WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 ||

200% 180% 160% 140% 120% 100% 80% 60% 40% 20% 0% 1:160 1:80 1:40 1:20 1:10 1:Разведение Серии №№ 1 и 2 Серия № 3 Серия № 4 Серия № Рисунок 4. Кривые нейтрализации летального токсина противосибиреязвенными иммуноглобулиновыми препаратами человека В табл. 4 представлены результаты оценки профилактической эффективности противосибиреязвенного ВВИГ на морских свинках. Номинальная концентрация белка в лошадином глобулине составляет 10 %, а в иммуноглобулине человека – 5 %, поэтому последний был применён в удвоенной дозировке. Его эффективность была несколько ниже, чем у препарата сравнения, однако расчёт точного критерия Фишера позволил сделать заключение, что зарегистрированные различия активности препаратов статистически незначимы (p = 1,000).

Нейтрализация токсина Таблица Профилактическая эффективность противосибиреязвенного внутривенного иммуноглобулина человека Количество морских свинок Относительное количество выживших Группа животных взятых животных павших выживших в опыт через суток после заражения, % Опытная (4 мл ВВИГ подкожно, через 24 ч 50 LD6 3 3 штамма 71/12 в 1 мл подкожно) Сравнения (2 мл лошадиного глобулина подкожно, через 6 2 4 24 ч 50 LD50 штамма 71/12 в мл подкожно) Контрольная (50 LDштамма 71/12 в 1 мл 6 6 0 подкожно) Сходные результаты были получены при экспериментальной оценке эффективности применения ВВИГ в качестве средства монотерапии на кроликах (табл. 5). Введённая доза сибиреязвенного микроба моделировала инфекционный процесс средней степени тяжести, приводящий к 100 % гибели животных в течение 15 суток. Курс лечения иммуноглобулином для внутривенного введения снизил смертность на 67 % (относительное количество выживших животных составило 33 %), а применение лошадиного глобулина – на 50 %. На основании расчёта точного критерия Фишера различия в смертности кроликов также признаны статистически незначимыми (p = 1,000).

Применение ВВИГ в комплексе с антибиотиком было более эффективно, чем использование комбинации внутримышечного лошадиного ИП с антибактериальным препаратом (табл. 6). Заражающая доза моделировала тяжёлую форму сибиреязвенной инфекции, вызывающую летальный исход у 100 % кроликов в течение 5 суток. На 30 сутки после заражения относительное количество выживших животных в опытной группе составило 60 %. Такой же результат был зарегистрирован в первой группе сравнения. Во второй группе сравнения выжило 20 % животных. По-видимому, более выраженная эффективность комбинации иммуноглобулина для внутривенного введения с ампициллином обусловлена хорошо известным и применяемым на практике синергизмом действия ВВИГ и антибиотиков [Козлов В.К., 2006]. Наблюдаемые различия в смертности кроликов опытной группы и первой группы сравнения статистически незначимы на основании расчёта точного критерия Фишера (p = 1,000).

Таблица Лечебная монотерапевтическая эффективность противосибиреязвенного внутривенного иммуноглобулина человека Количество кроликов Относительное количество выживших Группа животных взятых животных павших выживших в опыт через суток после заражения, % Опытная (10 LD50 штамма Ч-7 в 1 мл подкожно, через 6 4 2 24, 48, 72, 96, 120 ч 2,4 мл ВВИГ внутривенно) Сравнения (10 LD50 штамма Ч-7 в 1 мл подкожно, через 24, 48, 72, 96, 120 ч 1,2 мл 6 3 3 лошадиного глобулина внутримышечно) Контрольная (10 LD6 6 0 штамма Ч-7 в 1 мл подкожно) Результаты проведённых исследований свидетельствуют о достаточно высокой эффективности экспериментальных образцов противосибиреязвенного ВВИГ, сопоставимой с защитными свойствами лошадиного глобулина. Вместе с тем, потенциал аллогенного препарата значительно выше, чем гетерогенного:

максимальная разовая доза ВВИГ составляет 2 г белка на 1 кг массы тела, то есть в среднем около 2800 мл 5 % раствора, в то время как допустимый объём инъекции лошадиного глобулина, лимитированый способом введения и, главным образом, гетерогенной природой препарата, может составлять не более 100 мл 10 % белкового раствора. Максимальная курсовая доза ВВИГ достигает 14 л в пересчёте на 10 % белка, в то время как лошадиного глобулина – только 400 мл.

Таким образом, перспективность противосибиреязвенного иммуноглобулина человека, не обладающего, в отличие от лошадиного глобулина, сенсибилизирующими свойствами, сомнений не вызывает.

Таблица Лечебная эффективность противосибиреязвенного внутривенного иммуноглобулина человека в комплексной терапии с антибиотиком Количество кроликов Относительное количество выживших Группа животных взятых животных павших выживших в опыт через суток после заражения, % Опытная (100 LD50 штамма Ч-7 в 1 мл подкожно, через 24, 48, 72, 96, 120 ч 2,4 мл ВВИГ внутривенно, через 24, 36, 48, 5 2 3 60, 72, 84, 96, 108, 120, 132 ч 560 мг ампициллина внутримышечно) Первая сравнения (100 LDштамма Ч-7 в 1 мл подкожно, через 24, 48, 72, 96, 120 ч 1,2 мл лошадиного глобулина 5 2 3 внутримышечно, через 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96, 108, 120, ч 560 мг ампициллина внутримышечно) Вторая сравнения (100 LDштамма Ч-7 в 1 мл подкожно, через 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96, 5 4 1 108, 120, 132 ч 560 мг ампициллина внутримышечно) Контрольная (100 LD5 5 0 штамма Ч-7 в 1 мл подкожно) ВЫВОДЫ 1. Впервые показана принципиальная возможность концентрации антител человека к протективному антигену B. anthracis (заявка на патент РФ № 2006129089/20/03/608). Минимальным защитным уровнем антител во внутривенном иммуноглобулине является титр 1:1600 по результатам иммуноферментного анализа, а в исходной плазме - 1:400.

2. Однократная иммунизация доноров сухой или жидкой формой комбинированной сибиреязвенной вакцины обеспечивает циркуляцию антител к протективному антигену на значимом уровне у 69 % людей.

Заготовка иммунной плазмы возможна с 5 недели после вакцинации.

Антитела стабильны в процессе хранения сырья в течение 12 месяцев при температуре не выше минус 30 С.

3. По технологии этанольного фракционирования донорской плазмы получены экспериментальные образцы противосибиреязвенных иммуноглобулинов человека. Препараты, произведённые с применением пепсинолиза и инкубации в кислой среде, содержат антитела к протективному антигену B. anthracis в титре 1:1600 и 1:соответственно и отвечают требованиям, предъявляемым к внутривенным иммуноглобулинам. Препарат для энтерального применения, полученный с применением метода извлечения иммуноглобулинов из фракции Б, содержит целевые антитела в титре не менее 1:800.

4. Экспериментальные серии иммуноглобулинов, полученные с применением 3 различных технологических приёмов, содержат антитела к третьему и четвёртому доменам протективного антигена и к летальному фактору сибиреязвенного микроба. Препараты обладают токсиннейтрализующей противосибиреязвенной активностью in vitro.

5. В экспериментах на животных доказана высокая профилактическая и лечебная эффективность внутривенного иммуноглобулина, сопоставимая с защитным эффектом, оказываемым гипериммунным лошадиным глобулином.

Автор благодарен всем сотрудникам лаборатории препаратов крови КНИИГиПК (руководитель – к.б.н. А.В. Дробкова), станции переливания крови КНИИГиПК (главный врач – В.К. Куноф), сотрудникам ЦНИИ МО (начальник – д.м.н. И.В. Борисевич), с.н.с. ФГУН «ГНЦ прикладной биотехнологии и микробиологии» к.б.н. Е.В. Беловой, с.н.с. ФГУН «МНИИ эпидемиологии и микробиологии» д.б.н. А.Г. Лютову за участие в работе.

ПУБЛИКАЦИИ 1. Долматов В.Ю., Блинова Е.А., Дробкова А.В., Карпова М.В. Изучение влияния процесса фракционирования плазмы на специфическую активность антител человека к протективному антигену сибиреязвенного микроба: Материалы научно-практической конференции молодых учёных «Вопросы трансфузиологии и клинической медицины». – Киров, 2007. – С. 30 – 31.

2. Долматов В.Ю., Блинова Е.А., Дробкова А.В., Карпова М.В., Шевцов А.Н., Боровской Д.В. Опыт выделения иммуноглобулинов из донорской плазмы, содержащей антитела к протективному антигену сибиреязвенного микроба: Сборник научно-практических работ «Производственная и клиническая трансфузиология: реальность и перспективы». – Воронеж, 2007. – С. 85 – 86.

3. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Карпова М.В., Мальцева О.В., Шевцов А.Н., Боровской Д.В. Гуморальный иммунный ответ доноров плазмы на комбинированную сибиреязвенную вакцину // Трансфузиология. - 2007. – Т.8, № 1 – 2. – С. 41 – 42.

4. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Карпова М.В., Шевцов А.Н., Боровской Д.В. Гуморальный иммунный ответ доноров на комбинированную сибиреязвенную вакцину // Проблемы гематологии и переливания крови. - 2005. - № 3. – С. 43 – 44.

5. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Карпова М.В., Шевцов А.Н., Боровской Д.В. Изучение стабильности содержания антител к протективному антигену Bac. anthracis в сыворотке крови доноров: Сборник «Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины». – Киров, 2005. – С.

152 – 153.

6. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Лютов А.Г., Мальцева О.В., Шевцов А.Н., Боровской Д.В., Елагин Г.Д., Карпова М.В., Вершинина О.А., Блинова Е.А., Шарыгин С.Л. Возможность получения противосибиреязвенного иммуноглобулина человека для внутривенного введения // Проблемы особо опасных инфекций. - 2008. - № 2.

7. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Мальцева О.В., Блинова Е.А., Шарыгин С.Л., Лютов А.Г., Вершинина О.А., Карпова М.В., Князев М.Г., Шалагинова Т.Д., Гребенева Г.А., Шевцов А.Н., Боровской Д.В.

Противосибиреязвенный внутривенный иммуноглобулин человека:

Сборник «Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины». – Киров, 2008. – С. 27 – 28.

8. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Мальцева О.В., Вершинина О.А., Карпова М.В., Шалагинова Т.Д., Шевцов А.Н., Боровской Д.В. Влияние ревакцинации на содержание антител к протективному антигену Bac.

anthracis в сыворотке крови иммунизированных доноров: Сборник трудов юбилейной научно-практической конференции «Специализированная медицинская помощь», посвящённой 75-летию медицинской службы и 10летию госпиталя ГУВД Свердловской области. – Екатеринбург:

Издательство Уральского университета, 2005. – С. 620 – 622.

9. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Мальцева О.В., Вершинина О.А., Карпова М.В., Шалагинова Т.Д., Шевцов А.Н., Боровской Д.В. Изучение содержания антител к протективному антигену Bac. anthracis в сыворотке крови иммунизированных доноров: Сборник «Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины». – Киров, 2005. – С. 148 – 151.

10. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Мальцева О.В., Карпова М.В., Вершинина О.А., Шалагинова Т.Д., Шевцов А.Н., Елагин Г.Д., Боровской Д.В., Лютов А.Г., Шарыгин С.Л. Тактика заготовки сырья для получения внутривенного противосибиреязвенного иммуноглобулина человека // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. - 2007. - № 3. – С. 124 – 131.

11. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Мальцева О.В., Шарыгин С.Л. Изучение стабильности основных параметров противосибиреязвенного внутривенного иммуноглобулина человека: Сборник «Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины». – Киров, 2008. – С.

26 – 27.

12. Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Погорельский И.П., Мальцева О.В., Шевцов А.Н., Елагин Г.Д., Белова Е.В., Боровской Д.В., Карпова М.В., Вершинина О.А., Блинова Е.А., Лютов А.Г., Шарыгин С.Л.

Фармацевтическая разработка противосибиреязвенного внутривенного иммуноглобулина человека // Успехи современного естествознания. - 2008. - № 5. – С. 96 – 98.

13. Долматов В.Ю., Карпова М.В. Оценка возможности определения содержания антител человека к протективному антигену Bacillus anthracis в концентрированных белковых растворах методом иммуноферментного анализа // Трансфузиология. - 2007. – Т.8, № 1 – 2. – С. 42 – 43.

14. Дробкова А.В., Мальцева О.В., Блинова Е.А., Шалагинова Т.Д., Шарыгин С.Л., Долматов В.Ю., Дармов И.В., Шевцов А.Н., Боровской Д.В.

Получение и оценка протективных свойств противосибиреязвенного концентрата иммуноглобулина человека // Трансфузиология. - 2007. – Т.8, № 1 – 2. – С. 43.

15. Мостовская Е.В., Лютов А.Г., Долматов В.Ю., Дробкова А.В., Соловьёв А.Ф., Карпова М.В., Мальцева О.В., Блинова Е.А., Бочкарёва С.С., Тюриков Ю.М. Габриглобин как основа создания специфических иммуноглобулинов для внутривенного введения: Материалы научнопрактической конференции молодых учёных «Вопросы трансфузиологии и клинической медицины». – Киров, 2007. – С. 39 – 41.

Pages:     | 1 | 2 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»