WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Мощность дозы, Объемная № п/п Доза, Гр Гр/час активность, Бк/мл 1 0,06 0,0025 4,59·2 0,15 0,0063 13,80·3 0,26 0,018 22,75·4 0,50 0,021 45,90·5 0,75 0,031 67,80·6 1,00 0,042 91,90·Таблица 2. Режим облучения проб крови бета-излучением НТО с постоянной мощностью дозы и с разным временем облучения (режим В).

№ п/п Доза, Гр Время облучения, час 0,05 1,0,2 4,3 0,25 8,4 0,50 16,5 0,75 24,6 1,00 32,Всего было проведено 6 серий облучений проб крови, полученных от доноров. Каждую серию облучений проводили при двух режимах: А и В.

Пробы крови облучали в стерильных условиях при комнатной температуре. В каждую пробирку помещали по 5мл цельной крови, 1мл среды RPMI-1640 с антибиотиками и 1мл раствора НТО соответствующей активности. Стерилизацию растворов НТО проводили, пропуская их через фильтрующие насадки Millipore.

Процедуру отмывки надосадочной жидкости повторяли 4 раза, центрифугируя пробы крови в течение 15 минут при 1000 об/мин. Бета-активность удаляемой надосадочной жидкости после четвертой отмывки определяли на жидкостном сцинтилляционном счетчике РЖС-05 с использованием сцинтилляционного раствора Ultima Gold.

Погрешность измерений составила ± 10%.

Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами (Гланц, 1999, Лапач и др., 2000). Достоверность различий между группами оценивали с помощью точного критерия Фишера.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Анализ нестабильных хромосомных аберраций в группе профессионаловатомщиков В таблице 3 представлены результаты анализа нестабильных хромосомных аберраций в группе профессионалов-атомщиков. Здесь же приведены результаты обследования контрольной группы.

Таблица 3. Результаты цитогенетического обследования группы профессионалов-атомщиков (анализ нестабильных хромосомных аберраций) Частота хромосомных аберраций, на 100 клеток, Кол-во Кол-во Группа М ± m человек клеток ab dic + rc ace chr 0,92 ± 0,Контроль 49 51893 0,08 ± 0,01 0,32 ± 0,02 0,51 ± 0.Профессио 79 65557 1,82 ± 0,05* 0,18 ± 0,02* 0,64 ± 0,03* 0,95 ± 0,04* -налы * - разница с контрольными значениями достоверна, р<0,05, точный критерий Фишера ab - общее число аберраций;

dic + rc – дицентрики и центрические кольца ;

ace –ацентрические фрагменты; chr –-хроматидные аберрации.

Статистический анализ полученных данных позволил выявить достоверные различия по всем цитогенетическим показателям – общая частота хромосомных аберраций, частота дицентриков и центрических колец, частота ацентрических фрагментов, а также аберраций хроматидного типа в группе профессионаловатомщиков достоверно превышала соответствующие контрольные значения. Что касается маркеров радиационного воздействия – дицентриков и центрических колец, то их частота в группе профессионалов-атомщиков была в 2,25 раз выше, чем в контрольной группе. Таким образом, проведенный цитогенетический анализ позволил выявить среди циркулирующих лимфоцитов периферической крови клетки с хромосомными аберрациями – дицентриками и центрическими кольцами, индуцированные бета-излучением трития.

Была проанализирована зависимость индивидуальной частоты хромосомных аберраций от накопленной за весь период работы поглощенной дозы. В целом наблюдается слабая, но значимая корреляция индивидуальных частот обменных аберраций и значений поглощенных доз (коэффициент корреляции составил 0,23;

р 0,05).

Для более детального анализа дозовой зависимости частоты хромосомных аберраций обследованная группа профессионалов-атомщиков была разделена на равные по числу людей подгруппы согласно значениям накопленных поглощенных доз. В таблице 4 представлены результаты проведенного анализа.

Подгруппы с наименьшими и с наибольшими значениями накопленных доз достоверно отличаются по частоте дицентриков и центрических колец. Частота обменных аберраций составила 0,14 ± 0,02 в первой подгруппе и 0,24 ± 0,04 на клеток во второй. Следует отметить, что все подгруппы, включая также и подгруппу с накопленными значениями доз менее 3,6 сЗв, по всем цитогенетическим показателям достоверно отличаются от контрольных значений.

Таблица 4. Результаты цитогенетического анализа в группах профессионаловатомщиков с разными значениями суммарных поглощенных доз.

Частота хромосомных аберраций, на 100 клеток, Кол-во Кол-во Доза, сЗв М ± m человек клеток ab dic+rc ace chr Контроль 49 51893 0,92 ± 0,04 0,08 ± 0,01 0,32 ± 0,02 0,51 ± 0.D <3,6 27 24481 1,69 ± 0,08 а 0,14 ± 0,02*а 0,59 ± 0,05 а 0,92 ± 0.06 а 3,6D 10,3 26 21411 1,79 ± 0,09 а 0,16 ± 0,03 а 0,64 ± 0,05 а 0,95 ± 0,07 а D >10,3 26 21283 2,00 ± 0,10 а 0,24 ± 0,04*а 0,68 ± 0,06 а 0,98 ± 0,07 а а - различия с контрольной группой достоверны * - различия между подгруппой с накопленной дозой меньше 3,6 сЗв и подгруппой с дозой больше 10,3 сЗв достоверны, р 0,05, точный критерий Фишера.

Поскольку клетки с нестабильными хромосомными аберрациями (дицентриками и центрическими кольцами), постепенно элиминируют из периферической крови, по остаточной частоте дицентриков и центрических колец спустя годы после радиационного воздействия можно только судить о возможном факте облучения без оценки дозы. Однако результаты проведенного анализа, несомненно, важны, особенно при осуществлении цитогенетического мониторинга в группах людей, подвергшихся облучению в процессе профессиональной деятельности. Полученные результаты позволяют оценить степень повреждения генома и могут быть объективным критерием при формировании групп риска развития отдаленных последствий облучения, в том числе канцерогенеза.

Анализ стабильных хромосомных аберраций в группе профессионаловатомщиков.

В таблице 5 приведены объединенные данные для обследованной группы профессионалов-атомщиков.

Учитывая имеющиеся в литературе сведения об увеличении частоты транслокаций с возрастом, полученные результаты сравнивали не только с контрольными значениями, полученными при обследовании контрольной группы (Snigiryova et.al, 1997 ), но и с литературными данными (Whitehouse, et al., 2005).

Средняя частота транслокаций для всей обследованной группы составила 21,8 ± 3,1 на 1000 клеток. Эта величина примерно в 2 раза превышала контрольный уровень по данным литературы (как для возраста 60–69 лет, так и для возраста 70–лет) и в 4 раза - уровень транслокаций собственной контрольной группы. Только для двух обследованных профессионалов были получены высокие значения частоты транслокаций – 87.9 ± 14,5 и 57,5 ± 15,6 на 1000 клеток. Исключение этих людей из расчета лишь незначительно снижало значение средней частоты транслокаций (19,0 ± 1,7 на 1000 клеток).

Принимая во внимание, что частота транслокаций в лимфоцитах периферической крови используется для ретроспективной дозиметрии, была проанализирована зависимость этого показателя от величины накопленной за период профессиональной деятельности дозы. В обследованной группе профессионалов выявлена положительная корреляция между индивидуальной частотой транслокаций в лимфоцитах крови и поглощенной дозой, полученной с помощью расчетных методов дозиметрии (r=0,75; p0,001).

Таблица 5 - Результаты цитогенетического анализа в группе профессионалов-атомщиков (FISH метод) Эквивалент- Геномная Число ная доза, сЗв, Число Число частота Возрастной Группа обследован М±m клеток –экв. транслокаций транслокаций на диапазон ных (Nэкв) (tc+ti) 1000 клеток (FG) M ± m 21,9 ± 3,1* 20 20,4 ± 5,9 63-76 14342 Профессионалы - 77,7 ± 14,1* атомщики 2 82,0 ± 17,5 67-68 618 19,4 ± 1,7* 18 13.6 ± 3,6 63-76 13724 67 - 60-69 32547 328 10,1 ± 0,Контроль (Whitehouse et al, 2005) 41 - 70-79 17227 231 13,4 ± 1,Контроль(Snigiryova 16 - 35-61 9061 49 5.4 ± 1,et.al, 1997) * - различия с контрольными значениями достоверны, p 0,Nэкв- клеточный эквивалент;

Nэкв = 2,05fp(1-fp)N; где fp – доля генома, которую составляют «окрашенные» хромосомы (0,187);

N – число проанализированных метафаз.

Исследование дозовой зависимости для частоты хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови человека при действии бета-излучения оксида трития (НТО).

В эксперименте in vitro было проведено исследование влияния дозы бета-излучения трития на частоту хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови. Были проанализированы дозовые зависимости для частоты дицентриков и центрических колец, полученные после облучения проб крови бета-излучением НТО при разных режимах радиационного воздействия, и построены кривые «доза-эффект» (рис. 1). Статистический анализ данных показал, что дозовые зависимости, полученные при разных режимах облучения, не имели достоверных различий. Поэтому данные двух экспериментов были объединены и проанализированы. Для построения регрессии использовался метод наименьших квадратов с весами, величины которых пропорциональны дисперсиям частот хромосомных аберраций. Полученная зависимость «доза-эффект» для дицентриков и центрических колец лучше всего описывается линейно-квадратичной моделью Y = (0,05±0,02) 10-2+(3,87±0,12) 10-2D+(7,28±0,14) 10-2Dгде Y–частота дицентриков и центрических колец на 100 клеток; D–доза, Гр.

0,вариант А 0,вариант В 0,0,0,0,0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,Доза, Гр Рисунок 1 - Зависимости частоты дицентриков и центрических колец от дозы бета-излучения трития in vitro при разных режимах облучения.

Частота дицентриков и колец на клетку График регрессии для частоты дицентриков и центрических колец представлен на рисунке 2.

0,0,0,0,0,0,0,0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,Доза, Гр Рисунок 2 – Объединенная кривая «доза-эффект» для частоты дицентриков и центрических колец Также были проанализированы зависимости «доза-эффект» для аберраций хромосомного и хроматидного типов. Коэффициенты регрессионных зависимостей вида y=c + aD+bD2 представлены в таблице 6.

Таблица 6. Коэффициенты регрессионных зависимостей вида y=c + aD+bDЦитогенетический a10-2 b10-2 c10-r p показатель Дицентрики и 3,87±0,12 7,28±0,14 0,05±0,02 0,891 0,центрические кольца Аберрации 7,29±0,35 16,49±0,44 0,92±0,0,912 0,хромосомного типа Хроматидные - 0,92±0,02 0,87±0,14 0,319 0,аберрации r – коэффициент корреляции;

p – уровень значимости В диапазоне доз от 0,05 до 1,0 Гр зависимости доза-эффект для дицентриков и центрических колец и для всех аберраций хромосомного типа описываются линейноквадратичным уравнением, а для аберраций хроматидного типа – линейным уравнением.

Оценка относительной биологической эффективности бета-излучения НТО.

Полученные в радиобиологическом эксперименте результаты позволили провести оценку Частота дицентриков и колец на клетку относительной биологической эффективности бета-излучения трития при данных, конкретных условий облучения. ОБЭ бета-излучения трития определяли, сравнивая полученные в эксперименте с НТО данные с результатами эксперимента по облучению проб крови гамма-излучением Со с мощностью дозы 0,103Гр/мин.(ур. регрессииY = (0,0008±0,0006)+(0,0080±0.0017)D+(0,0771±0,0017)D2). Сравнивали дозы излучения, которые индуцируют одинаковую частоту хромосомных аберраций, а именно частоту дицентриков и центрических колец. Величину относительной биологической эффективности бета-излучения трития определяли, используя следующее уравнение:

ОБЭ = D / D = [(0,0027+0,5019D+0,9442D2)1/2 - 0.0519] / D.

(1) где: ОБЭ - относительная биологическая эффективность D - доза гамма-излучения, Гр D - доза бета-излучения, Гр График зависимости ОБЭ трития от дозы бета-излучения НТО приведен на рисунке 3.

В исследованном диапазоне доз ОБЭ трития выше эффективности гамма-излучения, особенно ярко это проявляется в области малых дозах. Так, при минимальной дозе 0,05 Гр наблюдается максимальная ОБЭ трития, равная примерно 2,6. При дозе 1,0 Гр ОБЭ НТО составляет 1,15.

3,2,2,1,1,0,0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 1,Доза излучения трития, Гр Рисунок 3 – Значения ОБЭ бета-излучения трития в исследуемом диапазоне доз.

ОБЭ гамма-нейтронное бета-излучение НТО спонтанный уровень.

0 10 20 30 40 50 60 Доза, сГр Рисунок 4. Частоты транслокаций у профессионалов-атомщиков, подвергавшихся действию бета- и гамма-нейтронного излучений, сформированных по величине эффекта (индивидуальные данные).

Данные по частоте транслокаций в группе профессионалов-атомщиков, подвергавшихся действию бета- излучения трития, а также аналогичные данные, полученные ранее (Proceedings of IV ISTC scientific advisory committee seminar, Novosibirsk, 2001) при обследовании профессионалов-атомщиков, подвергавшихся действию внешнего гамма-нейтронного излучения, позволили проверить полученные в эксперименте значения биологической эффективности трития. С этой целью был проведен сравнительный анализ результатов цитогенетического обследования профессионалов-атомщиков, имевших близкие значения частот транслокаций. На рисунке 4 представлены индивидуальные значения частот транслокаций в группах профессионалов-атомщиков, подвергавшихся действию бета- и гамма-нейтронного излучений.

Средние значения частот транслокаций и поглощенных доз в группах профессионалов-атомщиков, подвергавшихся действию бета- и гамма-нейтронного излучений, представлены в таблице 7.

Частота транслокаций, Fg на1000 клеток Таблица 7 – Результаты сравнительного анализа данных цитогенетического обследования групп профессионалов-атомщиков, подвергавшихся действию бета- и гамма-нейтронного излучений Частота Средняя доза, Количество Вид воздействия транслокаций FG сЗв * D - n/D человек на 1000 кл. M± m M± m Бета-излучение 19,4 ± 1,18 13,6 ± 3,трития Гамма- 3,нейтронное 13 19,8 ± 2,7 44,4 ± 4,излучение *- доза реконструирована по данным физической дозиметрии Как следует из таблицы 7, в группе профессионалов, подвергавшихся действию гамма-нейтронного излучения, дозы, вызывающие эффект, близкий к наблюдаемому в группе профессионалов, подвергавшихся воздействию бета-излучения трития, были выше в 3,3 раза. Эти данные являются косвенным подтверждением более высокой биологической эффективности бета-излучения трития и позволяют сделать вывод о хорошем соответствии со значениями ОБЭ бета-излучения трития, полученными при проведении радиобиологического эксперимента.

Таблица 8 - Биологическая оценка индивидуальных доз в группе профессионаловатомщиков.

Биологическая оценка дозы, сЗв Доза, полученная с Вариант 1 (по Частота Вариант 2 (по помощью калибровоч-ной Код транслокаций, калибровочной кривой расчетных кривой для бетаFG, на 100 кл.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»