WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Бактериологическое исследование и секрета, и «пузырной» порции мочи включало в себя получение чистой культуры возбудителя с последующей идентификацией микробного вида. В условиях микробиологической лаборатории производили посев собранного в тупферы материала на следующие питательные среды: кровяной агар – для выявления стафилококков и стрептококков, сывороточный бульон – для стрептококков, среду Эндо – для энтеробактерий, агар Сабуро – для микроскопических грибов, тиогликолевую среду – для бактероидов. «Пузырную» порцию мочи разводили стерильным физиологическим раствором 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000 и 1:1000000.

Затем делали посев 0,1мл цельной мочи и каждого разведения на кровяной агар, среду Эндо, среду Сабуро, тиогликолевую среду. После инкубирования в термостате подсчитывали количество колоний.

Доказательством наличия инфекции считали присутствие микроорганизмов при разведении не менее 1:100000.

Морфологические исследования. Морфологию колоний изучали невооруженным глазом в отраженном свете, а также под микроскопом при малом увеличении и косо проходящем свете с помощью лупы МБС-1.

Подвижность культур определяли путем посева 18-ти часовой культуры уколом в полужидкий (0,3%) агар, а также методом «висячая капля» и «раздавленная капля».

Ферментативные свойства штаммов стафилококков определяли с применением STAPHYtest 16; стрептококков – STREPTOtest 16;

энтеробактерий – ENTEROtest 16, производства (PLIVA-Lachema, Чехословакия). Исследования каждой культуры проводили следуя инструкции к постановке.

Определение функциональной активности фагоцитов проводили путем измерения люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛ) с использованием плашечного люминометра LUCY I (Биохиммак) и пробирочного люминометра LKB 125 (Швеция).

Для постановки реакции используют лейкоцитарную суспензию. Для получения суспензии лейкоцитов 2 мл гепаринизированной крови смешивают с 1 мл 3% раствора желатина в фосфатно-солевом буфере (ФСБ). После спонтанной седиментации эритроцитов при 37°С в течение 15 минут осторожно отбирают надосадочную жидкость. Для двукратной отмывки лейкоцитов от желатины и плазмы применяют ФСБ, рН 7,4. Режим центрифугирования - 200g в течение 10 мин. Концентрацию клеток доводят ФСБ до 2 млн в мл по сегментоядерным лейкоцитам. В специальные полистереновые пробирки добавляем 200 мкл ФСБ, 100 мкл люминола (“Sigma”, США) в конечной концентрации 2,5х10-5 М и 100 мкл клеток (нейтрофилов), реакция проводится в дублях. При помощи хемилюминометра измеряют спонтанную хемилюминесценцию в течение 3040 минут. Затем в одну из проб добавляют 10 мкл опсонизированного зимозана (Sigma, США) (0,2 мг/мл) и измеряют стимулированную хемилюминесценцию в течение 20 минут. Учитывают следующие результаты:

1. Пик спонтанной хемилюминесценции в mV/мин 2. Пик стимулированной хемилюминесценции в mV/мин Индекс стимуляции - относительная величина, характеризующая разность между максимальными значениями стимулированной и спонтанной ХЛ.

Иммунологические методы исследования.

1. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Данный метод использовали для диагностики урогенитальных инфекций таких как: Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis, Ureaplasma urealyticum, вирус простого герпеса (ВПГ) I и II типа. Исследование проводили, применяя комплекты реагентов для ПЦРамплификации ДНК фирмы «ДНК-технология» для Chlamydia trachomatis – «хлами-ген», Mycoplasma hominis – «Плазмоген-Мх», Ureaplasma urealyticum – «Т-960», ВПГ I и II типа – «ВПГ-ген».

2. Методика непрямой иммунофлуоресценции для определения фенотипа лимфоцитов с помощью моноклональных антител.

Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови включало определение основных субпопуляций лимфоцитов (CD3; CD4; CD8;

соотношение CD4/CD8 - иммунорегуляторный индекс, CD16, CD19, HLA-DR+) с использованием метода иммунофлуоресценции.

3. Методика определения функциональной активности нейтрофилов при помощи НСТ-теста.

Функциональную активность нейтрофилов оценивали микроскопически по количеству (в %) диформазан-положительных нейтрофилов в спонтанном и стимулированном зимозаном тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) (Виксман М.Е., Маянский А.Н., 1979).

Методика терапии.

Пациенты получали комплексное лечение, включающее НПВП, имунофан суппозитории 100 мкг (один раз в сутки ежедневно на ночь ректально по 1 суппозиторию на ночь № 10, далее по 1 суппозиторию ректально на ночь через день № 5.). Кроме того, больным проводили системную антибактериальную терапию с учетом чувствительности биотопа и эмпирически, в соответствии с приложением к Приказу Минздравсоцразвития РФ от 22 ноября 2004г. №245 «Об утверждении стандарта медицинской помощи больным простатитом».

Оценку эффективности проведенной терапии осуществляли через недели после окончания антибиотикотерапии.

Методы статистической обработки.

Для распределения больных на группы проводили простую рандомизацию, основанную на прямом методе с применением таблицы случайных чисел, где они сгруппированы таким образом, что вероятность для каждого из однозначных чисел оказаться в любом месте таблицы была одинакова (равномерное распределение).

Статистическая обработка полученных данных осуществлялась по общепринятым методикам с помощью пакетов прикладных программ Statistica 6.0, Microsoft Exel 7.0 на ПК PC Pentium 4 – 3000 МГц ММХ. При анализе результатов определяли среднее арифметическая (М), ошибка среднего (m), проводили оценку значимости различий двух средних арифметических по t – критерию Стьюдента, высчитывали коэффициент линейной корреляции и его достоверность (Боровиков В.П., Боровиков И.П., 1998г.). Различия сравниваемых показателей принимали за достоверные при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Клиническая характеристика больных хроническими неспецифическими бактериальными простатитами.

По результатам наших микроскопических исследований из всех обратившихся с соответствующими жалобами было отобрано 100 человек, у которых при микроскопии мазка секрета простаты определяли не менее лейкоцитов в поле зрения. При этом также было выполнено микроскопическое исследование секрета простаты 50 пациентов, проходивших диспансерное обследование и не предъявлявших каких-либо специфических жалоб. Возраст больных хроническими простатитами варьировал от 20 до 50 лет.

Распределение пациентов по возрасту представлено в таблице 1.

Таблица 1. Повозрастное распределение пациентов.

группа 20-30 лет 30-40 лет 40-50 лет средний возраст n = 100 10 36 54 39,4г.

n = 50 3 12 35 41,1г.

В результате обследования 100 пациентов, госпитализированных с предварительным диагнозом простатит, обнаружили, что 52% обследуемых беспокоило ухудшение напора струи мочи, 60% - учащенное мочеиспускание, 24% - рези или дискомфорт при мочеиспускании, 16% - боли в мошонке и промежности, 8% - эректильная дисфункция. Также из данных анамнеза выяснили, что у большинства пациентов (96%) заболевание начиналось постепенно, и только у 4% появилось после перенесенного острого воспаления.

Длительность болезни составляла от полугода до 10 лет. Все обследуемые больные имели факторы, предрасполагающие к развитию простатита, такие как нерегулярная половая жизнь (68% случаев), частые переохлаждения (60% случаев), «сидячая» работа (40% случаев), малоподвижный образ жизни (56% случаев), частые запоры (36% случаев), хронический геморрой (12% случаев), очаги хронической инфекции (8% случаев).

Пальпаторно увеличение простаты (от незначительного до умеренного) отмечали в 59% случаев; болезненность (также от незначительной до умеренно выраженной) – 54%; изменения консистенции железы – 92%, из них: пастозная – 28%, тестоватая – 36%, уплотненная – 12%, неоднородная – 16%.

2. Микроскопическое исследование секрета простаты Известно, что в световом микроскопе при микроскопии нативного материала, определяются микроорганизмы в количестве превышающем 103 КОЕ/мл (Redosta J.P., 1998). Таким образом, бактериальную природу хронического простатита можно установить по результатам микроскопии мазков секрета простаты в окраске по Граму.

Увеличение числа лейкоцитов более 15-20 в поле зрения микроскопа, что соответствует 2-3 тыс. в мл, расценивали как признак хронического воспаления простаты. Лейкоциты в поле зрения располагались неравномерно, в некоторых случаях, их было небольшое количество в одних полях зрения и массовые скопления в других. Мы просматривали не менее 30 полей зрения.

При микроскопии мазков из секрета простаты в окраске по Граму находили грамположительные кокки: диплококки, стрептококки, кокки в виде скоплений. Иногда они находились в большом количестве, иногда единичные.

Находили также микроскопические грибы – кандиды и тонкие грамположительные палочки, по морфологии напоминающие листерии.

Среди грамотрицательных микробов определяли палочки (представители семейства энтеробактерий, синегнойная палочка, коккобациллярные и ветвящиеся формы бактерий).

Микроорганизмы могли быть в ассоциациях: наряду с грамположительными бактериями определяли и грамотрицательные, кокковые микробы – с палочковидными. Также в мазках находили единичные или в большом количестве клетки слущенного эпителия и сперматозоиды.

Результаты микроскопического и бактериологического исследований не всегда совпадали: в 10% случаев в бактериальных посевах не обнаруживали грамотрицательные извитые и нитевидные бактерии, несмотря на разнообразие сред для посева.

Микроорганизмы, выделенные от основной группы пациентов, представлены в таблице 2.

Таблица 2. Возбудители хронического неспецифического бактериального простатита у основной группы больных (n=100).

1. Стафилококки – 36,8% 2. Стрептококки – 28% 3. Бактерии кишечной группы – 16,8% 4. Синегнойная палочка – 4,9% 5. Кандиды – 4,9% 6. Бактероиды – 4,9% 7.Ацинетобактер – 0,6% 8. Коринебактерии – 0,6% 9. Возбудитель не идентифицирован – 2,5% Стафилококки были выделены из секрета предстательной железы в 36,8% случаев (61 штамм). Это грамположительные кокки, в мазках располагающиеся скоплениями, патогенные стафилококки могут образовывать капсулу. Колонии на твердых средах имели золотистый или белый пигмент. На кровяном агаре 70% выделенных культур давали -гемолиз. На мясопептонном бульоне (МПБ) росли в виде диффузного помутнения, иногда с образованием пристеночного кольца.

По ферментативной активности были определены следующие виды стафилококков: S.aureus – 13,1%,. S.epidermidis – 62,3%, S.warneri – 6,6%, S.haemolyticus – 9,8%, S.hominis – 8,2%. Последние три вида не упоминались ранее в литературных источниках в качестве этиотропных агентов в возникновении хронических простатитов.

Стрептококки были выделены из секрета предстательной железы в 28% случаев (47 штаммов). Для дифференциации от стафилококков с чистой культурой стрептококков проводили тест на каталазу – стафилококки образуют каталазу, стрептококки – нет. Энтерококки, в отличие от гемолитических стрептококков, давали рост на средах с добавлением 6,5% хлорида натрия и средах, содержащих 40% желчи крупного рогатого скота. Энтерококки также не лизировались 10% желчью крупного рогатого скота, были каталазоотрицательны и обладали подвижностью.

Str.pneumoniae – в мазках располагались парами, могли образовывать короткие цепочки, имели капсулу. При культивировании в аэробных условиях давали -гемолиз, в анаэробных – -гемолиз. Пневмококки были чувствительны к оптохину и желчи. Положительный результат определяли по зоне задержки роста микроорганизмов. По ферментативной активности были определены следующие виды стрептококков Str.agalactiae – 40,4%, Str.faecalis – 31,9%, Str.parauberis –12,8%, Str.sanguis – 4,3%, Str.salivarius –4,3%, Aerococcus viridans –4,3%, Str.pneumoniae – 2,1%.

В 16,8% случаев (28 штаммов) из секрета предстательной железы нами были выделены бактерии кишечного семейства: эшерихии, морганеллы, серратии, энтеробактеры, протей.

По ферментативной активности были определены следующие виды бактерий кишечного семейства: E.coli – 57,1%, M.morgani – 21,4%, S.odоrifera – 10,7%, E.cloacae – 7,1%, P.mirabilis – 3,6%.

Культура синегнойной палочки была выделена из секрета простаты в 4,9% случаев (8 штаммов). Выделенные нами штаммы P.aeruginosa образовывали слизистые колонии и давали -гемолиз на кровяном агаре.

Грибы рода Candida были выделены из секрета простаты в 4,9% случаев (8 штаммов). Вид грибов определяли по биохимическим свойствам.

Ферментация глюкозы и мальтозы до кислоты и газа, сахарозы – до кислоты и отсутствие утилизации лактозы – характерны для грибов рода C.albicans.

Из анаэробных бактерий также были выделены 8 штаммов (4,9%) бактерий рода Bacteroides. Они представляли собой грамотрицательные микроорганизмы, имеющие кокко-бациллярную или ветвящуюся форму.

Культивирование производили на кровяном агаре и тиогликолевой среде в анаэробных условиях. По морфологическим, тинкториальным, культуральным свойствам и резистентности к ванкомицину и канамицину полученные культуры были отнесены к роду B.fragilis.

В одном случае (0,6%) нами была получена культура бактерий – ацинетобактерии, роль которых в патологии человека до настоящего времени изучена недостаточно. Также был получен 1 штамм (0,6%) коринебактерий. В 2,5% случаев (4 штамма) идентифицировать выделенные микроорганизмы не удалось.

Всего было выделено 166 культур микроорганизмов, 79,5% из них (материал от 66 пациентов) находились в виде ассоциаций: стафилококкстрептококк – 49%, стафилококк-бактерии кишечной группы – 28%, стафилококк-грибы рода Candida – 7%, и другие – в меньшем количестве случаев. Следует отметить, что присутствие микроорганизмов в виде ассоциаций увеличивает способность слабовирулентных бактерий при определенных условиях вызывать заболевание.

При микробиологическом исследовании секрета простаты 50 условноздоровых мужчин были получены результаты, представленные в таблице 3.

Таблица 3. Результаты микробиологического исследования секрета простаты условно-здоровых мужчин (n=50) Показатели Количество Выделенные микроорганизмы обследуемых 44 (88%) нет Лейкоциты<10, бактерий нет 4 (8%) Staphylococcus epidermidis – 2штамма.

Лейкоциты<10, Streptococcus viridans – 1штамм.

бактерии выявлены Corynebacterium – 1штамм.

1 (2%) нет Лейкоциты>10, бактерий нет 1 (2%) Staphylococcus epidermidis – 1штамм.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»