WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Табл.1. Влияние иммуномодуляторов на относительную (%) и абсолютную (х106/л) численность субпопуляций лимфоцитов (М±tm) Норма № Санатор. ИРС19 Ацилакт ИРС19+ лечение Ацилакт Лейко- 1 7682±1460 7797±853 7125±658 6671±циты ±2 7870±997 8708±942 7586±514 8936±1319* 47±Лимфо- 1 36±3 28±4 32±3 26±циты 2630±470 2138±348 2305±226 1603±2 33±3 29±4 34±2 30±±2428±443 2430±294 3048±867 2655±396 * 68±СD3+ 1 62±3 57±3 61±3 65±1701±278 1227±211 1399±151 1050±2 62±3 60±3 * 64±2 62±±1675±339 1306±170 1672±183 * 1638±258 * 50±CD4+ 1 38±3 32±2 36±2 37±930±172 652±107 835±94 596±2 37±2 32±2 40±2* 30±3* ±929±190 663±87 1045±112 * 799±137 * 21±CD8+ 1 24±2 22±2 24±2 23±605±113 466±93 565±71 373±2 23±2 23±2 25±2 25±±598±170 534±82 681±94* 647 ±134 * 2,CD4+/ 1 1,62 ±0,24 1,59 ±0,16 1,66 ±0,17 1,64 ±0,±0,CD8+ 2 1,66 ±0,23 1,32 1,74 ±0,16 1,32 ±0,26* ±0,12* 22±CD19+ 1 20±2 18±2 21±3 15±484±95 390 ±90 491 ±82 236 ±2 20±3 16±1 21±3 17±±384±76 357 ±56 554 ±98 458 ±108* 14±CD16+ 1 13±2 15±2 16±2 13±350±157 498 ±113 369 ±56 219 ±2 13±2 15±2 16±2 16±3* ±269±65 299 ±52* 442 ±82 414 ±82* В графах с данными о численности лимфоцитов или их субпопуляций верхняя строка – процентное содержание, нижняя строка – абсолютное количество клеток. 1 - до лечения, 2 - после лечения * значимое отличие от исходного уровня (p 0,05) Применение ИРС19 приводило к увеличению относительного количества СD3+ лимфоцитов, однако так же наблюдалось снижение соотношения CD4+/ CD8+ и содержания CD16+ лимфоцитов. Ацилакт оказывал положительное влияние: увеличивалось абсолютное количество СD3+ лимфоцитов, CD4+ лимфоцитов и абсолютное количество CD8+клеток.

Так выглядело воздействие иммуномодуляторов в целом на группу, которая состояла из детей с разным исходным состоянием иммунной системы.

Был проведен анализ того, является ли влияние иммуномодуляторов на иммунную систему характеристикой только самих препаратов или зависит от состояния иммунной системы ребенка. Было рассмотрено действие иммуномодуляторов на исходно нормальную и исходно сниженную численность субпопуляций лимфоцитов (табл. 2 и 3).

Было выявлено, что при применении иммуномодуляторов у детей с исходно нормальной численностью субпопуляций лимфоцитов наблюдается более или менее выраженное снижение ряда показателей (табл. 2), причем Ацилакт снижал наименьшее количество показателей. Применение иммуномодуляторов у детей с исходно сниженной численностью субпопуляций лимфоцитов приводило к увеличению численности основных субпопуляций (табл. 3), только Ацилакт повышал и соотношение CD4+/ CD8+ клеток.

Влияет ли исходная численность субпопуляций лимфоцитов на заболеваемость детей респираторными заболеваниями Часть детей в период пребывания в санатории перенесла очередное ОРЗ. Ретроспективный анализ субпопуляционного состава лимфоцитов показал, что исходная численность субпопуляций у заболевших и не заболевших детей не различалась, но в примерно одинаковой степени была снижена по сравнению с группой здоровых детей. Это говорит о том, что на возникновение заболевания ОРЗ, вероятно, влияет не только численность субпопуляций лимфоцитов, но и другие компоненты, характеризующие состояние иммунной системы – уровень иммуноглобулинов, фагоцитоз, продукция цитокинов и др.

Табл. 2 Влияние иммуномодуляторов на исходно нормальную относительную (%) и абсолютную (х106/л) численность субпопуляций лимфоцитов (M±tm) № Санатор. ИРС 19 Ацилакт ИРС19+ Норма лечение Ацилакт Лейко- 1 8991±1825 8584±857 8970±637 7950±циты 2 8200±1421 8632±1055 7894±678* 9288 ±±(х106/л) 47± 1 38±4 41±7 41±3 37±Лимфо- 2903±530 3050±457 2832±236 – циты 2 33±3 38±9 34±3* 32±± 2384±511 2474±510 2857±339 – 68±СD3+ 1 70±3 68±4 69±2 69±2072±361 1965±261 1991±183 – 2 70±4 63±3 66±3 63±5* ±1635±500 1175±318* 1855±281 – 50±CD4+ 1 44±8 43±2 45±2 44±1311±470 1240±171 1307±115 – 2 43±6 38±5 44±4 34±4* ±986±520 514±281* 1222±230 – 21±CD8+ 1 23±2 23±2 26±2 23±717±126 748±134 773±76 530±2 24±3 23±2 26±2 24±±630±269 525±193 779±132 657±2,CD4+/ 1 2,06±0,36 2,08±0,19 2,35±0,23 2,03±0,±0,CD8+ 2 1,88±0,40 1,34±0,26* 1,91±0,26* 1,82±0,22± 1 19±2 20±2 23±3 16±604±139 558±116 670±99 – CD19+ 2 16±2 17±2 21±2 16±±344±90* 378±96* 662±155 – 14± 1 17±6 20±3 18±2 17± 624 ±405 643±107 505±72 – CD16+ 2 13±4 17±2 18±2 18±±246±133 306±68* 498±86 – В графах с данными о численности лимфоцитов или их субпопуляций верхняя строка – процентное содержание, нижняя строка – абсолютное количество клеток.

1 - до лечения, 2 - после лечения * значимое отличие от исходного уровня (p 0,05) Табл. 3 Влияние иммуномодуляторов на исходно сниженную относительную (%) и абсолютную (х106/л) численность субпопуляций лимфоцитов (M±tm) № Санатор. ИРС19 Ацилакт ИРС19+ Норма лечение Ацилакт Лейко- 1 5283±648 4300±1511 4785±275 4966±циты ±2 7267±162 9000±2674* 7196±814* 8466±2065* 47±Лимфо- 1 23±16 22±2 21±2 23±циты 1744±162 1356±132 1441±131 1485±2 28±14 29±3* 34±4 * 30±5 * ±2570±1641 2393±372* 2282±375* 2732±454* 68±СD3+ 1 57±5 52±5 51±3 59±1284±168 925±139 988±91 1006±2 66±8* 59±4 61±4 * 60±±1719±594 1360±213* 1546±242* 1642±284* 50±CD4+ 1 33±4 30±2 30±2 34±772±85 565±75 636±61 596±2 36±3 32±2 38±2 * 29±3* ±906±231 686±95* 971±126* 799±137* 21±CD8+ 1 16±1 14±1 – 399±84 311±46 322±39 326±2 23±7* 20±3 * ±540±164 538±87* 567±127* 644±165* 2,CD4+/ 1 1,38±0,22 1,36±0,12 1,21±0,09 1,46±0,±0,CD8+ 2 1,54±0,30 1,31±0,14 1,63±0,21* 1,1±0,18* 22±CD19+ 1 – 10±2 11±2 – 349±37 211±51 284±38 236±2 15±3* 19±12 – ± 430±143 334±69* 429±94* 458±108* 14±CD16+ 1 8±2 9±1 9±1 8±200±43 142±33 249±32 204±2 10±3 13±4* 11±3 14±2* ±281±87* 281±96* 390±141* 430±82* В графах с данными о численности лимфоцитов или их субпопуляций верхняя строка – процентное содержание, нижняя строка – абсолютное количество клеток.

1 - до лечения, 2 - после лечения – * значимое отличие от исходного уровня (p 0,05) Поскольку по сравнению со здоровыми детьми иммунная система ЧБД характеризуется снижением численности ряда субпопуляций лимфоцитов, их увеличение после приема ИРС 19 или Ацилакта может расцениваться как положительный фактор. Однако на основании только данных о субпопуляционном составе лимфоцитов невозможно делать какие-либо определенные выводы. В следующей части работы исследовалась функциональная активность лимфоцитов.

Ее исследование дало нам возможность понять особенности продукции цитокинов у часто болеющих детей по сравнению со здоровыми детьми и констатировать различия в воздействии иммуномодуляторов на продукцию цитокинов. Исследованию функциональной активности клеток – продукции цитокинов и действию различных иммуномодуляторов на этот процесс - посвящены следующие разделы.

Исследование цитокинового статуса детей проводилось по схеме, приведенной на рис. 3.

Рис.3 Структура исследования цитокинового статуса Определение секреторной активности клеток, продуцирующих цитокины Концентрация Спонтанная Индуцированная цитокина продукция цитоки- продукция цитокина в сыворотке крови на клетками клетками Определение концентрации цитокина методом ИФА Определение процента клеток, продуцирующих различные цитокины детекция клеток, меченных флюорохромами, на проточВнутриклеточное ном цитофлюориметре мечение цитокинов Оценка влияния иммуномодуляторов на продукцию цитокинов требовала предварительно установить пределы нормальных колебаний параметров этой продукции. Оказалось, что у здоровых детей они варьируют, но поддаются статистической обработке и могут быть использованы для сравнения с этими показателями у ЧБД и для сравнения данных до лечения и после. Результаты обследования здоровых детей представлены в табл.4.

Табл.4 Продукция цитокинов у здоровых детей (М±tm), n = 17.

Цитокин Концентрация в Спонтанная Индуцированная сыворотке крови продукция продукция (пг/мл) (пг/мл) (пг/мл) ИЛ 2 3,2 ± 1,5 2,3 ±1,1 28,3 ± 5,ИЛ 4 0,04 ± 0,01 1,2 ± 0,3 4,1 ± 2,ИЛ 6 1,4 ± 0,7 1380 ± 700 6000 ± ИЛ 8 2,3 ± 1,6 8500 ± 4100 17500 ± ИЛ 10 0,1 ± 0,01 3,0 ± 0,2 27,4 ± 13,ИФН 1,7 ± 0,8 51,0 ± 7,6 1077 ± ФНО 0,3 ± 0,14 5,7 ± 2,2 180 ± Готовность организма адекватно реагировать на возникающую инфекцию зависит, в частности, от баланса между Т-хелперами 1 и 2 типа. В настоящей работе состояние этого баланса оценивалось по соотношению клеток, продуцирующих ИФН (Тх1) или ИЛ4 (Тх2), и обозначалось как Тх1/Тх2. Оказалось, что у ЧБД это соотношение ниже, чем у здоровых детей (табл. 5). Эти данные подтверждают широко распространенное мнение, что относительное преобладание Тх2-иммунного ответа может быть связано с ухудшением иммунной защиты против вирусных и бактериальных инфекций.

Табл.5 Соотношение Tх1/Tх2 у здоровых и часто болеющих детей (M±tm).

Норма ЧБД n = 17 n = Tх1/Tх2 18,7 ± 12,2 * 8,0 ± 2,* значимое отличие от нормы (p 0,05) Полученные нами данные (табл. 6) свидетельствуют, что показатели функционирования цитокиновой сети у ЧБД отличаются от таковых у здоровых детей. Методом ИФА была определена концентрация цитокинов в сыворотке крови и в супернатантах культур клеток цельной крови. Сывороточная концентрация и спонтанная продукция характеризовали текущее состояние, а индуцированная продукция – функциональный резерв цитокиновой сети.

Табл.6 Продукция цитокинов у ЧБД и здоровых детей ( M±tm, пг/мл) Цитокин ЧБД Здоровые дети n= концентрация в сыворотке крови 1,1±0,1 1,7 ± 0,спонтанная продукция ИФН - 51,0 ± 7,индуцированная про- дукция 849 ±146 1077 ± концентрация в сыворотке крови 0 0,04 ± 0,спонтанная ИЛ продукция 0 1,2 ± 0,индуцированная про- дукция 9.5 ±5,7* 4,1 ± 2, концентрация в сыворотке крови 0 0,3 ± 0,спонтанная ФНО продукция 2,3 ±0,7* 5,7 ± 2,индуцированная про- дукция 173 ±26,3 180 ± * значимое отличие от показателей здоровых детей (p 0,05) ИФН исследован у 87 ЧБД, ИЛ 4 и ФНО – у 43 ЧБД.

У ЧБД снижена спонтанная продукция ФНО и повышена индуцированная продукция ИЛ4.

Важным фактором защищенности человека от инфекций является полноценное функционирование системы интерфероногенеза. Оценка этого процесса недостаточна, если изучается только концентрация интерферонов методом ИФА. Важно оценивать биологическую активность продуцируемых клетками интерферонов, т.е. их способность предотвращать цитопатогенное действие вирусов. Именно это было исследовано у ЧБД (интерфероновый статус), и результаты этого исследования приведены далее.

Средняя величина биологической активности интерферонов, определенная нами у 76 обследованных ЧБД, указана в таблице 7.

Индуцированная продукция интерферонов у ЧБД отличалась от нормы.

Если биологическая активность продуцируемого ИФН была в пределах возрастной нормы, то для ИФН она была значимо снижена.

Табл.7 Биологическая активность интерферонов у ЧБД (ед/мл, среднее и 95%-ный доверительный интервал ) Вид интерферона ЧБД Норма n = 76 n = 186 ИФН (151 229) (145 240) 12* ИФН (10 39) (20 44) * значимое отличие от нормы (p 0,05) Все приведенные выше данные о состоянии иммунной и цитокиновой систем у ЧБД свидетельствуют о наличии у ЧБД ряда изменений в показателях клеточного и гуморального иммунитета. Была проведена попытка выяснить, имеется ли связь между наличием этих нарушений и склонностью к заболеванием ОРЗ. Наблюдение за возникновением ОРЗ у детей проводилось на протяжении 7 – 10 дней после поступления их в санаторий и первичного иммунологического обследования. Оказалось, что у детей, заболевших ОРЗ в санатории, по сравнению с оставшимися здоровыми было снижено соотношение Тх1/Тх2, продукция как ИФН, так и ИФН.

Рис.4 Заболеваемость ОРЗ в зависимости от исходного уровня Тх1/Тх2 и продукции интерферонов (n = 85) % от нормы заболели не заболели Тх1/Тх2 ИФН* ИФН* Показатели выражены в % от нормы * - значимое отличие показателя у заболевших и не заболевших детей при p 0,В связи с тем, что выявлена четкая взаимосвязь заболеваемости ОРЗ в санатории со сниженными показателями интерфероногенеза, было прослежено их изменение в результате иммунокоррегирующей терапии у ЧБД. Результаты этой работы приведены в табл. 8.

Для унифицированной оценки влияния иммуномодуляторов на продукцию цитокинов было введено понятие изменения уровня продукции цитокина в процентах к исходному уровню у каждого конкретного ребенка.

Табл.8 Изменение цитокинового статуса у детей, получавших в санатории лечение иммуномодуляторами, в % к исходному уровню (M±tм).

Показатели Санатор. ИРС 19 ИРС 19 Ацилакт цитокинового статуса лечение +Ацилакт Тх1/Тх2 125±52 145±42 106±317±Концентрация ИФН 126±37 182±262±94* 314±195* цитокинов в супернатантах ИЛ4 104±24 144±95 _ 290±97* после стимуляции клеток крови ФНО 109±44 88±193±66* 197±66* ФГА Биологическая ИФН 100± 261±88* 164±30* 183±47* активность интерферонов ИФН 91±68±13* 35±22* 186±29* * значимое отличие от исходного уровня p 0, каждая группа включала от 10 до 30 человек Санаторное лечение в отличие от иммуномодуляторов не оказывало значимого влияния на показатели цитокинового статуса. У детей, получавших ИРС 19, значительно увеличивалась продукция ИФН, ИЛ 4 и ФНО.

При применении сочетания ИРС 19 вместе с Ацилактом изменения в цитокиногенезе были аналогичны, однако не наблюдалось повышения индуцированной продукции ИЛ 4.

В результате лечения Ацилактом у детей повышалась продукция как ИФН, так и ИФН, соотношение Тх1/Тх2; важно, что у них не повышалась продукция ФНО.

Анализ полученных в ходе исследования данных позволил сделать следующие выводы.

ВЫВОДЫ 1. Состояние иммунного и цитокинового статуса здоровых и часто болеющих детей одного возраста отличаются. Эти отличия заключаются в снижении у ЧБД численности ряда субпопуляций лимфоцитов, индуцированной продукции ИФН, соотношения Tх1/Tх2 и повышении индуцированной продукции ИЛ 4.

2. Выявленное снижение численности субпопуляций лимфоцитов не влияло на возникновение ОРЗ во время наблюдения у ЧБД, а снижение индуцированной продукции ИФН и ИФН, а также соотношения Tх1/Тх2 способствовало возникновению ОРЗ в тот же период.

3. Исследованные показатели цитокинового статуса (ИЛ2, ИЛ4, ИЛ6, ИЛ8, ИЛ10, ИФН, ФНО, Tх1/Тх2) у здоровых детей имеют индивидуальные различия, но поддаются статистической обработке, а ряд из них (ИФН, ФНО) сохраняются на одном уровне в течение 30 дней наблюдения.

4. Применение иммуномодуляторов (Ацилакта, ИРС 19 или их совместно) оказывает влияние как на численность субпопуляций лимфоцитов, так и на цитокиновый профиль у ЧБД. Это воздействие наиболее выражено у ЧБД со сниженными показателями, характеризующими иммунную и цитокиновую системы.

5. При сравнении разных схем иммуномодулирующей терапии у ЧБД Ацилакт оказался наиболее эффективным в плане коррекции выявленных изменений, т.к. он нормализовал численность субпопуляций лимфоцитов, повышал продукцию как ИФН, так и ИФН, увеличивал соотношение Тх1/Тх2.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»