WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||

Полученные кристаллические структуры ФДГ из разных источников Фермент Разрешение, Конформация Состояние ФДГ из Pseudomonas sp.апо-форма 1,8 открытая решена апо-форма 2,1 открытая решена [ФДГ+NAD++N3 ] 2,05 закрытая решена [ФДГ+ADPR] 1,5 открытая решена [ФДГ+формиат] 2,19 открытая решена [ФДГ+формиат] 2,28 открытая решена ФДГ из Pseudomonas sp.101 (GAV) апо-форма 2,3 открытая решена [ФДГ+NADH+формиат] 2,3 открытая решена ФДГ из Pseudomonas sp.101 (T7) апо-форма 2,3 открытая решена ФДГ из Arabidopsis thaliana апо-форма н/д н/д получены кристаллы [ФДГ+NAD++N3 ] 2,1 закрытая в процессе уточнения ФДГ из Moraxella sp.C-апо-форма 2,3 открытая решена [ФДГ+NAD++N3 ] 1,95 закрытая решена [ФДГ+NAD++N3 ] 1,1 закрытая в процессе уточнения [ФДГ+NAD++N3 ] 1,37 закрытая в процессе уточнения [ФДГ+NAD+] 1,4 закрытая в процессе уточнения [ФДГ+NAD+] 1,75 закрытая в процессе уточнения [ФДГ+NADH] 1,9 закрытая в процессе уточнения - 22 ВЫВОДЫ 1. Впервые проведена экспрессия растительных ФДГ в клетках E.coli в виде активных растворимых ферментов. Получены высокоочищенные препараты рекомбинантных ФДГ из Arabidopsis thaliana и Glycine max, изучены их кинетические свойства. Показано, что фермент из сои имеет наиболее низкие значения Кm по обоим субстратам;

2. Проведено исследование стабильности формиатдегидрогеназ из источников с помощью ДСК, КД-спектроскопии и изучения кинетики инактивации.

Показано, что тепловая денатурация исследованных ФДГ (кроме SceФДГ) протекает в одну стадию и является необратимым процессом. В случае ФДГ из S.cerevisiae процесс термоденатурации состоит из двух стадий, причем первая стадия является обратимой, а вторая – необратимой;

3. Различными методами определены количественные характеристики процесса теплового перехода при денатурации белковой глобулы формиатдегидрогеназ;

4. Изучено влияние ионной силы и присутствия кофермента (NAD+) и ингибитора (N3 ) на процесс денатурации. Показано, что повышение ионной силы, а также связывание ФДГ в двойной комплекс с [ФДГ+NAD+] и, особенно, тройной комплекс [ФДГ+NAD++N3 ] приводит к значительной стабилизации фермента;

5. Получены и решены кристаллические структуры различных форм исследуемых формиатдегидрогеназ.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи:

1. Садыхов Э.Г., Серов А.Е., Ясный И.Е., Войнова Н.С., Алексеева А.А., Петров А.С., Тишков В.И. NAD+-зависимые формиатдегидрогеназы из Arabidopsis thaliana и сои: экспрессия в клетках E.coli и кинетические свойства рекомбинантных ферментов. Вестник Московского Университета, Серия 2. Химия, 2006, т. 47, N1, с.31-2. Садыхов Э.Г., Серов А.Е., Войнова Н.С., Угланова С.В., Петров А.С., Алексеева А.А., Клейменов С.Ю., Попов В.О., Тишков В.И. Сравнительное исследование термостабильности формиатдегидрогеназ из микроорганизмов и растений. Прикладная биохимия и микробиология 2006, т.42, № 3, c.269-3. Тишков В.И., Ясный И.Е., Садыхов Э.Г., Маторин А.Д., Серов А.Е. Исследование термостабильности мутантных NADP+-зависимых формиатдегидрогеназ из Pseudomonas sp.101. Доклады Академии Наук 2006, т.409, №2, с. 271-4. Филиппова Е.В., Поляков К.М., Тихонова Т.В., Стеханова Т.Н., Бойко К.М., Садыхов Э.Г., Тишков В.И., Попов В.О. Кристаллическая структура комплексов NAD+-зависимой формиатдегидрогеназы из метилотрофных бактерий Pseudomonas sp.101 с формиатом. Кристаллография 2006, т.51. №4, c.663-- 23 Тезисы:

1. Sadykhov E.G., Serov A.E., Kleymenov S.Yu., Labrou N.E., Popov V.O., Tishkov V.I. Study of thermal stability of formate dehydrogenases from bacterium and yeasts using differential scanning microcalorimetry. Congress Proceedings of the III Moscow International Congress «Biotechnology: State of the Art and Prospects Development», Moscow, March 14-18, 2005, Part 2, p.2. Садыхов Э.Г., Серов А.Н, Левицкий Д.И., Попов В.О. и Тишков В.И. Изучение термостабильности формиатдегидрогеназы из Saccharomyces cerevisiae методом дифференциальной сканирующей калориметрии. Материалы Международной конференции студентов и аспирантов «Ломоносов 2004», т. 1, с.3. Sadykhov E.G., Serov A.E., Yasny I.E., Voynova N.S., Alekseeva A.A., Petrov A.S., Tishkov V.I. NAD+-dependent formate dehydrogenases from Arabidopsis thaliana and soya Glycine max: expression in E.coli cells and kinetic properties. Abstracts of International Conference «Biocatalysis 2005. Fundamentals and Applications», St.Petersburg, Russian Federation, June 19-23, 2005, p.4. Sadykhov E.G., Serov A.E., Levitsky D.I., Popov V.O., Tishkov V.I. Study of thermal stability of recombinant formate dehydrogenases from Pseudomonas sp.101 and Arabidopsis thaliana using differential scanning microcalorimetry. Abstracts of International Conference «Biocatalysis 2005. Fundamentals and Applications», St.Petersburg, Russian Federation, June 19-23, 2005, p.5. Filippova E.V., Polyakov K.M., Tikhonova T.V., Sadykhov E.G., Stehanova T.N., Boiko K.M., Tishkov V.I., Lamzin V.S., Popov V.O. Crystal structure of formate dehydrogenase from Pseudomonas sp.101 in complex with formate. Abstracts of International Conference «Biocatalysis 2005. Fundamentals and Applications», St.Petersburg, Russian Federation, June 19-23, 2005, p.6. Tishkov V.I., Sadykhov E.G., Serov A.E., Kleymenov S.Yu., Popov V.O.

Characterization of stability of wild-type and mutant formate dehydrogenases by differential scanning calorimetry. Materials of Intern. Simposium «Biotrans 2005.

The Key to Industrial Biotechnology», Delft, July 3-8, The Netherlands, p.Структуры, депонированные в банке трехмерных структур белков PDB:

1. Filippova E.V., Polyakov K.M., Tikhonova T.V., Shabalin I.G., Sadykhov E.G., Tishkov V.I., Popov V.O. NAD-dependent formate dehydrogenase from bacterium Moraxella sp.C-1 in complex with NAD and azide (код - 2GSD) – http://www.pdb.org/pdb/explore/explore.dostructureId=2GSD РАБОТА БЫЛА ВЫПОЛНЕНА ПРИ ФИНАНСОВОЙ ПОДДЕРЖКЕ:

• Российского Фонда Фундаментальных Исследований (проект № а-05-0449073);

• NATO (грант LST.CLG 979818);

• Федерального агентства по науке и инновациям (государственный контракт №02.467.11.3004);

• Программы Президиума РАН ”Молекулярная и клеточная биология”.

- 24

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»