WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 |

На правах рукописи

Бжадуг Оксана Борисовна ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАСПРОСТРАНЕННЫМ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.00.14 – онкология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 2007 2

Работа выполнена в НИИ клинической онкологии ГУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН (директор - академик РАН и РАМН проф. М.И. Давыдов) Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор С.А. Тюляндин Доктор медицинских наук, профессор Н.Н. Тупицын

Официальные оппоненты:

Член-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор И.В. Поддубная Доктор медицинских наук, проф. З.Г. Кадагидзе

Ведущая организация:

Российский Государственный Медицинский Университет им. Н.Н. Пирогова

Защита диссертации состоится “_” 2007 г. на заседании диссертационного совета (К.001.017.01) ГУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН (115478, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН Автореферат разослан “_” 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, Доктор медицинских наук Ю.А. Барсуков 3

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Заболеваемость раком молочной железы в России, как и во многих странах, продолжает расти. В структуре заболеваемости женщин рак молочной железы устойчиво занимает 1 место, при этом у 37,3% впервые заболевших женщин диагностируется III или IV стадии заболевания. Прирост заболеваемости раком молочной железы в России составил с 1999 по 2004 г.

10,6%. Результаты лечения больных раком молочной железы остаются неудовлетворительными (прирост стандартизованного показателя смертности составил 2,9%) (Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2004).

В последние годы особое внимание уделяется более точному стадированию заболевания, а также изучению таргетной терапии рака молочной железы. Большое значение придается изучению биологически значимых характеристик заболевания, которые могут помочь при выборе наиболее эффективного вида противоопухолевого лечения.

Развитие современных технологий сделало возможным определение единичных опухолевых клеток в биоптатах костного мозга и в периферической крови (Gafforio J.J.et al., 2003). Доказано, что обнаружение на этапе постановки диагноза микрометастазов в костном мозге влияет на продолжительность безрецидивного промежутка и общую продолжительность жизни у больных РМЖ (Крохина О.В., Летягин В.П., 2002).

Клиническое значение иммунологического определения опухолевых клеток, циркулирующих в периферической крови, остается не до конца понятным (Brown S., 2005, Cristofanilli M., 2004, Molino A., 1999, Naumov G., 2004, Thurm H., 2003). Опухоли молочных желез гетерогенны по иммунофенотипу, что находит отражение в особенностях клинического течения, степени распространенности процесса, характере иммунного ответа и прогнозе заболевания (Тупицын Н.Н., 2005, Molino A., 1999, Naumov G.).

Есть все основания предполагать, что гетерогенность рака молочной железы по иммунофенотипу присуща не только первичной опухоли, но и опухолевым клеткам, циркулирующим в периферической крови.

Следовательно, течение заболевания может определяться не только фактом обнаружения опухолевых клеток в периферическом кровеносном русле, но и качественным составом этих клеток. Изучение иммунофенотипа циркулирующих опухолевых клеток может быть полезным в понимании механизмов метастазирования и лекарственной устойчивости рака молочной железы.

В этой связи представляется актуальным изучение количественного и качественного состава опухолевых клеток, циркулирующих в периферической крови больных диссеминированным раком молочной железы, а также оценка клинической значимости этого феномена.

Цель работы.

Целью настоящего исследования является оценка клинического значения иммунофенотипического изучения опухолевых клеток в периферической крови больных местно-распространенным и диссеминированным раком молочной железы.

Задачи исследования.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Установить количество циркулирующих опухолевых клеток в периферической крови больных местно-распространенным и диссеминированным раком молочной железы иммуноцитофлуорометрическим методом с использованием моноклональных антител к мембранным панэпителиальным антигенам Egp34 и BerEp4.

2. Провести количественную оценку клеток рака молочной железы в костном мозге иммуноцитологическим методом с использованием МКА к панцитокератинам KL-1.

3. Охарактеризовать субпопуляции циркулирующих в периферической крови клеток рака молочной железы на основании экспрессии мономорфных детерминант молекул гистосовместимости II класса (HLA-DR) и рецептора апоптоза FAS/APO-1 (CD95).

4. Оценить клиническую значимость определения циркулирующих опухолевых клеток и их количества в динамике в процессе специфической противоопухолевой терапии у больных местно-распространенным и диссеминированным раком молочной железы.

Научная новизна.

Впервые установлена частота обнаружения (41,3%) и охарактеризован субпопуляционный состав циркулирующих опухолевых клеток в периферической крови больных местно-распространенным и диссеминированным раком молочной железы. Показано, что циркулирующие в периферической крови опухолевые клетки гетерогенны по экспрессии молекул главного комплекса гистосовместимости II класса (HLA-DR) и рецептора CD95. В большинстве случаев отмечена выраженная пропорция HLA-DR-негативных и CD-95-негативных клеток. Выявление ЦОК наблюдается достоверно чаще при инфильтративно-дольковом раке и у больных в менопаузе. Микрометастазы в костном мозге до лечения обнаруживаются в 55% случаев рака молочной железы III-IV стадий и не имеют прямой ассоциации с наличием циркулирующих опухолевых клеток в крови. Доказано, что использование проточноиммуноцитофлуорометрической количественной идентификации циркулирующих опухолевых клеток в крови больных раком молочной железы на основании отсутствия обще-лейкоцитарных антигенов CD45 и экспрессии мембранных панэпителиальных антигенов (BerEp4 и Egp34) с точностью 1 опухолевая клетка на 1 миллион лейкоцитов позволяет оценивать динамику ЦОК и, в комплексе со стандартными диагностическими методами, эффективность проводимой химиотерапии.

Научно-практическая значимость.

Обоснована необходимость определения циркулирующих опухолевых клеток у больных раком молочной железы с целью совершенствования оценки степени распространенности рака молочной железы. Метод внедрен в клиническую практику отделения клинической фармакологии и химиотерапии НИИ КО ГУ РОНЦ им. Блохина Н.Н. РАМН. Показано, что динамика ЦОК в процессе лечения отражает эффективность лечения (продолжительность интервала без прогрессирования) и является ценным прогностическим показателем. При оценке субпопуляционного состава ЦОК отсутствие экспрессии молекул HLA-DR может служить указанием на необходимость применения индукторов экспрессии HLA-DR (например, интерферонов) в HLA-DR-негативных случаях с целью восстановления возможности распознавания микрометастазов иммунной системой организма.

Апробация работы.

Состоялась 20 марта 2007 года на совместной научной конференции с участием с участием отделения клинической фармакологии и химиотерапии, централизованного клинико-лабораторного отдела, отделения химиотерапии, отделения химиотерапии и комбинированных методов лечения злокачественных опухолей, отделения диагностики опухолей, отделения реконструктивной и сосудистой хирургии НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы, из них 1 в зарубежной печати.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 177 страницах машинописного текста и состоит из введения, 6 глав, обсуждения и заключения, выводов и перечня литературы. Текст иллюстрирован 42 таблицами, 24 рисунками и клиническими примерами. Библиографический список содержит отечественных и 102 иностранных источника.

Содержание работы.

Характеристика больных и методы исследований C 2001 по 2003 гг. в исследование включено 65 больных местнораспространенным (первично-неоперабельным) и метастатическим раком молочной железы. У большинства больных (87,7%) была установлена IV стадия рака молочной железы (n = 57); из них у 45,6 % (n = 26) заболевание было выявлено впервые, у 54,4% больных (n = 31) был выявлен рецидив заболевания после различных видов противоопухолевого лечения. У восьми больных (12,3%) был диагностирован местно-распространенный неоперабельный рак молочной железы.

Средний возраст больных составил 53 года (26 - 75 лет).

Большинство больных находились в состоянии менопаузы (72,3%).

У всех больных диагноз злокачественной опухоли молочной железы был верифицирован морфологически: гистологическим методом - у больных (72,3 %), цитологическим методом – у 18 больных (27,7%).

Наиболее часто встречалась инфильтративно-протоковая форма рака – у больных (63,8%), дольковый инфильтративный рак у 13 больных (27,6% ), другие формы рака – у 4 больных (8,5%).

Определение рецепторов стероидных гормонов чаще проводилось иммуногистохимическим методом, в отдельных случаях – биохимическим методом. Исследование рецепторного статуса опухоли молочной железы было проведено 43 больным. Рецепторы эстрогенов и прогестерона (РЭ+РП+) выявлены на опухолевых клетках у 10 больных (23,3%). У (41,9%) больных клетки опухоли не содержали рецепторов эстрогенов и прогестерона (РЭ-РП-), у 15 (34,8%) больных был обнаружен один рецептор стероидных гормонов (РЭ+РП- или РЭ-РП+).

Системное лечение.

Большинству больных (80%) проводилась химиотерапия. Лечение гормональными препаратами получали 13 пациенток (20%).

Химиотерапия по схеме FAC проведена 40 больным. В эту группу вошли как больные, которым проведена только химиотерапия по схеме FAC (n = 32), так и больные, которым на первом этапе была проведена химиотерапия по схеме FАС, после чего была назначена гормонотерапия тамоксифеном (n = 11).

Химиотерапия таксанами (паклитаксел 175 мг/м2 1 раз в 21 день или доцетаксел 75 мг/м2 1 раз в 21 день) была проведена 6 больным (10,9%):

двоим из них - в связи с прогрессированием рака молочной железы после адъювантной химиотерапии с включением антрациклинов, четверым больным - в качестве 2 линии химиотерапии (после 1 линии химиотерапии с включением антрациклинов).

Гормональная терапия проводилась 13 больным. Тамоксифен 20 мг в сутки, как правило, назначался больным (n = 10) с благоприятным прогнозом (пациенткам в менопаузе, с положительными рецепторами половых гормонов, с длительным безрецидивным интервалом). Летрозол 2,5 мг в сутки был назначен 1 больной, получавшей тамоксифен адъювантно, и больным в качестве второй линии гормонотерапии при прогрессировании заболевания на фоне приема тамоксифена.

Методы выявления опухолевых клеток в периферической крови и костном мозге.

Всем больным проводилось иммунологическое исследование периферической крови и костного мозга с целью выявления циркулирующих опухолевых клеток до лечения и, части больных, по окончании цикла лечения, или при прогрессировании заболевания. Иммунологическое исследование материала проводили в лаборатории иммунологии гемопоэза Централизованного клинико-лабораторного отдела НИИ КО ГУ РОНЦ имени Н.Н.Блохина РАМН.

При оценке циркулирующих эпителиальных клеток в периферической крови нами использованы прямые коньюгаты моноклональных антител (МКА). Использованы МКА фирмы Becton Dickinson (США). МКА НЕА-любезно предоставлены G. Moldenhauer (Германия), флуоресцентное мечение этих антител осуществлено R. Jones (HMDS, Великобритания).

Подсчет количества ЦОК осуществляли иммуноцитофлуориметрическим методом с использованием двойной флуоресцентной метки. Клетки окрашивали МКА к общелейкоцитарному антигену CD45 и МКА к общеэпителиальным мембранным антигенам Egp(МКА HEA 125), Ber-EP4 (МКА Ber-EP4). Использовали CD45-FITC или CD45-PerCP, НЕА125-FITC или НЕА125-PerCP, Ber-EP4-FITC. Разницы в чувствительности флуорохромов не выявлено. Уровни неспецифического связывания оценивали по изотипическим контролям с соответствующей флуорохромной меткой.

Панель моноклональных антител для оценки количества эпителиальных клеток, циркулирующих в периферической крови при раке молочной железы:

I. 1. IgG1 PerCP 2. CD45 PerCP IgG1 FITC 3. CD45 PerCP HEA 125 FITC или CD45 PerCP BerEP4 FITC II. 1. IgG1 FITC 2. CD45 FITC IgG1 PerCP 3. CD45 FITC HEA 125 PerCP При сборе образца на проточном цитофлуориметре накапливали максимально возможное количество клеточных событий в пределах CD45негативной фракции клеток с низкими уровнями бокового светорассеяния (SSC) (рисунок 1А), при этом через детектор проходило не менее клеточных событий.

Цитограмма 1А демонстрирует выбор области анализа по экспрессии CD45 антигена. По оси ординат выбран показатель уровней гранулярности клеток (SSC), по оси абсцисс (FL-3- детектор) экспрессия CD45 антигена (CD45 PerCP). Область R1 - это CD45-негативные клетки, включая циркулирующие клетки рака молочной железы.

На цитограмме 1Б представлены только клетки области R1, среди них присутствует четкая популяция клеток (область R2) c яркой экспрессией антигена Egp34, выявляемая FITC-мечеными МКА НЕА 125. Количество НЕА125+ клеток в данном образце составило 27 клеток на 1млн всех клеток образца за вычетом 1 клетки, попавшей в область R2 в изотипическом контроле.

Рисунок 1.

Выявление циркулирующих опухолевых клеток в крови больной раком молочной железы методом проточной цитофлуориметрии. Двойная флуоресцентная метка (пояснения в тексте).

А Б При определении субпопуляций циркулирующих опухолевых клеток использовали тройную флуоресцентную метку, в панель добавляли моноклональные антитела к антигенам CD95 и HLA-DR.

Панель МКА при оценке субпопуляций ЦОК выглядела следующим образом:

Pages:     || 2 | 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»