WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 ||

Замечания: Собирать остатки органической фазы необходимо с особой осторожностью. Водная фаза при вакуумировании удаляется не полностью и при резком усилении вакуума выходит вместе с органической фазой. По этой причине было решено отказаться от данного варианта экстракции.

Вариант 3. Комбинация твердофазной и жидкостной экстракции.

Для максимально эффективной экстракции САР и удаления полифенольной части было решено совместить предыдущие варианты экстракции.

Навеску меда 3г помещали в полипропиленовую тубу для центрифугирования. Растворяли в 10 мл воды для ВЭЖХ. К раствору добавляли 20 мл этилацетата. Встряхивали на механической мешалке типа Vortex. Тубу помещали в центрифугу на 10 минут при 10000 об/мин. Органическую фазу отбирали и упаривали досуха на роторном испарителе при комнатной температуре в грушевидной колбе. Полученный осадок перерастворяли в 30 мл воды.

Данная процедура позволяет освободиться от полифенольной части меда, которая в воде практически не растворяется. Раствор переносили в тубу для центрифугирования. Грушевидную колбу ополаскивали 5 мл гексана. Смыв добавляли в тубу с водным раствором. Энергично встряхивали тубу и помещали ее в центрифугу на 10 мин при 10000 об/мин. Органический слой удаляли. Водную фазу пропускали через картридж для твердофазной экстракции Varian Bond Elute C18 со скоростью 2 капли в секунду. Жидкость удаляли, картридж промывали 1 мл воды, затем еще 2 мл воды. Смыв также удаляли.

Картридж просушивали под вакуумом. В чистую пробирку с картриджа делали смыв 4 мл МеОН. Растворитель упаривали досуха под струей чистого воздуха. Осадок перерастворяли в 1 мл 3% уксусной кислоты.

Анализ проводили по следующим схемам:

Градиент 2: 0-10 мин 25% ACN, 10,5-15 мин 100% ACN, 15,5-20 мин 25% ACN, 5 мин промывка после анализа. Время удерживания 4,94.

Градиент 3: 0-10 мин 2% ACN, 10,5-12 мин 25% ACN, 12-20 мин 25% ACN, 20,5-21 мин 90% ACN, 21-25 мин 90% ACN, 25,5-30 мин 2% ACN, 5 мин промывка после анализа. Время удерживания 17,1.

Градиент 4: 0-10 мин 2% ACN, 10,5-18 мин 25% ACN, 18-26 мин 25% ACN, 26,5-27 мин 90% ACN, 27,5-32 мин 90% ACN, 32,5-37 мин 2% ACN, 5 мин промывка после анализа. Время удерживания 21,2.

В третьей главе представлены результаты проведенных исследований, а также результаты валидаций разработанных методик.

Углеводный состав меда На основе разработанной методики были проведены анализы четырех видов меда: подсолнечниковый, липовый, гречишный и цветочный. Хроматограммы исследованных медов представлены на рисунках 1.1. – 1.4.

Рис 1.1. Хроматограмма подсолнечникового меда Рис 1.2. Хроматограмма гречишного меда Рис 1.3. Хроматограмма липового меда Рис 1.4. Хроматограмма цветочного меда Для оценки воспроизводимости результатов были проведены 5 параллельных опытов с растворами одного и того же меда. Были приготовлены одинаковых растворов одного меда. Относительное стандартное отклонение площадей пиков 5 инжекций из разных виал составило для фруктозы и глюкозы 0,27 и 0,50% соответственно. Сахароза и мальтоза в представленном образце отсутствовали.

Для оценки извлекаемости углеводов из меда были проведены опыты с добавками по методу «введено/найдено»: к образцам различных медов с известным содержанием углеводов (содержание углеводов определялось по калибровочному графику) добавили по 0,02, 0,04 и 0,06 г (точная навеска) фруктозы и глюкозы на грамм анализируемого меда. Для каждой добавки готовили по 3 навески исследуемого меда.

Результаты опытов с добавками к различным типам меда Добавка Отклонение Подсолнечник Гречишный Цветочный Липовый Фруктоза Глюкоза Фруктоза Глюкоза Фруктоза Глюкоза Фруктоза Глюкоза S(x) Среднеквадр. отклонение 0.02 0.02 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.0,Sr(x) Относительное среднеквадр.

0.37 0.43 0.13 0.29 0.19 0.35 0.11 0.отклонение S(x) Среднеквадр. отклонение 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.0,Sr(x) Относительное среднеквадр.

0.04 0.01 0.21 0.19 0.15 0.33 0.17 0.отклонение S(x) Среднеквадр. отклонение 0.01 0.02 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.0,Sr(x) Относительное среднеквадр.

0.07 0.51 0.29 0.27 0.14 0.20 0.07 0.отклонение Определение 5-гидроксиметилфурфураля На основе разработанной методики были проведены анализы четырех видов меда: подсолнечникового, липового, гречишного и каштанового. Хроматограммы исследованных медов представлены на рис. 2.1. – 2.4.

Рис 2.1. Хроматограмма подсолнечникового меда Рис 2.2. Хроматограмма гречишного меда Рис 2.3. Хроматограмма каштанового меда Рис 2.4. Хроматограмма липового меда Для оценки воспроизводимости результатов были проведены 3 параллельных опыта с растворами одного и того же меда. Относительное стандартное отклонение площадей пиков 3-х инжекций из разных виал составило 0,36 %.

Для оценки извлекаемости 5-ГМФ из меда были проведены опыты с добавками по методу «введено/найдено»: к образцам различных медов с известным содержанием ГМФ (определено по калибровочному графику) были добавлены 1/10, 1/4, 1/2, 1 и 3/2 ПДК. Для каждой добавки готовили по 3 навески исследуемого меда, в каждую из которых вносили добавку непосредственно перед анализом, что обусловлено лабильностью 5-ГМФ в водных растворах меда.

Результаты опытов с добавками к различным типам меда Добавка Отклонение Каштановый Гречишный Подсолнечник Липовый S(x) Среднеквадр. отклонение 0.0.19 0.06 0.2,Sr(x) Относительное среднеквадр. отклонение 10.9.54 2.48 4.S(x) Среднеквадр. отклонение 0.0.42 0.07 0.6,Sr(x) Относительное среднеквадр. отклонение 6.6.97 1.20 1.S(x) Среднеквадр. отклонение 0.0.15 0.18 0.12,Sr(x) Относительное среднеквадр. отклонение 5.1.19 1.55 0.S(x) Среднеквадр. отклонение 0.0.17 0.28 0.25,Sr(x) Относительное среднеквадр. отклонение 3.0.72 1.24 1.S(x) Среднеквадр. отклонение 0.1.43 0.31 0.37,Sr(x) Относительное среднеквадр. отклонение 2.3.92 0.89 2.Определение САР в меде.

На основе разработанной методики был проведен анализ купажного меда.

Рис 3. Хроматограмма экстракта купажного меда с добавкой САР. Градиент 4.

Для оценки извлекаемости САР из меда были проведены опыты с добавками по методу «введено/найдено»: К образцам меда с известным содержанием САР (определено по калибровочному графику) добавляли раствор САР до достижения концентраций 0,1; 0,5 и 1,0 нг/мл. Для каждой добавки готовили по 3 навески исследуемого меда.

Результаты опытов с добавками САР к купажному меду Добавка Отклонение Значение S(x) Среднеквадр. отклонение 0,0,Sr(x) Относительное среднеквадр. отклонение 0,0,5 S(x) Среднеквадр. отклонение 0,Sr(x) Относительное среднеквадр. отклонение 1,1,0 S(x) Среднеквадр. отклонение 0,Sr(x) Относительное среднеквадр. отклонение 0,Выводы 1. Изучено состояние современной методологии определения качественного и количественного состава меда. Критически рассмотрены достоинства и недостатки существующих методов и показаны ограниченные возможности последних при решении задач определения качественного и количественного состава меда. В результате сформулирована цель исследования.

2. Разработана отвечающая современным требованиям методика определения углеводного состава меда. Проведен статистический отбор данных и обработка результатов согласно ГОСТ Р ИСО 5725-2-2001. Точность определения составляет 98%. Методика прошла этап валидации.

3. Создана методика определения содержания 5-ГМФ в меде методом ВЭЖХ. Проведен статистический отбор данных и обработка результатов согласно ГОСТ Р ИСО 5725-2-2001. Точность определения составляет 97%. Методика позволяет контролировать стадии хранения и переработки меда. Методика прошла стадию валидации.

4. Разработана схема пробоподготовки образцов меда для последующего определения методом ВЭЖХ, включающая жидкостную и твердофазную экстракции.

5. Предложена методика хроматографического определения содержания САР в меде на уровне 0,1-1,0 нг/мл. Проведен статистический отбор данных и обработка результатов согласно ГОСТ Р ИСО 5725-2-2001. Метод прошел стадию внутрилабораторной стандартизации. Точность определения составляет 95%.

6. Реализация результатов работы, а именно включение методик в ГОСТ, даст возможность применять их в различных производственных лабораториях и лабораториях контролирующих организаций. Это позволит повысить точность и достоверность проводимых анализов меда, а также станет эффективным инструментом при выявлении фальсификатов меда.

Список публикаций 1. Определение 5-гидроксиметилфурфураля в меде методом ВЭЖХ.

Романов А.В., Ларионов О.Г., Балашова Е.Ю., Коржов П.Б., Дубичев А.Г.// Сорбционные и хроматографические процессы. 2007. Т.7.

Вып.5. С.711-2. Определение углеводного состава меда методом ВЭЖХ. Романов А.В., Ларионов О.Г., Балашова Е.Ю., Коржов П.Б.// Сорбционные и хроматографические процессы. 2007. Т.7. Вып.5. С.719-3. Использование хроматографии для изучения адсорбции стабильных наночастиц серебра. Романов А. В., Ларионов О.Г., Ревина А.А. //Международная конференция, посвященная 60-летию ИФХ РАН «Физико-химические основы и высокие технологии в 21 веке». Москва 30 мая – 3 июня 2005.

4. Использование хроматографии для изучения адсорбции стабильных наночастиц серебра. Романов А.В., Ларионов О.Г., Ревина А.А.

//Сборник тезисов. Всероссийская конференция «Теория и практика хроматографии. Применение в нефтехимии». Самара. 3 - 8 июля.

2005. С.122.

5. Исследование температурной кинетики образования 5гидроксиметилфурфураля в меде методом ВЭЖХ. Романов А.В., Ларионов О.Г., Коржов П.Б., Гришковский Б.А.// Х Международная конференция «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии». 2006 г.

6. Определение малых концентраций левомицетина (Chloramphenicolum) методом ВЭЖХ с применением массспектрометрического детектора Романов А.В., Ларионов О.Г., Гришковский Б.А.// Х Международная конференция «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии».

2006 г.

Pages:     | 1 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»