WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 |

На правах рукописи

ЛАРИНА Ираида Васильевна РАССЕЯННЫЙ СКЛЕРОЗ И АДГЕЗИВНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ И СЫВОРОТКИ КРОВИ (КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) 14.00.13 – нервные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Москва – 2009 2

Работа выполнена в Научном центре неврологии Российской академии медицинских наук Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Завалишин Игорь Алексеевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Кадыков Альберт Серафимович доктор медицинских наук, профессор Кипарисова Елена Сергеевна

Ведущая организация:

Московский Государственный Медико-Стоматологический Университет

Защита состоится «3» марта 2009 г. в 12 часов на заседании совета по защите кандидатских и докторских диссертаций Д 001.006.01 при Научном центре неврологии Российской академии медицинских наук по адресу:

125367 Москва, Волоколамское шоссе, 80.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НЦН РАМН

Автореферат разослан «_»2009г.

Учёный секретарь совета по защите кандидатских и докторских диссертаций Д 001.006.01, кандидат медицинских наук Домашенко М.А.

3

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Рассеянный склероз (РС) - одно из наиболее распространённых демиелинизирующих заболеваний центральной нервной системы (ЦНС). По распространённости среди заболеваний ЦНС РС занимает четвертое место после острых нарушений мозгового кровообращения, эпилепсии и паркинсонизма, в молодом возрасте – второе место после эпилепсии.

Хроническое прогрессирующее течение РС, поражение преимущественно лиц молодого и среднего возраста, ранняя инвалидизация, недостаточная эффективность проводимой терапии подтверждают медицинскую и социальную значимость проблемы.

Исследования последних лет показали сложность и многогранность патогенеза РС. РС является заболеванием с выраженной клинической вариабельностью, непредсказуемостью прогноза.

Несмотря на активное изучение, этиология и патогенез РС остаются не вполне ясными. Актуальной проблемой является изучение механизмов развития неврологической симптоматики и вариантов течения заболевания.

Очаги демиелинизации в ЦНС, выявляемые с помощью магнитнорезонансной томографии (МРТ), не всегда и не в полной мере соответствуют клиническим данным.

В последние годы большое внимание уделяется не только изучению иммунологических и биохимических нарушений, приводящих к обострению болезни и формированию ремиссий, но и также сопоставлению патогенетических особенностей различных вариантов течения РС. (Гусев Е.И., Завалишин И.А., Бойко А.Н., 2004; Беляева И.А., 2000; Кротенкова М.В., 2002; Тринитатский Ю.В., 2003; Олейников В.Г., 2004, Опольский М.Б., 2005). Ключевую роль в миграции специфичных к антигенам нервной ткани (основному белку миелина (ОБМ) и др.) аутореактивных Тлимфоцитов через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) в ЦНС играют молекулы адгезии, экспрессирующиеся как на поверхности Т-лимфоцитов, так и на эндотелиальных клетках. На современном этапе, изучение адгезивных молекул (МА) является актуальным как в понимании патогенеза различных типов течения РС, так и разработки перспективных направлений патогенетической терапии РС. В последние годы проводятся исследования возможности использования моноклональных антител против некоторых форм МА с терапевтической целью.

В осуществлении целого ряда физиологических и патологических процессов важнейшую роль играют адгезивные свойства лейкоцитов крови.

Способность лейкоцитов крови к адгезии (прилипанию) была известна давно. Однако значимость этого свойства долгое время недооценивалась. В настоящее время адгезионным взаимодействиям различного типа клеток между собой, а также их взаимодействию с межклеточным матриксом отводится ведущая роль во многих процессах, развивающихся как в физиологических условиях, так и в условиях патологии. К их числу относятся такие, как активация и дифференцировка иммунокомпетентных клеток, преодоление клетками гистогематических барьеров, развитие воспалительных реакций, передача всевозможных сигналов и другие.

Субстратом, опосредующим взаимную адгезию клеток и межклеточного матрикса, являются адгезивные молекулы, причём прилипание (или распластывание клеток на субстрате) служит одним из проявлений их функциональной активации. В целостном организме адгезия клеток развивается по отношению к другим клеткам, эндотелию сосудов, межклеточному матриксу, а в условиях in vitro она воспроизводится к неспецифическим субстратам, в частности, стеклу, пластиковой поверхности;

при этом предполагается, что данное явление отражает способность клеток к прилипанию к эндотелию. Идентифицировано более 5 групп МА, в их числе интегрины, селектины, суперсемейство иммуноглобулинов и другие.

Известно существование двух различных форм МА: растворимой (рМА) и связанной с поверхностью клеточных мембран (мМА). Методы определения уровня молекул адгезии в клинических условиях принципиально разработаны, однако остаются малодоступными в связи с большой трудоёмкостью и высокой стоимостью тест – систем для определения рМА, что объясняет ограниченное число исследований роли МА при РС.

Все вышеизложенное послужило основанием для определения и изучения клинического значения адгезивных свойств лейкоцитов и сыворотки крови при РС.

Цель исследования. Провести клинико-иммунологическое исследование с оценкой различных параметров адгезивной активности клеток и сыворотки крови больных РС.

Задачи исследования 1. Изучить адгезивную активность лейкоцитов и сыворотки крови у больных рассеянным склерозом (РС) с помощью оригинального нового способа, разработанного на основе реакции подавления прилипания лейкоцитов (РППЛ).

2. Провести сопоставление индекса спонтанной адгезии (ИСА) и эффекта усиления адгезии под действием аутосыворотки (ЭУс-а) со степенью активности патологического процесса, длительностью, тяжестью и клиническими проявлениями заболевания.

3. Исследовать сенсибилизацию лейкоцитов крови к основному белку миелина, смеси ганглиозидов из мозга быка (ГМ) и туберкулопротеину (ТП) с помощью РППЛ у больных РС.

4. Уточнить состояние количественных показателей клеточного иммунитета с помощью определения основных субпопуляций лимфоцитов крови (фенотипы CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+) и активированных клеток (CD25+, CD95+, HLA-DR+) у больных РС.

5. Исследовать гуморальный иммунитет с определением содержания иммуноглобулинов G, A, М и иммунных комплексов (ИК) в сыворотке крови больных РС.

6. Изучить взаимосвязь показателей адгезии с другими показателями иммунного статуса больных РС, и оценить диагностическую и прогностическую значимость адгезивной активности лейкоцитов и сыворотки крови у больных РС.

Научная новизна.

Впервые применён оригинальный метод определения суммарной адгезивной активности лейкоцитов и сыворотки крови. Получен патент на изобретение №2246728 "Способ определения адгезивных свойств лейкоцитов крови", приоритет изобретения от 03 апреля 2003; зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.02.2005г.

Проведённое исследование позволило получить новые данные, характеризующие адгезивную активность лейкоцитов и сыворотки крови, взаимосвязи показателей адгезии с клиническими проявлениями у больных РС, а также с особенностями клеточного, гуморального иммунитета при различных типах течения, длительности и тяжести заболевания.

Сравнительный анализ показателей адгезии и иммунного статуса в зависимости от типа течения, длительности и тяжести заболевания показал значительные отличия в изменении изучаемых параметров, что отражает этапы демиелинизирующего процесса.

Теоретическая и практическая значимость работы Установлены параметры показателей адгезии (значение индексов спонтанной адгезии и эффекта усиления адгезии под действием аутосыворотки), которые могут быть использованы в качестве дополнительных лабораторных критериев прогнозирования характера течения РС. Предложенный способ определения показателей азгезии и вычисления величин ИСА и ЭУс-а позволил выявить повышение адгезивной активности лейкоцитов и сыворотки при РС и использовать их для скринингового определения суммарного содержания мембранных и растворимых форм адгезивных молекул как при РС, так и при других заболеваниях. Проведённое комплексное клинико-иммунологическое исследование расширяет представление о механизмах формирования иммунного ответа при РС, и влияние факторов адгезии на гетерогенность клинических проявлений.

Основные положения, выносимые на защиту 1. У больных РС обнаружено повышение адгезивных свойств лейкоцитов и сыворотки крови. Установлена взаимосвязь показателей адгезии с характером течения РС, активностью патологического процесса, а также с клиническими проявлениями заболевания.

2. Показатели адгезии (индекс спонтанной адгезии, эффект усиления адгезии под действием сыворотки) могут использоваться как критерий подтверждения развития обострения заболевания и выхода в ремиссию, а также прогнозирования типа течения РС.

3. Различный характер и особенности взаимосвязей иммунных параметров с показателями адгезии при разных клинических проявлениях РС подтверждают их существенный вклад в клиническую гетерогенность заболевания.

Апробация работы Диссертация апробирована и рекомендована к защите на заседании научных сотрудников лаборатории экспериментальной патологии нервной системы, нейроинфекционного и нейрогенетического отделений, II, III сосудистых, научно-консультативного, отделения нейрореанимации, лаборатории клинической нейрофизиологии ГУ НЦН РАМН от 02.07.08г.

Материалы диссертации были представлены на конференциях с международным участием: на III Всемирном конгрессе «Клиническая патология и реабилитация в медицине», Тайланд, 2005; IX Международном конгрессе по клинической патологии, 2004.

На ХII Всероссийской научно-практической конференции неврологов «Нейроиммунология», Санкт-Петербург, 2003г. стендовый доклад «Новый способ оценки адгезивной активности лейкоцитов крови и влияния сыворотки на адгезию клеток» занял 3 место.

Публикации: по материалам диссертации опубликовано 16 научных работ.

Структура и объем диссертации: Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста, состоит из введения, четырёх глав, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 37 работ российских и 81 работу иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 33 таблицами и 24 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Пациенты. В обследуемую клиническую группу вошло 100 больных рассеянным склерозом. Контрольная группа состояла из 54 здоровых доноров крови, сопоставимых с больными РС по возрасту и полу. Группу сравнения составили 33 пациента с другими неврологическими заболеваниями (ДНЗ), преимущественно с нейродегенеративными заболеваниями нервной системы.

В соответствии с поставленными задачами исследования больные основной группы были распределены по основным критериям течения РС:

типу течения, длительности заболевания и степени тяжести.

Для распределения больных по типу течения РС использованы критерии О.А. Хондкариана и соавт. (1987). Большинство больных были представлены ремиттирующим и прогредиентным течением РС (48 и человек соответственно). При ремиттирующем течении РС выделены группы больных в стадии ремиссии (РРС-р) -9 больных, и в стадии обострения (РРСо)- 39 больных. Также была выделена группа больных с дебютом РС (РС-д) - 6 больных. Среди прогредиентных форм - 12 больных были с первичнопрогредиентным рассеянным склерозом (ППРС) и 34 пациента со вторичнопрогредиентным рассеянным склерозом (ВПРС) с обострениями.

Большинство больных РС (55%) имело среднетяжелое течение от 4 до 6,5 баллов по шкале EDSS (Kurtzke J.F., 1983). Легкое течение было у 29% больных и тяжелое у 16%. В целом в группе больных РС средний балл по шкале EDSS составил 4,6±1,9 (М±SD).

Методы. Оценивались основные показатели гуморального и клеточного иммунитета. У всех исследуемых пациентов (n=100) определяли реактивность клеток крови к ОБМ, к смеси ганглиозидов из мозга быка и к ТП, а также эффект усиления адгезии под действием аутосыворотки с помощью реакции подавления прилипания лейкоцитов (РППЛ).

РППЛ ранее использовалась для выявления сенсибилизации лимфоцитов к различным антигенам. Однако данный способ не предполагал оценку адгезивных свойств лейкоцитов крови и влияния аутосыворотки на адгезию лейкоцитов в виде возможного усиления адгезии лейкоцитов крови, не зависящего от действия антигенов. Для учёта указанных выше показателей на основе РППЛ был предложен новый метод с оценкой суммарной адгезивной активности сыворотки и лейкоцитов крови.

Применяли микромодификацию теста с использованием пластиковых микропланшет. В кратком изложении способ заключается в постановке дополнительных проб, дающих возможность произвести подсчёты общего числа клеток в пробе до и после инкубации как в среде без аутосыворотки, так и с добавлением аутосыворотки.

Индекс спонтанной адгезии (ИСА) - величина отношения числа адгезивных клеток к числу не адгезивных клеток в составе выделенного лейкоконцентрата крови после 1,5 часовой инкубации при t°=37°С, выраженная в процентах (%). ИСА - показатель, отражающий адгезивные свойства лейкоцитов, и предложен для оценки суммарного уровня экспрессии МА на поверхности лейкоцитов крови мМА. Исследование ИСА проведено у 79 больных РС и у 23 доноров, группу сравнения составил пациент с ДНЗ.

Аналогичным образом оценивалось повышение адгезивных свойств сыворотки. С этой целью ставилась проба с инкубацией клеток в среде с добавлением аутосыворотки. Отношение числа клеток, подвергшихся дополнительной адгезии к числу не прилипших клеток в пробе с аутосывороткой после 1,5 часовой инкубации при t°=37°С, выраженное в процентах, названо эффектом усиления адгезии под действием аутосыворотки (ЭУс-а), и учитывалось при величине 30% и более.

Pages:     || 2 | 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»