WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 |

На правах рукописи

ФАЙЗРАХМАНОВ Ринат Рустамович ОЦЕНКА ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ПРОФЕТАЛЯ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПРОНИКАЮЩЕМ РАНЕНИИ ГЛАЗА 14.00.36 - аллергология и иммунология

Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Екатеринбург – 2007 2

Работа выполнена в лаборатории иммунофизиологии Института иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Черешнева Маргарита Владимировна доктор медицинских наук Гаврилова Татьяна Валерьевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Гусев Евгений Юрьевич доктор медицинских наук Чистякова Гузель Нуховна

Ведущая организация: ГНЦ – Институт иммунологии ФМБА России, Москва

Защита состоится 24 мая 2007 г. в часов на заседании диссертационного совета Д. 004.027.01 при Институте иммунологии и физиологии УрО РАН по адресу:

620041, г. Екатеринбург, ул. Первомайская, 91 Факс (343) 374-00-70

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке УрО РАН (620041, г. Екатеринбург ул. С. Ковалевской, д. 22/20), с авторефератом - на сайте Института иммунологии и физиологии УрО РАН - http://www.iip.uran.ru Автореферат разослан «» апреля 2007г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор И.Н. Тузанкина 3

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Феномен иммунной привилегированности глаза привлекает внимание современных исследователей [Архипова Л.Т., 2000, 2006;

Слепова О.С. и др., 2005; Гундорова Р.А. и др., 2006; Черешнева М.В. и др., 2006;

Martin-Fontecha A. et al., 2003; Novak N. et al., 2003; Streilein J., 2003; Yanoff M. et al., 2004]. При проникающем ранении глаза (ПРГ) развивается комплекс типовых изменений в иммунной системе, в том числе системных [Архипова Л.Т., 2000, 2006;

Слепова О.С. и др., 2005], являющихся общими для травмы в целом, несмотря на ограниченный по объему характер повреждения. В частности, при ПРГ как у человека, так и у животных важную роль играют стрессорные изменения в иммунной системе [Черешнева М.В. и др., 2006] и развитие синдрома вторичной комбинированной иммунной недостаточности [Волик Е.И., 2000; Черешнева М.В., 2000; Гаврилова Т.В.

и др., 2005].

Одним из подходов к иммунокоррекции является включение наряду с антибиотиками, стероидными и нестероидными противовоспалительными средствами современных отечественных иммуномодуляторов [Архипова Л.Т., 2000; Волик Е.И., 2000; Черешнева М.В., 2000; Гаврилова Т.В., 2006]. Среди них перспективен отечественный препарат «Профеталь» (далее профеталь), действующее вещество которого – сывороточный белок альфа-фетопротеин (АФП) [Родионов С.Ю. и др., 1997; Черешнев В.А. и др., 2004]. В настоящее время он положительно зарекомендовал себя при лечении заболеваний, протекающих с иммунными нарушениями [Родионов С.Ю. и др. 1997, 2006; Черешнев В.А. и др., 2003, 2004]. Показано, что в системе in vitro профеталь усиливает дифференцировку и цитотоксическую активность NKклеток, дифференцировку и экспрессию костимулирующих молекул дендритными клетками [Гаврилова Т.В., 2006; Лебединская О.В., 2006]. Однако многие аспекты механизма иммуномодулирующего действия профеталя остаются неизученными.

Дальнейшее исследование характера изменений иммунной системы при ПРГ и разработка патогенетически обоснованных методов их коррекции определяют актуальность данной проблемы.

Цель работы – исследовать характер изменений иммунной системы и их коррекцию профеталем при экспериментальном проникающем ранении глаза.

Основные задачи 1. Оценить эффект действия проникающего ранения глаза и профеталя в варианте монотерапии и при комбинации со стандартной терапией на процессы антителогенеза, выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа, клеточность органов лимфомиелоидного комплекса.

2. Исследовать влияние проникающего ранения глаза и действие профеталя на фагоцитарную активность клеток лимфатических узлов, периферической крови и брюшной полости.

3. Изучить воздействие проникающего ранения глаза и профеталя на частоту выявления антител в плазме периферической крови к аутоантигенам тканей глаза.

4. Исследовать изменение содержания альфа-фетопротеина в плазме периферической крови экспериментальных животных в зависимости от схем введения профеталя.

5. Оценить морфологическую картину травматического воспаления при проникающем ранении глаза в условиях разных схем введения профеталя.

Научная новизна. В экспериментальной модели ПРГ крыс популяции Wistar исследованы особенности течения травматического воспаления, изменения иммунной системы, влияние на них нового отечественного иммунотропного препарата профеталя при разных схемах введения.

В работе впервые установлено: при введении профеталя в комплексе со стандартной терапией уровень АФП в плазме крови животных ниже, чем в варианте монотерапии, что указывает на необходимость учета взаимодействия профеталя с препаратами стандартной терапии. Показана возможность снижения профеталем выраженности аутосенсибилизации. Установлено, что в условиях как изолированного, так и комбинированного введения препарата животным с ПРГ наблюдается угнетение антителообразования и степени выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

Впервые выявлено, что введение профеталя отменяет ряд эффектов стандартной терапии на функции фагоцитирующих клеток, приводит к повышению интегральных показателей моноцитарного фагоцитоза и числа моноцитов крови при отсутствии влияния на поглотительную активность нейтрофилов и эозинофилов периферической крови; наблюдается активация поглотительной способности перитонеальных мононуклеарных фагоцитов и увеличение их количества, а также стимуляция фагоцитарной активности тучных клеток; в регионарном лимфатическом узле снижаются показатели суммарной фагоцитарной активности клеток.

Впервые обосновано восстановление тканевых дефектов за счет репаративной регенерации при использовании профеталя как в монотерапии, так и при комбинированном введении с другими препаратами.

Теоретическая и практическая значимость работы. В теоретическом плане исследования существенно расширяют представления о роли иммунной системы в патогенезе ПРГ и дополняют сведения об иммунотропном действии профеталя в условиях индуцированного изменения функций иммунной системы при данном виде патологии: показана высокая иммуномодулирующая активность препарата.

В практическом плане полученные результаты демонстрируют перспективность дальнейшего изучения возможности использования профеталя для коррекции иммунных нарушений при аутоиммунных заболеваниях глаза.

Внедрение в практику. Основные положения диссертации используются при чтении лекций студентам, магистрам, аспирантам биологического факультета Пермского государственного университета. Фрагменты работы вошли в материалы доклинического испытания профеталя и были представлены в Фармакологический комитет РФ для получения разрешения на его производство.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Проникающее ранение глаза вызывает ряд изменений иммунной системы, включая стимуляцию гуморального и клеточноопосредованного иммунного ответа, модуляцию функций фагоцитирующих клеток, регенеративной активности зоны повреждения, провоцируя развитие аутоиммунного ответа к тканям глаза.

2. Применение стандартной терапии, экстраполированной со схем, используемых в клинике у пострадавших c проникающим ранением глаза, усугубляет развитие дисфункции иммунной системы при сохранении воспалительной инфильтрации и рубцовых изменений в поврежденной ткани.

3. Включение профеталя в комплексную патогенетическую терапию травматических и стрессорных изменений функций иммунной системы оптимизирует течение воспалительного процесса при экспериментальном проникающем ранение глаза.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на VI Международной конференции «Проблемы загрязнения окружающей среды» ICEP - (Пермь–Казань–Пермь, 2005); Российском научном симпозиуме «Цитокины.

Стволовые клетки. Иммунитет» (Новосибирск, 2005); VIII Всероссийском научном форуме с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (СанктПетербург, 2006); IV Евро-Азиатской конференции по офтальмохирургии (Екатеринбург, 2006); X Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых (Пущино, 2006); V конференции иммунологов Урала (Оренбург, 2006);

Всероссийской конференции молодых ученых «Иммунитет и аллергия: от эксперимента к клинике» (Пермь, 2006).

Диссертационная работа апробирована и обсуждена на заседании научной проблемной комиссии по аллергологии и иммунологии ИИФ УрО РАН (г. Екатеринбург, 2007).

Публикации. Основные положения диссертации изложены в 13 печатных работах, в том числе 4 публикации (3 статьи, 1 материалы конференции) в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР ИИФ УрО РАН, является частью исследований по теме «Иммунологическая регуляция физиологических функций в норме и при патологических процессах» (номер госрегистрации 01.120.0411946). Выполнение работы поддержано грантами для молодых ученых УрО РАН, Программы Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология» и интеграционного проекта фундаментальных исследований, проводимых в УрО РАН совместно с СО и ДВО РАН «Коррекция стрессорных и травматических нарушений функций иммунной системы в экспериментальной модели проникающего ранения глаза».

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 185 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 3 глав собственных экспериментальных исследований, заключения, выводов.

В диссертации 3 рисунка, 39 таблиц. Прилагаемый список литературы включает наименования (204 отечественных и 109 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. Эксперимент выполнен на 116 крысах-самцах популяции Wistar массой 237,7±3,6 г.

Проведены две серии исследований в оригинальной экспериментальной модели проникающего ранения глаза у крыс [Черешнева М.В. и др., 1999].

В I серии эксперимента (51 крыса) изучали действие профеталя* на иммунный ответ ко ксеногенному антигену и функции фагоцитирующих клеток. Под местной анестезией 2% раствором новокаина в специально сконструированном приспособлении-фиксаторе микролезвием наносили проникающее ранение правого глаза 41 животному. Сформированы экспериментальные группы: 1-я (n=10) – ПРГ и введение 0,85% раствора NaCl; 2-я (n=11) – ПРГ со стандартной терапией, экстраполированной со схем, используемых в клинике (ампициллин 12,5 мг/кг массы тела, гентамицин 1,5 мг/кг, диклофенак натрия 0,5 мг/кг – два раза в день, дексаметазон 0,1 мг/кг – один раз в день); 3-я (n=10) – ПРГ со стандартной терапией и профеталем;

4-я (n=10) – ПРГ с введением профеталя. Последний в 3-й и 4-й группах вводили в дозе 1 мкг/кг массы тела ежедневно по одной инъекции. Контролем служили нетравмированные животные 5-й группы (n=10), которые получали по тем же схемам 0,85% раствор NaCl. Введение препаратов подкожно начинали через 365 мин после нанесения травмы и продолжали ежедневно в течение 13 суток. Для моделирования локального иммунного ответа на 9-е сутки после нанесения травмы всех животных сенсибилизировали эритроцитами барана (108 клеток вводили подкожно в подошвенную поверхность правой стопы). На 4-е сутки после сенсибилизации вводили разрешающую дозу антигена (109 эритроцитов барана подкожно в правую стопу).

Животных выводили из эксперимента на 14-е сутки методом декапитации под эфирным наркозом. Оценивали гуморальный ответ по числу антителообразующих клеток (АОК) в регионарном, по отношению к месту иммунизации, (правом подколенном) и отдаленном (левом подколенном) лимфатических узлах, селезенке методом локального гемолиза в геле агарозы [Jerne N., Nordin A., 1963]; выражен- ность иммунного воспаления при реакции ГЗТ путем регистрации толщины _ * Выражаю благодарность д.м.н. С.Ю. Родионову за любезно предоставленный препарат профеталь.

(инженерным микрометром) опытной и контрольной стопы [Toichi E. et al., 1997];

число ядросодержащих клеток (ЯСК) в органах лимфомиелоидного комплекса.

Оценивали фагоцитарную активность клеток регионарного лимфатического узла [Shilov Ju. et al., 2001], перитонеальных фагоцитов [Шилов Ю.И., Ланин Д.В., 2001] и лейкоцитов периферической крови [Каплин В.Н., 1996; Shilov Ju., Orlova E., 2003] по отношению к формалинизированным эритроцитам барана.

Исследование патоморфологических изменений глаз проводили совместно с зав.

лабораторией морфологии ИИФ УрО РАН, к.м.н. С.Ю. Медведевой по методике В.Н.

Архангельского [1957]. Морфометрическую оценку гистологических срезов осуществляли с помощью окулярной стереометрической сетки Г.Г. Автандилова [2002]. Определяли количество клеток и плотность волокон в 0,01 мм2 сетки.

Митотическую активность многослойного плоского эпителия (МПЭ) роговицы глаза оценивали по митотическому индексу в o/oo.

Pages:     || 2 | 3 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.