WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

– определение индекса токсичности слезы у 60 больных (85 глаз). Применялся метод, разработанный Н.И.Курышевой и соавт. (2000г.) по аналогии с исследованием альбумина сыворотки крови и специально модифицированный для слезной жидкости и водянистой влаги, т.е. биологических жидкостей с низким содержанием альбумина. В работе анализировался индекс токсичности слезной жидкости (Ит), который рассчитывается, по аналогии с таковым в сыворотке крови (Г.Е.Добрецов, Ю.И.Миллер, 1994) и водянистой влаге (Н.И.Курышева с соавт, 2003) по формуле:

Ит = ОКА/ЭКА – 1. Исследование выполнено в отделе биофизики Московского НИИ физико-химической медицины МЗ РФ (зав. отделом – член-корр. РАМН проф.Г.Е.Добрецов) при участии д.б.н., проф. Ю.А.Грызунова и доц. кафедры биофизики РГМУ к.б.н. А.И.Деева.

– исследование содержания нитрит ионов в водянистой влаге и слезной жидкости 45 больных (45 глаз), оперированных по поводу глаукомы. Применялся метод, основанный на реакции диазотированной сульфаниловой кислоты с нафтиламином и образованием азокрасителя красного цвета (реакция Грисса). Работа выполнена в лаборатории биохимических исследований ЦНИЛ Ивановской государственной медицинской академии (руководитель – д.м.н., проф.

Э.С.Акайзин) при участии д.м.н., проф. С.Б.Назарова.

– определение концентрации нейротрофического фактора BDNF в слезной жидкости 23 пациентов (46 глаз) методом иммуноферментного анализа на микро планшетном фотометре «Anthos» (Австрия) с использованием диагностических наборов R&D(Австрия). Исследование выполнялось на кафедре офтальмологии Московского государственного медико-стоматологического университета им.

Н.А.Семашко (зав.кафедрой – д.м.н., проф. Х.П.Тахчиди, совместно с д.м.н.

Н.А.Гавриловой).

– исследование уровня трансформирующего фактора роста TGF 1 в слезной жидкости 43 больных (43 глаз) методом иммуноферментного анализа с применением коммерческих тест-систем (фирма “BIOSOURCE”, Бельгия). Работа выполнена на кафедре иммунологии РГМУ (зав. кафедрой д.б.н., проф. Л.В. Ковальчук, совместно с д.б.н.,проф. Л.В.Ганковской).

– кристаллографию слезы 85 больных глаукомой (138 глаз) с применением многомерного кластерного анализа при помощи компьютерной программы «ОБРАЗ» (Колединцев М.Н., 2005). Анализу были подвергнуты две основные характеристики кристаллограмм: длина цепочки в пикселях и величина перепада световой интенсивности между начальной и конечной точками “цепочки”. Исследование проводилось на кафедре патофизиологии Московского государственного медико-стоматологического университета им. Н.А.Семашко (зав. кафедрой – заслуженный деятель науки, лауреат гос. премий, д.м.н., проф. А.И.Воложин, совместно с д.м.н. М.Н.Колединцевым).

Для проведения всех указанных исследований слезную жидкость (около мкл) собирали капилляром из нижнего конъюнктивального свода (без предварительной анестезии) автоматизированной пипеткой в одно и то же время суток у всех больных (как правило, в утренние часы) и в день взятия слезы пациентов просили не закапывать утром никаких капель. Стимуляцию слезопродукции осуществляли путем вдыхания пациентом паров нашатырного спирта. Полученные образцы хранили при температуре -18°С до выполнения исследований.

В качестве критериев прогрессирования заболевания учитывали комплекс структурных и функциональных изменений. Основными структурными изменениями, принимаемыми в расчет, были: сужение неврального ободка ДЗН хотя бы в одном из шести секторов по данным его зарисовки, расширение перипапиллярной атрофии (особенно ее бета-зоны), появление или расширение зоны атрофии слоя нервных волокон (если таковая визуализировалась в бескрасном свете), появление кровоизлияний по краю ДЗН. В случаях, когда применялись методы визуализации ДЗН, учитывали объемные значения неврального ободка и экскавации ДЗН, площадь неврального ободка и экскавации ДЗН, а также ее форму, среднюю толщину слоя нервных волокон в перипапиллярной сетчатке. При анализе результатов лазерной поляриметрии (GDx–VCC) учитывали значения показателя, характеризующего состояние слоя нервных волокон сетчатки NFI, а при анализе результатов оптической когерентной томографии (OCT) – площадь ДЗН и неврального ободка, площадь экскавации и различные соотношения, например, отношение площади экскавации к площади ДЗН. Главное внимание обращалось на толщину слоя нервных волокон перипапиллярной сетчатки с учетом достоверности отклонения показателя от нормы.

Критериями функциональных изменений были: сужение периферических границ полей зрения на 10° и более при наличии других критериев; увеличение ВСМР по данным Off-On на 25 мсек и более в 5° на ахроматический стимул и в 10° на синий; любое снижение амплитуды пика Р 100 по данным исследования ЗВП мозга при наличии повышения индекса АО (отношение амплитуды раннего и позднего компонентов пика N75 – P100). При анализе результатов стандартной автоматизированной периметрии принимали во внимание наиболее важные индексы, а именно – MD – среднее отклонение светочувствительности сетчатки, а также паттерн стандартное отклонение (PSD) с учетом коэффициента вероятности Р.

В каждом конкретном случае учитывался весь комплекс полученных данных обследования и при сочетании двух и более критериев (например, одного структурного и двух функциональных или двух структурных) делали заключение о прогрессировании ГОН.

Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью компьютерной программы “Microsoft Excel”. Вычислялись средняя арифметическая, стандартное отклонение, показатели достоверности различий. При проведении корреляционного анализа рассчитывались коэффициент корреляции(r) и его достоверность(p). Достоверным считали отличие при p<0,05.

Результаты исследования.

Определение антиоксидантной активности слезной жидкости как индикатора процессов свободно-радикального окисления при глаукоме.

Результаты показали, что в норме АОА слезы составляет 320±78 мкМоль.

При начальной стадии глаукомы данный показатель даже превосходил таковой в контроле и составил 440±112 мкМоль. В развитой стадии глаукомы АОА слезы практически не отличалась от нормальной и составила в среднем 350±93 мкМоль, что, однако, была достоверно ниже, чем при начальной глаукоме (p<0,05). В далеко зашедшей стадии (150±65 мкМоль), что достоверно ниже по сравнению с начальной и развитой стадиями глаукомы (p<0,05) и контролем (p<0,01).

Проведенный анализ показал, что глаукома, как правило, прогрессировала при значениях АОА ниже 220 мкМоль. Нами не было зарегистрировано зависимости частоты развития ГОН от уровня АОА слезы в начальную стадию заболевания.

Вместе с тем, в продвинутые стадии было отмечено более частое развитие заболевания при изначально более низких показателях АОА. Так, в развитой стадии заболевания при значениях АОА ниже 290 мкМоль прогрессирование ГОН было отмечено в два раза чаще, чем при более высоких значениях АОА. Аналогичное различие было замечено при далеко зашедшей стадии при показателях АОА слезы ниже 180 мкМоль.

Основываясь на полученных результатах, мы полагаем, что определение АОА слезы может служить вспомогательным критерием оценки течения ГОН Исследование индекса токсичности слезной жидкости как индикатора метаболических расстройств при глаукоме.

Основываясь на данных литературы о важных антиоксидантных и детоксикационных свойствах альбумина, нами было предпринято определение связывающей способности альбумина слезы и индекса ее токсичности. Данный показатель, как и в случае с внутриглазной жидкостью, отражает способность альбуминов слезы связывать токсические метаболиты.

Благодаря тому, что значение Ит слезы коррелирует с показателем Ит водянистой влаги, мы сочли возможным разработать метод определения риска прогрессирования ГОН путем определения токсичности слезной жидкости.

Во-первых, было установлено, что в начальной стадии глаукомы Ит слезы составляет в среднем 1,3±0,13. Незначительно отличаясь от такового в контроле (1,0±0,18), он слабо изменяется в развитой стадии (1,8±0,7) и повышается до 2,8±1,в далеко зашедшей стадии. Во-вторых, было выявлено, что более высокие значения Ит слезы отмечались у тех пациентов, у которых в течение года было отмечено прогрессировании ГОН, несмотря на нормализованное внутриглазное давление (Табл.1).

Таким образом, был предложен метод определения уровня Ит слезной жидкости в динамике диспансерного наблюдения больных глаукомой, который помогает в прогнозировании течения ГОН и проведении соответствующего профилактического лечения.

Таблица 1.

Средние значения индекса токсичности слезной жидкости больных первичной глаукомой при различном течении ГОН Группы больных Значения Ит СЖ Число глаз M± Больные с прогрессирова- нием ГОН 3,1± 1,p<0,Больные без прогрессиро- вания ГОН 1,2±0,Был также определен пороговый уровень Ит слезы, выбранный нами в качестве критерия риска прогрессирования заболевания. Мы основывались на том, что далеко зашедшей стадии глаукомы соответствуют значения Ит слезы выше 1,(при расчете M ± ). При развитой глаукоме показатель Ит также близок к 1,8. Кроме того, при выявлении признаков прогрессирования ГОН значения Ит всегда были выше 1,8. (Табл.2).

Таблица 2.

Зависимость частоты прогрессирования ГОН от исходных значений Ит слезной жидкости Исходные показатели Ит СЖ Число глаз Частота прогрессирования ГОН абс. % 40 33 p<0,001 1,<1,8 45 7 В этой связи индекс токсичности слезы 1,8 был выбран в качестве порогового: более высокие его значения расценивались как неблагоприятные в плане прогрессирования ГОН.

Исследование динамики продукции оксида азота слезы в прогнозировании риска прогрессирования ГОН.

Результаты показали высокую корреляцию между содержанием нитрита во влаге и слезной жидкости (r=0,65; p<0,05) и постепенное снижение уровня нитрит иона в слезе по мере прогрессирования глаукомы (Таб.3).

Таблица 3.

Содержание нитрит иона в водянистой влаге и слезной жидкости при глаукоме Группы Стадия Показатели гидродинамики* Нитрит ион P больных глаукомы n (нмоль/мл) ВВ СЖ P0 C F I 25,2±0,8 0,19±0,08 2,9±0,9 9,9±1,8 16,1±3, <0,001(I-II) II 30,2 ±1,2 0,12±0,06 2,1±0,6 1,9±0,5 3,4±1,Глаукома III 20 <0,001(I-III) 32,3±1,8 0,06±0,00 1,1±0,8 0,12±0,05 0,23±0,<0,01(II-III) <0,(с контролем) Контроль 16,3±2,5 0,21±0,16 2,7±1,2 3,68±1,Примечание:*- в данном разделе были отобраны пациенты с повышенным ВГД, в связи с предстоящей антиглаукомной операцией, в ходе которой предполагалось взятие водянистой влаги. Последующее наблюдение за больными проводилось на фоне нормализованного офтальмотонуса.

Из 45 пациентов, обследованных в данном разделе работы, спустя год удалось исследовать слезную жидкость у 38 больных (38 глаз). Результаты показали, что у всех больных в начале заболевания прогрессирование ГОН происходило на фоне повышения уровня нитрит иона. Принимая во внимание также достоверное отличие уровня нитрита в СЖ при начальной глаукоме от его нормальной концентрации, мы полагаем, что данный лабораторный критерий в самом начале заболевания можно расценивать как неблагоприятный в плане прогноза течения глаукомы.

В продвинутых стадиях заболевания прогностически значимым оказалось снижение концентрации нитрит иона в слезной жидкости: у всех больных с развитой и далеко зашедшей глаукомой прогрессирование ГОН происходило неизменно на фоне снижения уровня нитрит иона в слезе. Полученные в ходе настоящего исследования результаты, подчеркивают неблагоприятную прогностическую значимость снижения продукции NO в динамике глаукомы.

Исследование трансформирующего фактора роста TGF 1 слезной жидкости в динамике глаукомного процесса В ходе настоящей работы нами впервые было предпринято исследование уровня данного цитокина в различные стадии глаукомы. Результаты показали нарастание концентрации TGF 1 в слезной жидкости по мере перехода глаукомы из начальной стадии в развитую и далеко зашедшую: от 265±110 пкг/мл до 486±пкг/мл и 518±87 пкг/мл, соответственно. Полученные результаты еще раз подчеркнули заинтересованность TGF 1 в патогенезе ГОН и продемонстрировали целесообразность его исследования при глаукоме для определения прогноза ГОН.

Нейротрофический фактор BDNF и его роль в прогрессировании ГОН.

Исследование концентрации BDNF в слезной жидкости больных глаукомой выявило ее колебание от 0 до 280 пкг/мл (в контроле: от 155 пкг/мл до 200 пкг/мл).

При глаукоме содержание BDNF в слезе превосходило уровень 155 пкг/мл лишь в пяти случаях из 46 исследуемых глаз. У подавляющего числа обследованных больных содержание BDNF не поднималось выше 90 пкг/мл. В целом это указывает на низкий потенциал нейротрофической защиты при глаукоме.

Исходя из полученных значений, для последующего анализа больные были разделены на три подгруппы: с уровнем BDNF ниже 50 пкг/мл, от 51 до 90 пкг/мл и выше 90 пкг/мл.

Было отмечено, что низким значениям BDNF соответствуют более выраженные отклонения в параметрах ДЗН и слоя нервных волокон сетчатки, исследованных несколькими методами визуализации. Так, слой нервных волокон, исследованный методом ОКТ, у больных со значениями BDNF ниже 50 пкг/мл оказался в три раза тоньше, чем у пациентов с более высоким уровнем BDNF: при BDNF<50пкг/мл толщина слоя нервных волокон перипапиллярной сетчатки соста вила в среднем 22,7µм, при BDNF от 50 до 90 пкг/мл – 73,5µм, при BDNF>90пкг/мл – 86,2µм, в то время как в контроле – 98,4 µм При значениях BDNF ниже 50 пкг/мл объем неврального ободка, исследованный на приборе HRT II, в два раза отличался от аналогичного параметра при высоких значениях BDNF и составлял в среднем 0,18+0,07 мм3, при BDNF от50 до пкг/мл 0,27+0,13 мм3, при BDNF >90 пкг/мл составил 0,41+0,09 мм3, в контроле 0,44+0,17 мм3.

У пациентов с низкой концентрацией изучаемого нейротрофического фактора достоверно более выраженным был также объем экскавации ДЗН (cup volum).

Низким значениям BDNF соответствовало более выраженное снижение светочувствительности сетчатки. При уровне BDNF ниже 50 пкг/мл значения показателя MD в 9 раз превосходили таковой параметр при BDNF выше 90 пкг/мл (Табл.4). Была получена также достоверная корреляция уровня изучаемого нейротрофического фактора со значениями PSD. Коэффициент корреляции составил 0,(P<0,05).

Таблица 4.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»