WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Во всех обследованных группах проведён сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов с использованием пакетов статистических программ STATISTICA v.6.0, BIOSYS-2, Microsoft Access, BIOSTAT (Primer of Biostatistics version 4.03). Частоты гаплотипов сцепленных локусов генов (CYP1A1, CYP1A2, EPXH1, GSTP1 и CAT) рассчитывали в программе “The EH software program” (Rockefeller University; New York, NY).

Разницу в распределении частот генотипов между группами рассчитывали с использованием критерия 2 с поправкой Йетса. При попарном сравнении частот аллелей и генотипов применяли точный критерий Фишера (Животовский Л., 1991). Ассоциацию генотипов, аллелей и гаплотипов c развитием заболевания выявляли, сравнивая выборки больных и здоровых индивидов по частоте одного признака с использованием критерия. Статистически значимыми считали различия при P < 0.05. Для исключения ошибки первого типа вводили поправку на множественность сравнений (Рcor).

Силу ассоциаций гено- и фенотипических характеристик изученных генов с риском развития профессионального хронического бронхита и ХОБЛ оценивали по значениям показателя отношения шансов (odds ratio, OR) (Schlesselman J., 1982).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ Полиморфизм генов ферментов монооксигеназной системы и антиоксидантной защиты в этнических группах Республики Башкортостан Исследованиями ряда авторов было показано, что в распределении частот полиморфных вариантов генов битрансформации ксенобиотиков, в том числе цитохромов P450, а также генов ферментов антиоксидантной защиты имеются межэтнические различия [Викторова Т.В., Хуснутдинова Э.К., 2003; Сибиряк С.В. с соавт., 2003]. Принимая во внимание неоднородную этническую структуру населения Республики Башкортостан, нами проведен анализ частот генотипов, аллелей и гаплотипов полиморфных маркеров генов ферментов микросомальной монооксигеназной системы (цитохрома Р450 1А1, 1А2, 2А6, 2Е1, микросомальной эпоксидгидролазы) и антиоксидантной защиты (глутатион-S-трансфераз, каталазы, НАДФ(Н)-хинон оксидоредуктазы, глутатионпероксидазы) в трёх этнических группах (русских, татар и башкир), проживающих в Республике Башкортостан.

Проведенный анализ полиморфизма генов монооксигензаной системы (CYP1A1, CYP1A2, CYP2A6, CYP2E1, EPHX1) и антиоксидантов (GSTM1, GSTT1, GSTP1, CAT, GPX1, NQO1) показал наличие генетического своеобразия этнических групп русских, татар и башкир.

Изучение частот гаплотипов гена CYP1A1 среди жителей Республики Башкортостан выявил значительные межэтнические различия (2=15.42, р=0.004). Попарное сравнение групп, показало, что этническая группа башкир статистически достоверно отличается по распределению частот гаплотипов гена CYP1A1 как от русских (2=12.33, р=0.008), так и от татар (2=9.23, р=0.034). Данные различия обусловлены довольно высокой частотой гаплотипа CYP1A1*2B, представляющего собой сочетание мутантных аллелей полиморфных вариантов 2455A>G и 3801Т>С гена CYP1A1 у башкир (10.17% против 2.94% у русских и 3.05% у татар).

Распределение частот гаплотипов гена CYP1A2 обнаружило достоверные различия между этническими группами здоровых жителей Республики Башкортостан (2=25.75, р=0.0001). Этническая группа башкир статистически достоверно отличалась как от русских (2=18.78, р=0.0001), так и от татар (2=14.33, р=0.003). Необходимо отметить, что в группе башкир частота гаплотипа CYP1A2*1D достигала 11.02%, в то время как у татар - только 2.36%, а в этнической группе русских он был выявлен у 1.61% обследованных (Рис.1).

русские татары башкиры 11,2,1,*1A *1F *1D *1L гаплотипы гена CYP1AРис.1. Распределение частот гаплотипов гена CYP1A2 в трёх этнических группах Республики Башкортостан Сравнение распределения частот аллелей гена CYP2A6 выявил статистически достоверные различия между этническими группами татар и русских (2=8.65, р=0.003), что обусловлено высокой частотой делеционного аллеля CYP2A6*4B в группе татар - 29.55%, тогда как у русских частота данного генотипа составила 16.81% (Рис.2).

При анализе распределения частот генотипов гена GSTM1 выявлены существенные отличия этнической группы башкир и от татар (2=4.63, р=0.03), и от русских (2=4.19, р=0.04). Нулевой генотип гена GSTM1 в группе башкир встречался с частотой 57.89%, тогда как у татар и русских частота его составляла 40.54% и 41.30%, соответственно.

частота, % 83,русские татары 70,29,16,*1A *4B аллели гена CYP2AРис.2. Распределение частот аллелей гена CYP2A6 в этнических группах русских и татар При изучении распределения частот генотипов локуса Ile105Val гена GSTP1 в этнических группах здоровых жителей Республики Башкортостан было показано, что этническая группа башкир достоверно отличалась от группы татар (2=8.20, р=0.02). Это было связано с высокой долей гетерозигот по данному локусу в группе башкир (53.97%).

Анализ распределения частот аллелей полиморфного локуса Pro197Leu гена GPX1 в группе здоровых жителей Республики Башкортостан выявил достоверные различия между изученными группами (2=6.04, р=0.05). Что было обусловлено увеличением доли аллеля Leu в этнической группе татар (30.22%), тогда как у русских и башкир частота его составила 21.15%, и 23.81%, соответственно.

Таким образом, при сравнении трех этнических групп жителей Республики Башкортостан нами были установлены существенные межэтнические различия по распределению частот гаплотипов гена CYP1A1 (2=15.42, р=0.004) и CYP1A2 (2=25.75, р=0.0001); частот аллелей делеционного полиморфизма гена CYP2A6 (2=8.65, р=0.003); а также частот аллелей полиморфизма Pro197Leu гена GPX1 (2=6.04, р=0.05). Результаты данного анализа будут положены в основу выделения генетических факторов риска предрасположенности к многофакторным заболеваниям в Республике Башкортостан.

Полиморфизм генов ферментов монооксигеназной системы у больных профессиональным хроническим бронхитом и ХОБЛ Проанализирована роль полиморфных вариантов генов ферментов монооксигеназной системы в развитии хронического обструктивного бронхита, частота, % вызванного воздействием как факторов производственной среды, так и сигаретного дыма.

При изучении особенностей распределения гаплотипов гена CYP1A1 в общей группе больных профессиональным хроническим бронхитом и здоровых рабочих показал, что гаплотип CYP1A1*1A является наиболее частым в обеих группах, однако его частота была достоверно выше в группе больных (85.40% против 76.49%, в группе здоровых рабочих, соответственно; 2=5.93, р=0.0155, pcor=0.0465; OR=1.80, 95%CI 1.11-2.91). Анализ частот гаплотипов с учетом этнической принадлежности больных выявил ассоциацию гаплотипа CYP1A1*1A с риском развития профессионального бронхита у башкир (2=5.94, р=0.0155, pcor=0.0465; OR=3.27, 95%CI 1.23-9.02).

Анализ распределения частот генотипов полиморфного локуса -2467Т>delT гена CYP1A2 выявил статистически значимые различия между общей выборкой больных профессиональным хроническим бронхитом и здоровыми рабочими (2=6.80, р=0.03). Это обусловлено преобладанием по частоте гомозиготного генотипа *1A*1A среди здоровых рабочих (75.90%), в сравнении с 65.64% у больных профессиональным бронхитом (2=4.51, р=0.03, рcor =0.06).

Генотип *1A*1D гена CYP1A1, напротив, чаще встречался у больных с профессиональным хроническим бронхитом. Показана рисковая значимость данного генотипа: OR=2.08, 95%CI 1.15–3.77 (2=6.07, р=0.01, рcor =0.02) (Рис.3, а).

Аллель CYP1A2*1D гена CYP1A2 в группе больных ХОБЛ маркирует риск развития заболевания как в общей группе больных (OR=1.38, 95%CI 1.07– 1.80), так и в этнической группе татар (OR=1.83, 95%CI 1.24-2.71, 2=9.48, р=0.003).

При исследовании частот гаплотипов по полиморфным локусам -163С>А и -2467Т>delT гена CYP1A2 установлено, что гаплотип CYP1A2*1D маркирует риск развития ХОБЛ как в общей группе больных (2=5.26, р=0.0223, рcor =0.0669, OR=2.01 95% CI 1.16-3.50), так и в группе больных, татар по этнической принадлежности (2=9.73, р=0.0027, рcor=0.008, OR=3.91, 95%CI 1.56-10.19). В тоже время гаплотип CYP1A2*1A, встречался достоверно реже как в общей группе больных (22.02% против 29.01%, в контрольной группе;

2=8.757, р=0.004, рcor =0.012), так и среди больных татар по этнической принадлежности (2=6.32, р=0.0127, рcor=0.038) (Рис.3, б).

75,51,50,63,OR=0.OR=2.OR=2.29,30,22,20,17,16,6,5,6,3,*1A*1A *1A*1D *1D*1D генотипы полиморфизма *1A *1F *1D *1L T-2467delT гена CYP1Aгаплотипы гена CYP1AХОБЛ здоровые индивиды Пхб здоровые рабочие а) б) Рис.3. Распределение частот генотипов и гаплотипов гена CYP1A2 в группах больных профессиональным хроническим бронхитом (а) и ХОБЛ (б) Изучение ассоциации маркеров гена CYP1A2 с развитием профессионального хронического бронхита и ХОБЛ ранее не проводилось.

Между тем, Sachse et al. (1999), было установлено, что вариант CYP1A2*1F полиморфизма-163С>A приводит к изменению каталитической активности фермента и увеличению его индуцибельности. Что же касается других вариантов этого гена, в частности CYP1A2*1D, то их функциональная значимость была не достаточно ясна. Pavanello S. et al. (2005) на большой группе курильщиков (N=95) была выявлена связь между активностью фермента и присутствием аллеля CYP1A2*D (Т-2467delT). Активность фермента у индивидов с вариантом CYP1A2*D была достоверно выше. Известно, что субстратами для CYP1А2 являются гетероциклические амины, ариламины и нитрозоамины, входящие состав сигаретного дыма, а курение модифицирует активность фермента CYP1А2. Полиароматические амины, присутствующие в сигаретном дыме выступают в качестве лигандов для Ah-рецептора, запускающих каскад реакций и приводящих к активации транскрипции гена.

Вероятно, полиморфизмы, локализованные в промоторе гена CYP1А2, могут модифицировать сайт связывания гетеродимера Ah-рецептора с транслокатором (комплекс AhR/Arnt), локализованного между участками -и -2000 промотора, что, возможно, приводит к увеличению индукции CYP1Акомпонентами табачного дыма [Pavanello S. et al. 2005].

В группе больных ХОБЛ и соответствующей группе сравнения, нами изучен делеционный полиморфизм 8-го экзона гена CYP2A6, белковый продукт частота,% частота,% которого катализирует процесс окисления никотина - основного соединения, который вызывает и поддерживает табачную зависимость, в котинин [Messina E.S. et al, 1997; Malaiyandi V. Et al, 2005]. Было показано, что аллель CYP2A6*1A достоверно чаще встречался в группе больных ХОБЛ (2=13.09, р=0.001, OR=2.43, 95%CI 1.47-4.00), тогда как делеционный аллель CYP2A6*4В достоверно чаще выявлялся среди здоровых жителей РБ, татар по этнической принадлежности (Рис.4).

OR=2.85,70,45 OR=0.29,14,*1A *4B аллели гена CYP2AХОБЛ здоровые индивиды Рис.4. Распределение частот аллелей делеционного полиморфизма гена CYP2A6 в группе больных ХОБЛ и здоровых индивидов Исследования ряда авторов показали, что присутствие делеционного аллеля гена CYP2A6 продлевает период полураспада никотина от двух до одиннадцати часов [Yamanaka H. et al, 2004]. Поэтому, предполагается, что носители этого аллеля курят реже и меньше и, возможно, именно это играет протективную роль в развитии ХОБЛ [Miyamoto M. et al, 1999; Minematsu N et al, 2003].

Нами изучены полиморфизмы 337Т>С в 3-м экзоне и 415А>G в 4-м экзоне гена EPHX1. Исследованные полиморфизмы 3 и 4 экзонов гена EPHX1 четко коррелируют с уровнем ферментативной активности микросомальной эпоксидгидролазы in vitro [Hassett C. et al., 1994]. Различные комбинации генотипов по двум локусам формируют разный уровень активности фермента.

Описано 4 фенотипа фермента: быстрый (F, fast), нормальный (N, normal), медленный (S, slow) и очень медленный (SS, very slow) [Hassett C. et al., 1994].

Анализ распределения частот фенотипов микросомальной эпоксидгидролазы показал, что в случае профессионального бронхита фактором риска развития заболевания в этнической группе русских является фенотип частота, % нормального метаболайзера (N) (2=7.34, р=0.008, рcor=0.024; OR=3.30, 95%CI 1.35-8.23) (Рис.5а).

76,80 52,OR=1.45,OR-3.40 34,26,28,19,21,17,16,6,2,1,N F S N F S SS фенотипы гена EPHXфенотипы гена EPHXПхб здоровые рабочие ХОБЛ здоровые индивиды а) б) Рис.5. Распределение частот фенотипов гена EPHX1 в группах больных профессиональным хроническим бронхитом (этническая группа русских) (а) и ХОБЛ (общая группа) (б) Риск развития ХОБЛ ассоциировал с присутствием медленного фенотипа (OR=1.57, 95%CI 1.13-2.18). В тоже время нормальный фенотип микросомальной эпоксидгидролазы чаще встречался среди здоровых индивидов, что позволяет рассматривать его как фактор устойчивости к развитию заболевания (52.84% против 45.54% в контрольной группе, 2=7.71, р=0.006, рcor=0.018; OR=0.66, 95%CI 0.48-0.89) (Рис.5б).

По полиморфному локусу -1091C>T гена CYP2E1 достоверных ассоциаций с развитием профессионального бронхита или ХОБЛ получено не было.

Таким образом, в результате анализа выявлены ассоциации полиморфных вариантов генов цитохрома Р450 (CYP1A1, CYP1A2, CYP2A6), и микросомальной эпоксидгидролазы (EPHX1) с предрасположенностью к развитию профессионального хронического бронхита и ХОБЛ.

частота,% частота, % Полиморфизм генов ферментов антиоксидантной защиты у больных профессиональным хроническим бронхитом и ХОБЛ Окислительный стресс, развивающийся в результате избыточного накопления активированных форм кислорода (АФК) – важнейший этиологический и патогенетический фактор развития хронического обструктивного бронхита. Контроль за интенсивностью и продолжительностью свободнорадикальной реакции осуществляет система антиоксидантной защиты, характеризующаяся высокой специфичностью, к которой относятся супероксиддисмутаза, каталаза, глутатион-зависимые пероксидазы и трансферазы [Зенков Н.К. и соавт, 2001; Rahman I., 2006].

В нашем исследовании проанализирована роль полиморфных вариантов генов ферментов антиоксидантной защиты (глутатион-S-трансфераз М1, Т1, Р1, каталазы, глутатионпероксидазы, НАДФ(Н)-хинон оксидоредуктазы) в развитии профессионального хронического бронхита и ХОБЛ.

Изучение частот гаплотипов по полиморфным локусам Ile105Val и Ala114Val гена GSTP1 показал, что гаплотип GSTP1*D, является маркером риска развития ХОБЛ как в общей группе больных (2=10.84, р=0.0018, pcor=0.0054; OR=2.16 95%CI 1.34-3.48), так и в этнической группе татар (2=6.77, р=0.01; pcor=0.03; OR=2.80 95%CI 1.25-6.38).

В респираторном тракте ген GSTP1 экспрессируется в эпителиальных клетках, альвеолярных макрофагах и бронхиолах и составляет 83% от всего пула легочных глутатион-S-трансфераз [Watson M.A. et al, 1998]. Поэтому снижение активности фермента, связанное с присутствием гаплотипа GSTP1*D, возможно, приводит к развитию цепных свободнорадикальных процессов и сдвигу окислительно-восстановительного баланса в сторону окислительного стресса.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»