WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 7 |

Полученные нами данные (ингибирование проагрегантного эффекта тромбина в присутствии проникающего аналога цАМФ и хлорида бария, препятствующего повышению уровня внутриклеточного кальция), свидетельствуют о сходстве механизмов активации тромбином агрегации эритроцитов и тромбоцитов: этот процесс, по всей видимости, реализуется с участием цАМФ и ионизированного Са2+.

Таким образом, результаты, полученные при исследовании влияния белков свертывающей системы крови на процесс агрегатообразования эритроцитов, демонстрируют выраженный проагрегантный эффект фибриногена и тромбина.

3. Влияние регуляторных молекул на агрегацию эритроцитов Форменные элементы крови первыми соприкасаются не только с компонентами плазмы, но и с теми биологически активными соединениями, которые транспортируются к месту приложения и, по всей видимости, могут влиять на функциональные свойства самих клеток крови (Ярошевский А.Я., 1968).

Результаты воздействия некоторых гормонов, нейромедиаторов и простагландинов на процесс агрегатообразования эритроцитов представлены в таблице 4.

Таблица Агрегатные свойства эритроцитов, обработанных растворами биологически активных веществ (M±m) Условия эксперимента Степень агрегации, Размер агрегата, отн. ед. отн. ед.

Контроль 0,236±0,017 6,14±0,Адреналин 10-6 М 0,342±0,042** 6,84±0,Норадреналин 10-6 М 0,360±0,032** 7,18±0,35* Дофамин 10-6 М 0,331±0,043* 6,99±0,23* Инсулин 0,1 ед/мл 0,267±0,016 6,21±0,Ацетилхолин 10-5 М 0,337±0,041* 6,94±0,Простагландин Е1 10-8 М 0,376±0,026** 6,58±0,Простагландин Е2 10-8 М 0,409±0,037** 6,72±0,Все использовавшиеся биологически активные вещества (за исключением инсулина) продемонстрировали выраженную стимуляцию агрегатообразования. Степень агрегации эритроцитов достоверно повысилась, отмечена тенденция к увеличению среднего размера агрегата, а для норадреналина и дофамина – достоверное увеличение на 16,9% и 13,8% (р<0,05) соответственно.

Однотипные изменения агрегатных свойств эритроцитов, обработанных биологически активными веществами и ресуспендированных в плазме и в стандартном растворе с реофортаном (рис. 6), позволили заключить, что проагрегантное действие сигнальных молекул опосредуется модификацией клеточных свойств, а не их влиянием на плазму.

Рис. 6. Сравнительная плазма реофортан СА, % оценка изменения агрегатных свойств эритроцитов под действием тромбина (Тр), ацетилхолина (Ац) и адреналина (Адр) в плазме крови и в стандартном растворе с реофортаном Тр Ац Адр 4. Оценка адренореактивности организма и агрегации эритроцитов под действием адренергических соединений Система кровообращения отличается высокой реактивностью и играет первостепенную роль в адаптационных перестройках функционального состояния организма. Это определяет практически немедленное вовлечение ее в реакции организма при стрессе (Федоров Б.М., 1991; Ройтман Е.В., 2003). Патология возникает при тяжелом стрессе, обусловленном не только чрезмерным стрессовым воздействием, но и недостаточностью контролирующих механизмов. В условиях патологии пропатогенную роль могут играть различные биологически активные вещества, которые в норме участвуют в осуществлении физиологических процессов. Этому способствует патологически измененная реактивность структур и дизрегуляционные нарушения баланса их активности, а также эффектов биологически активных веществ.

Проагрегантное влияние катехоламинов было сопоставлено с показателями адренореактивности организма в норме и при различных видах патологии.

Результаты определения адренореактивности организма в разных группах исследования в присутствии различных адренергических соединений представлены в таблицах 5 и 6.

В группе контроля (здоровые лица) показатели адренореактивности организма в присутствии пропранолола соответствовали норме (220 отн. ед.). Статистически достоверное снижение адренореактивности организма разной степени зафиксировано во всех исследованных группах пациентов с разными формами патологии.

Наиболее выраженное снижение -адренореактивности отмечено при хронической обструктивной болезни легких, дисциркуляторной энцефалопатии, умеренное снижение – при сахарном диабете и сердечнососудистых заболеваниях, при раке желудка показатели адренореактивности, хотя и были достоверно ниже, чем в группе здоровых доноров, все же оставались на достаточно высоком уровне. В присутствии адреналина направленность изменений осмотической резистентности эритроцитов во всех обследуемых группах доноров была такой же, как и при воздействии пропранолола.

Таблица Показатели адренореактивности (отн. ед.) в присутствии адренергических соединений в норме и при патологии (M±m) Группа доноров Препарат (10-3 ЗД ССЗ РЖ М) Пропранолол 15,9±1,7 60,4±5,1*** 31,6±7,6* Адреналин 22,1±2,7 63,1±4,7* 35,6±6,0* Норадреналин 99,9±2,9 97,8±3,5 78,2±5,9* Йохимбин 104,6±3,2 104,7±4,1 136,4±7,6* Коринантин 88,8±3,0 93,0±3,5 70,1±5,8* Атенолол 45,9±4,4 75,0±4,6* 35,9±5,Клонидин 113,4±4,6 106,1±2,0 — Изопротеренол 117,8±3,2 107,9±3,1 — Обозначения: ЗД – здоровые доноры, ССЗ – пациенты с сердечнососудистыми заболеваниями, РЖ – пациенты с раком желудка Инкубация эритроцитов с норадреналином практически не повлияла на осмотическую резистентность красных клеток крови в обследуемых группах за исключением пациентов с раком желудка. Для них отмечено достоверное повышение мембранной резистентности в присутствии этого катехоламина.

Для пациентов этой группы зафиксированы и выраженные статистически значимые мембранная реакция на действие 2-блокатора йохимбина (снижение осмотической стойкости) и повышение резистентности в присутствии 1-блокатора коринантина.

Сходное действие на мембранные свойства эритроцитов (снижение осмотической резистентности) в группе здоровых лиц оказало присутствие 2-агониста клонидина и -агониста изопротеренола. При патологии это влияние нивелировалось. Действие 1-блокатора атенолола было тоже мембраностабилизирующим, как для пропранолола и адреналина.

Таблица Показатели адренореактивности (отн. ед.) в присутствии адренергических соединений в норме и при патологии (M±m) Препарат Группа доноров (10-3 М) ЗД ДЭП ХОБЛ СД Пропранолол 15,9±1,7 77,5±3,4*** 83,6±4,5*** 66,8±4,3*** Адреналин 22,1±2,7 73,1±4,4* 83,5±3,7* 74,5±3,5* Норадреналин 99,9±2,9 96,1±2,1 104,3±2,4 100,3±6,Клонидин 113,4±4,6 100,9±3,5 109,7±7,5 104,5±5,Изопротеренол 117,8±3,2 99,5±2,3* 113,5±2,5 99,3±3,2* Обозначения: ЗД – здоровые доноры, ДЭП – пациенты с дисциркуляторной энцефалопатией, ХОБЛ – пациенты с хронической обструктивной болезнью легких, СД – пациенты с сахарным диабетом Таким образом, полученные результаты продемонстрировали выраженное снижение -адренореактивности организма при патологии.

Статистически значимое изменение мембранной реакции на действие -адренергических соединений зафиксировано только в группе пациентов с самой тяжелой формой патологии – раком желудка IY ст.

Степень агрегации интактных эритроцитов существенно отличалась в группах пациентов с патологией по сравнению со здоровым контролем. При дисциркуляторной энцефалопатии агрегируемость эритроцитов была на 148,7% выше (р<0,01), при сердечно-сосудистых заболеваниях – на 104,7% (р<0,01), при сахарном диабете – на 82,2% (р<0,05); выраженные тенденции к росту агрегатообразования выявлены для пациентов с хронической обструктивной болезнью легких и раком желудка. Средний размер агрегата при патологии также был увеличен.

Под действием катехоламинов возросла интенсивность процесса агрегатообразования эритроцитов здоровых доноров – увеличилась не только степень агрегации (на 60%, р<0,05 для адреналина и на 61%, р<0,05 для норадреналина), но и среднее число эритроцитов, приходящееся на один агрегат (на 11%, р<0,05 для адреналина).

Для эритроцитов пациентов различных групп на фоне исходно высокой степени агрегации влияние катехоламинов практически нивелировалось: статистически значимый прирост этого показателя был отмечен только для пациентов с раком желудка при действии норадреналина (104%, р<0,05) и у больных сахарным диабетом при инкубации клеток с адреналином (32,8%, р<0,05).

Коэффициенты корреляции между адренореактивностью в присутствии различных адренергических соединений и степенью агрегации под действием катехоламинов (измеренной методом видеорегистрации) представлены в табл.7.

Таблица Коэффициенты корреляции между адренореактивностью (АР) и степенью агрегации (СА) под действием катехоламинов (метод видеорегистрации) АР с препара- СА в присутствии адреналина (10-6 М) том (10-3 М) ЗД ДЭП ССЗ ХОБЛ РЖ СД пропранолол 0,485 0,621 0,620 0,983 0,992 0,адреналин 0,961 0,520 — 0,621 0,780 0,норадреналин 0,521 — — — — 0,йохимбин — — 0,596 — 0,969 — коринантин 0,602 — — — 0,698 — атенолол 0,612 — — — — — клонидин 0,498 — — — — — изопротеренол — — — 0,956 — 0, СА в присутствии норадреналина (10-6 М) пропранолол 0,494 0,794 0,568 0,975 0,975 0,адреналин — 0,924 — 0,900 — 0,норадреналин 0,764 — 0,541 — — 0,коринантин — — 0,748 — 0,988 — атенолол 0,789 — 0,995 — — — клонидин — — 0,981 — — 0,изопротеренол — — 0,690 0,732 — 0,Примечание: в таблице представлены только статистически значимые коэффициенты корреляции Как в норме, так и при различных формах патологии выявлена тесная корреляционная взаимосвязь между адренореактивностью в присутствии пропранолола, адреналина и агрегацией эритроцитов под действием катехоламинов. Корреляции между мембранной резистентностью эритроцитов в присутствии -блокаторов, 1-блокатора и адренергической агрегацией красных клеток крови отмечены для здоровых лиц, пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями и раком желудка. Взаимосвязь изменений мембранных свойств эритроцитов под действием 2-агониста клонидина и 2-агониста изопротеренола и агрегатными свойствами клеток под действием катехоламинов зафиксирована в группах пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями, хронической обструктивной болезнью легких и сахарным диабетом.

Полученные в ходе нашего исследования данные о существенном увеличении агрегируемости эритроцитов при разных формах патологии соответствуют литературным данным (Селезнев С.А. и соавт., 1985; Галенок В.А. и соавт., 1987; Meiselman H., 2002). При этом было выявлено, что исходно высокий уровень агрегации эритроцитов при патологии в большинстве случаев не претерпевает существенных изменений при действии высоких доз катехоламинов, в отличие от состояния нормы, где адренергические воздействия оказывают выраженное стимулирующее влияние. Следует отметить, что изменения агрегабельности эритроцитов и адренореактивности под действием - и адренергических соединений имели одинаковую направленность.

Опубликованные экспериментальные данные свидетельствуют о снижении -адренореактивности организма при ряде патологий (при артериальной гипертонии, ишемической болезни сердца и других сердечно-сосудистых заболеваниях), и повышении у практически здоровых лиц при нервно-эмоциональных напряжениях, депривации сна, интенсивной физической нагрузке и т.д. (Стрюк Р.И., Длусская И.Г., 2003). Возможно, что при действии длительных или чрезмерных раздражителей имеет место десенситизация -адренорецепторов, направленная на предотвращение энергетического истощения клеток. Нами также зафиксировано снижение -адренореактивности при ряде патологий, что может быть связано с изменением количества и/или функционального состояния адренорецепторов. Однако при тяжелой форме патологии (рак желудка IY ст.) отличительной особенностью было значительное влияние -адренергических соединений на мембранные свойства эритроцитов на фоне несущественного изменения адренореактивности организма.

Связь функционального состояния эритроцитов с прогрессированием заболевания и степенью десенситизации адренорецепторов, т.е.

адренореактивностью организма была доказана экспериментально для различных стадий гипертонической болезни (Стрюк Р.И., Длусская И.Г., 2003). Предложенные нами дополнения к методике определения адренореактивности организма позволяют оценить не только -, но и адренергическую реактивность. Это позволило, например, выявить серьезный характер изменений мембранных свойств эритроцитов при тяжелой патологии (онкологическом заболевании), когда при относительно небольшом снижении -адренореактивности была показана выраженная -адренореактивность, что подтвердилось и различиями в агрегационном ответе эритроцитов на - и -адренергические воздействия.

5. Анализ механизмов трансдукции сигнала при адренергических воздействиях на эритроциты При изучении зависимости проагрегантного эффекта катехоламинов от их концентраций (построении кривых доза-эффект) были получены типичные кривые с насыщением, характерные для лигандрецепторного взаимодействия (рис. 7).

СА, отн.

0,ед.

Рис. 7. Зависимость 0,степени агрегации (СА) эритроцитов от 0,концентрации адре0,налина 0,При активации раз0,концентрация Адр ( Х 10-7М) ных подтипов адренорецепторов, со0 1 2 3 4 пряженных с разными G-белками, запускаются различные внутриклеточные процессы.

Катехоламины через соответствующие ГТФ-связывающие белки могут регулировать активность как фосфолипазы С, так и аденилатциклазы (Ткачук В.А., 1983, 2002).

Чтобы выяснить, активацией каких подтипов адренорецепторов обусловлен проагрегантный эффект катехоламинов, оценивали степень агрегации эритроцитов под действием - и -адреномиметиков (рис. 8).

Согласно классическим представлениям о механизмах трансдукции гормонального сигнала, активация различных типов (2- и -) адренорецепторов должна сопровождаться противоположным эффектом.

Однонаправленное проагрегантное влияние обоих типов ( и ) адреномиметиков, выявленное ходе эксперимента, может быть объяснено, исходя из гипотезы Сергеева П.В. и соавт. (1999), согласно которой классическая сигналинг-система представлена во всех клетках крови, за исключением эритроцитов человека (хотя она имеется в эритроцитах амфибий, птиц и млекопитающих). В процессе филогенеза эритроциты человека, утратив систему G-белок – аденилатциклаза, сохранили адренорецепторы, а катехоламиновый ответ осуществляется в них иными путями. Возможный механизм взаимодействия адренорецепторов с агонистами обусловлен регуляцией Na+/ H+ обмена в клетке.

СА% ФЭ КЛО ИЗО ФЕНО Рис. 8. Повышение степени агрегации эритроцитов после инкубации с -агонистами (фэ – фенилэфрин, кло – клонидин) и -адреномиметиками (изо – изопротеренол, фено – фенотерол).

При изучении эффекта катехоламинов в присутствии адреноблокаторов отмечено статистически значимое ингибирование влияния адреналина при введении 1- и 2-блокаторов коринантина и йохимбина.

Стимулирующий эффект норадреналина существенно снижался в присутствии 1-блокатора коринантина (рис. 9).

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 7 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»