WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

С помощью спектрофотометрического метода определяли активность одного из основных ферментов АОЗ – супероксиддисмутазы плазмы крови и головного мозга (СОД-подобную активность) (Сирота 1999) и регистрировали содержание в плазме крови продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-активных продуктов), как показатель уровня свободнорадикальных процессов в организме (Гаврилов, Гаврилова и др. 1987).

Оценка параметров работы системы метаболизма ГАМК.

Флуорометрическим методом определяли содержание в головном мозге свободной ГАМК (Авенирова, Маслова и др. 1966) и активность фермента её синтеза – глутаматдекарбоксилазы (ГДК) (Сытинский и Кэ-цзинь 1966; Lowe, Robins et al. 1958). Также спектрофотометрически определяли активность фермента деградации ГАМК – ГАМК-трансаминазы (ГАМК-Т) (Bergmeyer 1983; Koo, Park et al. 2003).

Определение уровня кортикостерона в надпочечниках и плазме крови.

Уровень кортикостерона в надпочечниках и плазме крови определяли флуорометрически (Панков и Усватова 1965).

Во всех случаях взятие образцов крови и головного мозга для биохимического анализа проводили в одно и то же время суток – с 10:00 до 12:00.

Исследования по определению параметров работы системы метаболизма ГАМК, системы АОЗ и уровня кортикостерона проводились на базе кафедры биофизики биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова под руководством профессора Е.Н. Гончаренко.

Статистическая обработка результатов.

Обработку результатов осуществляли при помощи пакетов статистических программ Statistica 6.0 и Microsoft Excel. При сравнении характеристик массивов данных, характеризующихся нормальным распределением, применяли параметрический t-критерий Стьюдента (нормальность распределения доказывали с помощью критерия Шапиро-Уилка), а также ряд непараметрических критериев (Вилкоксона-Манна-Уитни и точный метод Фишера). Значимыми считали отличия при уровне достоверности р<0.05;

отличия при уровне достоверности 0.05<р<0.10 рассматривали как проявление тенденции к отклонению от контроля. Для общей оценки локомоторной активности, ориентировочно-исследовательской активности и тревожности использовался метод расчёта интегративных индексов, позволяющий учесть изменения всех поведенческих показателей, отражающих соответствующее функциональное состояние, и выразить его отклонения от контроля в виде обобщающего значения. Значения индексов варьировало от -1 до +1.

Положительное или отрицательное значение индекса свидетельствовало, соответственно, об усилении или ослаблении выраженности того или иного функционального состояния в опытной группе по отношению к контрольной.

При значении модуля индекса менее 0.05 отклонения функционального состояния от контрольного считали пренебрежительно малым.

Результаты и их обсуждение.

Часть I. Последствия стрессов различной этиологии для небеременных и беременных крыс в период раннего органогенеза.

Результаты поведенческого тестирования представлены в табл. 1 (значения зарегистрированных показателей) и на рис. 1 (значения интегративных индексов). В группе беременных самок через сутки после обоих видов гипоксических стрессов (ОГГ и ПНГ) снижалась тревожность, что подтверждается наличием значимых отличий соответствующих показателей от контроля, а также отрицательными значениями интегративных индексов тревожности. После ОГГ, кроме этого, увеличивались локомоторная и ориентировочно-исследовательская активность. Зависимости от резистентности к острой гипоксии не было. Судя по общей частоте встречаемости изменённых показателей и абсолютному значению индексов, постстрессорные последствия для беременных самок были более выражены после острого стресса.

Действие гипоксических стрессов на небеременных самок в основном было сходно с действием на беременных. Противоположная направленность отклонений наблюдалась только у небеременных самок с низкой устойчивостью к острой гипоксии, у которых, в отличие от беременных, были подавлены локомоторная и ориентировочно-исследовательская активность.

Кроме того, в той же группе самок ПНГ приводила не к снижению, а к увеличению тревожности.

Рисунок 1. Интегративные индексы локомоторной активности (ЛМА), ориентировочноисследовательской активности (ОИА) и тревожности (Тр) беременных и небеременных самок крыс через сутки после соответствующего стресса по отношению к собственному контролю. Условные обозначения: ОГГ НУ и ВУ – группы самок, переживших острую гипобарическую гипоксию, обладающие низкой и высокой устойчивостью, соответственно;

ПНГ – группы самок, переживших прерывистую нормобарическую гипоксию; ИММ – группы самок, переживших иммобилизацию; # - значимые отличия от собственного контроля.

Показатели Открытое поле Приподнятый крестообразный лабиринт поведенческой активности Группа Когг к НУ, N=28 55.3±4.4 11.7±1.2 3.9±0.6 17.3±4.9 0.79±0.23 0.59±0.17 27.1±4.3 0.11±0.06 0.36±0.16 0.37±0.63.8±3.7 12.8±1.0 5.5±0.6 9.1±1.9 1.08±0.22 1.95±0.65 34.5±4.0 0.46±0.14 0.21±0.08 0.71±0.ОГГ НУ, N=* ** ** Когг к ВУ, N=22 52.6±5.4 10.1±1.3 3.5±0.8 24.5±7.0 0.61±0.26 0.35±0.09 23.9±5.5 0 0.22±0.17 0.33±0.62.1±5.5 12.8±1.1 4.4±1.1 6.5±2.2 1.71±0.75 0.48±0.13 40.1±8.5 1.00±0.61 0.75±0.50 0.13±0.ОГГ ВУ, N=* * * ** Кпнг, N=23 50.5±6.0 9.1±1.2 2.2±0.4 31.6±7.0 0.73±0.24 1.24±0.27 26.3±6.0 0.09±0.06 0.27±0.13 0.73±0.46.2±4.5 7.8±0.9 2.9±0.6 28.7±5.6 1.03±0.17 0.99±0.18 42.0±5.9 0.21±0.07 0.52±0.21 0.90±0.ПНГ, N=* Кимм, N=30 54.5±5.4 10.5±1.1 3.3±0.4 11.1±3.3 1.76±0.35 4.54±1.47 33.9±4.6 0.28±0.13 0.59±0.20 0.79±0.ИММ, N=29 52.0±3.3 10.8±0.8 2.8±0.5 10.5±2.0 1.31±0.28 4.05±1.56 47.7±7.4 0.35±0.11 0.42±0.14 0.77±0.Когг (общий), N=18 49.3±3.7 8.3±0.9 2.58±0.47 22.3±4.4 2.00±0.31 1.32±0.43 52.5±7.0 0.11±0.10 2.95±0.54 1.21±0.37.4±4.3 7.7±1.0 1.7±0.4 27.2±7.2 1.21±0.26 0.50±0.20 49.3±9.1 0.57±0.20 3.00±0.38 0.71±0.ОГГ НУ, N=** * * ** 50.0±9.5 11.3±2.2 1.8±0.8 23.6±8.3 2.00±0.37 2.33±0.61 63.3±10.4 1.00±0.52 1.67±0.61 0.67±0.ОГГ ВУ, N= * ** Кпнг, N=7 39.3±6.1 9.9±2.1 3.9±0.9 23.0±7.47 1.10±0.35 0.80±0.32 34.1±7.9 0.29±0.18 3.14±1.14 0.29±0.39.1±4.6 6.9±1.6 2.8±0.6 24.7±7.8 2.44±0.35 0.56±0.24 39.4±10.3 0.33±0.17 3.67±0.73 1.22±0.ПНГ, N=** Кимм, N=10 43.0±4.3 5.9±0.8 1.0±0.5 40.6±10.0 1.29±0.47 2.30±0.34 26.6±5.9 0.40±0.22 6.50±1.29 1.10±0.56.8±4.3 9.3±0.9 1.7±0.4 20.1±4.5 0.89±0.42 1.28±0.24 50.6±7.9 0.94±0.29 6.94±1.09 1.17±0.ИММ, N=** ** * ** ** ** Таблица 1.

Поведенческая активность беременных и небеременных самок в тестах «Открытое поле» и «Приподнятый крестообразный лабиринт» через сутки после соответствующего стресса (данные представлены в виде среднего ± стандартная ошибка среднего). Условные обозначения: ГДА – горизонтальная двигательная активность; ВДА – вертикальная двигательная активность; Отходы+Выходы – количество отходов от стенок и выходов в центр поля; ОГГ НУ и ОГГ ВУ – группы самок, переживших ОГГ, низкой и высокой устойчивости, соответственно; ПНГ – группы самок, переживших прерывистую нормобарическую гипоксию; ИММ – группы самок, переживших иммобилизацию; Когг, Кпнг и Кимм – соответствующие контрольные группы; N – число животных; ** и * – значимые отличия от соответствующей контрольной группы на уровне достоверности р<0.05 и 0.05<р<0.15, соответственно.

n Время Время ГДА, n отсек, с ВДА, n Отходы в тёмный отсеков, n отсеков, n из тёмных на свету, с Латентный выходов на Количество Количество Количество + Выходы, n замирания, с дефекаций, n свешиваний с светлые лучи, период захода Выглядывания Небеременные Беременные самки Эмоциональный стресс практически не оказал влияния на поведение беременных крыс через сутки после стресса, тогда как у небеременных самок отмечалось увеличение локомоторной и ориентировочно-исследовательской активности и снижение тревожности.

Таким образом, сам фактор беременности влиял на стрессреактивность самок. У беременных самок более значительные отклонения поведенческих характеристик от контроля в постстрессорном периоде наблюдались после ОГГ, тогда как у небеременных существенное влияние оказал и эмоциональный стресс.

Отклонения от контроля показателей вариабельности сердечного ритма в группе беременных и небеременных самок через сутки после гипоксических стрессов были незначимы (табл. 2). Возможно, это свидетельствует в пользу большей устойчивости структур, определяющих вегетативный баланс, к гипоксическим стрессам по сравнению со структурами, контролирующими поведение.

Показатели ВСР Показатели ВСР Группа Группа SI RMSSD SI RMSSD Когг к НУ, N=17 0.83±0.16 2.49±0.Когг (общий), 0.56±0.05 2.53±0.N=ОГГ НУ, N=23 0.91±0.10 2.25±0.Когг к ВУ, N=11 0.91±0.24 2.49±0.20 ОГГ НУ, N=10 0.53±0.09 2.68±0.ОГГ ВУ, N=9 0.78±0.20 2.29±0.27 ОГГ ВУ, N=5 0.70±0.13 3.16±0.Кпнг, N=19 1.24±0.17 2.47±0.36 Кпнг, N=8 1.05±0.31 2.35±0.ПНГ, N=22 0.95±0.16 2.20±0.18 ПНГ, N=9 0.37±0.11** 3.11±0.Кимм, N=20 1.08±0.14 2.06±0.14 Кимм, N=8 0.54±0.15 3.92±0.ИММ, N=20 1.61±0.22 1.70±0.09 ** ИММ, N=11 0.41±0.07 3.37±0.Таблица 2. Показатели ВСР беременных и небеременных самок, зарегистрированной в тесте «Открытое поле» через сутки после соответствующего стресса (среднее ± стандартная ошибка среднего). Условные обозначения: SI – стресс-индекс; RMSSD – корень из суммы разностей последовательного ряда RR-интервалов; ОГГ НУ и ОГГ ВУ – группы самок, переживших ОГГ, низкой и высокой устойчивости, соответственно; ПНГ – группа самок, переживших прерывистую нормобарическую гипоксию; ИММ – группа самок, переживших иммобилизацию; Когг, Кпнг и Кимм – соответствующие контрольные группы; N – число животных; ** – значимые отличия от соответствующей контрольной группы при уровне достоверности р<0.05.

Исключением явились последствия прерывистой гипоксии в группе небеременных самок. У них отмечалось значимое снижение SI, что расценивается как смещение вегетативного баланса в сторону активации парасимпатического контура регуляции.

Эмоциональный стресс беременных самок привёл к смещению вегетативного баланса в сторону активации симпатического контура регуляции:

значимо снижался RMSSD. При этом у небеременных самок значимых отклонений от контроля не наблюдалось. Таким образом, именно состояние беременности при эмоциональном стрессе сыграло решающую роль для проявления изменений поведения и вегетативного баланса: при беременности в самки самки Беременные Небеременные первую очередь был затронут вегетативный баланс, тогда как в отсутствие беременности – поведенческие характеристики.

Оценка через сутки после стрессорных воздействий некоторых параметров работы системы антиоксидантной защиты не дала какой-то ясной картины постстрессорных изменений. Значимые изменения при уровне достоверности р<0.05 были отмечены лишь для переживших ИММ небеременных самок:

уменьшалось количество ТБК-активных продуктов плазмы при одновременном повышении СОД-подобной активности мозга (табл. 3), что можно расценивать как проявление активизации системы АОЗ через сутки после стресса и соответствующем подавлении свободнорадикальных процессов.

Параметры работы Параметры работы системы метаболизма Содержание системы АОЗ ГАМК головного кортикостерона мозга Группа ОГГ НУ, N=+22.2 -43.ОГГ ВУ, N=ПНГ, N=-46.6 -15.ИММ, N=ОГГ НУ, N=+22.ОГГ ВУ, N=-56.ПНГ, N=+16.5 -12.6 +16.4 -50.ИММ, N=-14.1 +19.4 -74.0 -76.Таблица 3. Параметры работы системы АОЗ, системы метаболизма ГАМК головного мозга и содержание кортикостерона беременных и небеременных самок через сутки после того или иного стресса, выраженные в % по отношению к контролю (показаны только значимые при р<0.05 отклонения). Условные обозначения: ТБК – тиобарбитуровая кислота;

СОД – супероксиддисмутаза; ГАМК – гамма-аминомасляная кислота; ОГГ НУ и ОГГ ВУ – группы самок, переживших ОГГ, низкой и высокой устойчивости, соответственно; ПНГ – группы самок, переживших прерывистую нормобарическую гипоксию; ИММ – группы самок, переживших иммобилизацию; Когг, Кпнг и Кимм – соответствующие контрольные группы; N – число животных. Стрелками указано направление отклонения от контроля.

ГАМК, % Активность плазмы крови, % плазмы крови, % Плазма крови, % Надпочечники, % головного мозга, % Кол-во свободной декарбо-ксилазы, % Активность глутаматТБК-активные продукты СОД-подобная активность СОД-подобная активность ГАМК-транс-аминазы, % самки самки Небеременные Беременные Вероятно, в остальных случаях при оценке отдалённых постстрессорных последствий мы наблюдаем остаточные, следовые процессы развития реакции, по которым трудно определить целостную картину изменений.

Параметры системы метаболизма ГАМК у беременных самок тоже в большинстве случаев не менялись, у небеременных значимые отличия были выявлены для низкоустойчивых самок, переживших острую гипоксию, и для самок, переживших ПНГ. Существенных различий между группами обнаружено не было: направленность изменений для каждого параметра была сходна во всех случаях. Наблюдалось увеличение активности одного или обоих ферментов метаболизма ГАМК при неизменном или сниженном (для небеременных самок, переживших ПНГ) по сравнению с контролем уровнем свободной ГАМК. Вероятно, стрессы привели к подъёму общего уровня метаболизма медиатора, что в случае ПНГ в группе небеременных могло выразиться, в том числе, в снижении его концентрации в каждый момент времени.

Содержание кортикостерона снижалось у беременных самок в группах, переживших прерывистую гипоксию, и низкоустойчивых, переживших острую гипоксию. У небеременных такое же явление наблюдалось во всех группах, кроме низкоустойчивых к острой гипоксии. Вероятно, такое уменьшение количества кортикостерона в надпочечниках и плазме крыс – результат действия отрицательной обратной связи в гипоталамо-гипофизарнонадпочечниковой оси. При этом выброс в ответ на стресс глюкокортикоидов (в частности, кортикостерона) подавляет секрецию спровоцировавших этот выброс кортикотропин-рилизинг фактора и адренокортикотропного гормона, что ведёт к уменьшению выработки глюкокортикоидов и снижению их содержания как в плазме, так и в надпочечниках в постстрессорном периоде.

Общий анализ результатов показал, что число изменённых параметров в группе небеременных было таким же (в случае ОГГ), либо выше, чем после соответствующих стрессов в группе беременных (в случае ПНГ и ИММ) (рис.

2). На этом основании мы предполагаем более высокую устойчивость беременных к действию соответствующих стрессов.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»