WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 ||

0.0.0.tt0.3 ttRpf 0.0.t2 t3 t4 t5 Rpf None антиген Рис. 9. Количество антител класса IgG к гомологичным Rpf-антигенам в сыворотках иммунных и интактных мышей (оптическая плотность, разведение сывороток 1:500).

ОD 405nm При изучении пролиферации Т-лимфоцитов иммунизированных мышей при добавлении к ним белков семейства Rpf в качестве антигенов, выяснилось, что иммунизация белками семейства Rpf приводит к появлению не только гуморального, но и Т-клеточного иммунного ответа. Все белки семейства оказались иммуногенны. Как и в случае антителами, исключением явился белок Т3, не обладающий иммуногенностью (рис.10).

tt15000 ttRpf None t2 t3 t4 t5 Rpf sonic contr антиген Рис. 10. Оценка пролиферативного ответа клеток лимфоузлов иммунных и интактных мышей на гомологичные Rpf-антигены по включению 3Н-тимидина.

Высокая иммуногенность белков Rpf in vitro указывала на возможность значительного протективного эффекта иммунизации против туберкулеза в модели in vivo. Для этого мышей линии B6 трижды иммунизировали 10 мкг соответствующего белка в неполном адъюванте Фройнда с интервалами в 2 недели, а затем их заражали летальной дозой микобактерий. Протективный эффект иммунизации оценивали по продолжительности жизни иммунизированных животных относительно контроля (Рис.11). Результаты опытов позволяют сделать вывод о том, что продолжительность жизни иммунизированных CPM животных достоверно превышает таковую в контроле. В случае Rpf t2-t4 у 40% иммунизированных мышей время жизни после заражения увеличивалось более чем в два раза.

60 control t40 tttRpf 0 Дни после заражения Рис.11. Динамика гибели мышей вакцинированных белками Rpf после внутривенного заражения Mycobacterium tuberculosis.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что белки семейства Rpf обладают иммуногенными свойствами как in vitro, так и in vivo, что позволяет рассматривать эти белки в качестве перспективных кандидатов на включение в состав субъединичных вакцин против туберкулеза.

% живых животных Выводы:

1. Разработаны методики очистки рекомбинантных белков семейства Rpf:

Rv2450, Rv2389, Rv1884, Rv1009, Rv0867 (M.tuberculosis) и g3559933 (M.luteus).

2. Экспрессия Rpf в культуре M. luteus начинается на ранних стадиях роста и остается высокой на протяжении всего активного роста культуры; в ранней стационарной фазе количество белка существенно уменьшается. В поздней стационарной фазе Rpf не экспрессируется и полностью исчезает из среды.

3. Rpf проявляет литическую активность по отношению к препарату лиофилизированных клеток M. luteus. В то же время замена в белке некоторых аминокислот приводила к потере этой активности. Сходство структуры Rpf с литическими трансгликозилазами и тип воздействия на клеточную стенку позволяет предположить принадлежность Rpf к этому семейству ферментов.

4. Белки семейства Rpf являются индукторами как гуморального, так и клеточного ответов, а иммунизация ими приводит к защите против туберкулеза.

Эти данные позволяют рассматривать белки семейства Rpf в качестве перспективных кандидатов на включение в состав субъединичных вакцин против туберкулеза.

Публикации:

1. Ganina E.A., Telkov M. V., Kaprelyants A. S., Kazarian K. A., Potapov V. D., Biketov S. F. Effect of the bacterial cytocine of Rpf family of M. tuberculosis on morphogenesis of TB in mice. First international conference «Bacterial and viral virulence factors», Smolenice, Slovakia, 2000. р 2. Казарьян К. А., Телков М. В., Кондратьева Т. К., Еремеев В. В. Иммунологические свойства микобактериальных белков семейства Rpf. «Проблемы биохимии, радиационной и космической биологии». Том 2, стр. 62-67, Дубна 2001.

3. Yeremeev V.V., Kondratieva T.K., Rubakova E.I., Kazarian K.A., Telkov M.V., Kaprelyants A.S. Autocrine growth factors of Mycobacterium tuberculosis as components of new vaccine. Scandinavian journal of immunology, vol. 54, international congress of immunology, р Stockholm, 2001.

4. Kazarian K.A., Telkov M.V., Kondratieva T.K., Eremeev V.V. Immunological properties of the mycobacterial Rpf-family proteins. First international congress – Biotechnology – state of art & prospects of development. р 50. Moscow 5. Mukamolova G. V., Turapov O. A., Kazarian K. A., Telkov M.V., Kaprelyants A.S., Kell D.B., Young M. The rpf gene of Micrococcus luteus encodes an essential secreted growth factor. Molecular Microbiology (2002), vol. 46, 611-621.

6. Yeremeev V. V., Kondratieva T. K., Rubakova E. I., Petrovskaya S.N., Kazarian K. A., Telkov M.V., Biketov S. F., Kaprelyants A.S., Apt A. S. Proteins of the Rpf family:

Immune cell reactivity and vaccination efficacy against tuberculosis in mice. Infection and Immunity, (2003), vol.71, 4789-4794.

7. Kazarian K. A., Yeremeev V.V., Kondratieva T. K, Telkov M. V., Kaprelyants A. S., Apt A. S. Proteins of Rpf family as novel TB vaccine candidates. The first international conference on TB vaccines for the world. Poster session. Montreal 2003.

Pages:     | 1 | 2 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»