WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

и соавт., (1985) и Hedloy D.W., (1989) в нашей модификации. Клеточный состав суспензии, ее гомогенность контролировали под микроскопом по методике Cytospin (Shandon Co., Великобритания). Концентрацию клеток в суспензии доводили до 12x10 в 1 мл. Затем к 0,2 мл суспензии добавляли 0,мл холодного (4°С) раствора пропидиума йодида («Sigma», США), полученную смесь несколько раз встряхивали и анализировали на проточном цитофлуорометре EPICS-XL (Coulter Beсkman, США). Для характеристики степени анеуплоидии клеток опухоли вычисляли ИДНК, который характеризовал отношение интенсивности флуоресценции пика анеуплоидных клеток (его номер канала) к диплоидному. Диплоидными опухолями считали новообразования, у которых G0/1 пик находился в пределах контрольного пика диплоидных стандартов и, соответственно, их ИДНК всегда равен 1,0. В анеуплоидных новообразованиях он был больше или меньше 1,0. В полученной ДНК-гистограмме процент клеточных ядер с различным содержанием ДНК вычисляли по отношению к общему числу исследованных клеток с помощью компьютерной программы MultiСycle (Phoenix Flow System, США). Программа автоматически рассчитывала плоидность опухоли и число клеток в G0/1-, S- и G2+М- фазах клеточного цикла, количество анеуплоидных клеток опухоли в процентах. Индекс пролиферации (ИП) определяли как сумму количества клеток в S- и G2+М- фазах.

Статистическая обработка.

Параметры лазерной ДНК-проточной цитофлуорометрии в большинстве наблюдений подчинялись нормальному распределению, что позволило использовать для статистического анализа параметрический критерий Стьюдента. При числе наблюдений менее 30 применялся и непараметрический анализ по Колмогорову-Смирнову (Гублер Е.В., 1978).

Статистический анализ и графика выполнялись с помощью стандартного пакета Statistica (version 5.0, Statsoft Inc., США).

Вычисление частотных характеристик были выполнены средствами базы Paradox, сравнение достоверности различий проведено с использованием t-критерия Стьюдента.

Для оценки отдаленных результатов лечения проведен анализ с использованием метода Kaplan-Meier, а сравнение достоверности различий этого показателя оценивали с помощью log-rank теста с вероятностью не менее 95% (р=0.05). На этом этапе анализа применялась программа «SURVAN», разработанная Техасским Университетом для Национального Ракового Института США.

Результаты исследования При проведении анализа продолжительности жизни в исследованной группе больных замечено, что продолжительность жизни больных метахронным раком молочной железы прямо коррелирует с интервалом между первой и второй опухолью. В случае возникновения второй опухоли до 3 лет после окончания лечения первой опухоли, общая 10-летняя выживаемость составила 30,2%. При выявлении второй опухоли в сроки от 3 до 5 лет, общая 10-летняя выживаемость составила 53,4% случаев. Если вторая опухоль возникла после 5 лет, то общая 10-летняя выживаемость составила 97,4% случаев.

Выживаемость больных представлена на рисунке №1. На графике видно, что меньше всех живет группа больных при возникновении второй опухоли через 1-2 года. А дольше всех – группа, в которой опухоль возникла после 5 лет от момента окончания лечения первой. Статистически достоверные различия были отмечены при сравнении всех трех временных интервалов (р<0,05).

Рисунок № Выживаемость больных в зависимости от времени возникновения второй опухоли до 3 лет 3-5 лет 100 100 97,95,после 5 лет 83,60,58,53,38,3 38,30,14,9 14,0 5 10 15 время наблюдения (годы) При сравнении показателей выживаемости в зависимости от возраста и овариально-менструальной функции лучшие результаты отмечены у молодых менструирующих женщин (рисунок №2).

(%) в ы ж и в а е м о с т ь Рисунок № 2.

Выживаемость в зависимости от овариально-менструального статуса 0 5 10 15 Время наблюдения (годы) Менопауза+Менопауза Менструир+Менструир Менструир+Менопауза Конечно, существенное влияние на прогноз оказывает и стадия заболевания: чем меньше стадия, тем выше выживаемость. Это верно как для первого рака, так и для метахронного (таблица №2).

Выживаемость (%) Таблица № 2.

Выживаемость больных метахронным раком молочной железы в зависимости от стадии заболевания Стадия Стадия Число Общая 5-летняя Общая 10-летняя ПРМЖ МРМЖ больных выживаемость выживаемость Т1-2N0 Т1-2N0 59 94,9+2,8* 83,0+5,2* Т1-2N0 Т1-2N1-3 32 93,4+4,5 64.8+7,Т1-2N0 Т3-4N0-3 9 81,3+4,2 77,8+7,Т1-2N1-3 Т1-2N0 32 78,2+2,1 85,6+4,Т1-2N1-3 Т1-2N1-3 21 72,1+4,5* 62,7+7,8* Т1-2N1-3 Т3-4N0-3 8 87,5+1,7 70,0+8,Т3-4N0-3 Т1-2N0 21 80,7+4,6 53,8+7,Т3-4N0-3 Т1-2N1-3 11 76.6+7.6 40,9+11,Т3-4N0-3 Т3-4N0-3 17 29.4+5.7* 11,3+7,2* Достоверность* Р<0,05 Р<0,При оценке плоидности у 34 больных из 37- это 91.9% выявлены анеуплоидные опухоли, причем у 14 больных (37.8%) -это анеуплоидные опухоли с потерей хромосомного материала (ИДНК<1.0). Следует отметить и еще одну важную особенность. У 35 больных из 37 обе опухоли, первая и метахронная имели одинаковую плоидность. То есть, если при первом раке опухоль, была анеуплоидной с потерей хромосомного материала, то и при метахронном раке выявлялась анеуплоидия с потерей хромосомного материала. Мы считаем весьма вероятным, что эти факты подтверждают генетическую предрасположенность к развитию метахронного рака.

Таблица №3.

Плоидность опухолей больных метахронным раком молочных желез (МРМЖ) Плоидность ПРМЖ МРМЖ Диплоидные 3(8.1%) 3(8.1%) Анеуплоидные с потерей хромосомного 13(35.2%) 14(37.8%) материала Анеуплоидные с ИДНК в пределах 12(32.4%) 11(29.8%) митотического цикла Тетраплоидные 1(2.7%) 1(2.7%) Многоклоновые 8(21.6%) 8(21.6%) (анеуплоидные) Всего: 37(100%) 37(100%) Анеуплоидные опухоли преобладали у больных до 50 лет, а диплоидные у пациенток старше этого возраста.

Частота анеуплоидных опухолей у больных метахронным раком молочной железы была максимальной при раннем раке. При больших значениях показателя «Т» частота анеуплоидных опухолей снижается. В то же время при одностороннем раке молочной железы такая тенденция отмечается у больных с диплоидной опухолью. В нашем исследовании первичные диплоидные опухоли, обнаружены при местно-распространенной стадии. Метахронные опухоли у этих пациенток выявлены в течение 3 лет после окончания лечения первого рака, прогрессирования заболевания за время наблюдения у них не отмечено.

Во всех группах плоидности, как при первичном, так и при метахронном раке, чаще всего встречались опухоли 2 степени злокачественности; возможно, это говорит об умеренной агрессивности метахронного рака.

Анализ плоидности опухоли в зависимости от интервала возникновения метахронного рака показал, что чаще всего в ближайшие два года после лечения первой опухоли метахронный рак выявляется у больных с анеуплоидными многоклоновыми опухолями, что говорит о высокой злокачественности данного вида опухолей. В интервале от 3 до 5 лет метахронный рак был чаще представлен анеуплоидными опухолями с ИДНК в пределах митотического цикла. Анеуплоидные же опухоли с потерей хромосомного материала в большинстве случаев выявлялись через 5 и более лет после лечения первого рака.

Больные с одинаковой плоидностью опухоли были условно разделены на группы: выжившие в течение срока наблюдения и умершие. Большую часть группы выживших больных -39 %- составили пациенты, опухоли которых были анеуплоидными с потерей хромосомного материала.

Таблица № 4.

Плоидность опухолей при метахронном раке у выживших больных Плоидность ПРМЖ Плоидность МРМЖ Количество % больных Диплоидные Диплоидные 2 8.Анеуплоидные с потерей Анеуплоидные с потерей 9 39.хромосом хромосом Анеуплоидные в пределах Анеуплоидные в пределах 5 21.митотического цикла митотического цикла Анеуплоидные в пределах Анеуплоидные 1 4.митотического цикла многоклоновые Анеуплоидные Анеуплоидные 1 4.тетраплоидные тетраплоидные Анеуплоидные Анеуплоидные 5 21.многоклоновые многоклоновые Всего: 23 В группе умерших больных в 43% случаев обнаружены анеуплоидные опухоли с ИДНК в пределах митотического цикла; данный тип плоидности характерен и для одностороннего рака. Все пациентки с тетраплоидными опухолями живы в течение срока наблюдения.

Был проведен сравнительный анализ в группах выживших и умерших больных с одинаковой плоидностью по таким параметрам, как ИП и распределение клеток по фазам клеточного цикла. Как следует из ранее полученных данных, неблагоприятное течение заболевания наблюдается при количестве клеток в G0/1 фазе клеточного цикла менее 80%, в S-фазе более 6%, в G2+М-фазе более10%, и при индексе пролиферации более 25%.

Из полученных нами данных видно, что у умерших больных показатели ИП и процентное количество клеток в S и G2+М фазах клеточного цикла были почти в два раза выше, чем эти же показатели у выживших пациентов.

У умерших больных количество клеток в G0/1 фазе менее 80%, в отличие от выживших.

При анализе отдаленных результатов у больных с анеуплоидными опухолями выявлено, что 5 летняя общая выживаемость в группе анеуплоидных опухолей с потерей хромосомного материала составила 92.3%, а в группе анеуплоидных опухолей в пределах митотического цикла только 58.3% (р<0,05).

Рисунок №Общая выживаемость больных метахронным раком молочной железы в зависимости от индекса ДНК 92,82,87,78,61,61,58,52,43,43,38,38,0 5 10 15 Время наблюдения (годы) Анеуплоидные с потерей хромосом Анеуплоидные в пределах метатического цикла Анеуплоидные многоклоновые Выживаемость (%) У 48 больных первично-множественным метахронным раком молочной железы был определен протоонкоген Her-2/neu. Почти у 84% этих пациентов показатели Her-2/neu были одинаковыми как для первой, так и для второй опухоли. При этом у 10 больных 20.8% как при первичном, так и при метахронном раке была отмечена гиперэкспрессия Her-2/neu. Так как данный факт является неблагоприятным в прогностическом отношении (Gusterson et.al., 1992), поэтому гиперэкспрессия Her-2/neu отмечена лишь у относительно небольшого числа больных.

Таблица №Результаты экспрессии Her-2/neu при первичном и метахронном раке молочной железы Her-2/neu при Her-2/neu при Количество % ПРМЖ МРМЖ больных + + 6 12.- - 34 70.+ - 4 8.- + 4 8.Всего: 48 Для выявления наиболее значимых факторов прогноза, влияющих на выживаемость пациентов, проведен многофакторный анализ течения первого рака молочной железы у больных, у которых в последствии выявлен метахронный рак. Весовые коэффициенты информативности (по Шеннону), были рассчитаны по 8 признакам, которые внесли наиболее значимый вклад в прогноз жизни больных. Это в первую очередь время возникновения второй опухоли- весовой коэффициент данного признака наибольший- 9.2. Так же на прогноз жизни влияет размер опухоли, вид лечения, количество пораженных регионарных лимфатических узлов, возраст, репродуктивный статус, количество стероидных гормонов и плоидность опухоли.

Диаграмма №. Весовые коэффициенты (по Шеннону) прогностически значимых признаков Время до 2 опухоли 9,T 6,Вид лечения 3,N 2,возраст 2,Репродуктивный статус 1,РЭ/РП 1,Плоидность 0,02468 Для того, что бы определить, какие из клинических и биологических факторов особенно важны для прогнозирования возникновения метахронного рака, мы провели сравнительный анализ двух групп больных. Одну составили пациенты, у которых в последствии развился метахронный рак, другую-больные односторонним раком молочной железы. Эта контрольная группа из 300 человек была подобрана с учетом возраста, стадии заболевания и рецепторного статуса опухоли, которые соответствовали таковым у изучаемых больных метахронным раком. При многофакторном анализе, взяв за критерий прогноз возникновения опухоли во второй молочной железе, мы с точностью до 80% определили признаки, влияющие на развитие метахронного рака. В группу риска входят молодые больные в репродуктивном возрасте, страдающие ранним раком молочной железы, опухоль у которых является анеуплоидной с потерей хромосомного материала.

Эти пациенты требуют наиболее тщательного наблюдения с целью возможно более раннего выявления метахронного рака молочной железы.

Выводы 1. Прогностически значимыми признаками при первичномножественном метахронном раке – являются время возникновения второй опухоли, возраст, репродуктивный статус, размер опухоли, поражение регионарных лимфатических узлов, уровень рецепторов стероидных гормонов, вид лечения и плоидность опухоли.

2. Как при первичном раке молочной железы, так и при метахронном наблюдается преимущественно анеуплоидные опухоли (91,9%), большая часть из них (35,2%) с потерей хромосомного материала.

3. Любой из неблагоприятных клинико-морфологических факторов прогноза у больных метахронным раком молочной железы сочетается, по крайней мере, с одним из параметров лазерной ДНК-проточной цитофлуорометрии, свидетельсвующих о повышении пролиферативной активности опухоли: повышением содержания клеток в S-фазе более 6% и в G2+М фазе клеточного цикла более 10% или повышением индекса пролиферации более 25%.

4. Первичный и метахронный рак молочной железы имеют в 83,4% случаев одинаковые показатели Her-2/neu. Гиперэкспрессия протоонкогена Her-2/neu наблюдается только в 20.8% случаев у больных метахронным раком молочной железы.

5. Общая выживаемость больных метахронным раком, прежде всего, зависит от срока развития опухоли в контрлатеральной молочной железе и возрастает с увеличением этого временного интервала с 30,2% при выявлении второй опухоли в первые 3 года с момента окончания лечения первой до 97,4% при выявлении второй опухоли после 5 лет (р<0,05).

6. Группу риска по возникновению метахронного рака молочной железы составляют молодые больные в репродуктивном возрасте, с I и IIа стадией заболевания, у которых анеуплоидная опухоль с потерей хромосомного материала. Вероятность развития метахронного рака молочной железы у этих больных составляет 73%.

Список печатных работ по теме диссертации.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»