WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Во II серии эксперимента исследовали влияние профеталя на наличие аутоантител (АТ) в плазме периферической крови к аутоантигенам тканей глаза и уровень АФП в плазме крови крыс в условиях разных схем введения препарата. ПРГ наносили 50 животным, которые были разделены на 5 групп по 10 в каждой: 1-я группа – ПРГ и введение 0,85% раствора NaCl в течение суток; 2-я – ПРГ со стандартной терапией (схема аналогична использованной в I серии эксперимента) в течение 13 суток; 3-я – ПРГ со стандартной терапией в течение 13 суток и введением профеталя в течение 29 суток; 4-я – ПРГ с введением профеталя в течение 29 суток; 5-я – ПРГ со стандартной терапией и введением профеталя в течение 13 суток. Профеталь вводили в дозе 1 мкг/кг массы тела один раз в день утром. Введение всех препаратов подкожно начинали через 365 мин после нанесения травмы. Контролем служили интактные животные (6-я группа, n=10). Образцы крови получали из сосудов хвоста на 30-е сутки после ПРГ. АТ определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА)* с оценкой результатов в полуавтоматическом режиме на анализаторе MultiscanPlus («Labsystems», Finland) по изменению оптической плотности относительно контрольного образца согласно инструкции производителя [Яковлева В.Г., Сибиряк С.В., 1999, 2000]. Концентрацию АФП определяли совместно с к.б.н. Е.Г. Орловой методом ИФА (тест - система ИФА-АФП-1 фирмы «АЛКОР БИО», Санкт-Петербург, Россия) с использованием «сэндвич»-варианта по инструкции производителя.

Статистический анализ результатов проводили методами описательной статистики, однофакторного дисперсионного анализа и апостериорного критерия Дункана (post-hoc Duncan’s test) для множественного сравнения между группами.

Результаты представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±m). Данные по числу АОК с учетом их log-нормального распределения перед проведением дисперсионного анализа предварительно преобразовывали в значения log10 для количества АОК [Лозовой В.П. и др., 1989] Для оценки достоверности различий, связанных попарно данных, применяли вариант t-критерия Стьюдента, критерий 2. Для исследования статистической связи между наличием АТ в периферической крови к антигенам тканей глаза и схемой проводимой терапии использовали критерий 2.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Влияние профеталя на иммунный ответ ко ксеногенному антигену и функции фагоцитирующих клеток при экспериментальном проникающем ранении глаза Влияние профеталя на гуморальный иммунный ответ. Наибольшие изменения выявляются в регионарном лимфатическом узле. У животных с ПРГ наблюдается * Выражаю благодарность д.м.н., профессору С.В. Сибиряку за любезно предоставленные тест-системы.

стимуляция гуморального иммунного ответа с достоверным увеличением числа АОК.

Введение одного профеталя или препаратов стандартной терапии угнетает образование антителопродуцентов, при их комбинации усиления иммунодепрессивного эффекта воздействий не обнаружено. В отдаленном лимфатическом узле статистически значимых изменений количества АОК на фоне всех экспериментальных воздействий не определяется. Изменение антителопродукции на территории регионарного лимфатического узла свидетельствует о локальном характере иммунного ответа. При введении профеталя число АОК в селезенке достоверно снижается в сравнении с показателями травмированных животных. Суммации депрессивных эффектов стандартной терапии и профеталя не выявляется.

Влияние профеталя на клеточноопосредованный иммунный ответ. В группе животных с ПРГ наблюдается стимуляция реакции ГЗТ. Введение препаратов стандартной терапии приводит к выраженному угнетению реакции ГЗТ; сходный, но менее выраженный эффект выявлен при введении профеталя. При комбинированном использовании профеталя и препаратов стандартной терапии степень выраженности угнетения реакции ГЗТ нарастает по сравнению с введением одного профеталя и достоверно не отличается от показателей животных, получавших только стандартную терапию.

Влияние профеталя на клеточность органов лимфомиелоидного комплекса. При ПРГ у крыс в регионарном лимфатическом узле в сравнении с отдаленным значительно увеличивается клеточность (р<0,05). Подобные изменения, по-видимому, связаны с рекрутированием иммунокомпетентных клеток и их пролиферацией in situ [Drayson M.

et al., 1981; Martin-Fontecha A. еt al., 2003]. Стандартная терапия значительно снижает число ЯСК. Направленность действия профеталя аналогична, но суммации эффекта при комбинированном воздействии не наблюдается. Изменения клеточности отдаленного лимфатического узла отсутствуют. В селезенке обнаружено снижение клеточности (р<0,05) у животных, получавших профеталь в комплексе со стандартной терапией (3-я группа), в сравнении с травмированными крысами (1-я группа). В костном мозге и тимусе стандартная терапия приводит к снижению числа ЯСК (р<0,05) по сравнению с травмированными животными (1-я группа). У крыс, получавших один профеталь и в комбинации со стандартной терапией, выявляется достоверное возрастание количества ЯСК по отношению не только к показателям животных, получавших одну стандартную терапию, но и к крысам 1-й и 5-й (контроль) групп.

Профеталь полностью отменяет уменьшение клеточности тимуса, вызванное стандартной терапией (3-я группа в сравнении со 2-й). При введении профеталя достоверно увеличивается клеточность тимуса в сопоставлении с нетравмированными крысами. При исследовании миелограммы у крыс с ПРГ отмечено достоверное повышение числа эозинофилов, лимфоцитов, хотя суммарного изменения клеточности данного органа не было. При введении препаратов стандартной терапии прослеживается депрессия образования клеток в костном мозге относительно травмы (p<0,05 2-я группа к 1-й): снижение числа эозинофилов, базофилов, лимфоцитов.

Профеталь как в монотерапии, так и при комбинации с препаратами стандартной терапии повышал число клеток моноцитарного, нейтрофильного (рис. 1), эозинофильного рядов, количество лимфобластов, лимфоцитов и плазматических клеток, в монотерапии – число клеток эритроидного ряда. Подобные изменения характеризуют данный препарат как средство, активирующее иммунопоэз.

Изменение фагоцитарной активности клеток регионарного лимфатического узла. При ПРГ изменений относительных и абсолютных показателей фагоцитоза в регионарном лимфатическом узле не происходит. Препараты стандартной терапии снижают число макрофагов относительно контроля и ПРГ, абсолютные и относительные интегральные показатели суммарной фагоцитарной активности макрофагов. Введение профеталя вызывает депрессию фагоцитарной активности по абсолютным значениям (рис. 2). Подобный эффект связан с уменьшением в регионарном лимфатическом узле количества клеток, обладающих фагоцитарной * * * * * * # # a a a a a a 8 2 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Рис. 1. Влияние травмы, профеталя и стандартной терапии на количество клеток моноцитарного, нейтрофильного рядов, лимфоидных клеток костного мозга.

Примечание. Здесь и на рис.2–5 * – р<0,05 к контролю (5-й группе); # – р<0,05 к 1-й группе; a – р<0,05 ко 2-й группе. По оси абсцисс – группы животных: 1 – ПРГ, 2 – ПРГ+стандартная терапия, 3 – ПРГ+ стандартная терапия+профеталь, 4 – ПРГ+профеталь, 5 – контроль. По оси ординат – число ЯСК 106 / костный мозг бедренной кости.

Б В А 8 7 6 # # # # # # 3 # # * * * * 2 * 1 * 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Рис. 2. Влияние травмы, профеталя и стандартной терапии на показатели суммарной фагоцитарной активности клеток регионарного лимфатического узла.

Примечание. По оси ординат на А и Б – абсолютные показатели 106 / орган.

активностью. Относительно травмы профеталь супрессирует фагоцитоз преимущественно за счет снижения количества макрофагов с низкой и средней фагоцитарной активностью (захвативших 1 – 4 объекта).

Нейтрофильный ряд Моноцитарный ряд Лимфоидные клетки фагоцитов, хфагоцитоза, хПроцент фагоцитоза, % Абсолютное число объектов Абсолютное число «истинных» Изменение количественного состава и фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови. В поздний травматический период (14-е сутки) у крыс с ПРГ выявляется активация поглотительной способности моноцитов периферической крови.

Препараты стандартной терапии вызывают развитие моноцитопении, лимфопении, увеличение числа молодых форм нейтрофилов (рис. 3). Изменение фагоцитарной активности клеток проявляется в активации нейтрофильного фагоцитоза, депрессии фагоцитарной активности моноцитов и эозинофилов. При введении профеталя в периферической крови обнаружены моноцитоз, активация фагоцитарной активности моноцитов (процент фагоцитоза) (рис. 4), повышение их вклада в суммарный фагоцитоз, отмена действия препаратов стандартной терапии: возрастание абсолютного количества лимфоцитов, снижение уровня палочкоядерных нейтрофилов и их фагоцитарной активности в сравнении с крысами 2-й группы.

a 35000 a a a # 30000 # * * 25000 1000 * # 20000 * 15000 a 10000 400 a * 5000 0 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 Рис. 3. Влияние травмы, профеталя и стандартной терапии на абсолютные показатели количественного состава лейкоцитов периферической крови.

Примечание. По оси ординат – число лейкоцитов в 1 мкл крови.

Изменение показателей фагоцитарной активности перитонеальных клеток.

При ПРГ изменений относительных и абсолютных показателей фагоцитоза клеток брюшной полости не происходит. Препараты стандартной терапии значительно снижают количество мононуклеарных фагоцитов, фагоцитарную активность данного пула клеток, фагоцитарную активность нейтрофильных гранулоцитов, тучных клеток.

Моноциты Лимфоциты нейтрофилы Палочкоядерные Б В А a a * a a # # # # * * * * 400 # # * 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Рис. 4. Влияние травмы, профеталя и стандартной терапии на показатели суммарной фагоцитарной активности моноцитов периферической крови.

Примечание. По оси ординат на А и Б – абсолютные показатели на 1 мкл крови.

Профеталь уменьшает количество лимфоцитов, повышает фагоцитарную активность мононуклеарных фагоцитов (рис. 5), тучных клеток, уменьшает показатели фагоцитарной активности перитонеальных гранулоцитов. При этом выявляются отмена депрессивного действия глюкокортикоидов в составе стандартной терапии на количество мононуклеарных фагоцитов, изменение направленности фагоцитарной активности данного типа клеток, более выраженное супрессивное действие на фагоцитарную активность нейтрофильных гранулоцитов, чем при монотерапии профеталем.

Полученные результаты указывают на разное влияние профеталя на фагоцитарную активность моноцитов периферической крови и их потомков – перитонеальных мононуклеарных фагоцитов и фагоцитирующих клеток регионарного лимфатического узла. Это, по-видимому, объясняется изменением активации клеток системы мононуклеарных фагоцитов и направленностью их дифференцировки, которые во многом определяются природой активирующих сигналов и цитокиновым Абсолютное число объектов фагоцитоза Абсолютное число Процент фагоцитоза, % активных фагоцитов Б А В * 110 a a 100 # a # a * 30 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Рис. 5. Влияние травмы, профеталя и стандартной терапии на показатели суммарной фагоцитарной активности перитонеальных мононуклеарных фагоцитов.

Примечание. По оси ординат на А – абсолютное число объектов фагоцитоза 106 / брюшная полость.

микроокружением [Geissmann F. и др., 2003; Rotta G. еt al., 2003; Rhen T., Cidlowski J., 2005].

2. Влияние профеталя на наличие антител к аутоантигенам тканей глаза и уровень альфа-фетопротеина в периферической крови экспериментальных животных Влияние профеталя на наличие антител к аутоантигенам тканей глаза. У интактных животных в плазме крови АТ к аутоантигенам тканей глаза не выявляются.

У крыс с ПРГ частота обнаружения АТ к корнеальному белку BCP-54, -кристаллину хрусталика и ретинальному S-антигену составляет для каждого из антигенов 30%.

Положительные результаты на наличие АТ одновременно ко всем трем антигенам обнаружены только у 20% животных; к одному антигену АТ определялись у 50% животных, последнее достоверно отличается от контроля (р=0,001). Эти факты могут свидетельствовать о формировании аутосенсибилизации и являться прогностически неблагоприятными [Слепова О.С., 1991]. В группе животных, получавших препараты стандартной терапии, появление АТ к ретинальному S-антигену отмечено в 30% случаев, к -кристаллину – в 20% и к корнеальному белку BCP-54 – в 20%.

фагоцитов,% фагоцитоза, хПроцент активных Процент фагоцитоза,% Абсолютное число объектов Положительные результаты на наличие АТ одновременно ко всем трем антигенам определились только у 10% животных; к одному антигену АТ определились у 50% животных, последнее достоверно отличается от контроля (р=0,001).

Введение профеталя как в варианте монотерапии, так и в комплексе со стандартной терапией приводит к снижению интенсивности аутосенсибилизации, что ведет к исчезновению достоверных отличий от контроля. Так, при монотерапии профеталем в течение 29 суток у 10% травмированных крыс обнаружены АТ против корнеального белка BCP-54, у 10% – против S-антигена и у 20% – против -кристаллина хрусталика. Обнаружение АТ к одному антигену у 20% животных, что достоверно не отличается от контроля, а также отсутствие АТ одновременно ко всем антигенам является положительным результатом. При введении и профеталя, и препаратов стандартной терапии в течение 13 суток только у 20% животных выявлены АТ к BCP-54, у 20% – к -кристаллину и у 10% – к S-антигену. Общее число животных с положительными реакциями на обнаружение АТ к одному антигену на 30 сутки эксперимента составило 30% (р>0,05 к 6-й группе). Наиболее эффективно совместное введение профеталя в течение 29 суток и препаратов стандартной терапии. В этом случае АТ против корнеального белка BCP-54 выявлялись у 20% крыс, против -кристаллина – у 10 %; АТ против S-антигена не определялись, АТ к одному антигену – у 30% (р>0,05 к 6-й группе). Одновременно ко всем антигенам АТ не найдены ни в одном случае, как и у интактных животных.

При исследовании статистической связи между наличием АТ в периферической крови к антигенам тканей глаза и схемой проводимой терапии при ПРГ применен критерий 2. Установлено, что расчетное значение 2Р= 23,439 (сумма расчетных элементов), табличное значение 2т = 18,307. Так как 2Р > 2т, то анализируемые признаки статистически зависимы при уровне значимости, равной 0,05. Результаты демонстрируют зависимость между разными схемами применения профеталя при ПРГ и наличием в периферической крови антител к антигенам тканей глаза (корнеальному протеину BCP-54, -кристаллину хрусталика и S-антигену сетчатки). Существенным представляется факт максимального защитного эффекта в отношении формирования иммунного ответа к S-антигену сетчатки – наиболее «увеитогенному» белку глаза.

Pages:     | 1 || 3 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.