось обнаружить и через 24 часа в концентрации 0,14 мкг/мл. Зарегистрировать присутствие ципрофлоксацина в сыворотке крови поросят в последующие часы не удалось.

Таким образом, после внутримышечного и перорального введения ципрофлоксацина его концентрация в сыворотке крови поросят в течение 24 часов превышает бактериостатическую для большинства этиологически-значимых возбудителей.

2.2.3.  Распределение ципрофлоксацина в организме свиней

Распределение ципрофлоксацина в организме свиней было изучено в двух сериях опытов при внутримышечном и пероральном введениях.

В первом опыте было определено содержание ципрофлоксацина после внутримышечного введения в дозах 2,5 и 5 мг/кг массы тела.

В опыте было использовано 12 поросят (4 группы по 3 головы) 2,5-месячного возраста, которых убивали через 12 и 24 часа после однократного внутримышечного введения ципрофлоксацина. Объектами исследования служили легкие, печень, почки, мышцы, кишечник, желчь и моча.        

Полученные данные указывают на хорошее проникновение ципрофлоксацина в органы, ткани и биологические жидкости поросят. Так, через 12 часов после введения в дозе 2,5 мг/кг массы тела он обнаруживался во всех исследованных образцах в концентрациях от 0,27 мкг/г (мышцы) до 4,25 мкг/мл (моча). Примечательно, что даже спустя 24 часа после введения препарата его присутствие обнаруживалось во всех (за исключением мышц) пробах, в концентрации 0,12-1,12 мкг/г (мкг/мл).

При увеличении дозы препарата до 5 мг/кг массы тела его концентрация в органах и тканях также достоверно повышалось. Так, через 12 часов после инъекции препарата его содержание в исследованных пробах достигало 0,4-6,35 мкг/мл. Спустя сутки после введения ципрофлоксацин обнаруживался во всех (за исключением мышц) пробах, а его концентрация колебалась в пределах 0,2-1,7 мкг/г (мкг/мл).

Во втором опыте были исследованы особенности распределения ципрофлоксацина в организме свиней после перорального введения. Опыт был проведен на 12 здоровых поросятах 2,5-месячного возраста, которых разделили на четыре группы. После однократного перорального введения ципрофлоксацина в дозах 5 и 10 мг/кг массы тела животных убивали через 12 и 24 часа. Объектами исследования служили легкие, печень, почки, мышцы, кишечник, желчь и моча. Результаты проведенных исследований показали, что через 12 часов после введения препарата в дозе 5 мг/кг массы тела он был обнаружен во всех исследуемых образцах. Концентрация препарата колебалась от 0,14 мкг/мл (мкг/г) до 5,44 мкг/мл (мкг/г). Спустя 24 часа он регистрировался только в желчи и моче (0,18 и 0,96 мкг/мл соответственно).

У поросят, убитых спустя 12 часов после введения препарата в дозе 10 мг/кг массы, его концентрация в исследуемых пробах находилась в пределах 0,48-8,3 мкг/мл (мкг/г). Через 24 часа ципрофлоксацин удалось зарегистрировать во всех (за исключением мышц) исследуемых пробах в концентрациях 0,18-1,34 мкг/г, превышающих бактериостатические для большинства этиологически значимых микроорганизмов.        

2.2.4. Определение остаточных количеств ципрофлоксацина

в организме свиней

Остаточные количества препарата в организме свиней изучались в трёх опытах. Объектами исследования служили кровь, мышцы, сердце, легкие, печень, почки, подкожный жир, желчь, моча и фекалии.

В первом опыте длительность выведения ципрофлоксацина из организма свиней после внутримышечного введения в дозе 7,5 мг/кг массы тела один раз в сутки в течение 5 дней изучали на трех группах поросят (по 3 головы в каждой). После пятой инъекции препарата животных убивали через 24, 48 и 72 часа.

Полученные данные показывают, что у поросят, убитых через 24 часа после прекращения введения препарата, ципрофлоксацин обнаруживался во всех исследованных органах, тканях и биологических жидкостях, кроме подкожного жира. При этом уровень препарата колебался в пределах от 0,12 мкг/г до 22,14 мкг/мл (мкг/г). Спустя 48 часов ципрофлоксацин был обнаружен в желчи (0,24 мкг/мл), моче (0,98 мкг/мл) и фекалиях (0,12 мкг/г). У поросят, убитых через 72 часа после последнего введения ципрофлоксацина, его наличие установить не удалось.

Во втором опыте препарат давали перорально в смеси с кормом в концентрации 200 мг/кг в течение 10 дней. В опыте находилось 12 поросят. Животных (по 4 головы) убивали через 24, 48 и 72 часа после последнего введения.        

Полученные данные свидетельствуют о том, что у поросят, убитых через 24 часа после прекращения дачи ципрофлоксацина, его обнаруживали почти во всех исследуемых (за исключением мышц и подкожного жира) органах, тканях и биологических жидкостях в концентрациях 0,1-4,2 мкг/мл (мкг/г). Спустя 48 часов следы ципрофлоксацина регистрировались только в моче. В органах, тканях и биологических жидкостях поросят, убитых через 72 часа, препарат не обнаруживался.

В третьем опыте ципрофлоксацин вводили перорально с питьевой водой в концентрации 200 мг/л воды в течение 10 суток. У поросят, убитых через 24 часа после дачи ципрофлоксацина, он обнаруживался во всех исследуемых пробах (кроме подкожного жира) в концентрациях от 0,08 до 8,6 мкг/мл (мкг/г). Через 48 часов препарат регистрировался только в моче в концентрации 0,82 мкг/мл. В органах, тканях и биологических жидкостях поросят, убитых через 72 часа, ципрофлоксацин обнаружить не удалось.

Проведенные исследования показали, что при внутримышечном введении ципрофлоксацина в дозе 7,5 мг/кг массы тела один раз в сутки в течение пяти дней, а также при 10-суточном пероральном введении в дозах 200 мг/кг корма и 200 мг/л воды, он полностью выводится из организма свиней в течение трех суток.

2.2.5. Определение острой токсичности ципрофлоксацина

для лабораторных животных

Острая токсичность ципрофлоксацина была изучена на 108 белых мышах при подкожном и пероральном введении. Парентерально ципрофлоксацин инъецировали в дозах от 1000 до 2600 мг/кг массы тела, интервал между дозами 200 мг/кг. Перорально препарат вводили в дозах 2000–6000 мг/кг массы тела (интервал между дозами 500 мг/кг). На каждую дозу было взято по 6 мышей. За животными наблюдали в течение 14 суток.

Парентеральное введение ципрофлоксацина в дозах 1000–1200 мг/кг массы тела не приводило к гибели белых мышей, однако отмечались признаки острой интоксикации. Гибель 50% животных наступала при введении препарата в дозе 1600 мг/кг массы тела. Ципрофлоксацин в дозе 2600 мг/кг массы тела вызывал гибель всех подопытных мышей. LD50 в этом опыте составила 1650 (1422–1914) мг/кг массы тела.

При пероральном введение препарата в дозах 2000–2500 мг/кг массы гибель животных не наступала. При назначении ципрофлоксацина в дозе 3000 мг/кг массы тела были зарегистрированы признаки острой интоксикации и гибель отдельных животных. Применение препарата в дозе 4000 мг/кг массы тела вызывала гибель 50% подопытных мышей. 100% животных погибало при введении препарата в дозе 6000 мг/кг массы тела. LD50 в данном опыте составила 3300 (2661-4092) мг/кг массы тела.

Из полученных результатов следует, что согласно ГОСТ 12.1.007-76 ципрофлоксацин относится к III классу токсичности (вещества умеренно опасные).

2.2.6. Терапевтическая эффективность ципрофлоксацина

при экспериментальном сальмонеллезе белых мышей

Модель генерализованной инфекции воспроизводили внутрибрюшинным введением суточных культур микроорганизмов в концентрации 10 млн. микробных тел в 1 мл (Salmonella choleraesuis) и 150 млн. микробных тел в 1 мл (Salmonella typhimurium).

В первом опыте по определению терапевтической эффективности ципрофлоксацина при экспериментальном сальмонеллезе белых мышей, вызванном Salmonella choleraesuis, находилось 4 группы по 10 мышей в каждой. Подкожную инъекцию препарата производили однократно, непосредственно после заражения в форме 0,1% раствора в дозах: первой группе – 2,5 мг/кг массы тела, второй – 5 и третьей – 7,5 мг/кг массы тела. Четвертая группа служила контролем.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что наибольший терапевтический эффект получен в третьей группе мышей, в которой суммарная продолжительность жизни равнялась 88% (высокоактивная доза). Во второй группе этот показатель составил 75% (активная доза). При подкожном введении препарата в дозе 2,5 мг/кг массы тела, выживших не было, и суммарная продолжительность жизни мышей равнялась 32% от максимально возможной, тогда как в контрольной группе значение этого показателя не превышало 7%.

Второй опыт был проведен по аналогичной схеме, но экспериментальную инфекцию вызывали культурой Salmonella typhimurium. Полученные экспериментальные данные показали, что выжившие мыши были только в третьей группе, которым ципрофлоксацин инъецировали в дозе 7,5 мг/кг массы тела. Суммарная продолжительность жизни в этой группе равнялась 84% (высокоактивная доза). В группе мышей, которым препарат вводили в дозе 5 мг/кг массы тела, суммарная продолжительность жизни составила 60% (активная доза). При инъекции препарата в дозе 2,5 мг/кг массы тела суммарная продолжительность жизни мышей составила 35% от максимально возможной. В контрольной группе этот показатель не превышал 14%.

2.2.7. Профилактическая эффективность ципрофлоксацина при экспериментальном сальмонеллезе белых мышей

В первом опыте изучали профилактическую эффективность ципрофлоксацина на модели сальмонеллезной инфекции у белых мышей, внутрибрюшинно зараженных Salmonella choleraesuis. Исследование проводили на четырех группах беспородных белых мышей по 10 голов в каждой. Ципрофлоксацин вводили подкожно в дозе 5 мг/кг массы тела: первой группе за 1 час до заражения, второй – за 3 часа и третьей – за 6 часов до заражения.

Наибольшая профилактическая эффективность ципрофлоксацина при экспериментальном сальмонеллезе белых мышей наблюдалась при его введении за 1 час до заражения (активная доза). В этом случае суммарная продолжительность жизни опытных мышей составила 56% от максимально возможной при 12% в контроле. Несколько меньшая эффективность наблюдалась при введении препарата в той же дозе за 3 и 6 часов до заражения (активные дозы). В этом случае в опытных группах суммарная продолжительность жизни составила 46% и 42% соответственно, что указывает на их умеренное профилактическое действие.

Во втором опыте определяли профилактическую эффективность ципрофлоксацина при экспериментальном сальмонеллезе лабораторных животных, вызванном Salmonella typhimurium. Препарат вводили по той же схеме, что и в первом опыте.

Экспериментальные данные показали, что при подкожном введении ципрофлоксацина в дозе 5 мг/кг массы тела за 1 час до заражения суммарная продолжительность жизни мышей составила 51% от максимально возможной (активная доза) при 13% в контроле. В группе мышей, которым препарат вводили за 3 часа до заражения, суммарная продолжительность жизни равнялась 41% от максимальной (активная доза). Введение ципрофлоксацина за 6 часов до заражения было наименее эффективным. В этой группе суммарная продолжительность жизни опытных мышей не превышала 25%, что указывает на неудовлетворительную профилактическую эффективность препарата (неактивная доза).

2.2.8. Терапевтическая эффективность ципрофлоксацина

при экспериментальном колибактериозе белых мышей

Опыт проведен на трех группах по 10 мышей в каждой. Генерализованную инфекцию вызывали внутрибрюшинным заражением мышей полевым штаммом Escherichia coli в концентрации 500 млн. микробных тел в 1 мл. Препарат вводили сразу после заражения подкожно однократно в дозах: первой группе – 5 мг/кг массы тела; второй – 7,5; третьей – 10 мг/кг массы тела. Четвертая группа была контрольной, лечению не подвергалась.

Из полученных данных видно, что наибольшая терапевтическая эффективность была получена в третьей группе, в которой по завершении эксперимента остались живыми 6 мышей, а суммарная продолжительность жизни равнялась 75% (активная доза). Во второй группе за период наблюдений пало 6 мышей, а суммарная продолжительность жизни составила 51% (активная доза). В первой группе животных, которым ципрофлоксацин инъецировали в дозе 5 мг/кг массы тела, наблюдалась 100% смертность, а суммарная продолжительность жизни животных была 21% (слабоактивная доза).

2.2.9. Профилактическая эффективность ципрофлоксацина при экспериментальном колибактериозе белых мышей

Исследования проведены на четырех группах мышей по 10 особей в каждой. Ципрофлоксацин инъецировали подкожно однократно в дозе 7,5 мг/кг массы тела: первой группе мышей за 1 час до заражения, второй – за 3 часа и третьей – за 6 часов до заражения. Четвертая группа мышей служила контролем. Данные исследования показывают, что ципрофлоксацин в дозе 7,5 мг/кг массы тела оказывает умеренное профилактическое действие при введении за 1 час до заражения (активная доза). При этом суммарная продолжительность жизни опытных мышей составляла 47% от максимально возможной при 5% в контроле. Подкожная инъекция препарата в указанной дозе за 3 и 6 часов до заражения оказывала минимальное профилактическое действие (слабоактивные дозы). В этих группах общая продолжительность жизни опытных мышей не превышала соответственно 34% и 21% от максимума.

При этом к концу опыта выживших животных не было ни в одной группе, а из всех исследованных проб крови, печени, почек и селезенки была выделена исходная культура Escherichia coli.

2.2.10. Терапевтическая эффективность ципрофлоксацина

при лечении поросят, больных сальмонеллезом

Терапевтическая эффективность ципрофлоксацина при сальмонеллезе исследована на больных поросятах 40-45-суточного возраста, для чего было сформировано 3 группы животных, отобранных по принципу аналогов. Поросятам первой группы (n=67) ципрофлоксацин вводили внутримышечно один раз в сутки в течение 5 дней в дозе 5 мг/кг массы тела.

Животным второй группы (n=74) препарат вводили в той же дозе, но два раза в сутки в течение 5 дней.

Поросята третьей группы (n=62) служили положительным контролем. Животным этой группы два раза в сутки в течение 5 дней вводили внутримышечно гентамицин в дозе 5 мг/кг массы тела.

За опытными животными в течение 20 дней вели клиническое наблюдение, учитывая изменения общего состояния, аппетита, температуры тела, сроки выздоровления, падеж и вынужденный убой. Для контроля среднесуточного прироста проводили контрольное взвешивание.

В этом опыте наиболее высокая лечебная эффективность ципрофлоксацина была получена во второй группе. В данной группе за период наблюдения выздоровело 68 (91,9%) поросят, 4 (5,4%) пало и 2 (2,7%) были вынужденно убиты. У животных этой же группы наблюдался и самый высокий среднесуточный прирост живой массы (256 г).

Хороший терапевтический эффект был получен в первой группе. Из 67 поросят выздоровело 59 (88,1%), пало 5 (7,5%) и 3 (4,4%) вынужденно убито. Среднесуточный прирост в этой группе составил 250 грамм.

В третьей группе поросят, которых лечили гентамицином, была получена наименьшая лечебная эффективность. В данной группе наблюдался наиболее высокий отход молодняка. Так, из 62 голов пало 7 (11,3%) и вынужденно убито 9 (14,5%). К концу опыта выздоровело лишь 46 (74,2%) поросят. Следует также отметить, что среднесуточный прирост в данной группе был минимальным (231 г.).

Наибольшая экономическая эффективность (8,4 руб. на один рубль затрат) получена в первой группе. Во второй группе этот показатель равнялся 5,88 руб. и в третьей – 5,52 рубля.

Таким образом, ципрофлоксацин, по сравнению с гентамицином, показал более высокую терапевтическую эффективность при лечении свиней, больных сальмонеллезом.

2.2.11. Терапевтическая эффективность ципрофлоксацина

при лечении поросят, больных колибактериозом

В опыте по изучению лечебной эффективности ципрофлоксацина при колибактериозе находилось 3 группы больных поросят 3-суточного возраста.

Поросятам первой группы (n=64) ципрофлоксацин вводили внутримышечно в дозе 7,5 мг/кг массы тела один раз в сутки в течение 5 дней. Животным второй группы (n=58) препарат вводили в той же дозе, но два раза в сутки в течение 5 дней. Третья группа поросят (n=56) служила положительным контролем, их лечили гентамицином, который инъецировали внутримышечно в дозе 5 мг/кг массы тела два раза в сутки в течение 5 дней. За опытными поросятами вели наблюдение в течение 20 дней, учитывая изменения общего состояния, аппетита, температуры тела, сроки выздоровления или падеж. В начале и конце опыта проводили взвешивание поросят.

Полученные данные свидетельствуют о том, что эффективность терапии в первой и второй группах, которых лечили ципрофлоксацином, оказалась выше, чем в контрольной группе, где животных лечили гентамицина сульфатом. Самый высокий лечебный эффект получен во второй группе. Из 58 опытных животных за период наблюдения выздоровело 54 (93,1%), а 4 (6,9%) пало. У животных этой же группы наблюдался и самый высокий среднесуточный прирост живой массы (125 г).

В первой группе из 64 поросят выздоровело 56 (85,5%) и 8 (12,5%) пало. Среднесуточный прирост в этой группе составил 120 грамм.

Наименьшего успеха мы добились при лечении поросят в третьей группе. Так, из 56 животных признаки выздоровления наблюдались только у 40 (71,4%) поросят, при этом падеж достиг 16 голов (28,6%). Одновременно наблюдался и самый малый прирост массы тела, который не превышал 117 г. в сутки.

Наибольшая окупаемость терапевтических мероприятий (7,98 руб. на 1 рубль затрат) получена в первой группе. Во второй группе этот показатель составил 6,5 руб., а в третьей – экономическая эффективность проведенного курса лечения гентамицином не дала положительных результатов.

3. Выводы

       1. Ципрофлоксацин in vitro обладает широким спектром антимикробного действия в отношении микроорганизмов, выделенных от больных свиней. МПК препарата в отношении возбудителей сальмонеллеза и колибактериоза свиней составляет 0,008-0,01 и 0,01-0,25 мкг/мл соответственно. Минимальная бактерицидная концентрация ципрофлоксацина превышает значение МПК в 2-4 раза.

       2. Ципрофлоксацин быстро всасывается при парентеральном и пероральном введениях, достигая максимальных концентраций в сыворотке крови свиней через 1-4 часа. Концентрация препарата в крови превышает бактериостатические для возбудителей сальмонеллеза и колибактериоза свиней.

       3. После однократного внутримышечного (5 мг/кг массы тела) и перорального (10 мг/кг массы тела) введений ципрофлоксацина свиньям он регистрируется во всех тканях и биологических жидкостях в течение 24 часов в концентрациях, превышающих бактериостатические для этиологически значимых микроорганизмов.

       4. При парентеральном и пероральном введении ципрофлоксацин полностью выводиться из организма свиней в течение трех суток.

       5. Ципрофлоксацин относится к III классу токсичности - вещества умеренно опасные.

       6. При экспериментальном сальмонеллезе белых мышей ципрофлоксацин проявляет высокую терапевтическую эффективность в концентрации 7,5 и 5 мг/кг массы тела (высокоактивная и активная дозы). Наибольшее профилактическое действие при экспериментальном сальмонеллезе препарат проявил при его введении в дозе 5 мг/кг массы тела за 1 час до заражения.

       7. При экспериментальном колибактериозе белых мышей наибольшую терапевтическую активность ципрофлоксацин оказывает при его назначении в дозах 10 и 7,5 мг/кг массы тела (активные дозы). Максимальное профилактическое действие наблюдается при введении препарата в дозе 7,5 мг/кг массы тела за 1 час до заражения лабораторных животных.

       8. Ципрофлоксацин, применяемый внутримышечно в дозе 5 мг/кг массы тела один раз в сутки в течение 5 дней является высокоэффективным терапевтическим средством при сальмонеллезе поросят. Экономическая эффективность лечения составляет 8,4 руб. на 1 рубль затрат.

       9. Применение ципрофлоксацина при колибактериозе поросят в дозе 7,5 мг/кг массы тела один раз в сутки в течение 5 дней обеспечивает высокий терапевтический эффект и наибольшую окупаемость (7,98 руб. на 1 рубль затрат) терапевтических мероприятий.

4.        Практические предложения

Материалы диссертации вошли в методические рекомендации «Фармакологические аспекты применения фторхинолонов при бактериальных болезнях животных» (Рассмотрены и одобрены на заседании секции «Инфекционная патология животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН 30 сентября 2010 г., протокол №3).

Для терапии больных сальмонеллезом свиней ципрофлоксацин рекомендуется применять внутримышечно в дозе 5 мг/кг массы один раз в сутки в течение 5 дней.

С целью лечения поросят, больных колибактериозом, рекомендуется внутримышечное введение ципрофлоксацина в дозе 7,5 мг/кг массы тела один раз в сутки в течение 5 дней.

  1. Список работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ:

1.        Сафонова Н.А. Чувствительность и резистентность E. coli, выделенных от животных, к антимикробным препаратам / Н.А. Сафонова, А.А. Балбуцкая, В.Н. Скворцов, Д.В. Юрин, В.В. Маханев // Ветеринарная патология. - 2010. - №2(33),- С. 45-47.

2.        Скворцов В.Н. Определение остаточных количеств ципрофлоксацина в организме свиней / В.Н. Скворцов, Д.В. Юрин // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. – 2011. – №12 (86), - С. 65-66.

3.        Скворцов В.Н. Фармакокинетика ципрофлоксацина в организме свиней после однократного перорального введения / В.Н. Скворцов, Д.В. Юрин // Известия Оренбургского ГАУ. – 2012, Вып 33 №1.- С. 98-100.

Статьи в сборниках научных трудов и материалах конференций:

4.        Юрин Д.В. Острая токсичность ципрофлоксацина для лабораторных животных / Д.В. Юрин, В.Н. Скворцов // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения: Мат. X Межд. науч. – произв. конф. (15-19 мая 2006 года). – Белгород, 2006, Т. 1, - С. 69.

5.        Юрин Д.В. Развитие устойчивости у эшерихий к ципрофлоксацину in vitro / Д.В. Юрин, В.Н. Скворцов // Новые средства в ветеринарии: Мат. XII межд. науч. - произв. конф. – Санкт Петербург, 2006. - С. 84.

6.        Юрин Д.В. Развитие устойчивости у сальмонелл к ципрофлоксацину in vitro / Д.В. Юрин, В.Н. Скворцов // Новые средства в ветеринарии: Мат. XIX Межд. науч. - произв. конф. – Санкт Петербург, 2007. - С. 46.

7.        Юрин Д.В. Концентрация ципрофлоксацина в сыворотке крови поросят / Д.В. Юрин, В.Н. Скворцов // Новые средства в ветеринарии: Мат. XIX Межд. науч. - произв. конф. – Санкт Петербург, 2007. - С. 46-47.

8.        Юрин Д.В. Терапевтическая эффективность ципрофлоксацина при экспериментальном колибактериозе белых мышей / Д.В. Юрин, В.Н. Скворцов, В.В. Маханев // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения: материалы XIII Межд. науч. – произв. конф. (19-22 мая 2009 года) – Белгород, 2009. - С. 91.

9.        Юрин Д.В. Эффективность ципрофлоксацина при экспериментальном сальмонеллезе / Д.В. Юрин, В.Н. Скворцов // Новые фармакологические средства в ветеринарии: Мат. XXI Межд. науч. - произв. конф. – С-Пб., 2009. - С. 93-94.

10.        Юрин Д.В. Лечение экспериментального сальмонеллеза белых мышей, индуцированного Salmonella typhimurium / Д.В. Юрин, В.Н. Скворцов, В.В., В.В. Маханев // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения: Мат. XIV Межд. науч. – произв. конф. (23-26 мая 20011 года) – Белгород, 2011. - С. 103.

11.        Юрин Д.В. Лечение сальмонеллеза свиней ципрофлоксацином // Бюлл. науч. работ БелГСХА. – 2011. Вып. 28. – С. 49-51.




© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.