WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 |

Если на первом этапе анализ содержания антител к ЦМВ проводился полуколичественным методом с использованием тест-системы ВектоЦМВ-IgGстрип, имеющий нормативный документ (ФСП) с представлением результатов в виде титра (степени разведения препарата), то в дальнейшем была применена тестсистема, имеющая внутренний стандарт и позволяющая определять титр антител в МЕ/мл - ДС-ИФА-анти-ЦМВ-G.

При сравнении содержания антител, определяемых с использованием этих тест-систем, обращает на себя внимание разброс значений, выраженных в МЕ/мл при одном и том же разведении образцов (табл. 1).

Таблица Определение анти-ЦМВ антител в препаратах иммуноглобулинов с использованием двух различных тест-систем Содержание анти-ЦМВ-антител по данным:

Наименование препарата «ВектоЦМВ-IgG- "ДС-ИФА-анти-ЦМВстрип» G", M+m 1 Габриглобин-анти-ЦМВ с. 1 1:6400 51,3 + 1,2 Габриглобин-анти-ЦМВ с. 2 1:6400 58,8 + 1,3 Габриглобин-анти-ЦМВ с. 3 1:12800 66,4 + 1,4 Цитотект с. 144081, 10 % 1:6400 51,2 + 1,Противоцитомегаловирусный иммуноглобулин для 5 внутривенного введения 1:12800 72,7 + 2,(Кировский НИИГПК, экспериментальный образец) ОСО № 42-28-371-03 с 6 содержанием антител к ЦМВ 1:400 5,3 + 0,5 МЕ/мл Так, если титр антител препаратов "Габриглобин-анти-ЦМВ" с. 1 и с. 2 был 1:6400 («ВектоЦМВ-IgG-стрип»), то при анализе этих же образцов тест-системой "ДС-ИФА-анти-ЦМВ-G" были получены значения 51,3 и 58,8 МЕ/мл.

Аналогичная картина наблюдалась при разведении препаратов 1:12800: у препарата "Габриглобин-анти-ЦМВ" с. 3 содержание антител по данным, полученным в тестсистеме "ДС-ИФА-анти-ЦМВ-G", составило 66,4, а у экспериментального образца анти-ЦМВ-иммуноглобулина, произведенного в Кировском НИИГПК – 72,МЕ/мл. Эти результаты свидетельствуют, что для грубой оценки содержания антител (в связи с большим шагом разведения проб) может быть использована тестсистема «ВектоЦМВ-IgG-стрип», а если необходимо получение более точных результатов, лучше применять тест-систему "ДС-ИФА-анти-ЦМВ-G", содержащую внутренний стандарт, калиброванный по ОСО № 42-28-371-03.

Сравнение препарата габриглобин-анти-ЦМВ с коммерческим аналогом - препаратом цитотект («Biotest Pharma», Германия) показало, что габриглобин не уступает по специфической активности зарубежному образцу (табл. 1). После согласования нормативной документации предполагается проведение клинических испытаний препарата при различных формах ЦМВ-инфекции.

Положительные результаты, достигнутые при фракционировании плазмы с высоким титром таких лабильных антител подкласса IgG3, какими являются антитела к ЦМВ, позволили разработать общую технологию фракционирования плазмы для получения препаратов "Габриглобин" и "Габриглобин-анти-ЦМВ" (рис.

4). Схема включает карантинизацию плазмы, тестирование на вирусные маркеры, спиртовое фракционирование, концентрирование фильтрата «Б» ультрафильтрацией при величине рН 4,2, стадию снижения антикомплементарной активности (диализ-диафильтрация), первую вирусинактивацию (выдерживание при рН 4,2 в течение 21 суток), высушивание, вторую вирусинактивацию (прогрев при 60 оС в течение 72 ч), контроль, упаковку и маркировку. Промышленное производство препарата организовано на Ивановской областной станции переливания крови.

Клинические испытания габриглобина при врожденных гуморальных иммунодефицитах.

Располагая официально выпускаемым препаратом с содержанием, по данным колоночной хроматографии, мономерного иммуноглобулина G 98-99 %, мы должны были убедиться в его терапевтических возможностях.

Карантинизированная плазма Карантинизированная плазма не менее чем от 1000 доноров с высоким титром к ЦМВ антинизированная плазма не Тестирование на вирусные маркеры Спиртовое фракционирование Концентрирование фильтрата «Б» ультрафильтрацией при величине рН 4,Стадия снижения антикомплементарной активности (диализ-диафильтрация) Вирусинактивация 1:

выдерживание при рН 4,2 в течение 21 суток Высушивание Вирусинактивация 2:

прогрев при 60 оС в течение 72 ч Контроль, упаковка, маркировка Габриглобин Габриглобин-анти-ЦМВ Рис. 4. Производственная схема получения препаратов "Габриглобин" и "Габриглобин–анти-ЦМВ" Абсолютным показанием для назначения иммуноглобулина является первичный гуморальный иммунодефицит /Кострова О.М., Алешкин В.А., 1995;

Сетдикова Н.Х. и соавт., 2004; Goldman A.S., Goldblum R.M, 1977/. При этом выявляются все преимущества и недостатки того или иного коммерческого препарата иммуноглобулина: скорость достижения уровня циркулирующего IgG в сыворотке крови, длительность сохраняющейся концентрации и частота побочных реакций. Клиническая эффективность внутривенных иммуноглобулинов напрямую связана со степенью повреждения молекулы иммуноглобулина во время процедуры получения коммерческого препарата.

Клинические испытания выполнены в рамках "Протокола открытого одноцентрового исследования безопасности и клинической эффективности препарата "Габриглобин" у взрослых с агаммаглобулинемией", утвержденного Фармакологическим комитетом МЗ РФ (протокол № 8 от 4.12.03) в отделении иммунопатологии (заведующая – д.м.н. Латышева Т.В.) ГНЦ "Институт иммунологии МЗ РФ". Все больные (10 пациентов) до начала лечения получали заместительную терапию: плазмой (2 человека) и иммуноглобулинами для внутривенного введения отечественного производства (г. Нижний Новгород и г. Уфа) - человек. Несмотря на проводимую заместительную терапию у больных сохранялось значительное снижение концентрации IgG и полностью отсутствовали иммуноглобулины классов М и А. Только у одного больного присутствовало остаточное количество иммуноглобулинов А и М (табл. 2).

Таблица Содержание иммуноглобулинов (мг%) в сыворотке крови у больных с агаммаглобулинемией до начала лечения габриглобином Иммуно- Норма, Больные (n = 10) глобулины мг% 1 2 3 4 5 6 7 8 9 IgG 900-1800 214 268 32 39 109 838 0 478 202 IgA 100-300 0 0 0 0 0 0 0 0 0 IgM 80-250 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Габриглобин вводили в разовой дозе 0,6 г/кг массы тела трехкратно с интервалом 3 недели. Ни у одного больного не было зарегистрировано каких-либо системных реакций. За время применения габриглобина больными агаммаглобулинемией в течение 3-х месяцев отмечалось сокращение частоты рецидивов хронических заболеваний, что вело за собой сокращение потребности и длительности применения антибактериальной терапии. Так, например, перед началом лечения четверо больных нуждались практически в постоянном приеме антибиотиков в связи с непрерывно рецидивирующим воспалительным процессом, в последующие 2 месяца только один больной нуждался в антибактериальной терапии.

Уже на первый день после введения габриглобина отмечалось значительное повышение концентрации иммуноглобулина G в сыворотке крови, в среднем в 2-3 раза, а у некоторых больных - в 5-6 раз. Начало снижения достигнутой концентрации иммуноглобулина G в сыворотке крови наблюдалось лишь на 15-й день после введения препарата (рис. 5).

Обращает на себя внимание увеличение максимальной достигнутой концентрации иммуноглобулина G в крови больных с каждым последующим циклом применения габриглобина. Так, если у пациента № 3 до начала лечения концентрация иммуноглобулина в крови была 32 мг%, то максимальная концентрация IgG в крови после первого курса введения препарата составила мг%, после второго курса – 604 мг%, а после третьего введения – 718 мг%, постепенно снижаясь к окончанию лечения. Аналогичная картина наблюдалась у всех других пациентов (рис. 5).

Таким образом, длительность сохранения повышенной концентрации IgG в крови больных агаммаглобулинемией после введения габриглобина составляет более 21 суток (3 недели).

Необходимо отметить, что препарат "Габриглобин" был успешно использован для терапии вирусных инфекционных заболеваний: при так называемом "синдроме атипичной пневмонии", при невынашивании беременности, связанной с цитомегаловирусной инфекцией, и при лечении вирусного энцефалита, вызванного вирусом Эпштейна-Барр.

Синдром атипичной пневмонии (SARS) – острое вирусное заболевание, вызванное, как предполагают, мутированным корона- или парамиксовирусом, характеризующееся преимущественным поражением легочной ткани и высокой смертностью.

Динамика концентрации иммуноглобулина G в крови больных агаммаглобулинемией (n=10) До 1 2 5 10 15 21 1 2 5 10 15 21 1 2 5 10 Дни после применения габриглобина Рис. Концентрация IgG, мг% По одним данным, перенесенное заболевание не дает полноценного иммунитета, так как в крови у некоторых переболевших атипичной пневмонией повторно обнаруживается возбудитель заболевания. По другим сведениям, сыворотка крови от переболевших больных способствует более легкому течению заболевания и значительно снижает смертность. В нашей стране зарегистрирован случай данного заболевания у больного С., 25 лет, в г. Благовещенске Амурской области.

Располагая отечественным препаратом иммуноглобулина для внутривенного введения "Габриглобин", хорошими результатами клинических испытаний препарата при агаммаглобулинемии и учитывая развивающийся при атипичной пневмонии иммунодефицит, мы предположили, что габриглобин может явиться высокоэффективным средством комплексной терапии SARS.

Габриглобин, по заключению консилиума Амурской областной инфекционной клинической больницы, был использован у больного С. в период ранней реконвалесценции, в дозе 7,5 г ежедневно в течение 3 дней, что составило 0,12 г/кг массы тела в сутки. Переносимость препарата была хорошей, введение не сопровождалось никакими нежелательными реакциями. Со вторых суток применения препарата не наблюдалось подъема температуры, уменьшился лейкоцитоз, улучшилось общее состояние. Вскоре больной был выписан под амбулаторное наблюдение. Положительные результаты клинического использования габриглобина при синдроме атипичной пневмонии позволили рекомендовать включение препаратов иммуноглобулинов в комплексную терапию данного заболевания /Письмо МЗ РФ 2510/4194-03-27, 2003 г./.

Учитывая сведения о том, что эффективным барьером на пути передачи вируса цитомегалии от матери к плоду являются материнские анти-ЦМВ-антитела /Калинина Н.М., Кетлинский С.А., 2002/, и то обстоятельство, что препарат габриглобин-анти-ЦМВ еще только направлен для проведения клинических испытаний, а обычные, «неспецифичные» серии габриглобина также содержат антитела к ЦМВ, хоть и в меньшем титре, была сделана попытка применения «неспецифичного» габриглобина для лечения ЦМВ-инфекции.

Габриглобин был использован у больной В., находившейся на лечении в гинекологическом отделении Ивановского НИИ материнства и детства им.

В.Н.Городкова с диагнозом "невынашивание беременности смешанного генеза, хроническая ЦМВ-инфекция. После проведенного курса лечения габриглобином по 7,5 г еженедельно в течение 4 недель наступила беременность, во время которой ежемесячно пациентка получала по 5 г препарата внутривенно капельно.

Беременность закончилась срочными родами, родился здоровый мальчик. В настоящее время развитие ребенка (1 год и 7 месяцев) нормальное, признаки ЦМВинфекции отсутствуют.

Лечение вирусного энцефалита, вызванного вирусом Эпштейна-Барр, проведено у больного Г., 37 лет, находившегося в отделении реанимации ГКБ № г. Москвы с диагнозом: бактериально-грибково-вирусный сепсис, аспергиллез, вирусный энцефалит Эпштейна-Барр, отек головного мозга, бактериально-вирусногрибковая пневмония, дыхательная недостаточность, острая печеночно-почечная и надпочечниковая недостаточность. Диагноз установлен клинически и был подтвержден инструментальными и лабораторными методами.

Лечение вирусного энцефалита было проведено ацикловиром в дозе 1,5 г в сутки в течение 10 дней без эффекта. По решению консилиума был назначен курс лечения габриглобином в дозе 30 г иммуноглобулина в течение трех суток в сочетании с ацикловиром. Через 10 суток выполнена люмбальная пункция и получен светлый прозрачный ликвор, в котором вирус Эпштейна-Барр отсутствовал.

Таким образом, габриглобин обладает высокой эффективностью у больных с общим вариабельным иммунодефицитом, снижает потребность в антибактериальных средствах и может использоваться для лечения вирусных и бактериальных инфекций.

ВЫВОДЫ.

1. Научно обоснованный процесс масштабирования лабораторной технологии позволил впервые в Российской Федерации организовать промышленное производство препарата иммуноглобулина для внутривенного введения, с низким значением рН, состоящего из цельных молекул IgG в мономерной форме и сохранивших свои бифункциональные свойства.

Технологическая схема производства препарата, получившего торговое наименование "Габриглобин", включает: карантинизацию плазмы, тестирование на вирусные маркеры, спиртовое фракционирование, концентрирование фильтрата «Б», стадии диафильтрации и диализа, первую вирусинактивацию, высушивание, вторую вирусинактивацию, контроль, упаковку и маркировку.

2. Оптимизированы технологические производственные операции и установлены факторы, определяющие основные качественные показатели препарата: степень очистки воды, используемой в технологическом цикле и этап снижения антикомплементарной активности. Соблюдение регламентных режимов позволяет выпускать габриглобин с минимальными колебаниями показателей качества.

3. Подобраны и включены в технологический процесс получения препарата "Габриглобин" две стадии инактивации возможно присутствующих вирусов:

инкубация жидкого полуфабриката иммуноглобулина при величине рН 4,2 в о течение более 21 суток и прогрев флаконов с сухим препаратом при 60 С в течение 72 часов. Процесс вирусинактивации не ухудшает физико-химические и биологические свойства препарата.

4. Разработан алгоритм отбора донорского сырья с высоким титром антител к вирусу цитомегалии и доказана принципиальная возможность получения иммуноглобулина для внутривенного введения с титром антител к цитомегаловирусу 1:6400 – 1:12800, или с содержанием антител более 50 МЕ/мл.

Препарат "Габриглобин-анти-ЦМВ" стабилен в течение трех лет (срок наблюдения).

5. Клинические испытания показали высокую эффективность заместительной терапии габриглобином у больных с общим вариабельным иммунодефицитом, сохранение повышенной концентрации IgG в крови после введения препарата в течение более 21 суток. Препарат обладает терапевтической активностью при синдроме атипичной пневмонии, врожденной ЦМВ-инфекции и энцефалите, вызванном вирусом Эпштейна-Барр.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Тюриков Ю.М., Трофимова С.И. О донорском движении в Ивановской области.

Производство иммуноглобулинов. Материалы международной научнопрактической конференции по донорству крови. Архангельск, 2001, с. 29.

Pages:     | 1 | 2 || 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»