WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

В связи с выраженным полиморфизмом гистоструктуры исследуемого штамма опухоли, нами были определены унифицированные критерии выбора тестовых полей для сравнительного анализа изучаемых параметров в подопытных группах, что, на наш взгляд, позволило добиться максимальной стандартизации полученных результатов (табл. 1).

Таблица 1.

Количественные характеристики исследованных параметров саркомы М-1 в контрольных и подопытных группах.

Группы и IМИТ IАПОПТ SЯО ЯО срок NОК/ мм2 IPCNA (%) (%) (%) мкм2 (%) исследования 1-я (контроль);

4117±125 81,0±5,9 2,30±0,21 0,29±0,08 2,69±0,09 7,59±0,16-18-е сут;

n=1-я (контроль); 4220±80 76,5±2,6 2,28±0,09 0,28±0,03 2,70±0,08 7,40±0,26-е сут; n=2-я 2,29±0,(-облучение); 4020±96 68,0±1,5 0,55±0,10 2,75±0,07 6,02±0,p2,1 < 0,3 ч; n=2-я 3503±154 1,97±0,(-облучение); 69,3±3,0 (-) 3,21±0,05 5,63±0,p2,1 < 0,05 p2,1 < 0,1-е сут; n=2-я 1993±147 1,93±0,15 3,29±0,(-облучение); 85,7±3,0 (-) 5,61±0,p2,1 < 0,05 p2,1 < 0,05 p2,1 < 0,3-и сут; n=2-я 3560±205 62,3±3,9 1,50±0,18 3,10±0,02 5,90±0,(-облучение); 2,31±0,p2,1 < 0,05 p2,1 < 0,05 p2,1 < 0,01 p2,1 < 0,05 p2,1 < 0,10-е сут; n=3-я (действие 0,67±0,4230±120 74,5±2,7 1,89±0,11 2,80±0,03 7,38±0,эпиталона); p3,1 < 0,n=4-я (-облучение 3320±190 2,07±1,16 1,30±0,12 2,98±010 5,10±0,61,1±3,+ эпиталон); p4,2 > 0,05 p4,2 > 0,05 p4,2 > 0,05 p4,2 > 0,05 p4,2 > 0,n= (-) – большая часть митозов представлена патологическими формами В конце экспоненциальной фазы роста саркомы М-1 в периферической зоне паренхимы, определяющей рост опухолей, плотность опухолевых клеток составляет 4200 ± 80 на 1 мм2, митотический индекс опухолевых клеток определен в 2,28 ± 0,09%, а индекс апоптоза почти на порядок ниже – 0,28 ± 0,03%. По индексу соотношения (Iс = 8,2) митотическая активность опухолевых клеток в 8 раз выше, чем их гибель путем апоптоза.

По существующим представлениям основные закономерности скорости роста определяются балансом размножения, гибели и элиминации опухолевых клеток [Райхлин Н.Т. и др., 1996]. Согласно современным представлениям идеальными маркерами пролиферации являются белки, постоянно присутствующие в клетке во всех фазах митотического цикла и быстро исчезающие при его завершении. Поэтому в настоящее время для оценки пролиферативного статуса опухолевых клеток применяют иммуногистохимическое выявление ядерных белков (циклинов), принимающих участие в подготовке клеточного деления [Iatropoulos M.J., Williams G.M., 1996]. При изучении клинического материала с этой целью наиболее часто применяется антиген Ki-67 [Пожарисский К.М. и др., 2005]. В экспериментальных исследованиях широкое распространение получил PCNA [Южаков В.В. и др., 2005; Conolly K.M., Bogdanffy M.S., 1993]. Этот дополнительный белок к и полимеразам ДНК появляется в ядрах делящихся клеток в середине G1 периода, максимальная экспрессия происходит в S фазе и постепенно снижается к концу периода G2. Фактически, иммунолокализация этого циклина позволяет выявить всю фракцию пролиферирующих клеток.

Полученные нами данные показали, что в саркоме М-1 фракция пролиферирующих клеток по индексу PCNA составляет 76,5 ± 2,6%.

Следует полагать, что при интегральной оценке степени прогрессии злокачественных новообразований учет фактора «потери» клеток является не менее важным, чем их способность к размножению. Для опухолей основными факторами «потери» являются некроз и апоптоз. Полученные нами данные по митотическому и апоптотическому индексам отличаются от результатов других авторов [Абросимов А.Ю., Скоропад В.Ю., 1991]. Вариабельность этих показателей объясняется принципиально иным методологическим подходом, выбранным нами для изучения функциональной морфологии этой опухоли, и унифицированной системой подсчета клеток.

По-видимому, для саркомы М-1, широко используемой в радиобиологических исследованиях, достаточно большое значение имеют и другие полученные нами результаты. Так, несмотря на выраженный экспансивный характер роста саркомы М-1, признаков инвазии в сосуды и прорастания опухолевыми клетками соединительнотканной капсулы мы не обнаружили, что свидетельствует о невысокой склонности этого штамма к метастазированию. Кроме того, отсутствие выраженной перифокальной воспалительной и иммунной реакции предполагает, что клетки саркомы М-обладают, по-видимому, высокой толерантностью к защитным иммунным реакциям организма.

В целом, наши результаты показали, что саркома М-1 представляет низкодифференцированную соединительнотканную опухоль с высоким пролиферативным потенциалом и низким уровнем спонтанного апоптоза. Судя по зонам ядрышковых организаторов, высокая функциональная активность опухолевых клеток направлена на интенсификацию процессов размножения.

По существующим представлениям в интерфазных ядрах зоны ядрышковых организаторов представляют участки активной транскрипции рРНК [Morales A. et al., 1996]. В последние годы метод AgNOR для изучения зон ЯО предлагают применять для прогностической оценки эффективности предоперационной радиотерапии опухолей [Kinoshita Y. et al., 1996]. Многие исследователи ограничиваются определением лишь количества ядрышковых организаторов в ядре, производя подсчет среднего числа гранул серебра на одно ядро. Однако есть данные и об измерении площади зон ядрышковых организаторов с использованием систем компьютерного анализа [Турбин Д.А., Перевощиков А.Г., 1998]. Нами был введен дополнительный интегральный показатель, отражающий процентное содержание области ЯО в ядре. Так, в контроле в клетках саркомы М-1 средняя площадь одной зоны ЯО составила 2,7 ± 0,08 мкм2; при интегральном содержании в ядре – 7,4 ± 0,18%.

Сравнительная оценка роста опухолей в группе контрольных животных и после гамма-облучения в дозе 30 Гр (рис. 1,а) показала, что в течение первой недели после облучения наблюдается довольно быстрая частичная регрессия опухолей с последующим также достаточно быстрым увеличением их объемов в течение 2 - 4 сут. Полученные результаты согласуются с данными литературы, согласно которым ускоренная репопуляция новообразований в первое время после ремиссии или регрессии объясняется двумя моментами:

увеличением пролиферативного пула опухолевых клеток в связи с реоксигенацией и в ряде случаев - снижением продолжительности клеточного цикла [Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А., 2004]. По-видимому, определенную роль в быстром увеличении размеров опухолей играет и отек в зоне облучения.

Именно в этот период в зоне радиационного воздействия начинает формироваться картина лучевого дерматита.

Наши результаты изучения опухолей в ранние сроки после гаммаизлучения показали, что индуцированная ионизирующей радиацией гибель опухолевых клеток идет по «стандартной схеме», однако лучевая инактивация саркомы М-1 достаточно низкая. Так, однократное гамма-облучение в дозе Гр привело лишь к частичной регрессии и последующему быстрому возобновлению роста опухолей при полном восстановлении их объемов к сут после облучения. К 3 сут после облучения количественная плотность морфологически жизнеспособных опухолевых клеток в тестовой зоне снизилась только в 2 раза (табл. 1). При этом пролиферативная активность клеток, избежавших лучевой инактивации, сохранилась очень высокой (IPCNA составил 85,7%). Объяснить достаточно низкий уровень лучевой инактивации саркомы М-1, по-видимому, можно исходя из того, что значительную часть опухолевой популяции в этом опухолевом штамме составляют гипоксические клетки. Активизация в этот период зон ЯО свидетельствует о направленности биосинтетических процессов на репарацию поврежденных структур выживших опухолевых клеток. Усиление пролиферативной активности клеток на 3 сут после облучения, возможно, обусловлено эффектами реоксигенации распределением кислорода среди меньшего числа клеток и увеличением доступа кислорода к ранее гипоксическим клеткам.

а б Контроль Гамма облучение Гамма-облучение 0,10 14 18 22 26 30 34 38 42 46 50 10 14 18 22 26 30 34 38 42 46 50 г в Контроль Облучение эпиталон Облучение + эпиталон 10 14 18 22 26 30 34 38 42 46 50 10 14 18 22 26 30 34 38 42 46 Рис. 1. Рост саркомы М-1 в контрольной и подопытных группах.

По оси абсцисс – срок после имплантации опухолей, сут; по оси ординат – объем опухолей, см3. а – рост опухолей в контроле и после облучения в координатах логарифмической шкалы; б – индивидуальная реакция опухолей на гамма-облучение в дозе 30 Гр; в – рост опухолей в контроле и после введения эпиталона; г – рост саркомы М-1 после облучения и сочетанного применения гамма-облучения и последующего введения эпиталона Полученные нами данные о снижении числа делящихся опухолевых клеток и существенном увеличении апоптотических клеток через 3 ч после облучения в дозе 30 Гр и динамике их изменений в последующие сроки в целом совпадают с данными литературы. Однако обращает внимание сохранение высокой пролиферативной активности клеток саркомы М-1 по индексу PCNA.

Последнее предполагает, что синтез этого циклина достаточно резистентен к действию ионизирующей радиации даже после подведения больших доз.

На наш взгляд, установленный факт, что эффективность однократного гамма-облучения зависит от объема опухоли на момент лучевого воздействия (рис. 1,б; 2,б), подтверждает роль фракции гипоксических клеток в радиочувствительности саркомы М-1. Однако не исключено, что низкая радиочувствительность саркомы М-1 обусловлена не только фракцией гипоксических клеток. По нашим последним данным [Южаков В.В. и др., 2005] в клетках саркомы М-1 определяется интенсивная ядерная экспрессия мутантного гена р53, который может оказывать существенное влияние на радиорезистентность этого опухолевого штамма. Возможно, что наличие мутантного гена р53 обуславливает и столь низкий уровень спонтанной апоптотической гибели клеток саркомы М-1.

б а 2,60 y = 0,81Ln(x) + 1,1,y = 75,90e-1,10x 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 0 0,5 1 1,5 Рис. 2. Влияние объема опухолей на темп их роста в экспоненциальной фазе: а - в контроле; б - при действии -облучения в дозе 30 Гр. По оси абсцисс – объем опухолей, по оси ординат - коэффициент роста опухолей.

В последние годы особенно активно ведутся поиски новых средств комбинированной противоопухолевой терапии с использованием не только цитотоксических, но и не цитотоксических препаратов [Olie R. et al., 2000; Kim K et al., 2002; Post D. et al., 2003]. В этой связи обращает внимание интерес исследователей к изучению различных аспектов действия на организм регуляторных пептидов [Хавинсон В.Х. и др., 2003; Лабунец И.Ф. и др., 2004;

Коркушко О.В. и др., 2004]. В частности, показана эффективность использования некоторых пептидов в коррекции радиационных иммунодефицитов, а также ингибирующий эффект эпиталона на пролиферативную активность клеток радиочувствительных органов [Смирнов В.С. и др., 1992; Хавинсон В.Х. и др., 2001], что позволило предполагать наличие противоопухолевой активности данного препарата.

Действительно, по нашим данным (рис. 1,в; табл. 2) эпиталон достоверно замедляет рост саркомы М-1. При этом ингибирующий эффект сохраняется примерно в течение 2 недель после окончания курса введения препарата. Кроме того, использование эпиталона увеличило среднюю продолжительность жизни животных на 20%. В результате она составила 44,9 ± 2,7 сут (Pt < 0,04; PU = 0,04). Результаты комплексного исследования показали, что на фоне введения эпиталона пролиферативная активность опухолевых клеток остается столь же высокой, как и в контрольной группе (табл. 1). Следовательно, по показателям пролиферативной активности, объективно регистрируемое замедление темпа роста саркомы М-1 не связано с прямым цитостатическим действием этого препарата на опухолевые клетки. Морфологические признаки развития некроза опухолей свидетельствуют о специфическом механизме действия, который, повидимому, может реализоваться через микроциркуляторное русло.

Таблица 2.

Параметры роста опухолей, лучевые реакции кожи и продолжительность жизни животных в контрольной и подопытных группах.

ЛРК Тжив G(28-35) Группа животных (28-40) (баллы) (сутки) (см3) 1 14,73 ± 1.01 1,34 37,4 ± 2, (контроль) n = 6 n = 3 n = 2 0,8 ± 0,15 0,08 2,0 ± 0,3 > (-облучение в дозе 30 Гр) n = 8 n = 8 n = 15 n = 10,89± 1,20 44,9 ± 2,3 0,n = 8 n = (эпиталон) n = P3,1 < 0,05 P3,1 < 0,0,9 ± 0,14 1,3 ±0,4 0,08 > n = 8 n = (-облучение + эпиталон) n = 8 n = P4,2 > 0,05 P4,2 = 0,По нашим данным характерной чертой препаратов после введения эпиталона является появление вокруг сосудов многочисленных клеток, которые окрашиваются толуидиновым синим и дают положительную иммуногистохимическую реакцию на серотонин. В отдельных участках их количественная плотность достигает 90 на 1 мм2 площади паренхимы опухоли.

При использовании метода серийных полутонких - ультратонких срезов эти клеточные элементы были идентифицированы как тучные клетки.

Результаты электронно-микроскопического исследования свидетельствуют, что после введения эпиталона основные события развертываются в периваскулярной строме. При этом появляются многочисленные моноциты, являющиеся, как известно, предшественниками макрофагов, и наряду с естественными киллерами, активированными Тлимфоцитами и тучными клетками, обладающие противоопухолевой цитотоксичностью. Не исключено, что в «пусковой механизм» сосудистостромальных изменений в саркоме М-1, регистрируемых после введения эпиталона, вовлечены вазоактивные медиаторы и, следует полагать, прежде всего, биологически активный амин - серотонин. Ранее проведенные исследования [Хавинсон В.Х. и др., 2001, 2003] показали, что эпиталон оказывает модулирующее действие на синтез серотонина в энтерохромаффинных клетках – основных депо его содержания в организме.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»