WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

U/ml * * норма гепатит А гепатит В гепатит С РМЖ Рис. 1. Сывороточное содержание sCD50 антигена при иммуноопосредованных заболеваниях * - достоверные отличия в сравнении с нормой (р<0,05) При остром гепатите В была выявлена тенденция к увеличению сывороточного уровня растворимой молекулы CD50 (р>0,05). Сывороточное содержание sCD50 антигена в крови больных острым гепатитом С также имело тенденцию к повышению (р>0,05) (рис. 1). Сходные результаты были получены ранее другими авторами (Птицына и др., 2000; Евсегнеева и др., 2005).

У больных c первично выявленным раком молочной железы II-III стадии содержание sCD50 антигена было повышено в среднем в 4 раза (р<0,05) (рис.

1). Увеличение сывороточного содержания sCD50 антигена при раке молочной железы было также отмечено А.В. Алясовой и др. (2004), что авторы связывают с повышенным шеддингом мембранной формы CD50 антигена с мононуклеарных клеток периферической крови.

В связи с тем, что в доступной литературе мы не обнаружили информации о сывороточном содержании sCD50 антигена при ожогах, нами проведено детальное исследование уровня этого антигена на разных стадиях ожоговой болезни. При ожогах площадью менее 30% поверхности тела в течение первой недели после травмы наблюдалось повышенное содержание растворимой формы молекулы CD50 (р<0,05) (рис. 2). На второй неделе со дня получения термической травмы регистрировалось снижение сывороточного уровня sCDантигена до нормы, которое сохранялось и в дальнейшем.

U/ml * * * 150 * сут норма 1-3 4-7 8-14 15-21 более до 30% свыше 30% Рис. 2. Сывороточное содержание sCD50 антигена при ожогах * - достоверные отличия в сравнении с нормой (р<0,05) При ожогах площадью свыше 30% поверхности тела в первые трое суток после получения ожога изменений в уровне растворимого CD50 антигена по сравнению с нормой не отмечалось. С 4 по 14 сутки с момента травмы содержание sCD50 антигена повышалось по сравнению с нормой (р<0,05). В последующие периоды (от 15 суток и более) происходила нормализация сывороточного содержания sCD50 антигена.

При ожогах с площадью поражения менее 30% поверхности тела на фоне повышения уровня sCD50 антигена происходило снижение относительного количества CD50+ клеток. Такая же картина наблюдалась при ожогах с поражением кожных покровов более 30%, однако снижение относительного количества CD50+ мононуклеарных клеток происходило только со второй недели с момента травмы. Повышение уровня растворимых молекул адгезии в крови ожоговых больных вероятно снижает способность активированных CD50+ клеток проникать в очаг воспаления, а также приводит к нарушению клеточных контактов наивных Т-лимфоцитов с антигенпрезентирующими клетками.

На наш взгляд снижение относительного количества CD50+ лимфоцитов и повышение сывороточного уровня sCD50 антигена может являться возможным фактором формирования послеожоговых иммунодефицитных состояний.

Последние, по данным M.Ju. Lebedev et al. (2001) проявляются стойким сокращением популяции CD4+-клеток, выполняющих функцию Т-хелперов.

Растворимые формы CD54 антигена могут существовать как в виде отдельных белковых молекул, так и в виде димерных и олигомерных форм и нести важную информацию о состоянии системы иммунитета (Егорова и др., 2004; Jun et al., 2001). При вирусном гепатите А наблюдалась выраженная тенденция к повышению сывороточного уровня суммарного sCD54 антигена (р>0,05). Сывороточное содержание олигомерной фракции sCD54 антигена увеличивалось в 2,9 раза (р<0,05) (рис. 3). Более выраженное увеличение содержания олигомерного sCD54 антигена в сравнении с изменениями уровня суммарного sCD54 антигена, с нашей точки зрения, отражает напряженность иммунологических реакций, направленных на элиминацию вируса гепатита А.

При формировании иммунного синапса, образующегося при непосредственном участии CD54 антигена, происходит кластеризация мембранных белков, отвечающих за взаимодействие иммунокомпетентных клеток (Bromley et al., 2001). Последующее расхождение клеток может сопровождаться шеддингом кластеризованных белков и выходом их в межклеточное пространство.

U/ml * * 300 * * * норма гепатит А гепатит В гепатит С РМЖ ожоговая травма суммарный CD54 олигомерный CDРис. 3. Сывороточное содержание растворимых фракций (суммарного и олигомерного) CD54 антигена при разных патологиях * - достоверные отличия в сравнении с нормой (р<0,05) При вирусном гепатите В сывороточный уровень суммарной фракции sCD54 антигена в 3 раза превышал нормальные значения (р<0,05). Содержание олигомерного sCD54 антигена не менялось (рис. 3). Повышение сывороточного уровня суммарной фракции растворимых молекул CD54 антигена, зарегистрированное ранее другими авторами, принято связывать с возникающей вследствие вирусного поражения печени экспрессией этих молекул на гепатоцитах (Zhang et al., 2000).

У больных вирусным гепатитом С содержание суммарного sCD54 антигена достоверно не изменялось, однако наблюдалась выраженная тенденция к повышению. Повышение сывороточного содержания sCD54 антигена при гепатите С отмечено в работах G. Zohrens et al. (1993), S.S. Yang et al. (1996).

Уровень олигомерного sCD54 антигена увеличивался в 2 раза выше нормальных показателей (р<0,05) (рис. 3). У больных гепатитом С, не имеющих в крови антител против неструктурных белков NS3 или NS4, выявлено повышение сывороточного уровня sCD54 антигена по сравнению с группой здоровых доноров.

Содержание суммарного sCD54 антигена в сыворотке больных раком молочной железы было в 1,4 раза меньше нормы (р<0,05). Уровень олигомерного sCD54 антигена не изменялся (рис. 3).

При ожоговой травме сывороточный уровень суммарной фракции sCDантигена имел тенденцию к повышению (р>0,05), что соответствует литературным данным (Ahmed et al., 1998; Kuang et al., 2002). Содержание олигомерного CD54 антигена определено при ожоговой травме впервые. При ожогах площадью более 30% поверхности тела уровень олигомерного sCDантигена увеличен в 2,1 раза (р<0,05) (рис. 3). Полученные данные свидетельствуют, что при тяжелой ожоговой травме в суммарной фракции sCD54 антигена возрастает доля олигомерных молекул CD54.

Если для белков группы ICAM (CD50, CD54) продемонстрировано наличие растворимых форм, то для их партнеров по межклеточным взаимодействиям - 2-интегринов - на момент начала данного исследования подобной информации в доступной нам литературе не найдено. Мы предположили, что 2-интегрины также могут переходить в растворимую форму. С целью проверки высказанной гипотезы был разработан иммуноферментный метод определения в биологических жидкостях sCD18 антигена (субъединицы, общей для всех 2интегринов), основанный на использовании моноклональных антител к CDантигену. Его специфичность подтверждена в реакции нейтрализации.

Разработанный иммуноферментный метод был апробирован для определения содержания sCD18 антигена в крови здоровых доноров.

Сывороточный уровень sCD18 антигена у доноров составил в среднем 212,3±32,0 U/ml. Совместно с Н.И. Егоровой определен уровень растворимого CD18 антигена в сыворотке крови больных урогенитальным хламидиозом.

Показано, что при урогенитальном хламидиозе сывороточная концентрация sCD18 антигена повышалась в 2,0 раза.

Сывороточный уровень sCD18 антигена у больных гепатитом А в 10 раз превышал нормальные значения (р<0,05) (рис. 4). В отличие от гепатита А, при вирусном гепатите В значительного изменения в содержании sCD18 антигена не происходило. Следует отметить, что при этом сывороточный уровень sCDантигена увеличивался в несколько раз. Изменение сывороточной концентрации sCD54 антигена при нормальном содержании sCD18 антигена свидетельствует о нарушении баланса в содержании растворимых форм данных молекул адгезии при вирусном гепатите В. Растворимые антигены группы ICAM могут блокировать мембранные CD18-содержащие интегрины и тем самым ограничивать аутоиммунные реакции, развивающиеся при гепатите В.

U/ml * * норма гепатит А гепатит В гепатит С РМЖ Рис. 4. Сывороточное содержание sCD18 антигена при разных патологиях * - достоверные отличия в сравнении с нормой (р<0,05) В сыворотке крови больных вирусным гепатитом С статистически значимых изменений в содержании sCD18 антигена, как и sCD54 антигена не обнаружено. Тем не менее, выявлены различия между уровнем sCD18 антигена у больных, имеющих и не имеющих антител к NS3 белку вируса гепатита С. У больных, положительных по антителам против NS3 антигена, сывороточный уровень sCD18 антигена был в 1,3 раза ниже, чем у больных, не имеющих этих антител (р<0,05).

При раке молочной железы сывороточный уровень sCD18 антигена был в 1,8 раза меньше по сравнению с таковым у здоровых доноров (р<0,05), что, возможно, связано с формированием у онкологических больных иммунологической недостаточности (рис. 4).

Сывороточной уровень sCD18 антигена при ожоговой болезни менялся в зависимости от времени, прошедшего с момента травмы. При ожогах с площадью поражения поверхности тела до 30% отмечено трехкратное повышение сывороточного уровня sCD18 антигена в период с 4 по 7 сутки после травмы (р<0,05). Далее наблюдалось падение его сывороточной концентрации по сравнению с нормой и предшествующим периодом болезни U/ml * * * * * * сут норма 1-3 4-7 8-14 15-21 более до 30% свыше 30% (р<0,05) (рис. 5).

Рис. 5. Сывороточное содержание sCD18 антигена при ожогах * - достоверные отличия в сравнении с нормой (р<0,05) При ожогах площадью свыше 30% поверхности кожи уже в первые сутки после травмы регистрировалось более чем двукратное повышение сывороточного уровня sCD18 антигена по сравнению с нормальными показателями (р<0,05). Последующие периоды ожоговой болезни характеризовались нормальным содержанием растворимой адгезивной молекулы CD18. И лишь в период реконвалесценции происходило снижение сывороточного уровня sCD18 антигена в 4 раза по сравнению со здоровыми донорами (р<0,05) (рис. 5).

Сравнение относительного количества CD18+ мононуклеарных клеток и сывороточного уровня sCD18 антигена при ожогах площадью свыше 30% поверхности тела позволило выявить прямо противоположную динамику этих показателей. Можно предположить, что именно мононуклеарные клетки являются основным источником sCD18 антигена в крови у тяжелообоженных больных. При ожогах площадью менее 30% подобных изменений не обнаружено. Вероятно, в формировании пула sCD18 антигена участвуют не только лимфоциты, но и макрофагальные клетки. Показано, кроме того, что при ожоговой травме происходит активация нейтрофилов, которая проявляется, в том числе, повышением их адгезивной способности (Fang et al., 1998).

Таким образом, получены данные о наличии растворимой формы CDантигена в сыворотке крови здоровых доноров и показаны изменения его уровня при заболеваниях различного генеза. Одновременное определение растворимых форм молекул адгезии, являющихся партнерами друг друга, - белков группы ICAM и CD18 антигена - позволило глубже оценить адгезивную составляющую иммунологического статуса больных с данными патологиями.

С целью оценки возможности наличия в крови человека растворимых комплексов белков адгезии, участвующих в формировании иммунного синапса, - ассоциатов антигенов CD18 и CD54, а также антигенов CD18 и CD50 были разработаны соответствующие иммуноферментные методы. Для определения ассоциатов CD18-CD54 в качестве первых антител, сорбируемых на твердую фазу, использовали МКА ИКО-108 против CD18 антигена; в качестве иммуноферментного конъюгата применяли МКА ИКО-184 против CDантигена, связанные с пероксидазой хрена. Для детекции ассоциата CD18-CDв качестве первых антител, сорбируемых на твердую фазу, вносили МКА ИКО60 против CD50 антигена; в качестве иммуноферментного конъюгата использовали МКА ИКО-108 против CD18 антигена. Специфичность разработанных методов была подтверждена в реакции нейтрализации с использованием МКА против тестированного антигена и МКА ИКО-160 против CD95 антигена.

С помощью разработанных методов тестирования растворимых ассоциатов молекул адгезии удалось выявить наличие растворимых комплексов белков группы ICAM и CD18 антигена в сыворотке крови здоровых доноров. Мы полагаем, что в состав этих комплексов входят не одиночные -цепи CD18содержащих интегринов, а гетеродимеры полностью, например, LFA-1, существование которого было обнаружено в 2006 году (Evans et al., 2006). В соответствии с нашими данными гетеродимер LFA-1 присутствует в крови не только в свободной растворимой форме, но и может находиться в составе ассоциатов с белками ICAM.

Разработанные иммуноферментные методы позволили также определить относительное содержание растворимых комплексов антигена sCD18 с sCDантигеном или sСD50 антигеном при заболеваниях различной этиологии.

Проведен сравнительный анализ относительного содержания обнаруженных белковых комплексов с уровнями отдельных растворимых молекул, участвующих в их формировании.

Сывороточный уровень растворимых комплексов молекул адгезии в крови больных острым гепатитом А не изменялся по сравнению с нормой (рис. 6).

При этом наблюдалось увеличение сывороточных уровней суммарных фракций молекул адгезии (рис. 1, 3, 4), что, вероятно, отражает активацию внеклеточного протеолиза мембранных белков при гепатите А. Однако, подобная интенсификация протеолитических примембранных процессов не приводит к повышению концентрации ассоциатов, построенных из растворимых белков адгезии. То есть увеличение содержания отдельных растворимых белков адгезии происходит за счет свободных, не связанных с лигандами молекул, способных взаимодействовать с мембранными партнерами и оказывать U/ml 400 * * норма гепатит А гепатит В гепатит С РМЖ ожоговая травма CD18-CD54 CD18-CDиммуномодулирующий эффект.

Рис. 6. Сывороточное содержание растворимых комплексов CD18-CD54 и CD18-CD50 при различных патологиях * - достоверные отличия в сравнении с нормой (р<0,05) При гепатите В наблюдалась тенденция к увеличению концентрации растворимых ассоциатов с участием растворимых молекул CD18 и CD(р<0,05). Сывороточное содержание растворимых форм молекул адгезии, участвующих в формировании этих комплексов, было неизменным. Выявлена взаимосвязь между сывороточными уровнями растворимых комплексов CD18CD54 и олигомерного sCD54 антигена при остром гепатите В (r=0,7; р<0,05), при этом корреляций с суммарной фракцией sCD54 антигена обнаружено не было. Можно предположить, что при данном заболевании в составе растворимых ассоциатов CD18-CD54 находятся не одиночные молекулы sCDантигена, а олигомерные конгломераты.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»