WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Посевы инкубировали при температуре 42,5С в микроаэрофильных и капнофильных условиях в специальных системах для инкубации Genbox фирмы bio Merieux (Франция) с использованием газогенерирующих пакетов «Кампилогаз» производства ООО ИНКО г. Санкт - Петербург, предназначенных для создания искусственной атмосферы, обедненной кислородом и обогащенной углекислым газом. Состав искусственной атмосферы, генерируемой пакетом «Кампилогаз» в сосуде объемом 2,5-3 л : О- 5-7 % об., СО2 8-10 % об. Длительность инкубации составляла 48 часов с обязательным просмотром посевов через 24 часа.

Нами апробирована первичная идентификация колоний, подозрительных на кампилобактериозные, с использованием латексного агглютинационного набора Саmpylobacter test kit фирмы OXOID (Великобритания).

Методика основана на взаимодействии латексных частиц тестовой поверхности, сенсибилизированных кроличьими кампилобактериозными антителами, с поверхностными антигенами отобранных клеток, подозрительных на кампилобактериозные.

Для видовой идентификация кампилобактеров использовали современные диагностические системы (стрипы) api Campy фирмы bio Merieux (Франция), позволяющие одномоментное проведение комбинации ферментативных и ассимиляционных тестов, а также тестов на чувствительность к антибиотикам.

Учет и интерпретацию результатов проводили визуально через 24 часа инкубации при 35-37С, сравнивая их с идентификационной таблицей.

Ни в России, ни за рубежом до настоящего времени не существует нормативного документа, четко регламентирующего процедуру определения и учет результатов чувствительности кампилобактеров к противомикробным препаратам. Французское общество микробиологов (SFM) и Британское общество антимикробной терапии (BSAC) дают лишь временные рекомендации, говоря о сложности проведения корреляции между МИК и диаметром зон задержки роста, NCCLS также не дает точных рекомендаций.

Определение чувствительности проводили на среде Мюллера - Хинтона производства ЗАО НИЦФ г. Санкт - Петербург с добавлением 5% эритроцитарной массы и 0,2% магния хлорида [Иванов В.П. др., 1995] диско - диффузионным методом с использованием стандартных дисков.

Чувствительность изучали к следующим антибиотикам: ампициллину, цефазолину, цефалексину, цефепиму, имипенему, гентамицину, офлоксацину, эритромицину, тетрациклину, хлорамфениколу, налидиксовой кислоте (ЗАО НИЦФ г. Санкт - Петербург).

Посевы инкубировали при температуре + 42,5С в течение 24-48 часов в микроаэрофильных условиях. Учет результатов проводили путем измерения диаметров зон задержки роста вокруг диска с тем или иным антибиотиком.

Интерпретация результатов осуществлялась согласно указаниям производителей дисков.

Для проведения контроля качества определения антибиотикорезистентности выделенных кампилобактеров использовался контрольный штамм C.jejuni ATCC 11322.

В качестве сигнальной экспресс - детекции кампилобактериоза нами была применена реакция коагглютинации (РКА), с целью оценки ее эффективности в общей схеме лабораторной диагностики кампилобактериозных диарей, а также изучения частоты встречаемости кампилобактеров и их антигенов совместно с другими возбудителями ОКИ. Преимущество данного метода состоит в том, что его можно использовать не только с первых дней заболевания и на протяжении всего острого периода, но также еще в течение 1-2 недель после прекращения бактериовыделения и на фоне антибиотикотерапии.

РКА основана на способности поверхностного белка А стафилококка (штамм Cowan 1) сорбировать на себе специфические IgG антитела, которые при смешивании с субстратом, содержащим соответствующий антиген, агглютинируют.

Для обнаружения специфических антигенов кампилобактеров использовали «Диагностикум для определения антигенов кампилобактеров в реакции коагглютинации на стекле, жидкий» производства НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи (руководитель лаборатории проф. Ю.А.Белая). Препарат представляет собой стабилизированную взвесь стафилококков – носителей белка А (штамм Cowan 1), связанных со специфическими антителами IgG 1,2,4 к возбудителям кампилобактериоза.

Исследования проводили согласно наставлению по применению диагностикумов для определения антигенов возбудителей кишечных инфекций в реакции коагглютинации на стекле. Учет результатов осуществляли по 4-х крестной шкале.

Нами впервые было проведено определение антигенов кампилобактеров в испражнениях больных ОКИ с применением системы для иммуноферментного анализа RIDASCREEN® Campylobacter ELISA производства немецкой фирмы R – biopharm AG совместно с реакцией коагглютинации и бактериологическим методом диагностики кампилобактериоза. Данный диагностический тест характеризуется высокой специфичностью к антигенам Campylobacter, простотой проведения процедуры исследования, позволяющей в течение двух часов выявить патогены, в том числе не поддающиеся культивированию. Исследования осуществляли согласно прилагаемой инструкции по применению.

Статистическую обработку полученных данных проводили в соответствии с общепринятыми методами медицинской статистики [Шевченко И.Т. и др., 1970] при этом определяли среднее арифметическое и его ошибку, различия считали достоверными при t2. При проведении расчетов использовали программу Microsoft Excell.

Результаты исследований и их обсуждение Динамика высеваемости кампилобактеров за 2002 -2005 гг.

С 2002 по 2005гг. нами выделено 217 культур кампилобактеров от больных. Динамика высеваемости кампилобактеров с 2002 по 2005 гг.

представлена в табл. 3.

Таблица Высеваемость кампилобактеров 2002 - 2005 гг.

№ Год Выполнено Выделено Высеваемость п/п исследований культур в %±m 1. 2002 1996 48 2,4±0,2. 2003 3272 65 2,0±0,3. 2004 3438 58 1,7±0,4. 2005 3173 46 1,5±0, ИТОГО 11879 217 1,8±0, Высеваемость кампилобактеров с 2002 по 2005 гг. в среднем составила 1,8±0,12%, что более чем в 2 раза превышает уровень высеваемости шигелл за анализируемый период (0,8%), но уступает высеваемости сальмонелл (3,2%). При общей тенденции снижения заболеваемости ОКЗ, вызванной бактериальными патогенами, в Липецкой области наблюдается постепенное снижение уровня высеваемости как классических кишечных возбудителей (сальмонелл, шигелл), так и кампилобактеров с 2,4±0,14% в 2002 г. до 1,5±0,11% в 2005 г., достоверность различий t2 (рис. 1).

3,3,3,3,2,2,2,% 1,1, 1,1,0,0,6 0,0,2002 2003 2004 кампилобактеры сальмонеллы шигеллы Рисунок 1. Динамика высеваемости кампилобактеров, сальмонелл и шигелл в КДЛ МУЗ «Клиническая инфекционная больница» г. Липецка 2002-2005 гг.

Процентные показатели выделения кампилобактеров от общего числа обследованных в различных возрастных категориях распределились следующим образом: дети до 1 года - 2,4±0,3%, от 1 до 2 лет – 3,5±0,5%, от до 3 лет – 0,9±0,1 %, от 3 до 14 лет – 1,5±0,3% и взрослые – 0,8±0,1% (табл. 4).

Таблица Высеваемость кампилобактеров у обследуемых больных Возраст Количество Количество больных обследованных выделявших кампилобактеры Абсолютное %±m число Взрослые (старше 14 лет) 4192 34 0,8±0,Дети всего, в том числе 7415 161 2,2±0,До 1 года 3423 83 2,4±0,От 1 г.1м. до 2 лет 1323 46 3,5±0,От 2л.1м. до 3 лет 1218 11 0,9±0,От 3 л.1м. до 14 лет 1451 21 1,5±0,ИТОГО 11607 195 1,7±0, Изучение возрастной структуры больных кампилобактериозом в 2002 2005 гг. показало, что удельный вес обнаружения кампилобактеров у детей до 14 лет почти в 4,8 раза выше, чем у взрослых (соответственно 82,6±2,7% и 17,4±2,7%).

Таблица Возрастная структура больных кампилобактериозом (2002-2005 гг.) Возраст Количество больных выделявших кампилобактеры Абсолютное число %±m Взрослые (старше 14 лет) 34 17,4±2,Дети всего, в том числе 161 82,6±2,До 1 года 83 42,6±3,От 1 г.1м. до 2 лет 46 23,6±3,От 2л.1м. до 3 лет 11 5,6±1,От 3 л.1м. до 14 лет 21 10,8±2,ИТОГО 195 Процент выделения кампилобактеров у детей до 1 года от общего числа выделивших возбудитель составил 42,6±3,6%, от 1 до 2 лет – 23,6±3,1%, от 2 до 3 лет – 5,6±1,7 %, от 3 до 14 лет – 10,8±2,2% (рис. 2).

Штаммы кампилобактеров всего %±m С видовой идентификацией 169 77,9±2, в том числе:

Campylobacter jejuni 159 94,1±1,Campylobacter coli 10 5,9±1,Без видовой идентификации 48 22,1±2,(Campylobacter spp.) ВСЕГО 217 Полученные данные соответствуют литературным источникам, свидетельствующим об актуальности для патологии человека именно термофильных видов C.jejuni и C.coli, причем C.jejuni считается наиболее важным этиологическим агентом. В проведенном нами исследовании 24 случая тяжелых клинически выраженных форм кампилобактериоза были связаны с C.jejuni и лишь 1 случай ассоциирован с C.coli.

Особенности распространения кампилобактериоза в Липецкой области.

Наблюдения, проведенные в течение 2002 – 2005гг. показали, что заболеваемость кампилобактериозом в Липецкой области носит спорадический характер с отсутствием вспышек и очагов распространения. Показатель заболеваемости на 100 тыс. населения составил 1,46 в 2002 году и 3,34 в году. Заболевания кампилобактериозом зарегистрированы на административных территориях области: 9 районах и в городе Липецке.

Интенсивность эпидемического процесса выше среди детского населения.

Максимальные показатели заболеваемости наблюдались у детей первого года жизни (по данным на 11.2003г.) - 147,6 на 100 тысяч населения, что лишь на 30% ниже уровня заболеваемости сальмонеллезами и в 4,7 раза выше уровня дизентерии в этой возрастной группе; у детей 1-2 лет - 43,05 на 100 тысяч населения. Показатели заболеваемости в сельской местности в 1,74 раза выше, чем среди городских жителей [Фатина Н.М., Ярковская И.В.,2004].

Сезонная динамика случаев кампилобактериоза коррелирует с летним подъемом заболеваемости ОКИ, интенсивность в этот период возрастает в 2-раза.

На рисунке 3 показано, что пик выделения возбудителя приходится на летне-осенний период с июня по сентябрь (61 % всех выделенных штаммов).

январь феврал ь март апрел ь май июнь ию ль август сентябрь октябрь ноябрь д екабрь Рисунок 3. Суммарная помесячная динамика высеваемости кампилобактеров.

КИБ г. Липецк, 2003-2005гг.

Характерной особенностью, выявленной трехлетним анализом сезонной динамики кампилобактериоза в Липецкой области, является отсутствие выделения кампилобактеров от больных в октябре с последующим появлением положительных находок в более холодные месяцы года.

Характеристика клинического течения кампилобактериоза.

Согласно клиническим наблюдениям (по данным историй болезни), большинству пациентов, выделивших кампилобактеры, при поступлении в стационар ставили следующие диагнозы: “гастроэнтерит” – 34,4±3,4%, “энтероколит” – 25,1±3,1% и “энтерит” – 13,8±2,5%.

Большинство случаев заболевания характеризовалось острым началом с повышением температуры до фебрильных значений, появлением симптомов интоксикации и болей в животе. Рвота наблюдалась у трети пациентов.

Ведущим синдромом болезни была диарея с различной частотой жидкого стула (от 2 до 10 раз в сутки).

Среди клинических форм кампилобактериоза преобладали среднетяжелые (76,9±3,0%). Тяжелые формы составили 12,8±2,4 %, легкие – 3,1±1,2%, субклинические - 7,2±1,9 % (табл.7).

% Таблица Клинические формы кампилобактериоза (по тяжести течения) № Клинические Всего больных п/п формы абс. %±m от числа дети взрослые больных 1. Субклинические 14 7,2±1,9 13 2. Легкие 6 3,1±1,2 2 3. Среднетяжелые 150 76,9±3,0 121 4. Тяжелые 25 12,8±2,4 25 - ИТОГО 195 100 161 Тяжелые формы кампилобактериоза наблюдались у детей (25 больных), из них до 1 года - 21 случай, от 1 до 2 лет – 4 случая. У взрослых пациентов преобладали среднетяжелые (29 больных) и легкие (4 больных) формы инфекции.

Проявления дистального гемоколита имели место в 33,3±3,4% случаев (больных), среди детей – у 59 (36,7±3,8%), среди взрослых - у 6 (17,6±6,6%).

Явления токсикоза с эксикозом разной степени наблюдались у 12,8±2,4% больных кампилобактериозом детей в возрасте до 2 лет.

У двух пациентов (1,0±0,7%) в возрасте до 1 года были отмечены явления рецидивов кампилобактериоза через 3 недели от начала заболевания, что соответствует данным литературы о характерном рецидивирующем течении изучаемой инфекции у детей.

Какие-либо осложнения после перенесенного кампилобактериоза у обследуемых нами больных не наблюдали.

Результаты определения чувствительности к антибиотикам штаммов кампилобактеров, циркулирующих в Липецкой области.

Результаты определения антибиотикорезистентности выделенных штаммов кампилобактеров представлены в табл. 8.

Проведенные нами исследования показали, что наиболее высокий уровень резистентности кампилобактеров отмечается к цефалексину (100 %) – препарату, применяемому в качестве селективной добавки для культивирования данных возбудителей [Иванов В.П. и др. 1991], и цефазолину (96,8±1,6 %), используемому для их идентификации.

Все выделенные культуры кампилобактеров были чувствительны к представителю карбапенемов - имипенему и цефалоспорину 4-го поколения - цефепиму. Выявлен достаточно высокий процент штаммов, чувствительных к хлорамфениколу (98,7±0,9 %), офлоксацину (89,4±2,4 %).

Поскольку эритромицин, по мнению некоторых авторов, считается наиболее оптимальным препаратом для лечения кампилобактериозной инфекции, особое значение придавалось оценке чувствительности микроорганизмов к этому антибиотику.

Исследования показали высокий процент чувствительных к эритромицину штаммов кампилобактеров - 85,6±2,8%, устойчивых - 3,8 ±1,5%, умеренноустойчивых - 10,6±2,4%.

Таблица Чувствительность штаммов кампилобактеров к антибиотикам (КИБ, г. Липецк, 2003 – 2005 гг.) Результаты определения чувствительности штаммов № Спектр Количество кампилобактеров к антибиотикам п/п антибиотиков штаммов Чувствительные Умеренно - Резистентные кампилобактеров устойчивые %±m %±m %±m 1. Ампициллин 160 79,4±3,2 8,1±2,2 12,5±2,2. Цефазолин 124 2,4±1,4 0,8±0,8 96,8±1,3. Цефалексин 25 - - 100±0,4. Цефепим 62 100±0,0 - - 5. Имипенем 62 100±0,0 - - 6. Гентамицин 156 75,6±3,5 - 24,4±3,7. Офлоксацин 160 89,4±2,4 1,9±1,1 8,7±2,8. Эритромицин 160 85,6±2,8 10,6±2,4 3,8±1, 9. Тетрациклин 36 33,3±7,97 38,9±8,2 27,8±7,10. Хлорамфеникол 153 98,7±0,9 0,65±0,65 0,65±0,11. Налидиксовая 156 86,5±2,7 2,6±1,3 10,9±2,кислота Важным показателем также является оценка уровня резистентности к налидиксовой кислоте. В результате проведенного исследования чувствительными к налидиксовой кислоте оказались 86,5±2,7% выделенных штаммов, устойчивыми - 10,9±2,5 %, умеренно-устойчивыми - 2,6±1,3%.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»