WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||

Ранее было показано, что с регуляторным районом HNF4 (0/-440 п.н.) способны связываться факторы HNF1, HNF3, HNF4, HNF6 и GATA6. Энхансерный элемент регуляторного района (-6.3 т.п.н./-6.0 т.п.н.) включает сайты связывания для факторов семейств C/EBP, HNF1, HNF3 и HNF4. В клетках культуры Н33 не экспрессируется часть вышеперечисленных факторов, а именно HNF1, HNF3, HNF6 и C/EBP. Мы провели серию ко-трансфекций, в которых вместе с вектором, содержащим репортерный ген люциферазы под контролем регуляторного участка HNF41 «-6.8», в клетки вводили вектор, экспрессирующий тот или иной транскрипционный фактор. Нашей целью было выяснить, произойдет ли активация репортерного гена в присутствии какого-либо из используемых транскрипционных факторов. Ко-трансфекции проводили с факторами HNF1 и, HNF3, и, GATA6, HNF6, C/EBP и HNF47. Оказалось, что ни один из перечисленных факторов не способен индуцировать экспрессию репортерного гена в клетках Н33, то есть, отсутствие этих транскрипционных активаторов HNF41 не является причиной подавления его экспрессии, что дополнительно свидетельствует в пользу предположения о репрессорном механизме инактивации гена в клетках культуры Н33.

Заключение В представленной работе был впервые проведен комплексный анализ экспрессии генов, предположительно вовлеченных в возникновение и прогрессию гепатокарцином.

Был проанализирован спектр экспрессии 46 генов в 11 ГК мыши и 32 генов в различных опухолях печени человека, а также в неопухолевой ткани печени тех же пациентов. По итогам проведенной работы наиболее общим явлением гепатоканцерогенеза и для мыши, и для человека оказалось снижение активности гена транскрипционного фактора HNF41, а также гиперэкспрессия его эмбриональной сплайс-формы HNF47 в дифференцированных ГК. Мы полагаем, что появление транскриптов HNF47 является ранним маркером гепатоканцерогенеза, в то время как подавление экспрессии обеих форм HNF41 и HNF47 маркируют поздние этапы опухолевой прогрессии. Нами был изучен регуляторный район гена HNF41, мы полагаем, что репрессия этого гена в дедифференцированных ГК обусловлена действием транскрипционного репрессора, сайт связывания для которого находится на участке -1.т.п.н./-363 п.н. регуляторного района HNF41. Поиск этого репрессора, а также дальнейшее изучение механизма подавления гена HNF41 станет темой нашей дальнейшей работы.

Активация генов TGF-сигнального пути была также охарактеризована нами, как событие, маркирующее прогрессию ГК: было показано, что дедифференцированные ГК самостоятельно транскрибируют TGF, кроме того, мы регистрировали в этих опухолях гиперэкспрессию некоторых TGF-зависимых генов (TSC-22, Tbi-68, остеопонтин, р21waf1/cip1).

По результатам проведенной работы гены остеопонтина, Ufo/Axl и ASNS охарактеризованы нами как наиболее перспективные маркеры гепатоканцерогенеза.

Кроме того, мы впервые показали, что в гепатокарциномах повышена экспрессия генов SLPI, ASNS, кавеолина и цитохезина 3. Нам представляется интересным дальнейшее изучение роли этих факторов в гепатоканцерогенезе.

Одним из важнейших направлений фундаментальной онкологии сейчас стало изучение взаимосвязи опухоли и окружающей ее неопухолевой ткани. Немаловажным результатом нашей работы стало наблюдение об активации генов (HNF47, HNF1, АФП, остеопонтин, виментин, Snail), нехарактерных для нормальных гепатоцитов, в клетках ткани печени, окружающей опухоль. Мы предполагаем, что под воздействием опухолевых клеток изменяется генетическая программа окружающих нормальных гепатоцитов, что способствует дальнейшему развитию опухоли.

Несмотря на то, что каждая опухоль уникальна по способу возникновения и развития, а спектр генетических поломок, последовательно направляющих клетку по пути канцерогенеза, сугубо индивидуален, нам представляется целесообразным продолжать поиски общих закономерностей опухолевой прогрессии. Изучение отдельных этапов этой прогрессии и способов перехода на следующую ступень озлокачествления представляет как неоспоримый интерес для фундаментальной науки, так и перспективное направление в лечении и диагностике опухолей ВЫВОДЫ 1. В гепатокариномах мыши и человека выявлена обратная зависимость между степенью опухолевой прогрессии и профилем экспрессируемых в них тканеспецифических регуляторов транскрипции HNF4, HNF1, HNF1, HNF3, C/EBP и FTF. Подавление активности гена HNF41 представляется наиболее значимым событием прогрессии гепатокарцином.

2. Впервые описана гиперэкспрессия эмбриональной формы HNF47 в образцах дифференцированных гепатокарцином мыши и человека. На поздних этапах опухолевой прогрессии происходит подавление транскрипции HNF47.

3. При прогрессии в значительной части гепатокарцином впервые описана активация экспрессии гена TGF2 и TGF-зависимых генов.

4. Из 46 проанализированных генов остеопонтин, тирозин-киназа Ufo/Axl и аспарагинсинтаза охарактеризованы как наиболее перспективные маркеры гепатоканцерогенеза.

5. Клетки ткани, окружающей гепатокарциному, экспрессируют не характерные для зрелых гепатоцитов гены HNF47 и HNF1, виментин, остеопонтин и snail.

6. Гепатокарциномы человека, ассоциированные с инфекцией вирусным гепатитом, развиваются по альтернативному механизму: в них не происходит репрессии гена HNF4.

7. В регуляторном районе гена HNF41 выявлен участок -1.4 т.п.н./-363 п.н., определяющий транскрипционную репрессию этого гена в клетках дедифференцированной гепатокарциномы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. N. L. Lazarevich, O. A. Cheremnova, E. V. Varga, D. A. Ovchinnikov, E. I.

Kudrjavtseva, O. V. Morozova, D. I. Fleishman, N. V. Engelhardt, S. A. Duncan.

Progression of HCC in mice is associated with a downregulation in the expression of hepatocyte nuclear factors. (2004) Hepatology, 39(4): 1038-1047.

2. Д.И. Флейшман, О.В. Морозова, Н.Л. Лазаревич. Сравнительная характеристика гепатокарцином мыши с различной степенью дифференцировки. (2008) Вестник Российского онкологического научного центра им. НН. Блохина РАМН, 2: 19-23.

3. Н.Л. Лазаревич, Д.И. Флейшман. Ткане-специфические транскрипционные факторы в прогрессии эпителиальных опухолей. (2008). Биохимия, выпуск (8).

4. Н.Л. Лазаревич, Д.А. Овчинников, Д.И. Флейшман, О.А.Черемнова, О.В.

Морозова, В.С Турусов. Н.В. Энгельгардт. Ткане-специфические транскрипционные факторы в прогрессии гепатоцеллюлярных карцином. (2006) Петровские чтения-2006. Конференция по фундаментальной онкологии, СанктПетербург, Россия. Вопр. Онкол., том 52 (1): 20-21.

5. Д.И Флейшман, О.А.Черемнова, Д.А. Овчинников, М.В, Макарова, О.А.

Чернобельская, Н.Л. Лазаревич. (2005) Изменения паттерна экспрессии генов в гепатокарциномах мыши и человека 9-я международная Пущинская школаконференция молодых ученых «Биология – наука XXI века», Пущино, тезисы доклада стр. 59.

6. Н.Л. Лазаревич, Д.И.Флейшман, О.А. Чернобельская, М.В.Макарова, Д.В.

Альперн, О.В.Морозова, Ю.И.Патютко, Н.В. Энгельгардт. Тканеспецифические транскрипционные факторы в прогрессии гепатоцеллюлярных карцином. Материалы VI Международной конференции «Молекулярная генетика соматических клеток». 12-16 декабря 2005 г., Звенигород, Москва, стр.

44.

7. D. I. Fleishman, M. V. Makarova, D. V. Alpern, D. A. Shavochkina, A. A.

Kuznetzova, O. V. Morozova, Y. I. Patyutko, N. L. Lazarevich. Gene expression alterations in hepatocarcinogenesis. Molecular Mechanisms in Signal Transduction and Cancer FEBS/EMBO Special meeting, Augast 15-24, 2007, Spetses, Greece.

Abstractbook, р. 28.

8. E.V. Varga, O.A. Cheremnova, D.A. Ovchinnikov, E.I. Kudrjavtseva, O.V.

Morozova, D.I. Fleichman, N.V. Engelhardt and N.L. Lazarevich. Steroid family nuclear receptor HNF4 expression increases differentiation level in a hepatocellular carcinoma. (2001) 27 FEBS Annual Meeting, FEBS J., v. 268, Suppl. 1, p. 68.

9. N. Lazarevich, O. Cheremnova, E. Varga, D. Ovchinnikov, E. Kudrjavtseva, O.

Morozova, D. Fleichman, N. Engelhardt. Comparative analyses of main properties and gene expression during mouse hepatocellular carcinoma one-step progression.

(2002) European Association for Cancer Research (EACR) 17 Meeting, Rev. Oncol., 4 (Suppl. 1): 91-92.

10. N. Lazarevich, O. Cheremnova, E. Varga, D. Ovchinnikov, D. Fleishman, E.

Kudrjavtseva, O. Morozova, N. Engelhardt. Tumor progression of mouse transplantable hepatocarcinomas: analyses of biological properties and gene expression. (2002) FASEB Summer Research Conference "Mechanisms of Liver Growth, Differentiation and Molecular Pathogenesis of Hepatic Diseases", Snowmass, Colorado,

Abstract

book, Х-15.

11. N.L. Lazarevich, D.I. Fleishman, O.A. Chernobel’skaya, M. V. Makarova, D.V.

Alpern, O.V. Morozova, Yu.I. Patyutko, N.V. Engelhardt. (2005) Tissue-specific transcription factor network in hepatocellular carcinoma progression The European Cancer Conference ECCO 13, Paris, Abstract book.

12. M.V. Makarova, O.A. Chernobelskaya, D.I. Fleishman, O.V. Morozova, N.L.

Lazarevich. Role of TGF-b signaling in hepatocellular carcinoma progression FEBS Special Meeting on Cellular Signaling, May 26 - June 1, 2006, Dubrovnik, Croatia.

Abstract book, стр.146-147.

13. N. Lazarevich, D. Fleishman, O. Chernobelskaya, M. Makarova, D. Alpern, A.

Kuznetsova, D. Shavochkina, O. Morozova, Y. Patyutko Dysfunction of tissuespecific transcriptional network is an important determinant of hepatocellular carcinoma progression Budapest, Hungary 1-4 July 2006. EACR-19 Meeting Proceedings, р. 14. D. Alpern, M. Makarova, D. Fleishman, O. Chernobelskaya, N. Lazarevich Expression of HNF4alpha is switched under influence of TGFbeta and p53 United Kingdom, Bath, 26-28 June, 2007. JDRF Center for Beta Cell Therapy in Diabetes Training Course "Transdifferentiation to Beta Cells", р. 12-

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»