WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 ||

Облучение ультрафиолетом L-кристаллина в присутствии дипептидов предотвращает образование таких крупных частиц. Средний диаметр частиц в случае добавки анзерина или N-ацетилкарнозина равен 6,89 и 6,27 нм, соответственно. Полученные данные позволяют заключить, что механизм действия дипептидов связан с уменьшением размеров агрегатов, формирующихся на начальной стадии агрегации УФ-денатурированного белка. Такой же механизм предложен нами для объяснения шаперон-подобной активности -кристаллина (Markossian et al., 2006).

Исследование действия короткоцепочечных пептидов на УФ-агрегацию смеси - и L-кристаллинов. Для эксперимента было выбрано соотношение - и кристаллинов 1:16 по массе (0,06:1мг/пробе), и получены совпадающие кривые агрегации для разных ГСД и контроля (данные не представлены), что позволяет говорить об отсутствии специфического влияния ГСД на шаперон-подобную активность -кристаллина при физиологических значениях концентрации и температуры. В отличие от ГСД, пантетин дозо-зависимо подавляет УФ-агрегацию смеси белков (рис. 12, А). Снижение скорости агрегации можно было бы объяснить только светофильтрующим эффектом, однако линейный рост лаг-фазы в присутствии пантетина указывает на специфическое влияние пантетина на активность кристаллина. На рис. 12, Б показана зависимость лаг-фазы t0 УФ-агрегации смеси белков от концентрации пантетина. В интервале концентраций 5-25мМ лаг-фаза Рис. 12. А - шаперон-подобная активность -кристаллина в присутствии пантетина на модели УФ-агрегации. 1-кривая агрегации L-кристаллина и -кристаллина в массовом соотношении 16:1 (контроль), 2-5 - кривые агрегации L-кристаллина и -кристаллина в присутствии 5, 10, 20, 25 мМ пантетина, соответственно. Б - Зависимость параметра t0 (лагфазы процесса) от концентрации пантетина при УФ- агрегации L-кристаллина растет линейно, при повышении концентрации до 30 мМ лаг-фаза сокращается, то есть эффект пантетина достигает насыщения. Действие пантетина в смеси - и Lкристаллинов по характеру влияния на кинетику агрегации сходно с действием кристаллина (увеличение t0 и снижение ki). На основании этих данных мы заключаем, что пантетин активирует шаперон-подобные свойства -кристаллина.

ВЫВОДЫ 1. Разработана экспериментальная модель УФ-индуцированной агрегации белков, позволяющая анализировать кинетику агрегации белков хрусталика.

2. Показано, что константа скорости процесса агрегации L-кристаллина, индуцированной как ультрафиолетом, так и повышением температуры, линейно зависит от концентрации белка, что свидетельствует о псевдопервом порядке реакции.

Однако, при УФ-индуцированной агрегации линейный рост константы скорости характерен только для области низких концентрации белка (0,25-1,00 мг/мл).

3. Дана количественная оценка эффективности -кристаллина как шаперонподобного белка на моделях УФ-индуцированной и тепловой агрегации Lкристаллина. Показано, что шаперон-подобная активность -кристаллина в отношении агрегации L-кристаллина, поврежденного теплом, существенно (примерно в 4 раза) превышает шаперон-подобную активность -кристаллина в отношении агрегации УФ поврежденного L-кристаллина, что совпадает с полученными ранее данными о тепловой активации -кристаллина.

4. Показано, что роль светофильтрующей составляющей в защитном действии кристаллина уменьшается при росте массового соотношения :L. При массовом соотношении 1:1 (:L) 30% защитного эффекта -кристаллина приходится на его экранирующий эффект, тогда как при соотношении 1:8 (:L) на экранирующий эффект приходится 93% защитного эффекта -кристаллина.

5. УФ облучение усиливает шаперон-подобную активность -кристаллина по отношению к L-кристаллину, что, по-видимому, связано с конформационной перестройкой -кристаллина под действием УФ света.

6. Разработан метод исследования УФ-индуцированной агрегации белков, который позволяет, разделяя во времени процесс повреждения белка и его агрегации, анализировать механизмы влияния шаперон-подобных соединений на агрегацию белков хрусталика.

7. Показано, что N-ацетилкарнозин, анзерин и D-пантетин дозо-зависимым образом замедляют процесс УФ-индуцированной агрегации L-кристаллина.

8. Торможение УФ-индуцированной агрегации L-кристаллина в присутствии Nацетилкарнозина и анзерина сопровождается существенным снижением размеров агрегатов.

9. Торможение УФ-индуцированной агрегации смеси - и L-кристаллинов в присутствии D-пантетина обусловлено как светофильтрующим действием соединения, так и активацией шаперон-подобных свойств -кристаллина.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Тимофеева А.К., Болдырев А.А. Влияние природных гистидин-содержащих дипептидов на шаперон-подобную активность бычьего -кристаллина. // Научные труды МБЦ МГУ, 2003, М., с. 42-46.

2. Тимофеева А.К., Ханова Е.А., Маркосян К.А., Муранов К.О., Островский М.А., Курганов Б.И.. Кинетика тепловой агрегации -кристаллина хрусталика глаза быка в присутствии -кристаллина. // Материалы Международного симпозиума «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки», Тюмень, 2005, с. 29-32.

3. Ханова Е.А., Тимофеева А.K., Самойлов А.М., Маркосян К.А., Муранов К.О., Островский М.А., Левицкий Д.И., Курганов Б.И.. Кинетика тепловой агрегации дрожжевой алкогольдегидрогеназы в присутствии -кристаллина. // Материалы Международного симпозиума «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки», Тюмень, 2005, с. 80-82.

4. Ханова Е.А., Тимофеева А.K., Самойлов А.М. Влияние -кристаллина на кинетику тепловой агрегации -кристаллина. // XII международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов – 2005», Москва, 2005. Тезисы докладов, с.239-240.

5. Khanova H.A., Markossian K.A., Kurganov B.I., Samoilov A.M, Kleimenov S.Yu., Levitsky D.I., Yudin I.K., Timofeeva A.C., Muranov K.O and Ostrovsky M.A. Mechanism of chaperone-like activity. Suppression of thermal aggregation of L-crystallin by crystallin. // Biochemistry, 2005, v. 44, p. 15480-15487.

6. Markossian K.A., Kurganov B.I., Levitsky D.I.,. Khanova H.A, Chebotareva N.A., Samoilov A.M., Eronina T.B., Fedurkina N.V., Mitskevich L.G., Merem’yanin A.V., Kleymenov S.Yu., Makeeva, V.F., Muronetz V.I., Naletova I.N., Shalova I.N., Asryants R.A., Schmalhausen E.V., Saso L., Panyukov Yu.V., Dobrov E.N., Yudin I.K., Timofeeva A.C., Muranov K.O. and Ostrovsky M.A. Mechanism of chaperone-like activity.// Protein Folding: New Research. Nova Science Publishers, Inc., New York, USA (Obalinsky T.R., Ed.), 2006, p. 89-171.

7. Муранов К.О., Дижевская А.К., Болдырев А.А., Карпова О.Е., Шеремет Н.Л., Полунин Г.С., Аветисов С.Э., Островский М.А. Поиск шаперон-подобных антикатарактальных препаратов-антиагрегантов кристаллинов хрусталика глаза.

Сообщение первое. Шаперон-подобное действие дипептида N-ацетилкарнозина:

исследование in vitro на модели УФ-индуцированной агрегации L-кристаллина. // Вестник офтальмологии, 2008, т.124(2), с.3-8. Аветисов С.Э., Полунин Г.С., Шеремет Н.Л., Макаров И.А., Федоров А.А., Карпова О.Е., Муранов К.О., Дижевская А.К., Соустов Л.В., Челноков Е.В., Битюрин Н.М., Сапогова Н.В., Немов В.В., Болдырев А.А., Островский М.А. Поиск шаперонподобных антикатарактальных препаратов-антиагрегантов кристаллинов хрусталика глаза. Сообщение четвёртое. Изучение воздействия смеси ди- и тетра-пептидов на «пролонгированной» модели ультрафиолет-индуцированной катаракты у крыс. // Вестник офтальмологии, 2008, т.124(2), с.12-16.

9. Дижевская А.К., Полянский Н.Б., Муранов К.О., Болдырев А.А., Островский М.А.

Молекулярный механизм действия гистидин-содержащих пептидов на агрегацию Lкристаллина. // Молекулярная медицина, 2009, (в печати).

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:

ГСД – гистидин-содержащие дипептиды ДЛС – динамическое лазерное светорассеяние ДСН – додецилсульфат натрия КЦП – короткоцепочечные пептиды ПААГ– полиакриламидный гель УФ – ультрафиолетовый свет УФО – ультрафиолетовое облучение NAC – N-ацетилкарнозин DLCA – diffusion-limited cluster-cluster aggregation, диффузионно-ограниченная кластерная агрегация FW – молекулярная масса PBS – фосфатный буфер RLCA – reaction-limited cluster-cluster aggregation, реакционно-ограниченная кластерная агрегация

Pages:     | 1 | 2 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»