WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Препараты анализировали на флуоресцентном микроскопе Axioplan (Carl Zeiss) при суммарном увеличении х1000. Анализировали только метафазы первого митоза, содержащие шесть окрашенных хромосом-мишеней. Регистрировали реципрокные и терминальные транслокации, инсерции, дицентрические хромосомы при анализе на каждого человека не менее 1000 клеток. По частоте ХА с участием окрашенных хромосом-мишеней рассчитывали геномную частоту событий по формуле, рекомендованной (Lucas J. N. et al, 1992).

1.5. Статистическая обработка результатов.

При анализе результатов рутинного анализа для каждой группы рассчитывали среднюю частоту хромосомных аберраций на 100 клеток. Достоверность межгрупповых отличий оценивали при помощи t-критерия Стьюдента. При оценке влияния различных факторов на частоту ХА использовали корреляционный анализ Спирмана, регрессионный анализ с использованием метода наименьших квадратов, двухфакторный дисперсионный анализ. Для статистической обработки данных использовали программные пакеты «Statistica for Windows 6.0», Statgraphics Plus 5.1, GraphPad Prism 4.0.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Влияние низкодозового облучения на спонтанную частоту нестабильных ХА.

Результаты сравнения контрольной и экспонированной групп по частоте ХА представлены в таблице 1. В большинстве экспонированных групп частота ХА превышает контрольную. У детей группы ДЭ частота маркеров радиационного воздействия (НХО) повышена в два раза по сравнению с детьми контрольной выборки; частота ОФ также превышает контрольную, однако различия не достоверны. В группе взрослых общая частота ХА достоверно повышена во всех группах, у ВЭ – за счёт частоты ОФ, у Л – за счёт аберраций хромосомного типа (НХО и ПФ), у ВТ – за счёт всех типов аберраций. Наибольшая частота ХА - 10 наблюдается у ВТ, хотя со времени окончания радиационного воздействия прошли десятилетия (от 15 до 45 лет). Таким образом, на нескольких контингентах лиц, подвергавшихся в прошлом низкодозовому облучению, продемонстрировано сохранение повышенного уровня нестабильных ХА, что совпадает с литературными данными. Поскольку цитогенетический анализ проводили в отдалённые сроки после лучевого воздействия, представленные результаты могут свидетельствовать либо о длительном сохранении первично индуцированных ХА (повышение частоты НХО), либо об их более частом возникновении de novo, то есть о нестабильности облучённого генома (повышение частоты ПФ и ОФ).

Таблица 1. Спонтанная частота хромосомных аберраций (на 100 клеток) у людей различных групп.

дети взрослые группа ДК ДЭ ВК ВЭ Л ВТ кол-во 43 75 92 19 174 людей кол-во 7340 16009 17438 3730 32605 клеток всего 1,88±0,16 2,00±0,11 2,02±0,11 2,62±0,27* 2,59±0,09* 3,52±0,26* ХА НХО 0,07±0,03 0,15±0,03* 0,11±0,02 0,13±0,06 0,17±0,02* 0,55±0,10* ПФ 0,76±0,10 0,67±0,06 0,94±0,07 1,07±0,17 1,30±0,06* 1,42±0,16* ОФ 1,05±0,12 1,18±0,09 0,97±0,07 1,42±0,19* 1,12±0,06 1,55±0,17* Примечание. Отличия от контрольных групп достоверны: * - p<0,05.

2.2. Влияние возраста на спонтанную частоту нестабильных ХА.

Для выявления связи между частотой ХА и возрастом было использовано два подхода: корреляционный анализ Спирмана по индивидуальным данным возраст – частота ХА; корреляционный, дисперсионный и регрессионный анализы средних значений ХА и возраста в группах, объединённых в 10-летние возрастные интервалы.

В контрольной выборке при корреляционном анализе Спирмана индивидуальных данных не было установлено достоверной связи с возрастом ни общей частоты ХА, ни частот отдельных типов аберраций – НХО, ПФ, ОФ, хотя для общей частоты аберраций хромосомного типа она была на грани достоверности. При аналогичном анализе выборки экспонированных лиц наблюдали достоверное увеличение с возрастом общей частоты ХА, частот НХО и ПФ (табл. 2).

- 11 Таблица 2. Коэффициенты корреляции между спонтанной частотой хромосомных аберраций и возрастом по индивидуальным данным и при разделении выборок на шесть возрастных групп.

по индивидуальным данным по усредненным данным тип контроль экспонированные контроль экспонированные аберраций (N=128) (N=282) (N=6) (N=6) r=0,17 r=0,23 r=0,99 r=0,ХА p=0,059 p=0,0001 p=0,003 p=0,r=0,15 r=0,13 r=0,94 r=0,НХО p=0,097 p=0,036 p=0,017 p=0,r=0,16 r=0,24 r=0,94 r=0,ПФ p=0,074 p=0,000 p=0,017 p=0,r= -0,10 r= -0,02 r= -0,43 r= 0,ОФ p=0,238 p=0,696 p=0,419 p=0,Примечание. Жирным выделены достоверные коэффициенты корреляции (p< 0,05), ХА – аберрации хромосомного типа.

В таблице 3 представлены данные о возрастной зависимости уровня ХА при разбиении выборок на десятилетние возрастные интервалы. В обеих группах количество аберраций хромосомного типа увеличивается с возрастом.

Таблица 3. Спонтанная частота хромосомных аберраций у лиц шести возрастных групп.

возрастной средний кол- кол-во аберраций на 100 клеток Группа интервал, возраст, во ХА НХО ПФ ОФ годы годы чел.

1-10 6,9±0,5 22 0,63±0,14 0,06±0,04 0,57±0,13 0,99±0,11-20 14,4±0,5 24 0,93±0,14 0,08±0,04 0,84±0,13 1,03±0,21-30 26,2±0,6 28 1,01±0,14 0,08±0,04 0,96±0,14 1,14±0,31-40 34,9±0,6 29 1,01±0,14 0,15±0,05 1,04±0,14 1,06±0,41-50 44,4±0,6 16 1,17±0,20 0,14±0,07 1,04±0,19 0,66±0,51-72 61,7±1,9 9 1,34±0,28 0,23±0,15 1,10±0,25 0,81±0,1-10 7,8±0,3 43 0,75±0,09 0,13±0,04 0,62±0,08 1,12±0,11-20 13,1±0,3 29 0,96±0,12 0,19±0,05 0,77±0,11 1,30±0,21-30 27,6±0,4 26 1,31±0,16 0,15±0,05 1,16±0,15 1,16±0,31-40 35,8±0,3 82 1,33±0,09 0,14±0,03 1,19±0,09 1,27±0,41-50 45,0±0,4 65 1,59±0,12 0,23±0,05 1,36±0,11 1,03±0,51-72 58,1±0,9 37 1,65±0,14 0,28±0,06 1,37±0,13 1,32±0,Примечание. ХА – аберрации хромосомного типа.

При корреляционном анализе этих данных в контрольной выборке высокую достоверную положительную корреляцию наблюдали между возрастом и общей частотой аберраций хромосомного типа, а также частотами НХО и ПФ, что может быть связано с уменьшением межиндивидуальных различий за счёт усреднения данных. В экспонированной выборке подтвердилась и оказалась более тесной контроль ные экспонирован - 12 положительная связь частот аберраций хромосомного типа и возраста, установленная при анализе индивидуальных данных. Корреляция частоты НХО и возраста, в отличие от аналогичной корреляции, рассчитанной по индивидуальным данным, оказалась недостоверной (табл. 2).

Двухфакторный дисперсионный анализ, проведённый по усреднённым данным в шести возрастных группах, выявил достоверный вклад фактора «облучённость группы» в значение частот всех изученных аберраций. Фактор «возраст» оказывал достоверное влияние на общую частоту ХА (F=3,5, p<0,01) и частоту ПФ (F=5,5, p<0,001), но не на уровень НХО и ОФ.

Как показал регрессионный анализ данных, усреднённых по десятилетним интервалам, зависимость частоты ХА, частоты НХО и частоты ПФ от возраста как в контрольной, так и в экспонированной выборках, удовлетворительно описывается линейной функцией вида Y = a + bX, где Y – частота аберраций в процентах, X – возраст в годах. В контрольной выборке линейная модель оказалась достоверной для аберраций хромосомного типа – НХО, ПФ и общей частоты ХА, в экспонированной выборке – для общей частоты ХА и частоты ПФ. Коэффициенты уравнений регрессии частоты ХА на возраст представлены в табл. 4, а соответствующие кривые на рис.1. Различия между соответствующими коэффициентами регрессии в контрольной и экспонированной выборках для общей частоты ХА достоверны, тогда как почти двукратные различия между коэффициентами регрессии для частоты ПФ лежат на грани достоверности (p=0,07).

Таблица 4. Коэффициенты уравнений линейной регрессии частоты ХА на возраст, рассчитанной по усреднённым данным для шести возрастных групп.

ХА НХО ПФ группа a b*10-2 a b*10-2 a b*10-К 0,65±0,07 1,1±0,2 0,02±0,02 0,3±0,1 0,64±0,07 0,8±0,Э 0,72±0,09* 1,8±0,2* 0,11±0,04 0,2±0,1 0,60±0,10 1,5±0,Примечание. К – контрольная выборка, Э – экспонированная выборка; жирным выделена достоверная модель регрессии (p<0,05), * - достоверные отличия от контроля (p<0,05), ХА – аберрации хромосомного типа.

- 13 контрольная выборка экспонированная выборка 0 10 20 30 40 50 60 возраст, годы Рис. 1. Зависимость спонтанной частоты ХА от возраста для контрольной выборки Y = (0,65±0,07)+(0,011±0,002)X; для экспонированной выборки Y = (0,72±0,09)+(0,018±0,002)X.

Таким образом, разные примененные способы анализа данных (корреляционный, дисперсионный и регрессионный анализ) позволили установить влияние возрастного фактора на частоту разных типов ХА как в контрольной, так и в экспонированной выборках. Более выраженное возрастное увеличение общего количества ХА наблюдалось в экспонированной выборке. Частота ПФ также быстрее увеличивалась с возрастом в экспонированной группе, хотя и недостоверно. Нарастание же частоты НХО с возрастом было практически одинаково в обеих группах.

2.3. Влияние низкодозового облучения на частоту стабильных ХА.

В таблице 5 представлены данные по геномной частоте стабильных (транслокации) и нестабильных (дицентрические хромосомы) хромосомных обменов в группах «ветераны» и «контроль» сравнимого возраста. Средняя частота транслокаций у ВТ достоверно превышает таковую у доноров контрольной группы.

В то же время практически двукратное увеличение частоты дицентрических хромосом в этой группе по сравнению с контрольной не является достоверным.

общая частота ХА, % - 14 Таблица 5. Частота хромосомных обменов в группе ветеранов и в контрольной группе.

Возрастной Средний Кол-во Кол-во диц.

Кол-во Группа интервал, возраст, транслокаций на хромосом на человек годы годы 100 клеток клеток ВТ 27 45-76 63,0±1,5 2,76±0,23* 0,23±0,К 26 45-58,5±1,2 1,19±0,16 0,12±0,Примечание. ВТ – группа ветеранов подразделений особого риска; К – контрольная группа; * – различия достоверны (р<0,001).

2.4. Влияние возраста на частоту стабильных ХА.

В контрольной группе была выявлена достоверная корреляция между индивидуальной частотой транслокаций и возрастом, коэффициент ранговой корреляции Спирмана составил 0,37 (р<0,05). В группе ВТ значение этого коэффициента Таблица 6. Коэффициенты уравнений регрессии частоты стабильных ХА на возраст у «ветеранов» и в контрольной группе.

коэффициент «a» для частоты группа транслокаций дицентрических хромосом ВТ 0,044± 0,004* 0,003± 0,К 0,019± 0,002 0,004± 0,Примечание. К – контрольная группа, ВТ – группа ветеранов, жирным выделена достоверная модель регрессии, * – различия достоверны (p<0,001).

составило 0,31 (р<0,05). Регрессионный анализ показал, что в исследованном возрастном интервале в обеих группах зависимость «возраст-эффект» описывается функцией вида Y = aX (Y – частота транслокаций, X – возраст) (табл. 6). Наклон линии регрессии частоты транслокаций на возраст в группе ВТ оказался достоверно бльшим, чем в группе ВК (табл. 6). Это свидетельствует о более интенсивном возрастном накоплении аберраций, т. е., об ускоренном старении лиц, подвергавшихся неконтролируемому облучению. Отсутствовала достоверная разница в возрастном увеличении частоты дицентрических хромосом между группами, что наблюдалось для НХО и при использовании рутинного метода (см.

2.2).

2.5. Влияние низкодозового облучения на частоту индуцированных in vitro ХА.

В таблице 7 представлены результаты сравнения контрольной и экспонированной групп по частоте индуцированных in vitro ХА. У детей экспонированной группы общая частота ХА и частота НХО повышены по сравнению с ДК, по частоте ПФ различия между этими двумя группами - 15 отсутствуют. Для взрослых результаты, полученные для разных групп, неоднозначны. Общая частота индуцированных ХА повышена в группе ВЭ по сравнению с контрольной, в основном за счёт НХО. Частота ПФ, так же как у ДЭ, не отличается от частоты ПФ в контрольной группе. В группах Л и ВТ общая частота изученных аберраций оказалась достоверно ниже, чем в контрольной группе: у ликвидаторов – за счёт обоих типов ХА (НХО и ПФ), у ветеранов – в основном за счёт ПФ. Таким образом, в экспонированванной выборке отмечается повышенная радиочувствительность лимфоцитов периферической крови у групп ДЭ и ВЭ. В то же время наблюдалась бльшая по сравнению с контрольной группой радиорезистентность лимфоцитов у групп ВТ и Л, что напоминает Таблица 7. Частота индуцированных хромосомных аберраций (на 100 клеток) у людей различных групп.

дети взрослые группа ДК ДЭ ВК ВЭ Л ВТ кол-во 29 42 38 12 106 людей кол-во 3866 4981 4195 1350 12170 клеток всего 39,7±0,8 45,21±0,76* 41,31±0,76 45,33±1,36* 36,11±0,44* 35,80±2,14* ХА НХО 22,1±0,7 27,91±0,64* 22,07±0,64 25,48±1,19* 19,66±0,36* 18,60±1,ПФ 17,6±0,6 17,31±0,54 19,24±0,76 19,85±1,09 16,45±0,34* 13,40±1,52* Примечание. * - отличия от контрольных групп достоверны (p<0,05), ХА – аберрации хромосомного типа.

реакцию адаптивного ответа. Действительно, в группе ликвидаторов значительная часть людей до аварии на ЧАЭС профессионально подвергалась воздействию либо химических, либо радиационных факторов. Кроме того, во время ликвидации аварии на ЧАЭС эти люди подвергались хроническому облучению. Эти факторы могли вызвать состояние преадаптации лимфоцитов этих людей к последующему облучению in vitro. Группа ВЭ состояла преимущественно из женщин, которые, также как и дети, не имели контакта с ионизирующей радиацией до аварии. У них наблюдалась повышенная in vitro радиочувствительность лимфоцитов.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что низкодозовое облучение людей может приводить как к увеличению радиочувствительности (нестабильности) генома, так и к увеличению его радиоустойчивости, в - 16 зависимости, по-видимому, от предшествующих генотоксических воздействий на человека.

2.6. Влияние возраста на частоту индуцированных in vitro ХА.

Для выявления связи между частотой индуцированных ХА и возрастом были использованы те же два подхода, что и при анализе влияния возраста на частоту спонтанных ХА.

В контрольной выборке при корреляционном анализе индивидуальных данных не было выявлено достоверной корреляции с возрастом ни общего уровня индуцированных ХА, ни частот отдельных типов аберраций – НХО, ПФ. При аналогичном анализе выборки экспонированных лиц была обнаружена достоверная Таблица 8. Коэффициенты корреляции между частотой индуцированных хромосомных аберраций и возрастом по индивидуальным данным и при разделении выборок на шесть возрастных групп.

по индивидуальным данным по усредненным данным тип контроль экспонированные контроль экспонированные аберраций (N=67) (N=165) (N=5) (N=6) r =0,12 r =-0,20 r=0,77 r= -0,ХА p=0,330 p=0,011 p=0,113 p=0,r =0,01 r = -0,25 r=0,64 r= -0,НХО p=0,992 p=0,001 p=0,242 p=0,r =0,12 r = -0,05 r=0,82 r= -0,ПФ p=0,335 p=0,509 p=0,088 p=0,Примечание. Жирным выделены достоверные коэффициенты корреляции (p<0,05), ХА – аберрации хромосомного типа.

Pages:     | 1 || 3 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.