WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

2.7. Экспериментальное заражение гидробий яйцами Bunocotile progenetica. Яйца Bunocotyle progenetica извлекались из зараженных гидробий, собранных в августе 2005 г. Эти яйца использовались для заражения гидробий как сразу после извлечения из полости тела редий, так и после их 5-ти суточного содержания в морской воде при комнатной температуре, либо близкой к 0C. После заражения моллюсков на 2 ч поодиночке помещали в небольшие емкости с морской водой комнатной температуры. Из выделенных ими за это время фекальных пеллет изготавливали давленые препараты и под микроскопом подсчитывали число интактных яиц (крышечка закрыта, мирацидий внутри) и пустых яйцевых оболочек (крышечка открыта, мирацидия внутри нет) B. progenetica. Всего было заражено 65 особей Hydrobia ulvae.

2.8. Влияние трематодной инвазии на жизнеспособность Hydrobia ulvae при действии неблагоприятных условий. Для оценки влияния трематодной инвазии на жизнеспособность H. ulvae сравнивали доли погибших особей в трех группах моллюсков: незараженных, зараженных B. progenetica и зараженных Cryptocotyle concavum после содержания в пресной воде, кратковременного нагревания до 42°C, либо замораживания до – 11°C. После экспериментального воздействия гидробий помещали в свежую морскую воду (около 24‰) и выдерживали 12 ч при температуре +15°C. Затем воду меняли и подсчитывали количество подвижных и неподвижных особей, которые считались живыми и погибшими, соответственно. После использования в этих экспериментах всех гидробий вскрывали и определяли наличие или отсутствие у них инвазии трематодами.

2.8.1. Определение влияния трематодной инвазии на устойчивость Hydrobia ulvae к кратковременному перегреванию. Гидробий, собранных в сентябре 2004 г. (1280 особей H. ulvae), адаптировали в течение 3 недель к комнатной температуре, а затем помещали в термостат с температурой 42°C на 3, 6, 9 и 12 ч (251, 250, 530 и 249 особей соответственно).

2.8.2. Определение влияния трематодной инвазии на устойчивость Hydrobia ulvae к кратковременному замораживанию. Собранных в марте 2005 г. гидробий (870 особей H. ulvae) замораживали тремя способами: 1) в морской воде с соленостью 20‰ при температуре –11°C в течение 2, 4, 6 и 9 ч; 2) в морской воде с соленостью 10‰, 15‰ и 20‰ при температуре –11°C в течение 2 ч; 3) в морской воде с соленостью 5‰, 10‰, 15‰ при температуре –5°C в течение 1 часа. Затем гидробий размораживали при +15°C в течение получаса.

2.8.3. Определение влияния трематодной инвазии на устойчивость Hydrobia ulvae к длительному содержанию в пресной воде. Собранных в октябре 2005 г. гидробий (2810 особей H. ulvae) содержали в аквариумах, заполненных морской водой, в течение 3 недель. Моллюски были разделены на 2 группы: первую содержали при высокой (+20°C) температуре, а вторую при низкой (+2°C). Обновление морской воды и пищи (растертых нитчатых водорослей) проводилось ежедневно. Впоследствии гидробии содержались в емкостях (0.5 л) с ежедневно сменяемой дистиллированной водой согласно схеме приведенной в Таблице1.

2.9. Статистическая обработка данных. Статистическая значимость различий долей определялась при помощи точного критерия Фишера. Для множественного сравнения долей использовался критерий 2. Все доверительные интервалы долей вычислялись по точной формуле Фишера для 95% уровня значимости.

Статистическая значимость различий количественных признаков определялась при помощи t-критерия Стьюдента и медианного критерия в соответствии со стандартными рекомендациями (Животовский, 1991). Все доверительные интервалы приведены для 95% уровня значимости. На диаграммах достоверные различия между соседними значениями отмечены звездочками (* — P<0.05; ** — P<0.01). Для проверки соответствия выборочных распределений отрицательному биномиальному распределению использовалась программа Quantitative Parasitology 2.0 (Rozsa et al, 2000).

Таблица 1. Численность гидробий, использованных для определения смертности при действии пресной воды.

Длительность Температура Температура Число действия пресной содержания в пресной особей акклимации, °C воды воде, °C 5 суток +20 +2 5 суток +20 +20 5 суток +2 +20 5 суток +2 +2 10 суток +20 +20 10 суток +2 +2 15 суток +20 +2 15 суток +2 +2 25 суток +2 +2 Всего Глава 3. Экспериментальное заражение особей Hydrobia ulvae яйцами Bunocotyle progenetica При заражении особей H. ulvae яйцами B. progenetica сразу после извлечения их из редий, доля пустых яйцевых оболочек в фекалиях хозяина (то есть вылупляемость яиц) составляла 9.4%. Вылупляемость яиц B. progenetica достоверно (P<0.01) возрастала после пятисуточного содержания в морской воде при комнатной температуре до 55.7% и достоверно снижалась после пятисуточного содержания при низкой (около 0°C) температуре до 0.9%. Скармливание гидробиям относительно большого (более сотни) числа яиц B. progenetica, предварительно содержавшихся при комнатной температуре, приводило к отторжению непрерывного тяжа практически пустой перетрофической мембраны вместе с большим количеством вылупившихся мирацидиев. В то же время после выполнения аналогичных экспериментов с яйцами, предварительно содержавшимися при низкой температуре, гидробии формировали нормальные по форме фекалии, состоящие в основном из внешне интактных яиц паразита.

Можно предположить, что морфологически зрелым мирацидиям для приобретения способности вылупляться в кишечнике специфичного хозяина требуется некоторое физиологическое «дозревание» во внешней среде. Нельзя также исключить, что необходимость «дозревания» яиц паразита во внешней среде может до некоторой степени увеличивать дисперсию инвазионного начала и ограничивать интенсивность множественного заражения хозяина. Таким образом, это «дозревание» яиц B. progenetica может снижать преждевременную гибель зараженных особей хозяина от гиперинвазии, способствуя успешной реализации жизненного цикла паразита.

Результаты экспериментального заражения H. ulvae свидетельствует о значительном снижении эффективности заражения хозяина после содержания яиц B. progenetica при низкой (близкой к 0°C) температуре. Таким образом, можно сделать вывод, что заражение гидробий яйцами Bunocotyle progenetica при низкой температуре в условиях гидробиологической зимы протекает неэффективно.

Глава 4. Патогенность партенит Bunocotyle progenetica и Cryptocotyle concavum для гидробий 4.1. Влияние трематодной инвазии на размер гидробий в районе сбора материала на примере Hydrobia ulvae. В совместном поселении гидробий в Сухой салме особи Hydrobia ulvae были значительно (P<<0.01) крупнее особей H. ventrosa, медианы площади проекции их раковин были равны 6.38 мм2 и 1.41 ммсоответственно.

Все возрастные группы H. ulvae (молодь, особи первого, второго и третьего лет жизни) отличаются между собой по размеру (P<0.01), различия отсутствуют только между зараженными B. progenetica особями второго и третьего лет жизни. Влияние трематодной инвазии на размер особей H. ulvae моложе второго года жизни не выявлялось. Среди моллюсков H. ulvae второго года жизни экземпляры, зараженные Cryptocotyle concavum, были крупнее незараженных (P<0.01), а незараженные — крупнее зараженных B. progenetica (P<0.05). Среди H. ulvae третьего года жизни особи, зараженные C. concavum, были крупнее незараженных (P<0.01). Влияния трематодной инвазии на размер особей H. ventrosa обнаружено не было.

Согласно современным представлениям, характер ростового ответа моллюсков на инвазию партенитами трематод может служить мерой их патогенности для хозяина (Sousa, 1983; Горбушин, 2000). Наблюдаемые изменения скорости роста Hydrobia ulvae при инвазии партенит B. progenetica и C. concavum, а также литературные данные по влиянию партенит этих видов трематод на скорость роста гидробий (Gorbushin, 1997) позволяют предположить, что партениты B. progenetica значительно более патогенны для гидробий, чем партениты C. concavum.

4.2. Влияние инвазии партенит Bunocotyle progenetica и Cryptocotyle concavum на жизнеспособность Hydrobia ulvae при действии неблагоприятных условий внешней среды 4.2.1. Влияние трематодной инвазии на жизнеспособность Hydrobia ulvae при краткосрочном действии высокой температуры. После 9 ч воздействия высокой (42°C) температуры смертность гидробий (6.9%) превышала (P<0.01) их смертность после 3 ч (1.2%) и 6 ч (2%) экспозиции. После 12 ч действия этой температуры все гидробии погибли. После 3, 6 и 9-ти часового воздействия смертность зараженных B. progenetica моллюсков оказалась выше (P<0.01) смертности зараженных C. concavum и незараженных особей. Смертность гидробий, зараженных C. concavum, была выше (P<0.05) смертности незараженных особей только после 9-ти часового воздействия высокой температуры. После 9-ти часового действия высокой температуры в группе зараженных C. concavum гидробий смертность трехлетних особей (75.0%) достоверно (P<0.05) превышала смертность двухлетних (8.3%) и однолетних (5.9%).

Незначительное влияние инвазии партенит C. concavum на жизнеспособность H. ulvae при перегревании, на первый взгляд, противоречит литературным данным о существенном влиянии этого паразита на жизнеспособность гидробий при воздействии высокой температуры (Галактионов и др., 2002). Однако следует отметить, авторы этой статьи отбирали наиболее крупных особей Hydrobia ulvae. Учитывая, что размер особей H. ulvae увеличивается с возрастом, можно предположить, что в этом случае в экспериментальную группу гидробий попадало значительное количество особей третьего года жизни. Между тем, в моих экспериментах негативное влияние инвазии партенит Cryptocotyle concavum на выживание H. ulvae при действии экстремально высокой температуры обнаруживалось именно у гидробий третьего года жизни.

Значительное негативное влияние заражения партенитами Bunocotyle progenetica по сравнению с инвазией партенитами C. concavum на выживание особей H. ulvae при действии высокой температуры свидетельствует, на мой взгляд, о более высокой патогенности партенит B. progenetica для хозяина.

4.2.2. Влияние трематодной инвазии на жизнеспособность Hydrobia ulvae при краткосрочном замораживании. Смертность гидробий после замораживания до –11°C в морской воде с соленостью 20‰ в течение 2, 4 и 6 ч значимо (P<0.01) возрастала с увеличением времени воздействия, составляя 0%, 24.5% и 55.6% соответственно. После 6-ти часового замораживания до –11°C в морской воде с соленостью 20‰ смертность гидробий третьего года жизни (80%) превышала (P<0.05) смертность гидробий второго года жизни (54.8%). При замораживании гидробий в морской воде с различной соленостью смертность наблюдалась только при наименьшей солености, составляя 24.1% при 5‰ после часового охлаждения до –5°C и 53.8% при 10‰ после 2-часового охлаждения до –11°C. Влияния трематодной инвазии на смертность моллюсков при замораживании не обнаружено.

H. ulvae, как и другие морские моллюски, являются осмокомформерами. При снижении солености воды у этих организмов в тканях и клетках снижается содержание солей (Бергер, 1986), и, соответственно, образование кристаллов льда может наблюдаться при более высокой температуре. Этим, возможно, и объясняется возрастание доли погибших моллюсков после замораживания при пониженной солености.

Отсутствие влияния заражения трематодами на смертность гидробий при действии низких температур может объясняться низкой физиологической активностью группировок партенит. Подобный феномен, и даже положительное влияние трематодной инвазии на жизнеспособность моллюсков при замораживании, был описано ранее для системы партениты микрофаллид группы “pygmaeus” — моллюски Littorina saxatilis (Галактионов, 1993). Сходное отсутствие влияния трематодной инвазии кажется поразительным, поскольку биологические различия в системах партениты микрофаллид группы “pygmaeus” — L. saxatilis, Bunocotyle progenetica — Hydrobia ulvae и Cryptocotyle concavum — H. ulvae очень велики. Однако следует заметить, что при всех различиях между этими паразито-хозяинными системами выживание зараженных моллюсков в зимний период должно способствовать успешной реализации жизненного цикла паразита. Таким образом, маловероятно, чтобы значительное негативное влияние локальных гемипопуляций партенит трематод на устойчивость хозяина к замораживанию в этих паразито-хозяинных системах могло бы быть поддержано отбором.

4.2.3. Влияние трематодной инвазии на жизнеспособность Hydrobia ulvae при содержании в пресной воде.

Смертность незараженных особей Hydrobia ulvae, адаптированных к 2°C не изменялась при увеличении срока их содержания в пресной воде при этой температуре на протяжении всего эксперимента (Рис. 1 А). Во всех остальных случаях смертность незараженных гидробий возрастала (P<0.01) с увеличением времени действия пресной воды на 5.85% в сутки (Рис. 1 Б, В и Г). Высокая температура содержания в пресной воде приводила к более высокой смертности незараженных гидробий, адаптированных к одинаковой температуре (P<0.01 — Рис. 1 А-В и Б-Г). Во всех случаях в группе незараженных гидробий достоверно (P<0.01) более высокая смертность наблюдалась у моллюсков, адаптированных к более высокой температуре (Рис. 1 А-Б и В-Г).

При изменении температуры содержания относительно температуры акклимации после 5-ти суточного содержания незараженных особей H. ulvae в пресной воде смертность особей третьего года жизни превышала смертность младших особей (P<0.05).

Наиболее часто в качестве причин гибели морских моллюсков при содержании в пресной воде приводится потеря электролитов, в первую очередь катионов металлов (K+, Na+, Ca2+ и т.д.) посредством диффузии (Бергер, Кондратенков, 1974; Бергер, 1976; Бергер, 1986; Галактионов и др., 2002), а также самоотравление конечными продуктами метаболизма у изолировавшегося от внешней среды организма (Sokolova et al, 1999a,b).

Существенные различия в смертности незараженных гидробий после равного времени содержания в пресной воде при одинаковой температуре (Рис. 1 А, В и Б, Г) напрямую противоречат объяснению причин гибели моллюсков диффузионной потерей солей, поскольку диффузия является температурозависимым процессом.

Для объяснения наблюдаемой в проведенном эксперименте смертности незараженных гидробий (Рис. 1) можно предположить, что высокая температура активизирует метаболизм у моллюсков, накопление метаболитов в тканях тормозит обмен веществ вне зависимости от температуры, а смерть организма наступает вследствие отравления продуктами анаэробного метаболизма.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.