WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Игуменщев Петр Александрович

Антимикробное и инсекто-акарицидное

действие биоцида Агро-Велт 

и его применение на объектах ветнадзора

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

06.02.05 – ветеринарная санитария, экология, зоогигиена

и ветеринарно-санитарная экспертиза

А в т о р е ф е р а т
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук

Москва – 2012

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГБОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

  Грязнева Татьяна Николаевна

Официальные оппоненты: Мирзаев Микаиль Нурбагандович - 

  доктор биологических наук, профессор,  ФГБОУ ВПО 

  МГАВМиБ, заведующий научно-исследовательской

  лабораторией иммунобиотехнологии;

  Бондаренко Владимир Олегович - доктор биологических наук, ФГБУ ««Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», ведущий научный сотрудник отдела качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных.

  Ведущая организация:  ГНУ «Всероссийский научно-исследова-тельский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко».

Защита состоится  20 сентября 2012 г. в 10.00 ч. на заседании  диссертационного совета Д.220.042.01 при ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина», по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан «____» ___________ 2012 года и размещен на сайте http://www.vak.ed.gov.ru.

Ученый секретарь

диссертационного совета

  Грязнева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ



Актуальность темы. Разработка и применение на объектах ветнадзора комплексных биоцидов с антимикробным и инсекто-акарицидным действием имеет важное значение, т.к. подобные средства позволяют не только обеззараживать окружающую среду от патогенных микроорганизмов, но и уничтожать членистоногих, являющихся переносчиками возбудителей инфекционных болезней человека и животных (Смирнов А.М., 2006; Иванова Е.Б., 2011, Шандала М.Г., 2011).

По данным Россельхознадзора, в последние годы в РФ наблюдается ухудшение эпизоотической ситуации по трансмиссивным природно-очаговым болезням животных. В значительной мере, предпосылками этого являются рост импорта животных, нарушения ветеринарно-санитарных мероприятий на объектах ветнадзора, недостаточная эффективность используемых вакцинных и лекарственных препаратов. Поэтому, дезинфекция, дезинсекция и дезакаризация как способ профилактики инфекционных болезней животных, приобретает все большую значимость.

С учетом отмеченного, изучение эффективности новых биоцидов в качестве антибактериальных, противогрибных и инсекто-акарицидных средств при профилактике инфекционных болезней животных представляет собой актуальную задачу для ветеринарии.

Цель и задачи исследований. Цель исследований – определение антимикробного и инсекто-акарицидного действия комплексного биоцида Агро-Велт и оценка его эффективности при дезинфекции, дезинсекции и дезакаризации объектов ветнадзора.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить основные свойства Агро-Велта, определяющие перспективность его использования для дезинфекции и дезинсекции объектов ветнадзора.

2. Определить антибактериальную и противогрибную активность Агро-Велта in vitro.

3. Определить инсекто-акарицидное действие Агро-Велта в отношении разных видов насекомых и клещей в лабораторных условиях.

4. Изучить острую и хроническоую токсичность Агро-Велта для теплокровных животных.

5. Определить микрофлору организма насекомых и клещей, собранных в лесопарковой и лесной зонах Москвы и Московской области.

6. Изучить антимикробное и инсектицидное действие Агро-Велта в условиях лесопарковой зоны г. Москвы.

7. Провести производственные испытания Агро-Велта на объектах ветнадзора.

8. Разработать технологические режимы дезинфекции, дезинсекции и дезакаризации биоцидом Агро-Велт объектов ветнадзора.

9. Разработать проект нормативной документации на Агро-Велт с целью регистрации его для применения на территории РФ.

Научная новизна.

1. Впервые, для ветеринарной практики предложено комплексное дезинфицирующее средство с инсекто-акарицидным действием на основе субстанции «Велтон» и циперметрина, перспективное для обеззараживания и дезинсекции окружающей среды при профилактике трансмиссивных природно-очаговых инфекционных болезней животных.

2.  Установлено, что Агро-Велт обладает высокой смачивающей и проникающей способностью, не проявляет коррозионного действия, белковый индекс средства позволяет проводить обеззараживание окружающей среды без предварительной механической очистки поверхностей.

3. Доказано, что Агро-Велт безвреден для теплокровных животных, не обладает сенсибилизи­рующими и кумулятивными свойствами и не оказывает кожно-резорбтивного действия. По величине LD50 при нанесении на кожу и при ингаляционном воздейст­вии Агро-Велт относится к 4 классу малоопасных ве­ществ и может применяться в присутствии животных.

4. Впервые, в сравнительном аспекте, определена микрофлора организма насекомых и иксодовых клещей, собранных в лесопарковой  зоне г. Москвы и в лесной зоне Московской области. По своему составу микрофлора членистоногих, обитающих на территории мегаполиса, была разнообразнее, чем у насекомых и клещей лесной зоны и содержала, наряду с почвенными сапрофитами и гнилостными бактериями, патогенные микроорганизмы – кандиды, стафилококки,  эшерихии, сальмонеллы.

5. Создана экспериментальная методика, позволяющая определять эффективность комплексных биоцидов с антимикробным и инсекто-акарицидным действием в условиях лесопарковой зоны мегаполиса.

6. Показана высокая антимикробная активность Агро-Велта в отношении широкого спектра патогенных бактерий и грибов. Минимальная антимикробная концентрация средства для вегетативных форм микроорганизмов составляет 0,05%, для спорообразующих бактерий, дерматофитов и плесневых грибов – 0,2%.

7. Установлено эффективное инсекто-акарицидное действие Агро-Велта при концентрации рабочих эмульсий 0,2% в отношении разных видов насекомых и клещей в лабораторных условиях, в условиях лесопарковой зоны мегаполиса и в животноводческих хозяйствах.

Практическая значимость.

1. Для применения в ветеринарии в качестве дезинфицирующего и инсекто-акарицидного средства для обеззараживания объектов окружающей среды и уничтожения членистоногих – переносчиков возбудителей инфекционных болезней животных, предложен комплексный, эффективный, безвредный биоцид Агро-Велт, который прошел производственные испытания.

2. Результаты исследований включены в проект СТО 71954720-0006-2012 на средство Агро-Велт, предназначенное для дезинфекции, дезинсекции и дезакаризации окружающей среды.

3. Разработан проект инструкции по применению биоцида Агро-Велт для профилактики инфекционных болезней животных.

4. При проведении производственных испытаний Агро-Велта в условиях лесопарковой зоны г. Москвы, а также в скотоводческих и свиноводческих хозяйствах изучена антимикробная, инсектицидная и акарицидная активность биоцида Агро-Велт, дана оценка его воздействия на разные виды микроорганизмов и членистоногих, показана высокая дезинфицирующая и инсекто-акарицидная эффективность средства, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств Московской и Челябинской областей.

5. Разработаны технологические режимы дезинфекции, дезинсекции и дезакаратизации объектов ветнадзора биоцидом Агро-Велт.

6. Результаты исследований по применению биоцида Агро-Велт на объектах ветнадзора используются в учебном процессе в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплинам «Санитарная микробиология», «Ветеринарная микробиология и микология».

Личный вклад соискателя. Автору принадлежат непосредственное осуществление исследований по изучению острой и хронической токсичности Агро-Велта на лабораторных животных; определение антимикробной  и инсекто-акарицидной активности Агро-Велта в отношении тест-штаммов разных видов микроорганизмов, а также клещей и насекомых; производственные испытания биоцида в условиях лесопарковой зоны мегаполиса и в животноводческих хозяйствах; разработка нормативной документации на Агро-Велт; анализ и обобщение полученных результатов.

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с директором НИИ биоцидов и нанобиотехнологий, кандидатом медицинских наук Ивановой Е.Б., которой выражаю глубокую благодарность за помощь и поддержку.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты  исследований были представлены на выставке, посвященной 90-летию ФГБОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2009); на выставке «Звезда Подмосковья» (Раменское, Московской области, 2010); на выставке в «Экспо-Центре» (Москва, 2010); доложены на XVIII Международном ветеринарном конгрессе (Москва, 2010); на ХIX Международном ветеринарном конгрессе (Москва, 2011); на VII Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2011); на Международной научно-практической конференции «Задачи ветеринарной науки в реализации доктрины продовольственной безопасности Российской Федерации (Москва, 2011); на III Международной научно-практической конференции «Научно-техническое творчество молодежи – путь к обществу, основанному на знаниях. Приоритетные направления развития науки и техники – технологический прорыв в мировое сообщество» (Москва, 2011); на Всероссийской научной конференции «Эколого-географические аспекты инфектологии» (Новосибирск, 2011).





Публикации.  По результатам диссертации опубликовано 10 статей, в т.ч. 6 статей в научных журналах, рекомендованных ВАК (Ветеринарная медицина, Биозащита и биобезопасность, Дезинфекция. Антисептика, Жизнь без опасностей, Нанотехнологии и охрана здоровья) и 2 - в сборниках научных трудов.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 179 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (118 источников, из которых 64 отечественных и 54 иностранных). Работа содержит 34 таблицы, 31 рисунок, 22 страницы приложений.

На защиту выносятся следующие положения и результаты:

  1. Основные свойства комплексного биоцида Агро-Велт, определяющие перспективность его использования на объектах ветнадзора.
  2. Результаты изучения антимикробной активности и инсекто-акарицидного действия биоцида Агро-Велт.
  3. Агро-Велт безвреден для теплокровных животных и по величине LD50 относится к 4 классу малоопасных ве­ществ.

4. Технологические режимы дезинфекции, дезинсекции и дезакаризации биоцидом Агро-Велт объектов ветнадзора.

МАТЕРИАЛЫ  И  МЕТОДЫ  ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 2009 по 2012 гг. на кафедре микробиологии в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. Эксперименты по определению острой и хронической токсичности Агро-Велта на лабораторных животных были проведены на базе НИИ биоцидов и нанобиотехнологий (г. Москва) и в виварии кафедры микробиологии ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Биоцид Агро-Велт представляет собой концентрат эмульсии в виде прозрачной жидкости светло-желтого цвета. Содержит в качестве действующих веществ субстанцию Велтон  (10%) и циперметрин (25%).

Изучение антимикробного и инсекто-акарицидного действия Агро-Велта в условиях лесопарковой зоны было проведено в парке «Кузьминки» г. Москвы. Производственные испытания Агро-Велта и его безопасность для сельскохозяйственных животных провели в хозяйствах Московской (ЗАО "Агрофирма Борец", Дмитровского района) и Челябинской (совхоз «Подовинное», Октябрьского района) областей.

В сравнительном аспекте были проведены бактериологические исследования насекомых и клещей, собранных в лесопарковой зоне г. Москвы и в лесной зоне Подмосковья (Истринский р-он, с. Первомайское).

Антимикробную активность Агро-Велта изучали с использованием тест-штаммов E.coli 1257, P.aeruginosa АТСС 27853; S.typhimurium 11,  S.aureus 906, B.cereus 96, C.albicans 15, T.gypseum НИИД, A.niger НИИД.

В экспериментах по изучению токсичности Агро-Велта было использовано 120 белых мышей, 20 белых крыс, 20 морских свинок, 10 кроликов, 5 коров черно-пестрой породы, 10 поросят-отъемышей.

Исследования проводили в соответствии с методическими указаниями «О порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики» (1987); Руководством Р 4.2.2643-10 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности» (2011); Руководством по эксперимен­тальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2005); СанПиН 2.1.2.1188-03; Инструкцией по проведению ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации (2001) и др.

Экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием пакета компьютерных программ «Statistica 6,0» и анализом результатов по Ашмарину И.П. и Воробьеву А.А.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение основных свойств Агро-Велта, определяющих

перспективность его использования для дезинфекции

и дезинсекции объектов ветнадзора

Комплексный биоцид Агро-Велт обладает важными свойствами, обуславливающими перспективность его применения для обеззараживания объектов ветнадзора и уничтожения насекомых и клещей - переносчиков возбудителей инфекционных болезней: поверхностное натяжение 0,2% эмульсии Агро-Велта составляет 0,74 мН/м, что свидетельствует о высокой проникающей способности средства; величина краевого угла смачивания рабочих эмульсий Агро-Велта составляет 34 градуса, что исключает необходимость использования ПАВ; Агро-Велт не обладает коррозионной активностью; белковый индекс средства равен 1, что свидетельствует о том, что Агро-Велт можно использовать на объектах ветнадзора без их предварительной санитарной очистки; рабочие эмульсии Агро-Велта сохраняют физико-химические и антибактериальные свойства после замерзания и оттаивания; бактерицидное действие Агро-Велта сильнее бактерицидного действия фенола в 14 раз.

Определение антибактериальной и противогрибной

активности Агро-Велта in vitro

Было приготовлено 11 разведений Агро-Велта в концентрациях от 0,02 до 2,0 %. Исследования проводили в отношении бульонных культур тест-штаммов бактерий и грибов и на батистовых тест-объектах.

Бактерицидная активность Агро-Велта в отношении бульонных тест-культур и  на батистовых тест-объектах была аналогична и составила для S.aureus 906 - 0,04%, для E.coli 12570, P.aeruginosa АТСС 27853, S.typhimurium 11 и  C.albicans 15 – 0,05%.

В отношении бульонных тест-культур B.cereus 96, T.gypseum НИИД  и A.niger НИИД бактерицидная активность Агро-Велта составила 0,1%, на батистовых тест-объектах – 0,2%.

Рис. 1. Антимикробная активность рабочих эмульсий Агро-Велта

Таким образом, минимальная антимикробная концентрация Агро-Велта для вегетативных форм микроорганизмов составляет 0,05%, для спорообразующих бактерий, дерматофитов и плесневых грибов – 0,2%.

Определение инсекто-акарицидного действия Агро-Велта в отношении разных видов насекомых и клещей в лабораторных условиях

Оценку инсекто-акарицидной активности Агро-Велта проводили методом принудительного контактирования членистоногих с обработанными впитывающими (фанера) и невпитывающими (стекло) влагу тест-поверхностями. Пластины смачивали рабочими эмульсиями Агро-Велта в концентрациях 0,05; 0,1; 0,2; 0,4; 0,5; 1,0; 2,0 из расчета 50 мл/м2.

Для испытания инсектицидного действия Агро-Велта  использовались мухи комнатные, мухи-жигалки, комары (p. Aedes), осы обыкновенные, разные виды пауков и жуков, муравьи черные и рыжие, которых собирали в парке Кузьминки г. Москвы.

Наиболее чувствительными к инсектицидному действию Агро-Велта оказались комары, муравьи черные домашние и пауки, менее чувствительными -  разные виды жуков, осы и муравьи рыжие.

Для комаров,  муравьев черных и пауков эффективной инсектицидной концентрацией Агро-Велта являлся 0,1%, для мух комнатных и мух-жигалок – 0,2%,  для ос и муравьев рыжих – 0,4%, для разных видов жуков - 0,5%.

Рис. 2. Эффективные инсектицидные концентрации Агро-Велта

Агро-Велт в эффективных инсектицидных концентрациях убивал мух, комаров и пауков через 1-2 сек., ос – через 10-15 сек., жуков – через 60 сек., муравьев черных – через 30 сек. При воздействии на рыжих муравьев наблюдалась гибель  насекомых через 5-10 мин.

Для испытания акарицидного действия Агро-Велта в качестве биологического материала в лабораторных экспериментах использовали гамазоидных (Ornithonyssus bacoti Hirst - крысиные  и Dermanyscus gallinae - куриные) и иксодовых клещей.

Оценивали степень поражения клещей (обратимый и необратимый нокдаун, гибель) после окончания экспозиции, а затем через 24; 48 и 72 часа (острое действие). Остаточное действие оценивали, подсаживая членистоногих на обработанные поверхности через 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7; 10; 14; 21 и более суток. Если количество погибших членистоногих не превышало 50%, остаточное действие Агро-Велта считали законченным.

  Необратимый нокдаун Гибель

Рис. 3. Степень поражения крысиных клещей рабочими

концентрациями Агро-Велта

Было установлено, что при 0,2% Агро-Велта на стекле гамазоидные клещи погибали мгновенно, при 0,05% - через сутки. Через 15 мин экспозиции у 98% крысиных и куриных клещей наблюдался необратимый нокдаун при концентрации средства 0,05%.

Необратимый нокдаун Гибель

Рис. 4. Степень поражения куриных клещей рабочими

концентрациями Агро-Велта

У 80% иксодовых клещей через 15 мин экспозиции 0,05% раствором Агро-Велта отмечали обратимый нокдаун на стекле, у 60% клещей – на фанере. При концентрациях Агро-Велта 0,1; 0,2 и 0,4% наблюдали необратимый нокдаун у 95-98% иксодовых клещей с последующей их гибелью через 24 ч.

Обр. нокдаун  Необратимый нокдаун Гибель

Рис. 5. Степень поражения иксодовых клещей рабочими

концентрациями Агро-Велта

Остаточная активность Агро-Велта сохранялась 4 недели на уровне 100% для всех видов изученных клещей. Через 6 недель на стекле через 60 мин погибало 70% куриных, 80% крысиных и  50% иксодовых клещей.

Таблица 1. Остаточная акарицидная активность Агро-Велта для

клещей при подсадке их на обработанные стеклянные поверхности

Вид клеща

Концентрация Агро-Велта, %

Количество (%) погибших при подсадке через (недели)

3

4

6

9

Dermanyscus gallinae

0,2

100

100

70

50

Ornithonyssus bacoti Hirst

0,2

100

100

80

65

Ixodes ricinus

0,5

100

100

50

20

Оптимальной концентрацией рабочих эмульсий Агро-Велта для гамазоидных клещей является 0,2%, для иксодовых клещей – 0,5%. Агро-Велт обладает остаточным акарицидным действием в течение не менее 6 недель, поэтому срок повторной обработки средством объектов ветнадзора можно проводить через 3-5 недель в зависимости от вида членистоногого, его численности, типа поверхности и состояния объекта.

Изучение острой и хронической токсичности Агро-Велта

для теплокровных животных

По степени воздействия на организм теплокровных животных при однократном введении в желудок Агро-Велт относится к III классу опасности в соответствии с классификацией ГОСТ 12.1.007-76. При однократном воздействии на кожные покровы средство относится к IV классу мало опасных веществ.  По лимитирующему показателю токсичности для инсектицидных средств - зоне острого и подострого биоцидного эффекта пары Агро-Велта в виде 0,5% водной эмульсии относятся к 4 классу мало опасных веществ. При многократном контакте с неповрежденной кожей 0,5% эмульсии Агро-Велта  кожно-резорбтивное действие средства не выявлено. При контакте со слизистыми оболочками глаз средство оказывает умеренно выраженное  раздражающее действие и не обладает сенсибилизирующими и кумулятивными свойствами.

Определение микрофлоры организма насекомых и клещей, собранных в лесопарковой и лесной зонах Москвы и Московской области

Для определения микробной обсемененности членистоногих в парке Кузьминки г. Москвы и в лесной зоне д. Первомайское Истринского района Московской области были собраны разные виды насекомых и иксодовые клещи. Была изучена бактериальная обсемененность разных видов мух, комаров,  пауков, жуков, муравьев, иксодовых клещей в сравнительном аспекте. Каждой особи членистоногих было не менее 10 шт.

Было установлено, что микрофлора у членистоногих из лесопарковой зоны Москвы и из лесной зоны Московской области различалась по родовому и видовому составу. От мух, обитающих как в лесопарковой зоне Москвы, так и  в лесной зоне Московской области, были выделены бациллы, эшерихии и аспергиллы. От мух, обитающих в городской черте, дополнительно выделяли патогенные для белых мышей  сальмонеллы и стафилококки, а также гнилостные бактерии из рода Pseudomonas.

Таблица 2. Микрофлора  изучаемых насекомых

Членистоногие

Виды микроорганизмов, выделенные от членистоногих

в лесопарковой зоне

в лесной зоне

Мухи

Escherichia coli

Escherichia coli

Bacillus subtilis

Bacillus subtilis

Aspergillus niger

Aspergillus niger

Pseudomonas herbicola

-

Salmonella typhimurium

-

Staphylococcus aureus

-

Комары

Bacillus subtilis

Bacillus subtilis

Escherichia coli

-

Пауки

Bacillus subtilis

Bacillus subtilis

-

Lactobacterium brevis

Жуки

Bacillus subtilis

Bacillus subtilis

Aspergillus niger

Aspergillus niger

Муравьи черные

Bacillus subtilis

Bacillus subtilis

Escherichia coli

-

Муравьи рыжие

Bacillus subtilis

Bacillus subtilis

-

Lactobacterium brevis

От комаров, пауков, жуков и черных муравьев, собранных в лесопарковой зоне, были выделены бациллы, эшерихии и аспергиллы. От таких же насекомых, обитающих в лесной зоне, эшерихии не выделялись, однако в их организме были обнаружены лактобактерии (бента бактерии).

Таблица 3. Микрофлора  изучаемых клещей

Членистоногие

Виды микроорганизмов, выделенные от клещей

В лесопарковой зоне

В лесной зоне

Клещи иксодовые

Bacillus subtilis

Bacillus subtilis

Escherichia coli

-

Mycobacterium

-

Staphylococcus aureus

-

Candida albicans

-

-

Erisipelothrix rhusiopathiae

-

Lactobacterium brevis

-

Clostridium pasteurianum

От клещей, собранных в лесопарковой зоне, были выделены бациллы, эшерихии, микобактерии, патогенные стафилококки и кандиды. От клещей из лесной зоны выделяли бациллы, возбудителя рожи свиней, лактобактерии растений и свободно живущих клостридий.

Таким образом, насекомые и иксодовые клещи, обитающие в лесопарковой зоне г. Москвы и в лесах Подмосковья, обсеменены  сапрофитными, гнилостными, условно-патогенными и патогенными бактериями и грибами. Членистоногие лесопарковой зоны содержат более широкий спектр микроорганизмов, опасных для человека и животных. 

Изучение антимикробного и инсектицидного действия

Агро-Велта в условиях лесопарковой зоны г. Москвы

Целью данного этапа работы являлось определение в условиях лесопарковой зоны мегаполиса антимикробной и инсектицидной активности биоцида Агро-Велт. Работа была проведена в парке Кузьминки Москвы.

Выбранный участок парка был поделен на 30 квадратов, площадью 1 м2 каждый – 12 квадратов для отбора контрольных проб и 18 квадратов – для обработки биоцидом.

До начала эксперимента с целью определения микробной обсемененности почвы с 3 контрольных и с 9 опытных участков были отобраны по 6 проб верхнего слоя почвы на глубину до 2 см.

Из отобранных проб почвы общепринятыми методами выделяли бактерии и грибы и проводили их идентификацию до вида, изучая культурально-морфологические и биохимические свойства.

Для определения плотности заселения почвы живыми биообъектами, с ее поверхности, а также из почвы на глубину до 2 см с этих же 3 контрольных и 9 опытных участков были собраны все виды насекомых, клещей, моллюски и др. Оставшиеся 9 опытных участков почвы орошали 0,2% раствором Агро-Велта, с расходом средства 150 мл/м2 и выдерживали в течение 1, 2 и 3 часов. Контрольные участки аналогично орошали стерильной водопроводной водой. Через время экспозиции с опытных и контрольных участков также отбирали пробы почвы для микробиологи-

ческих исследований и собирали живые и погибшие биообъекты.

Установлено, что почва на исследованных участках в парке Кузьминки обсеменена следующими микроорганизмами: E.coli, P.vulgaris, H.alvei, P.aeruginosa, S.epidermidis, S.aureus, B.subtilis, B.lentimorbus, B.thuringien-sis, C.perfringens, A.fumigatus, A.niger, A.flavus, F.graminearum. Протей, синегнойная палочка и золотистый стафилококк были патогенными для белых мышей. Из членистоногих были обнаружены жуки (8,3%), пауки (15,6%), муравьи (6%), мошки (7%), лесные клопы (3%) и др. 

После обработки опытных участков парка Кузьминки биоцидом Агро-Велт из проб почвы были выделены  грибы  Aspergillus niger. Бактериальная микрофлора не была обнаружена.

Антибактериальная активность 0,2% рабочей эмульсии Агро-Велта при экспозиции 3 часа составила 100%, противогрибная активность – 80%, инсектицидная активность 92,7%.

Проведение производственных испытаний Агро-Велта

на объектах ветнадзора

Производственные испытания антимикробной и инсектицидной активности Агро-Велта позволили установить, что однократное применение для дезинфекции и дезинсекции 0,1%-ной эмульсии средства методом орошения, с расходом средства 100-150 мл/м2 и экспозицией 180 мин. обеспечивает 100% дезинфекционную и 90% дезинсекционную эффективность средства как в летний, так и в зимне-весенний периоды.

Применение Агро-Велта в присутствии лабораторных животных (мыши, крысы, морские свинки и кролики), поросят-отъемышей и дойных коров не вызывало нарушений клинического состояния животных, а также раздражения слизистых оболочек глаз и верхних дыхательных путей.

Разработка технологических режимов обеззараживания

объектов ветнадзора биоцидом Агро-Велт

С учетом проведенных исследований были разработаны технологические режимы применения биоцида Агро-Велт в качестве дезинфицирующего и инсекто-акарицидного средства на объектах ветнадзора.

Таблица 4. Режимы дезинфекции объектов ветнадзора Агро-Велтом 

при инфекциях бактериальной этиологии

Объекты

обеззараживания

Концентрация  эмульсии,  %

Экспози-ция, мин

Способ обез-зараживания

при не спорообразующих бактериальных инфекциях

Поверхности в помещениях (пол, стены, перегородки), предметы ухода за животными, оборудование, автотранспорт и др.

0,1

0,2

0,5

60

30

15

Протирание

или орошение

Спецодежда, уборочный инвентарь

0,5

1,0

60

30

Замачивание

при сибирской язве и клостридиозах

Поверхности в помещениях (пол, стены, перегородки), предметы ухода за животными, оборудование, автотранспорт  и др.

0,5

1,0

2,0

120

60

30

Протирание или орошение

Спецодежда, уборочный инвентарь

0,5

1,0

2,0

60

30

15

Замачивание

При инфекционных болезнях, вызванных неспорообразующими бактериями, необходимо применять Агро-Велт в концентрациях от 0,1 до 1,0% при экспозиции 15-60 мин, при сибирской язве – от 0,5 до 2,0% при экспозиции 15-120 мин, при кандидозах и дерматофитозах - от 0,1 до 1,0% при экспозиции 15-90 мин, в отношении плесневых грибов – от 0,2 до 2,0% при экспозиции 15-90 мин.

При борьбе с насекомыми и гамазоидными клещами необходимо применять Агро-Велт в концентрациях  от 0,04 до 0,4%, а против иксодовых клещей – 0,5%.

ВЫВОДЫ

1. Биоцид Агро-Велт – комплексное инсекто-акарицидное средство с антимикробным действием, эффективное против бактерий и грибов – возбудителей инфекционных болезней животных, а также против насекомых и клещей, являющихся переносчиками патогенных микроорганизмов.

2. Агро-Велт обладает свойствами, обуславливающими перспективность

его применения на объектах ветнадзора: поверхностное натяжение средства составляет 0,74 мН/м, величина краевого угла смачивания - 34 градуса, белковый индекс равен 1, фенольный коэффициент - 14, коррозионная активность отсутствует,  физико-химические и бактерицидные свойства сохраняются после замерзания и оттаивания.

3. Агро-Велт проявляет бактерицидное и фунгицидное действие в отношении культур тест-штаммов E.coli 12570,  S.aureus 906, P. aeruginosa АТСС 27853,  S. typhimurium 11, C.albicans 15, B.cereus 96, T.gypseum НИИД  и A.niger НИИД. Минимальная антимикробная концентрация средства для вегетативных форм микроорганизмов составляет 0,05%,  для спорообразующих бактерий, дерматофитов и плесневых грибов – 0,2%.

4. Агро-Велт обладает инсекто-акарицидной активностью в отношении разных видов членистоногих. Для комаров, муравьев черных, пауков и гамазоидных клещей эффективной концентрацией является 0,1% средства, для мух – 0,2%,  для ос и муравьев рыжих – 0,4%, для разных видов жуков и иксодовых клещей - 0,5%.

5. Остаточное инсекто-акарицидное действие Агро-Велта сохраняется в течение 4 недель для 100% изученных членистоногих. Через 6 недель на обработанных средством поверхностях в течение 60 мин погибает 100% насекомых, 70% куриных, 80% крысиных и  50% иксодовых клещей.

6. По степени воздействия на организм животных при введении в желудок Агро-Велт относится к 3 классу умеренно опасных веществ, при ингаляционном воздействии и нанесении на кожу - к 4 классу мало опасных  веществ. Средство не обладает сенсибилизирующими, кумулятивными свойствами и не оказывает кожно-резорбтивного действия.

7. У насекомых и иксодовых клещей, обитающих в лесах Подмосковья, обнаружены E.coli, B.subtilis, E.rhusiopathiae, C.pasteurianum, L.brevis, A.niger. От членистоногих лесопарковой зоны Москвы выделены E.coli,  S.typhimurium,  S.aureus,  Mycobacterium,  B.subtilis, P.herbicola, C.albicans, A.niger. Членистоногие лесопарковой зоны мегаполиса содержат более широкий спектр микроорганизмов, опасных для человека и животных. 

8. В условиях лесопарковой зоны мегаполиса антибактериальная активность 0,2% эмульсии Агро-Велта с расходом средства 150 мл/м2 поверхности почвы и экспозицией 3 часа составила 100%, противогрибная – 80%, инсектицидная - 92,7%.

9. Однократное применение для дезинфекции и дезинсекции 0,1%-ной эмульсии Агро-Велта методом орошения, с расходом средства 100-150 мл/м2 и экспозицией 180 мин. обеспечивает 100%-ную дезинфекционную и 90%-ную дезинсекционную эффективность средства  в условиях вивария по содержанию лабораторных животных, свиноводческого и скотоводческого хозяйств как в летний, так и в зимне-весенний периоды. Применение Агро-Велта в присутствии животных не вызывает нарушений их клинического состояния, а также раздражения слизистых оболочек глаз и верхних дыхательных путей.

Практическое использование полученных

научных результатов

1. По результатам исследований составлены и утверждены в установленном порядке  2 научных отчета:

- промежуточный отчет «Экспериментальные испытания  безопасности,  антимикробной  и инсекто-акарицидной активности  Агро-Велта»;

- заключительный отчет  «Производственные испытания  дезинфицирующей  и инсекто-акарицидной активности  биоцида Агро-Велт  и  разработка  режимов  дезинфекции  и дезинсекции объектов  ветнадзора».

2. Результаты исследований включены в проект СТО 71954720-0006-2012 на биоцид Агро-Велт.

3. Разработан проект инструкции по применению биоцида Агро-Велт для профилактики инфекционных болезней животных.

4. Разработаны методические рекомендации по изучению антимикробной и инсекто-акарицидной активности комплексных биоцидов в условиях лесопарковой зоны мегаполиса.

5. При проведении производственных испытаний Агро-Велта в условиях лесопарковой зоны Москвы, а также в скотоводческих и свиноводческих хозяйствах изучена антимикробная, инсектицидная и акарицидная активность биоцида Агро-Велт, дана оценка его воздействию на бактерии и грибы, на различные виды насекомых и клещей, показана высокая дезинфицирующая и инсекто-акарицидная эффективность средства, что подтверждено актами, утвержденными руководителями  хозяйств Московской (ЗАО "Агрофирма Борец", Дмитровского района) и Челябинской (совхоз «Подовинное», Октябрьского района) областей.

5. Результаты исследований по применению биоцида Агро-Велт для дезинфекции и дезинсекции объектов ветнадзора используются в учебном процессе в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплинам «Санитарная микробиология», «Ветеринарная микробиология и микология».

рекомендации по использованию научных выводов

1. Рекомендовать биоцид Агро-Велт зооветспециалистам и владельцам животных в качестве дезинфицирующего и инсекто-акарицидного средства для обеззараживания окружающей среды и объектов ветнадзора с целью профилактики инфекционных болезней животных.

2. Ветеринарным специалистам рекомендуется использовать Агро-Велт  для уничтожения иксодовых клещей, мух и комаров, а также их личинок с целью профилактики трансмиссивных природно-очаговых болезней животных.

3. Агро-Велт рекомендуется для обработки спецодежды в качестве репеллентного и инсекто-акарицидного средства.

4. Результаты исследований по изучению бактерицидной, фунгицидной и инсекто-акарицидной активности биоцида Агро-Велт  рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплинам «Ветеринарная микробиология и микология», «Санитарная микробиология», «Эпизоотология», «Ветеринарная санитария» в ВУЗах РФ по специальностям 111801 «Ветеринария» и  111100 «Зоотехния».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Грязнева Т.Н., Игуменщев П.А. Актуальность технического регулирования при производстве и применении дезинфицирующих средств ветеринарного назначения // Дезинфекция. Антисептика.- 2010.-  № 1.- Т.1.- С. 26-28.

2. Грязнева Т.Н., Игуменщев П.А., Жирихина М.С. Применение наноструктурированных биоцидов в ветеринарии / Эколого-географические аспекты инфектологии: матер. Всеросс. Науч. конф.-  Новосибирск: Новосиб. Гос. аграр. Ун-т.- 2011.- С. 45-51.

3. Грязнева Т.Н., Игуменщев П.А. Применение биоцида Агро-Велт в условиях лесопарковой зоны мегаполиса / Научно-техническое творчество молодежи – путь к обществу, основанному на знаниях: Сб. докл.iii Междунар. научно-практич. конф.- М.: МГСУ.- 2011.- С. 321-324.

*4. Грязнева Т.Н., Игуменщев П.А., Жирихина М.С. Перспективные инновационные проекты в ветеринарии // Ветеринарная медицина.-2011.-№ 2.-С. 21-24.

*5. Жирихина М.С., Игуменщев П.А.,  Применение наноструктурированных биоцидов серии «ВЕЛТ» на объектах ветнадзора //Дезинфекция. Антисептика.- 2011.- № 2 (6).- Т. 2.- С. 50-54.

*6. Жирихина М.С., Игуменщев П.А.  Наносредства серии "ВЕЛТ" и их перспективность для ветеринарии //Нанотехнологии и охрана здоровья.- 2011.- № 2 (7).- Т. 3.- С. 50-54.

7. Иванова Е.Б., Грязнева Т.Н., Игуменщев П.А. Обеззараживание объектов окружающей среды биоцидом на основе субстанции «ВЕЛТОН» //Прикладная энтомология.- 2011.- № 4 (6).- С. 16-17.

*8. Иванова Е.Б., Грязнева Т.Н., Родионова В.Б., Жирихина М.С., Игуменщев П.А. Перспективы применения наносредств на основе субстанции Велтон для профилактики природно-очаговых и трансмиссивных заболеваний человека и животных //Жизнь без опасностей.- 2012.- № 1.- Т. 7.- С. 97-99.

*9. Грязнева Т.Н., Игуменщев П.А., Жирихина М.С. Экология и животноводство России //Жизнь без опасностей.- 2012.- № 1.- Т. 7.- С. 27-29.

*10. Иванова Е.Б., Грязнева Т.Н., Игуменщев П.А. Применение биоцида на основе субстанции Велтон в условиях лесопарковой зоны мегаполиса //Дезинфекция. Антисептика.-2012.-№ 1(9).- Т.3.- С. 36-40.






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.