WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 ||

Изучены некоторые механизмы формирования множественной лекарственной устойчивости M.tuberculosis, выделенных от больных туберкулезом легких, находящихся в пенитенциарных учреждениях Нижегородской области, при проведении анализа сочетания мутаций, выявленных в генах rpoB, katG и inhA у 41 штамма, устойчивых к изониазиду и рифампицину (табл. 6).

Наиболее часто (24,4%) наблюдали сочетание мутаций в кодоне гена rpoB и двойных мутаций в кодонах 315 и 335 гена katG. Подобные редкие сочетания мутаций при формировании множественной лекарственной устойчивости M.tuberculosis в других исследованиях выявлялись у единичных штаммов (Е.А.Желткова 2004, М.Ю. Липин. 2004). Чаще всего, как наиболее распространенное сочетание мутаций в генах M.tuberculosis с МЛУ описывают мутации в кодоне Ser531>Leu гена rpoB и Ser315>Thr в гене katG (О.И. Скотникова 2005, И.Г. Шемякин 2005), которое в нашем исследовании занимает второе место по частоте встречаемости – 21,9% (штаммов). Другие сочетания мутаций в исследуемых штаммах выявлены в единичных случаях с частотой встречаемости от 2,4 до 7,3%.

Таблица 6.

Сочетания мутаций в кодонах генов rpoB, katG и inhA M.tuberculosis с МЛУ.

Номера кодонов Количество штаммов (n=41) в гене rpoB в гене katG в гене inhA Абс % Ser315>Thr Мутации не 10 24,обнаружены Ile335>Val Мутации не Ser315>Thr 9 21,обнаружены Мутации не Ser315>Arg 3 7,обнаружены Ser531>Leu Ser315>Thr Т(15) 2 4,Мутации не Ser315>Gly 2 4,обнаружены Ser315>Thr G(6) 1 2,Ile335>Val Мутации не Thr328>Gly 1 2,обнаружены Мутации не Ser531>Thr Ser315>Thr 2 4,обнаружены Ser315>Thr Т(15) 2 4,His526>Asp Мутации не Ser315>Thr 1 2,обнаружены Ser315>Gly Т(15) 1 2,His526>Tyr Мутации не Ser315>Ile 1 2,обнаружены Ser315>Arg Т(15) 1 2,Мутации не Ser315>Arg 1 2,Leu511>Pro обнаружены Мутации не Ser315>Thr 1 2,обнаружены Asp516>Val Ser315>Gly Т(15) 1 2,Мутации не Ser315>Thr 1 2,обнаружены Мутации не обнаружены Мутации не Т(15) 1 2,обнаружены Таким образом, при формировании МЛУ M.tuberculosis, наиболее распространенным (73,2%) является сочетание мутаций в 531 кодоне гена rpoB и 315 кодоне гена katG, устойчивость к рифампицину обусловлена мутациями в гене rpoB в 95,1% случаев, устойчивость к изониазиду в гене katG - в 97,6% случаев. Выявлены новые доминирующие сочетания мутаций в кодоне 531 гена rpoB и двойные мутации в кодонах 315 и 335 гена katG M.tuberculosis, приводящие к множественной лекарственной устойчивости у 24,4% штаммов. Выявление доминирования штаммов M.tuberculosis с подобными мутациями, возможно, указывает на их селективные преимущества перед другими штаммами M.tuberculosis с МЛУ.

Определение лекарственной чувствительности M.tuberculosis к ПТП разными методами.

Изучена лекарственная чувствительность M.tuberculosis, выделенных от 52 больных туберкулезом легких. Образцы мокроты исследовали прямым ускоренным микробиологическим методом, штаммы M.tuberculosis – методом абсолютных концентраций и молекулярно-генетическим методом «ТБ-БИОЧИП» (табл. 7).

Таблица 7.

Результаты определения лекарственной чувствительности M.tuberculosis к ПТП разными методами.

Методы определения ЛЧ МБТ Прямой Метод ускоренный Метод Образцы мокроты или штаммы абсолютных микробиологич «ТБ-БИОЧИП» концентраций еский метод Чувствительные к изониазиду и 10 10 рифампицину Устойчивые только к 0 0 рифампицину Устойчивые только к изониазиду 1 1 С МЛУ (устойчивы к изониазиду 41 41 и рифампицину одновременно ) Всего 52 52 Из таблицы 7 видно, что по результатам трех методов M.tuberculosis, выделенные у 52 больных, имели одинаковую характеристику по лекарственной чувствительности: у 10 больных (19,2%) M.tuberculosis определены как чувствительные к изониазиду и рифампицину. Прямым ускоренным микробиологическим методом и методом абсолютных концентраций у 1 больного выявлены микобактерии туберкулеза, устойчивые только к изониазиду и у 41 больного (78,8%) M.tuberculosis обладали множественной лекарственной устойчивостью. Однако в методе «ТББИОЧИП» выявлено только 39 штаммов M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью. Два штамма M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью (3,8%) определены методом «ТБ-БИОЧИП» как устойчивые только к изониазиду, мутации в гене rpoB, ответственного за устойчивость M.tuberculosis к рифампицину, в этих двух штаммах не обнаружены. Вполне возможно, что в данной ситуации мутации были в других кодонах гена, так как с помощью метода "ТБ-БИОЧИП" исследуется только фрагмент гена rpoB, так называемый - Rifampicin Resistant Determining Region, в котором мутации, ответственные за резистентность к рифампицину встречаются у 95% штаммов M.tuberculosis. Однако, сам ген состоит из более 3000 пар нуклеотидов.

Таким образом, получены не только новые данные по механизму формирования множественной лекарственной устойчивости M.tuberculosis, но и подтверждена при сопоставительной оценке высокая чувствительность нового прямого ускоренного микробиологического метода в определении лекарственной чувствительности M.tuberculosis к изониазиду и рифампицину.

ВЫВОДЫ 1. Разработан новый прямой ускоренный микробиологический метод определения лекарственной чувствительности M.tuberculosis к рифампицину и изониазиду. Чувствительность нового метода - 93,997,4%, специфичность - 90,5-92,9%, эффективность - 0,93-0,96.

2. Показано, что определение лекарственной чувствительности M.tuberculosis прямым ускоренным микробиологическим методом происходит в течение 10-21 дня, что в 4-5 раз быстрее, чем методом абсолютных концентраций.

3. Применение нитратредуктазного теста в качестве детектора роста микобактерий впервые позволило в 44,2% образцов мокроты получить результаты определения лекарственной чувствительности M.tuberculosis на 10 и 14 день исследования.

4. Модифицирован способ деконтаминации мокроты, что повысило эффективность определения лекарственной чувствительности M.tuberculosis до 95,5% в образцах мокроты с незначительным содержанием микобактерий.

5. Изучение мутаций в генах M.tuberculosis, выделенных от больных туберкулезом легких пенитенциарных учреждений Нижегородской области, показало, что резистентность к рифампицину обусловлена (95,1%) мутациями в гене rpoB, резистентность к изониазиду (97,6%) мутациями в гене katG, наиболее распространенным является сочетание мутаций в 531 кодоне гена rpoB и 315 кодоне гена katG в 73,2% случаев.

Выявление характерных мутационных изменений в генах M.tuberculosis подтверждает эффективность, чувствительность и специфичность прямого ускоренного микробиологического метода и соответствует данным мировой литературы.

6. Выявлены новые доминирующие сочетания мутаций (в кодоне 531 гена rpoB и двойные мутации в кодонах 315 и 335 гена katG), приводящие к множественной лекарственной устойчивости у 24,4% штаммов M.tuberculosis.

Список опубликованных работ по теме диссертации 1. Safonova S.G., Blinova L.N., Golyshevskaya V.I., Kononets A.S., Mishouk G.A., Polotsky V.I., Polykov A.E., Yakimova N.I., Sloutsky A. Griess’ method for M.tuberculosis drug susceptibility testing implementation, validation and programmatic value // The international journal of tuberculosis and lung disease.-France.- Paris.- 2001.-p.12.

2. Safonova S.G., Blinova L.N., Golyshevskaya V.I., Kononets A.S., Mishouk G.A., Polotsky V.I., Polykov A.E., Yakimova N.I., Sloutsky A. Evalution of the Griess method for M.tuberculosis DST in the penitentiary system in Russia // The international journal of tuberculosis and lung disease.-France.-Paris.- 2001.-p.156.

3. Поляков А.Е., Якимова Н.И. Применение реактива Грисса в эпидемиологическом решении проблемы распространения полирезистентного туберкулеза в тюрьмах // Сборник статей «Профилактика социально-значимых заболеваний в УИС».-Нижний Новгород.-2001.

4. Поляков А.Е., Сафонова С.Г., Скотникова О.И. Определение множественной лекарственной устойчивости M.tuberculosis различными методами // Пробл.туб. - 2006. - №6. - с.40-42.

5. Поляков А.Е., Мазурова И.К. Прямой нитратредуктазный метод определения лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. – 2007.-№5- с.35-36.

6. Заявке на изобретение № 2005119756/13 выдана 24 июня 2005 года в Федеральном институте промышленной собственности Роспатента.

Список использованных сокращений NALC N-ацетил-L-цистеина ЛЧ - Лекарственная чувствительность ЛЧ МБТ - Лекарственная чувствительность микобактерий туберкулеза МБ - Микобактерии МБТ - Микобактерии туберкулеза МЛУ - Множественная лекарственная устойчивость ПТП - Противотуберкулезные препараты Среда Л-Й Среда Левенштейна-Йенсена

Pages:     | 1 | 2 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»