WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

доказательством внутриутробного инфицирования. Эти данные Положения, выносимые на защиту подтверждают как антенатальный, так и интранатальный путь 1. Возбудители УГИ (C.trachomatis, M.hominis, U.urealyticum) широко инфицирования плода, что соответствует наблюдениям у людей [Цинзерлинг распространены среди клинически здоровых обезьян разных видов.

А.В., Вуду Г.А., 1989; Малкова Е.М., Гавалов С.М. с соавт., 2005]. Таким Бессимптомное носительство возбудителей УГИ в 22,7% случаев образом, наши исследования показали, что детеныши, рожденные от сопровождается бесплодием.

инфицированных самок, относятся к группе обезьян с повышенным риском 2. При патологии беременности и родов возрастает инфицированность УГТ заражения возбудителями УГИ. обезьян возбудителями УГИ при одновременном нарастании частоты микстРезультаты проведенных исследований обосновывают необ- форм.

ходимость строгого контроля обезьян на носительство возбудителей УГИ как 3. Детеныши, рожденные от инфицированных матерей, относятся к группе при формировании производственного стада, так и при использовании этих обезьян с повышенным риском развития патологических процессов, животных в медико-биологических экспериментах. вызываемых возбудителями УГИ.

28 Публикации Как видно из табл.8, число инфицированных возбудителями УГИ при По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 2 в пневмопатии составило 53,8%, при гипотрофии 50%, у мертворожденных - журналах, рекомендованных ВАК. 35,2%.

Объем и структура диссертации Таблица Диссертационная работа изложена на 104 страницах компьютерного Инфицированность детенышей обезьян возбудителями УГИ при различных патологических состояниях текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована Число инфицированных деКол-во Виды патологии тенышей таблицами и 8 рисунками. Библиографический указатель включает детенышей абс. % источника (79 – отечественных и 55 –иностранных авторов).

мертворождение 17 6 35,пневмопатия 26 14 53,СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

пневмония 2 2 Материалы и методы исследования гипотрофия 4 2 травмы В настоящей работе все обследованные обезьяны, являются 4 2 акклиматизированными и содержатся в открытых вольерах площадью 200- патология ЖКТ 2 0 1000м2 по 30 – 50 особей или в групповых клетках по 5-7 голов. Вольеры и Всего 55 26 47,клетки имеют зимние домики с центральным отоплением и водоснабжением.

Обезьяны получают гранулированные корма, сбалансированные по всем У 6 из 17 мертворожденых обезьян разных видов методом имингредиентам, а также овощи и фрукты.

мунофлюоресценции практически во всех паренхиматозных органах определяли Объектом исследования служили 346 низших африканских (павианы наличие возбудителей УГИ (C.trachomatis, M.hominis, U.urealyticum), что гамадрилы, павианы анубисы, зеленые мартышки) и азиатских (макаки свидетельствует о генерализации инфекционного процесса. На основании этих яванские, макаки резусы, макаки лапундеры) обезьян обоего пола и данных мы предполагаем, что мертворождения связаны с внутриутробным различного возраста (от нескольких дней и до 25 лет), наиболее часто инфицированием плода. Возбудители УГИ регистрировались как в виде используемые в экспериментальных медико-биологических исследованиях.

моноинфекции, обусловленной C.trachomatis, так и смешанной, обусловленной Из обследованных обезьян разных видов, были составлены M.hominis и U.urealyticum.

следующие группы:

В группе погибших от пневмопатии так же как и у мертворожденных, 1) группа здоровых обезьян (без клинических симптомов мы наблюдали диссеминацию возбудителей УГИ в паренхиматозные органы урогенитальной патологии) разных видов распределена по полу;

(легкие, почки, печень, селезенку).

10 носителей, так и у обезьян с патологией урогенитального тракта. Сероло- 2) группа больных и погибших самок с патологией беременности гические исследования подтверждают высокую степень инфицированности и родов (аборты, патологические роды, мертворождения);

УГТ обезьян хламидиями. 3) группа погибших детенышей с различной патологией (пневмопатия, пневмония, гипотрофия) (табл.1).

Этиологическая роль возбудителей УГИ в неонатальной патологии По заключению клинико-ветеринарного отдела с диагностической обезьян. лабораторией к здоровым обезьянам (без клинических симптомов Для выяснения этиологической связи возбудителей УГИ с урогенитальной патологии) были отнесены активные животные, хорошо патологией новорожденных были обследованы детеныши разных видов поедающие предлагаемую пищу, с блестящим шерстным покровом, розовыми обезьян, рожденные от инфицированных и здоровых самок. Всего видимыми слизистыми, с нормальными показателями функций сердечнообследовано 55 детенышей, в том числе 17 мертворожденных и 38 погибших сосудистой, дыхательной систем и желудочно-кишечного тракта.

в течение 1 месяца жизни после рождения. К таковым относятся: 21 макаков Таблица резус, 13 макаков яванских, 2 зеленые мартышки, 1 макак лапундер, 15 Группы обследованных обезьян Погиб павианов гамадрилов, 3 павиана анубиса.

С патологией Здоровые шие беременности и родов Виды Общее Образцами для исследования являлись кровь из сердца, мазки из обезьян кол-во детены конъюнктивы глаз и задней стенки глотки (60 образцов), а также отпечатки Больные Погибшие ши органов (легкое, печень, селезенка, почка - 68 образцов), и того от 55 обезьян Макаки исследовано 128 проб материала. В 60 образцах, исследованных методом резусы 122 53 18 22 8 ПЦР, в 18,3 % случаев обнаружены возбудители УГИ. Из 68 образцов Макаки отпечатков, исследованных методом прямой иммунофлюоресценции, в яванские 87 33 4 27 10 случаях (76,4%) были определены возбудители УГИ, в том числе M.hominis в Макаки 30,8% случаев, U.urealyticum в 27,9% и C.trachomatis в 17,6%.

лапундеры 35 25 - 7 2 По данным патоморфологического исследования, из 38 детенышей, Зеленые погибших в течение первого месяца жизни, 28 погибли от пневмопатий и мартышки 16 9 5 - - пневмоний, 4 - с признаками гипотрофии, 4 – вследствии травм, 2 – при Павианы патологии желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).

гамадрилы 83 40 13 9 6 Из 55 исследованных детенышей у 26 обнаружены возбудители УГИ Павианы (C.trachomatis, M.hominis и U.urealyticum), что составило 47,2% (табл.8).

анубисы 3 - - - - Всего 346 160 40 65 26 26 Материалом для исследования служили соскобы из уретры самцов, Показано, что антитела классов Ig G и Ig М чаще обнаруживали у соскобы эпителиальных клеток влагалища здоровых самок и самок с больных, чем у клинически здоровых самок. У 10 из 13 больных самок урогенитальной патологией, а также соскобы, взятые из цервикального выявлялись одновременно антитела классов Ig G и Ig М к U.urealyticum.

отдела и полости матки погибших самок. У погибших детенышей На предмет обнаружения общих специфических хламидийных исследовали соскобы из конъюнктивы глаза, задней стенки глотки и антител были исследованы сыворотки крови 24 обезьян (17 самок и паренхиматозные органы (легкое, печень, селезенка, почка). В ряде случаев самцов). 12 обезьян были здоровыми и 12 – с патологией беременности и для серологического исследования использовали сыворотки крови здоровых родов (аборт, патологические роды, внутриутробная гибель плода). Антитела и больных обезьян. к хламидиям определяли в РНГА (табл 7). В 12 из 24 проб сывороток (50%) При осмотре и взятии материала для исследования у самцов и самок с антитела были обнаружены в диагностических титрах (1:80 – 1:160).

патологией беременности и родов использовали транквилизаторы (калипсол, Полученные данные, в зависимости от клинического состояния обезьян, кетамин). показали, что частота обнаружения антител у клинически здоровых При выполнении исследования руководствовались Правилами животных несколько ниже, чем у обезьян с патологией беременности и родов гуманного обращения с лабораторными животными (2003 г). - 41,6% и 58,3% соответственно.

Таблица МЕТОДЫ Выявление специфических хламидийных антител в сыворотке крови здоровых и больных обезьян Количество обезьян Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для подготовки и Группы обезьян с обнаружением антител проведения метода ПЦР использовали коммерческие наборы производства абс. % НПФ «Литех» и «Биоком» (г. Москва), гарантирующие высокую диагностическую эффективность, особенно при персистентных инфекциях.

Здоровые (n =12) 5 41,6±2,Данная реакция состоит из трех этапов: экстракции ДНК из исследуемого Больные (n =12) 7 58,3±1,материала, постановки ПЦР – амплификация участков ДНК и электрофоретический анализ продуктов ПЦР, которые проводили строго по Всего (n =24) 12 50±1,указанному протоколу, с обязательным набором контрольных образцов.

Методом прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) проводили Таким образом, полученные данные свидетельствуют о частоте прямую идентификацию антигенов хламидий и микоплазм, с помощью тестраспространения представителей класса Mollicutes (M.hominis, U.urealyticum) систем ХлаМоноСкрин, МикогомоФлюоСкрин и УреагениФлюоСкрин, среди обезьян, что подтверждается обнаружением специфических антител и выпускаемых в Москве ЗАО «Ниармедик плюс» при институте им. Н.Ф.

антигенов в сыворотке крови, как у клинически здоровых (бессимптомных) Гамалеи, по прилагаемой инструкции. Данная реакция флюоресцирующими 12 Таблица 5 моноклональными антителами в люминесцентном микроскопе представляет Данные серологического обследования обезьян (n=51) на наличие собой высокочувствительный и специфический тест, отличается простотой и антигенов и антител к M. hominis и U. urealyticum воспроизводимостью.

Количество обезьян в сыворотке крови Реакцию агрегат-гемагглютинации (РАГА) разработанную которых обнаружены лабораторией микоплазм и L-форм бактерий при институте им. Н.Ф.Гамалеи, Методы Выявлены антитела к антитела к использовали для выявления антигенов микоплазм в сыворотке крови исследования M. hominis U. urealyticum больного в концентрации 0,001-0,0001 мкг/мл (по белку). Особенность РАГА абс. % абс. % заключается в том, что для стабилизации эритроцитов и агрегированных ИФА: Ig G 16 31,3±6,4 32 62,7±6,белков иммунной сыворотки использовали глутаровый альдегид (ГЛА), при ИФА: Ig M 21 42,0±6,9 30 58,8±6,этом антитела вводятся в состав трехмерных белковых комплексов, антитела РПГА 8 15,6±5,0 8 15,6±5,вследствие чего часть активных центров антител отделяется от поверхности антигены РАГА 16 33,3±6,6 22 43,1±6,эритроцита и становится более доступной для детерминант антигена.

Реакцию ставили в планшетах микротитратора «Такаччи» с V-образными лунками. Учет полученных результатов производили по 4-х крестной Из всех серологически обследованных самок (41 обезьяна) у 13 в системе. Титр при неспецифическом взаимодействии обычно не превышает анамнезе были спонтанные аборты, мертворождения, патологические роды и 1:4. Минимальный диагностический титр 1:8.

др. Остальные 28 обезьян были клинически здоровы. В табл. 6 представлены Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), для определения результаты их обследования.

хламидийных антител у обезьян, проводили с помощью хламидийного Таблица Обнаружение Ig G и Ig M антител в сыворотке крови здоровых и эритроцитарного диагностикума производства ФГУП НПО «Микроген» МЗ больных обезьян (самок) методом ИФА РФ. В составе набора - ампулы с диагностикумом хламидийным, с Кол-во особей, имевших антитела к диагностикумом контрольным и хламидийной антисывороткой. РНГА Группы M. hominis U. urealyticum проводили микрометодом в планшетах для иммунологических реакций обезьян одноразового использования. Минимальный диагностический титр 1:80.

Ig G Ig M Ig G Ig M Реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА), разработанную абс. % абс. % абс. % абс. % Здоро- лабораторией микоплазм и L-форм бактерий при институте им. Н.Ф.Гамалеи, 6 21,5 12 42,8 14 50 35,вые ±7,6 ±9,2 ±9,4 ±8,6 использовали для выявления специфических антител к микоплазмам. Для (n =28) постановки реакции используют стабилизированные и активированные Боль7 53,8 6 46,1 84,6 92,ные 11 глутаровым альдегидом эритроциты человека, имеющего 0 (1) группу крови ±13,6 ±13,6 ±9,8 ±23,(n=13) резус-отрицательную, сенсибилизированные растворимым антигеном 24 микоплазм, который представляет собой центрифугат ультразвукового специфических антител методом РПГА, а также антигенов данных дезинтегратора биомассы микоплазм (2108 КОЕ/мл). Постановку реакции микроорганизмов в пробах сыворотки крови здоровых обезьян и с патологией осуществляли в планшетах микротитратора «Такаччи». Учет полученных ре- беременности и родов с помощью метода РАГА.

зультатов производили по 4-х крестной системе. Диагностический титр – Как следует из табл. 5, Ig M антитела к M.hominis выявляли в 1:32. большем проценте случаев, чем Ig G антитела (42,0% и 31,3% соотИммуноферментный анализ (ИФА) проводили с помощью тест- ветственно). При этом у 8 обезьян антитела этих двух классов были системы ООО «Ниармедик плюс» (г. Москва) для выявления обнаружены одновременно. В ИФА титры Ig G антител колебались в иммуноглобулинов IgG и IgM к антигенам микоплазм, которая основана на пределах 1:400-1:3200, Ig М антител - 1:800-1:1600.

применении непрямого иммуноферментного анализа на твердой фазе с Частота обнаружения антител классов Ig G- и Ig М к U.urealyticum использованием пероксидазы хрена в качестве маркерного фермента. составила 62,7% и 58,5% соответственно. При этом в 22 случаях были Подготовка реагентов, проведение иммуноферментного анализа и учет выявлены антитела этих двух классов. Титры антител класса Ig М колебались результатов производили строго по инструкции и регистрировали с помощью в пределах от 1:800 до 1:1600, Ig G 1:200 – 1:3200. Антигены U.urealyticum спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) на длине волны 492 были выявлены в РАГА в 43,1% случаев.

нм. Следует отметить, что частота обнаружения антител к U.urealyticum При выполнении данного исследования было проведено 1127 достоверно выше (p0,01), чем к M.hominis.

анализов: 70 бактериологических, 642 молекулярно-генетических, 215 Высокая частота обнаружения антител класса Ig M, как к M.hominis иммунофлюоресцентных, 200 серологических проб. так и к U.urealyticum, может свидетельствовать о недавно начавшемся Статистическую обработку полученных данных проводили в инфекционном процессе у обезьян, течение которого в большей части соответствии с общепринятыми методами по Ашмарину И.П. и Воробьеву случаев не имеет выраженных клинических симптомов.

А.А. При статистическом анализе выполняли межгрупповые сравнения с В РПГА специфические антитела обнаруживали в 15,6% случаев, т.е.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»