WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Публикации По материалам диссертации опубликовано 9 работ, из них 2 статьи – в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации Работа изложена на 156 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 215 источников, из них 187 работ зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 37 рисунками и 24 таблицами, дополнена приложением (6 стр.).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы исследования В работе использованы образцы ДНК 72 больных СЦА из 55 неродственных семей и 53 их фенотипически здоровых родственника, проживающих в РБ.

Сведения о больных были получены из базы данных Медико-генетической консультации РБ и из материалов ежегодных отчетов неврологов всех городов и районов республики, собираемых на кафедре неврологии с курсами нейрохирургии и медицинской генетики Башкирского государственного медицинского университета (БГМУ). Полученные таким образом сведения дополнительно уточнялись на момент исследования как путем целенаправленного запроса в центральные городские и районные больницы, так и в процессе экспедиционных выездов 2007-2009гг., проводимых нами совместно с сотрудниками кафедры неврологии БГМУ с целью дополнительного клинического осмотра больных и членов их семей, и забора крови для ДНК-анализа.

Популяционная выборка здоровых индивидов, у которых проводилось исследование полиморфизма числа тандемных повторов в генах AD SCAs, представлены коренными жителями Волго-Уральского региона: башкирами (чел.) из Абзелиловского (123 чел.), Бурзянского (100 чел.), Стерлибашевского (чел.) районов РБ, татарами (170 чел.) из Буинского района Республики Татарстан, марийцами (81 чел.) из Республики Марий Эл (Йошкор-Ола), мордвой мокшей (чел.) из Старошайгинского района и эрзя (46 чел.) из Атяшевского района Республики Мордовия, удмуртами (82 чел.) из Шарканского района Республики Удмуртия, коми (108 чел.) из Коми-пермяцкого автономного округа (с. Юсьма, с.

Ко-са), чувашами (138 чел.) из Чебоксарского, Марпосадского и Ибресинского районов Республики Чувашия, русскими (90 чел.) из Республики Башкортостан.

Методы исследования Диагноз ставили на основании жалоб больных, клинико-неврологического исследования и данных инструментальных методов исследования (МР-томография головного мозга). Формулировка диагноза проводилась в соответствии с требованиями «Международной классификации болезней» 10-го пересмотра (МКБ-10) (1994г.). Наследственные атаксии относятся к VI классу МКБ-10:

болезни нервной системы (системные атрофии, поражающие преимущественно центральную нервную систему), рубрика G11.

Для уточнения диагноза использовались нейровизуализационные и молекулярно-генетические методы. Нейровизуализационные методы исследования были проведены у 63 пациентов и включали магнитно-резонансную томографию (МРТ) головного мозга.

ДНК была выделена из периферической крови методом фенольнохлороформной экстракции [Mathew et al.,1984]. Анализ числа CAG -повторов в генах ATXN1(SCA1), ATXN2(SCA2), ATXN3(SCA3), CACNL1A4(SCA6), PPP2R2B(SCA12), TBP(SCA17) и DRPLA осуществляли методом секвенирования и полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР). Для идентификации наличия CAT-вставок в последовательности (CAG)n-повторов гена SCA1 использовали метод полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ). Результаты ПЦР и ПДРФ оценивали при проведении электрофореза в 7% полиакриламидном геле.

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета программ: MS Office Excel 2003 [Microsoft], GenePop ver.

3.3 [Rousset F., 2001], Biostat [Гланц., 1999]. Определение критериев 2, Стьюдента (t), частот аллелей и генотипов, оценку соответствия характера распределения частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга, расчет индексов наблюдаемой и ожидаемой гетерозиготности, проводили по стандартным формулам.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Распространенность СЦА в Республике Башкортостан.

В РБ с населением 4 104 336 человека (перепись 2002г.) в настоящее время состоят на учете 105 больных из 83 семей со спиноцеребеллярными атаксиями.

Исходя из этого, распространенность СЦА в РБ в среднем составила 2,56 на тыс. населения. В процессе проведения исследования у одного пациента диагноз был снят и установлен диагноз аномалия Арнольда-Киари (с помощью МРтомографии, которая ранее не проводилась). Пациент был исключен из выборки.

СЦА на территории РБ распространены неравномерно (рис.1). Заболевание зарегистрировано в 25 из 54 административных районов и в 15 из 21 города.

Наблюдается широкий разброс значений распространенности в районах РБ – от 1,3 до 22,1 на 100 000 населения, большинство показателей находится в пределах 2,1 – 7,4:100 тыс. На разброс показателей распространенности заболевания могут влиять значительные различия численности населения отдельных районов («эффект малых выборок»), а также было установлено, что в отдельных районах с повышенной распространенностью заболевания проживают больные с АД СЦА (по несколько больных в семьях).

Распределение больных по половому составу выглядит следующим образом:

мужчин - 53 (50,5%), женщин – 52 (49,5%). При численности мужского и женского населения в РБ, соответственно 1923,2 тыс. (46,9%) и 2181,1 тыс. (53,1%) (перепись 2002г.), различие в распределении по полу не имеет статистической значимости (р > 0,5).

По этническому составу 105 больных СЦА, проживающих в РБ, распределяются следующим образом: татар - 41 (39,0%), русских - 33 (31,4 %), башкир - 24 (22,9%), чувашей - 3 (2,86%), удмуртов - 1 (0,95%), белорусов - (0,95%). Кроме того, 2 (1,9%) больных СЦА являлись метисами от межнациональных браков башкир и татар (рис.2).

Поскольку, как среди больных, так и в структуре населения РБ преобладают русские, башкиры и татары, мы провели статистический анализ случайности распределения больных по этнической принадлежности для данных трех этнических групп. В результате этого анализа выявлено статистически значимое СЦАСЦАРисунок 1. Распространенность СЦА на территории Республики Башкортостан.

беларусы;

удмурты;

0,95% 0,95% метисы;

чуваши;

1,90% 2,86% татары;

39,00% башкиры;

22,90% русские;

31,40% Рисунок 2. Этнический состав больных СЦА в Республике Башкортостан.

различие в распределении больных по этническим группам по сравнению с общей популяцией РБ. Наиболее часто в РБ спиноцеребеллярные атаксии встречаются среди татар (2=6,41; df=1; p=0,01), реже среди башкир (2=1,13; df=1; p=0,3) и русских (2=0,39; df=1; p=0,5).

Клинико-генеалогический анализ позволил установить в 30,1% семьях (случаев) аутосомно-доминантный тип наследования, в 12,0% (10 случаев) - аутосомно-рецессивный тип наследования, в 57,8% (48 случаев) – спорадический.

Таким образом, распространенность АД СЦА в РБ в среднем составила 0,на 100000 населения, а доля семей с АД СЦА из числа семей с СЦА - 24,1%, что несколько ниже, чем в ряде других обследованных ранее регионах России [Иллариошкин С.Н. и др., 2006].

2. Клинико-генетическое исследование пациентов со спиноцеребеллярными атаксиями из Республики Башкортостан.

На основании молекулярно-генетического исследования в 3-х неродственных семьях был достоверно установлен тип СЦА.

СЦА1 выявлена в одной семье татарской этнической принадлежности, проживающей в Салаватском районе (рис.1), у 3-х больных сибсов (рис.3). При анамнестическом обследовании ближайших родственников подобное заболевание было выявлено у матери пробанда.

У всех обследованных больных была обнаружена экспансия (CAG)nповторов гена ATXN1(SCA1), которая была подтверждена с помощью ПДРФанализа (отсутствие сайта рестрикции для эндонуклеазы SfaN1). Во всех случаях мутантный аллель гена содержал 45 копий CAG - повторов без (CAT)n – вставки (рис.4).

I (1929-1993) (1929-2007) 1 2! II 1 2! 3! 4 5! 6! 7! 8! 9 10 11 III 1 2 3 4 5 6! 7! 8! 9 10 11 12 IV 1 Рисунок 3. Родословная обследованной семьи Х. с СЦА1.

1 2 3 Рисунок 4. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации локуса (CAG)n гена (ATXN1)SCA1 с указанием генотипов (1 - контрольный просеквенированный образец ДНК с экспансией CAG – повторов, 2, 4 – контрольные образцы ДНК с нормальным числом CAG-повторов, 3 – образец ДНК пробанда из семьи Х. с СЦА1 с 45 копиями CAG – повторов).

Клиническая картина при СЦА1 в данной семье складывалась из клиники динамической и статико-локомоторной атаксии, спастического тетрапареза, более выраженного в ногах, вестибулярной дисфункции (характеризующейся в данном случае нистагмом) и расстройств речи по типу мозжечковой дизартрии. Глубокая чувствительность снижена у всех больных на нижних конечностях. Изменения со стороны глубоких рефлексов и тонуса мышц указывают на вовлечение задних канатиков спинного мозга и пирамидных путей, что типично для AД СЦА.

Характерно, что у всех больных заболевание началось с 4-5-летнего возраста со снижения слуха, после переохлаждения. Затем через 3-5 лет присоединилась клиника атаксии. При клиническом и анамнестическом обследовании ближайших родственников других больных со снижением слуха выявлено не было. Тугоухость при СЦА1 также ранее не была описана в литературе.

СЦА1 характеризуется быстрым прогрессированием заболевания (продолжительность болезни не превышает 10-20 лет), что не характерно для описываемой семьи: обследованные нами больные только через 33-37 лет от момента манифестации заболевания не были способны к самообслуживанию из-за выраженных координаторных нарушений, нуждались в постороннем уходе и были признаны инвалидами II группы. Медленное прогрессирование заболевания в этой семье и видимая стабилизация состояния в течение длительного времени, вероятно, связана с невысокой степенью экспансии. На МРТ головного мозга пробанда из семьи Х. с СЦА1 выявляется атрофия полушарий и червя мозжечка, что согласуется с литературными данными.

СЦА6 была выявлена в двух неродственных семьях башкирской этнической принадлежности, проживающих в Баймакском районе (рис.1). По клиникоанамнестическим данным, в одной семье (А) заболевание носит спорадический характер (единственный случай в семье), при клиническом обследовании ближайших родственников других больных выявлено не было; в другой семье (Б) заболевание прослеживается в 4-х поколениях у 8 родственников (рис.5).

У всех больных из обеих семей, а также у одного из трех членов семьи Б. без клинических признаков заболевания выявлена экспансия (CAG)n-повторов гена CACNL1A4(SCA6). Во всех случаях мутантный аллель гена содержал 25 копий триплетов, число которых не изменялось при передаче из поколения в поколение (рис.6). О достаточно высокой стабильности (CAG)n-повторов в этом гене свидетельствуют и данные других авторов [Иллариошкин С.Н., Руденская, 2006].

I 1 II 1 2 3 III 1! 2 3! 4 5! 6 7! 8 IV 1 2 3! 4 5 6 7 8 9 10 11! 12 13! V 1 2 3 4 Рисунок 5. Родословная обследованной семьи Б. с СЦА6.

Экспансия Нормальные аллели 1 2 3 4 5 6 7 Рисунок 6. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации локуса (CAG)n гена (CACNL1A4)SCA6 с указанием генотипов (1 – контроль; 2 (III-1), (III-3), 6 (IV-3), 7 (III-7) – экспансия; 3 (IV-11) – доклинический носитель; 4 (III-5), 8 (IV-13) – здоровые члены семьи).

Клинические проявления СЦА6 в данной семье складывались из нарастающей мозжечковой статико-локомоторной атаксии с расстройством координации движений в руках, мозжечковой дизартрии и вестибулярной дисфункции в виде приступов системного головокружения и нистагма. Повторные приступы головокружения являются достоверным маркером СЦА6, что позволило предположить данный тип СЦА в обследованной семье. Чувствительных нарушений нет. Изменения со стороны глубоких рефлексов указывают на вовлечение пирамидного тракта, что типично для AД СЦА.

У здорового носителя мутантного гена (29 лет), по-видимому, еще не достигшего возраста манифестации, при клиническом осмотре отсутствовали неврологические проявления заболевания.

СЦА6, в отличие от других типов AД СЦА, характеризуется медленным прогрессированием заболевания, что справедливо для описываемой семьи Б.:

обследованные нами больные только через 20-30 лет от момента манифестации заболевания не были способны к самообслуживанию из-за выраженных координаторных нарушений, нуждались в постороннем уходе и были признаны инвалидами III группы. На МРТ головного мозга пробанда выявляются признаки умеренной атрофии червя и полушарий мозжечка, что согласуется с литературными данными.

Таким образом, в результате молекулярно-генетического исследования, включающего анализ 7 генов у 72 больных и членов их семей (55 неродственных семей) с СЦА из РБ, выявлено только 2 типа АД СЦА в трех неродственных семьях, в которых было возможным сопоставление генетических и клинических особенностей заболевания.

Молекулярно-генетический анализ остальных больных с СЦА выявил нормальные значения числа тринуклеотидных повторов в исследованных генах, что позволило сделать заключение об отсутствии форм СЦА2, СЦА3, СЦА12, СЦА17 и ДРПЛА в структуре АД СЦА в Республике Башкортостан.

Сравнительный анализ клинической картины у других больных из РБ был проведен в зависимости от установленного типа наследования заболевания.

Возраст появления первых клинических признаков значительно варьирует у больных спиноцеребеллярной атаксией. В обследованной нами выборке больных этот показатель составлял от 1 года до 52 лет. При сравнении возраста неврологической манифестации у больных с аутосомно-доминантным, аутосомнорецессивным и спорадическим типом наследования не выявлено достоверных отличий (р>0,05). При всех типах наследования, большинство больных имели длительность заболевания до 20 лет: 56,8%, 42,9% и 64,3% при АД СЦА, АР СЦА и при спорадическом типе наследования СЦА соответственно. В целом, по продолжительности заболевания при всех типах наследования между мужчинами и женщинами также нет достоверных отличий (р>0,05).

Среди 72 обследованных пациентов больше половины (61,1%) имело иинвалидность. При сравнении среднего возраста инвалидизации у больных в трех вышеописанных группах не выявлено достоверных отличий (р>0,05).

При сравнении распределения больных СЦА по группам инвалидности были выявлены достоверные отличия по распространенности инвалидов I группы, которые были представлены только среди пациентов с СЦА со спорадическим типом наследования (р<0,05) (рис.7).

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»