WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 ||

По данным компьютерного анализа в 3-ей группе животных апоптотическая гибель клеток саркомы М-1 увеличилась практически в 2 раза (Iапопт составил 0,67 ± 0,13%). В настоящее время факторы, присутствие или отсутствие которых инициирует запуск генетически запрограммированной смерти клеток, изучены достаточно хорошо [Schwartzman R.A., Cidlowski J.A., 1993]. К числу таких факторов относится и гипоксия. Однако в данном случае объяснить увеличение гибели опухолевых клеток путем апоптоза только за счет нарастающей гипоксии, по-видимому, нельзя. Количественный подсчет пролиферативной активности и апоптотической гибели клеток проводили на смежных полях серийных гистологических срезов. Между тем существуют убедительные иммуногистохимические доказательства, что в зонах гипоксии пролиферативный потенциал опухолевых клеток снижается [Raleigh et al., 1995, Kennedy A.S. et al., 1997]. Если бы зарегистрированное нами увеличение индекса апоптоза было обусловлено только гипоксией, то и пролиферативная активность клеток саркомы должна была снизиться. Поэтому, на наш взгляд, апоптоз, индуцированный после введения эпиталона, может быть обусловлен активизацией клеток микроокружения опухолей, которые обладают прямым цитотоксическим действием, в частности, тучных клеток и моноцитов.

При иммуноокрашивании препаратов на ламинин явных изменений в экспрессии и характере контурирования стенки сосудов после введения эпиталона мы не обнаружили. Однако обратило на себя внимание появление признаков периваскулярного отека и гипоксии прилегающих к сосудам опухолевых клеток.

По данным комплексного анализа (рис. 1,г, табл. 2) на фоне выраженных радиационных эффектов терапевтическое действие эпиталона практически полностью нивелируется. По-видимому, в условиях радиационного повреждения сосудистой сети, подавленной неоваскуляризации и развития гипоксии в опухолях отсутствует структурно-функциональная основа для проявления действия испытуемого препарата. Судя по механизму действия, эпиталон, усиливая некроз паренхимы опухолей, создает предпосылки для повышения фракции гипоксических клеток, являющихся, как известно, наиболее резистентными к лучевой терапии. Поэтому использовать этот препарат в традиционных схемах радиотерапии злокачественных новообразований, на наш взгляд, неоправданно.

Тем не менее, мы не случайно обратили внимание на снижение выраженности ЛРК (табл. 2) в группе животных, леченых эпиталоном.

Известно, что в патогенезе ранних лучевых реакций ведущим является острое нарушение гемодинамики в здоровых тканях, преимущественно функционального характера. Несмотря на некоторую субъективность визуальной оценки радиационной травмы по кожным лучевым реакциям, отмеченная тенденция к снижению остроты их проявления свидетельствует о перспективности испытания этого пептида как модификатора биологических реакций для коррекции воспалительных процессов.

ВЫВОДЫ 1. Использование компьютерного анализа изображений при морфофункциональном исследовании реакции радиорезистентной крысиной опухоли саркомы М-1 на воздействие ионизирующей радиации и пептидного препарата «эпиталон» позволило количественно охарактеризовать клеточные проявления повреждений опухоли, связанные с индукцией апоптоза и торможением пролиферативной активности.

2. Саркома М-1 представляет опухоль с высокой пролиферативной активностью и низким уровнем спонтанного апоптоза опухолевых клеток.

По данным компьютерного анализа микроскопических изображений в периферической зоне, определяющей рост опухолей, фракция пролиферирующих клеток по индексу PCNA составляет 76,5%, а уровень спонтанной гибели по индексу апоптоза – 0,28%.

3. Индивидуальные колебания эффективности однократного локального гамма-облучения в дозе 30 Гр на саркому М-1 обусловлены объемом опухоли в период воздействия. В период пострадиационного роста саркомы индекс PCNA снижается на 18,6%, в то время как индекс апоптоза увеличивается в 5 раз. Полученные данные соответствуют представлениям, что радиационно-индуцированный апоптоз является одним из важных факторов, обеспечивающих эффективность лучевой терапии опухолей.

4. Введение синтетического тетрапептида эпиталона крысам после подкожной трансплантации саркомы М-1 приводит к торможению роста опухолей. По показателям пролиферативной активности объективно регистрируемое торможение роста не связано с прямым цитостатическим действием этого препарата на опухолевые клетки. Морфологические признаки развития некроза опухолей и усиление в два раза индекса апоптоза опухолевых клеток свидетельствуют о специфическом механизме действия эпиталона, который, возможно, реализуется через сосудистое русло и клетки микроокружения опухолей.

5. Согласно результатам сравнительного гистологического, иммуногистохимического и компьютерного анализа аддитивный онкомодифицирующий эффект эпиталона не регистрируется, по-видимому, из-за наличия выраженных деструктивных изменений в паренхиме опухолей, вызванных гамма-облучением.

6. Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что метод компьютерного анализа изображений позволяет стандартизировать количественную оценку экспрессии маркеров, используемых в онкорадиобиологии, а также расширяет возможность получения объективных данных, необходимых для оценки коррекции дисбаланса между процессами пролиферации и индуцированной гибели опухолевых клеток при разработке схем лучевой и комбинированной терапии на экспериментальных моделях опухолевого роста.

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Южаков В.В., Хавинсон В.Х., Курилец Э.С., Кветной И.М., Фомина Н.К.

Функциональная морфология саркомы М-1 в «норме» и после гаммаоблучения // Высокие технологии в онкологии: Мат-лы V Всероссийского съезда онкологов. (Казань, 4-7 октября 2000 г.) – Ростов н/Д: Изд-во РГМУ, Изд-во РНИОИ, 2000. – Том 1. – С. 237-240.

2. Южаков В.В., Фомина Н.К., Кузнецова М.Н. Морфо-кинетические параметры саркомы М-1 без воздействия и после гамма-облучения // IV Съезд по радиационным исследованиям (Москва, 20-24 ноября 2001 г.):

Тезисы докладов. – Москва, 2001. – Т. 2. – С. 500.

3. Хавинсон В.Х., Южаков В.В, Кветной И.М., Малинин В.В., Попучиев В.В., Фомина Н.К. Иммуногистохимический и морфометрический анализ действия вилона и эпиталона на функциональную морфологию радиочувствительных органов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины – 2001. – Т. 131, № 3. – С. 338–346.

4. Южаков В.В., Хавинсон В.Х., Кветной И.М., Фомина Н.К., Кузнецова М.Н. Кинетика роста и функциональная морфология саркомы М–1 у интактных крыс и после гамма–облучения // Вопросы онкологии – 2001. – Т. 47, № 3. – С. 328–334.

5. Южаков В.В., Фомина Н.К. Применение компьютерного анализа микроскопических изображений в экспериментальной онкорадиобиологии // Материалы междисциплинарной конференции с международным участием «Новые биокибернетические и телемедицинские технологии 21 века для диагностики и лечения заболеваний человека» («НБИТТ-21»). – Петрозаводск, 27-29 июня 2002.

– С. 40-41.

6. Yuzhakov V.V., Fomina N.K., Konovalov S.S., Kvetnoy I.M., Khavinson V.Kh. Inhibition effect of epitalon on sarcoma M-1 in rats // Environment and human health, The complete Works of International Ecologic Forum June 29 – July 2, 2003, St.Petersburg. – P. 555-556.

7. Фомина Н.К., Южаков В.В. Компьютерный анализ микроскопических изображений для изучения пролиферативной активности и апоптоза опухолевых клеток в экспериментальной онкологии // Всероссийская конференция «Радиобиологические основы лучевой терапии». 19-апреля 2005. Изд. Российского университета дружбы народов. – Москва – 2005. – С. 67.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ АБП метод — метод авидин-биотин-пероксидазного комплекса;

БСП метод — метод биотин-стрептавидин-пероксидазного комплекса;

КРО — коэффициент роста опухолей;

ЛРК — лучевые реакции кожи;

ОК — опухолевые клетки;

ТК — тучные клетки;

ЯО — ядрышковые организаторы;

AgNOR — метод изучения ЯО селективным окрашиванием ядер клеток коллоидным раствором нитрата серебра;

PCNA — Proliferating Cell Nuclear Antigen (ядерный антиген пролиферирующих клеток) Основные стереологические и статистические параметры Sт — тестовая площадь 1 поля (мм2);

Ат — общая тестируемая площадь (площадь среза) (мм2) = Sт количество полей;

Ai — общая площадь сечений структуры i (мм2);

— объемная плотность структур i (интегральный показатель содержания структур в объеме ткани (%)) = Ai/Ат;

Si — средняя площадь сечения структуры i (мкм2);

Ns — общее число сечений структур i на площади среза;

Ni — количественная плотность (число сечений структур i на единицу площади среза) = Ns/Ат;

Iапопт — индекс апоптоза (%) = Nапопт/Nядер 100;

Iмит — митотический индекс (%) = Nмит/Nядер 100;

Iс — индекс соотношения = Iмит/ Iапопт;

IPCNA — индекс PCNA (%) = NPCNA/Nядер 100;

t — срок после имплантации опухоли (сутки);

V — объем опухолей (см3);

(t1- tn) — коэффициент, отражающий скорость роста опухолей в интервале времени t1-tn;

Tжив — продолжительность жизни животных после имплантации опухолей (сутки);

n — количество животных в группе;

Pages:     | 1 | 2 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»