WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

Яркость,В шестой главе изложены результаты исследований по разделе- 32 Электрофорез водного извлечеед нию хромогенов водного извлечения чаги с помощью электрофореза на ния чаги в боратном буфере даёт бумажном носителе и в тонком слое сорбента. яркие зоны на электрофоретограм Электрофорез водного извлечения чаги на бумажном носителе мах. На них преобладают хромоВ каждой буферной системе разделение водного извлечения чаги гены, движущиеся в сторону анода.

проводили в следующих режимах: фиксировали силу тока 5, 10, 15 или Как показано на денситограммах 20 мА, меняя напряжение от 100 до 400 В с шагом в 50 В. (рис. 4), оптимально подобранные Использование муравьиного буфера с рН среды, близкой к седи- -1 -0,8 -0,6 -0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 режимы проведения электрофореза Rf 1(150В) 2(200В) ментации ПФК (рН 2,4), приводит к низкой подвижности хромогенов позволяют разделить хромогены на электрофоретограмме. В УФ-свете отделившиеся подвижные хро Рисунок 4 – Электрофорез вод- водного извлечения чаги на две могены флуоресцируют, приобретая зеленоватую окраску. Обработка ного извлечения чаги при 20 мА фракции, подвижные в сторону электрофоретограмм парами аммиака усиливает цвет подвижного (боратный буфер): денситоно- анода, и одну - в сторону катода.

фронта. Следовательно, продвигающиеся по электрофоретограмме сограммы при 150 и 200В Впервые показано, что в отличие единения относятся к классу фенолов, которые могут быть сложно орот гуминовых кислот, хромогены ганизованы.

водного извлечения чаги в боратном буфере подвижны как в сторону Проведен электрофорез фильтрата (после удаления ПФК из водного анода, так и в сторону катода.

извлечения чаги осаждением хлористоводородной кислотой). В режиме Электрофорез водного извлечения чаги в слое сорбента на пластинке 5мА и 350В движение хромогенов не наблюдается. Электрофорез Silufol при использовании боратного буфера.

фильтрата при режиме 20мА и 400В обеспечивает движение частиц золя На пластинах силикагеля (в режимах: сила тока 5, 10, 15 и 20мА и фильтрата: в большей степени к аноду и в меньшей - к катоду. В поднапряжении 250 В) хромогены водного извлечения чаги перемещавижных фракциях фильтрата кроме хромогенов подтверждено присутются к катоду и разделяются на пять зон (рис. 5). Большая сорбционная ствие аминокислот и соединений, обладающих восстанавливающими ёмкость силикагеля способствует образованию положительно заряженсвойствами (при проявлении электрофоретограмм нингидрином и расных частиц, что позволяет проанализировать вещества, подвижные в твором азотнокислого серебра).

электрическом поле.

Проведение электрофореза в среде муравьиного буфера, эффективно Рисунок 5 Зоны электрофоиспользовать для изучения веществ, находящихся в свободном и слаборетограммы, полученной при связанном состоянии с их дисперсными фазами состоянии.

проведении электрофореза в При использовании ацетатного буфера (рН 5,6) сохраняется нативрежиме 10мА, 250В, в теченый рН среды водного извлечения. При всех применённых режимах ние 60 минут.

электрофоретического разделения хромогенов водного извлечения чаги на стартовой линии остаётся больше хромогенов. Оптимальный режим (ток 5мА напряжение 350В) позволяет выделить две фракции хромогенов, подвижных в сторону катода. Этому может способствовать высокое содержание зольных элементов в водном извлечении чаги (25 до Электронные спектры эльюатов, полученных с каждой из зон электро50%). Повышение силы тока до 15 мА (напряжение 400В) позволяет форетограммы, схожи со спектром ПФК водного извлечения чаги. Слеполучить как фракции несущие положительный заряд, так и подвижные довательно, во всех зонах присутствуют вторичные мицеллы, образуюполианионные фракции.

щиеся из мицелл золя водного извлечения чаги на стартовой линии.

21 Анализ эльюатов каждой зоны с помощью ТСХ показал присутствие в жено в бутанольном экстракте (20,39%), содержащем вещества, относяних полярных липидов. Кроме ранее обнаруженных в водном извлече- щиеся к полигликозидным формам фенольных соединений. Этим обънии чаги цереброзидов было показано наличие в них кардиолипинов. ясняется высокая АОА ПФКщ2. Исследование экстрактов с помощью Эльюаты силикагеля 95% этанолом проанализированы с помощью ТСХ позволило выявить в них липиды: моно- и триглицериды, стерины ТСХ. В них, со второй по пятую зону включительно, обнаружены п-ок- и их эфиры, галактозилглицериды, лизофосфатидилэтаноламин и фоссибензойная, сиреневая, ванилиновая и вератровая кислоты. Для прове- фатидилсерин. Содержание стеринов и их эфиров составляет 0,29% от дения идентификации соединений во фракциях, подвижных под дейст- сухих веществ фильтрата. В фильтрате содержится 0,1% гликолипидов вием электрического тока, более эффективно применять в качестве и 0,19% липидов, содержащих аминогруппу, 0,09% из которых прихоносителя пластины сорбента. дится на фосфолипиды. С помощью ГЖХ определён состав высших Электрофорез эффективно применять для разделения коллоидной жирных кислот: тридекановая (С13:0), миристиновая (С14:0), миристолеисистемы водного извлечения чаги, как в аналитических целях, так и для новая (С14:1), пентадекановая (С15:0), пальмитиновая (С16:0), гептадеканоразработки лекарственных препаратов при обнаружении электрофоре- вая (С17:0), олеиновая (С18:1). Количество простых фенолов составляет тических зон, проявляющих высокую биологическую активность. 0,18% от сухих веществ водного извлечения чаги. Показано содержание В седьмой главе показана возможность комплексной перера- в фильтрате вератровой, ванилиновой, сиреневой, п-оксибензойной, пботки чаги. кумаровой, -резорциловой, м-оксибензойной, протокатеховой и галлоПрактическое применение имеет осаждение ПФК хлористово- вой кислот. С помощью бумажной хроматографии определены флаводородной кислотой. Именно с его количественным содержанием в вод- ноиды: нарингенин, апигенин, мирицетин, гиперин, госсипетин, кемпном извлечении чаги связывают терапевтическую эффективность фар- ферол, 3-метокси-4,5-диоксифлаванон-7-О-неогесперидозид, робинетин макологических препаратов, получаемых на основе водных извлечений и наренгин.

чаги. После отделения ПФКК1 (13,58% от сухого веса чаги) фильтрат Разработаны способы извлечения биологически активных веществ имеет коричнево-желтую окраску. Диаметр мицелл в нём составляет и ПФК из шрота – отхода, полученного после проведения водной экс188 нм. Добавление к фильтрату в отдельности хлористоводородной тракции чаги. В качестве экстрагента использован этиловый спирт с кислоты, этанола или водного раствора гидроокиси калия не приводит к концентрацией 30%, 50% и 70%. Спиртовые экстракты из шрота полуосаждению ПФК. Применение спиртового раствора щёлочи позволяет чены по двум способам. По первому способу шрот проэкстрагирован осадить ПФКщ2 (4,79%). Осаждение водного извлечения сначала спир- РЕМ. По второму способу процесс проведён при кипячении шрота.

товым раствором щёлочи приводит к получению ПФКщ1 (17,24%). В Первый способ позволяет получить спиртовый экстракт (50% спирт) с результате осаждения дисперсной фазы фильтрата хлористоводород- самой низкой зольностью и высоким содержанием ПФК – до 6%, что в ной кислотой получено 2,01% ПФКк2. Выделенные ПФК отличаются 3,5 – 6 раз выше, чем по второму способу. Использование второго спопо АОА: ПФКк1 -27,5 кКл/100 г, ПФКщ2 - 108,0 кКл/100 г; ПФКщ1 - соба (70% спирт) позволяет получить экстракт, содержащий в 3-5 раз 17,0 кКл/100 г, ПФКк2 - 6,8 кКл/100 г. Различие их структурной орга- больше углеводов и в 1,5 – 2,5 раза больше фенольных соединений, низации показано с помощью ИК и электронных спектров, а также по чем в экстракте, полученном по первому способу. 70% спиртом из содержанию белка, углеводов и веществ фенольной природы, ассими- шрота можно извлечь в 6,6 раз больше фенольных соединений и в 1,лируемых ПФК при осаждении. раз больше углеводов по сравнению с их содержанием в настойках Для определения состава липидов и веществ фенольной при- чаги, выпускаемых промышленностью на основе сырья чаги.

роды, находящихся в фильтрате в свободном или слабосвязанном с его Такая переработка сырья позволяет извлечь из сырья в 6-7 раз дисперсной фазой состоянии, проведена последовательная исчерпы- больше ПФК по сравнению с его содержанием в промышленно полувающая экстракция фильтрата органическими растворителями (петро- ченных настойках чаги, производимых из сырья чаги без проведения лейный эфир, смесь хлороформ-этанол (2:1), диэтиловый эфир, этил- предварительной экстракции чаги водой. Идентичность ПФК, выдеацетат и бутанол). В них перешло 69,2% веществ от сухого остатка ленных из спиртовых экстрактов и полученных из водных извлечений фильтрата. Максимальное количество экстрактивных веществ обнару- чаги, показаны с помощью ИК и электронной спектроскопии. Их АОА 23 находится на уровне с этими показателями настоек, выпускаемых фар- его с помощью органических растворителей или проведении электромацевтической промышленностью. фореза.

Разработана комплексная переработка сырья чаги, заключаю- 3. Установлено, что изменение антиоксидантной активности как коллощаяся в получении ряда продуктов на основе водного извлечения и идной системы водного извлечения чаги, так и её дисперсной фазы шрота. Из водного извлечения можно получить два ПФК, обладающих (ПФК) связано: с содержанием в водном извлечении ПФК, размером высокими АОА, либо использовать фильтрат (после выделения ПФК) в мицелл ПФК/меланина (при изменении четвертичной структуры), прикачестве самостоятельного объекта для разработки БАД и лекарствен- родой соединений, входящих в его состав, а также количеством и приных препаратов. Экстракция шрота позволяет получить спиртовые экс- родой ПМЦ в ПФК/меланине (при изменении вторичной структуры).

тракты чаги с высоким содержанием углеводов, фенольных соединений 4. Показано, что изменение дисперсионной среды водного извлечения и ПФК. чаги при применении в экстракции комплексонов ОДФК, трилона Б, а В восьмой главе проведено обобщение полученных результатов, также гидроокиси натрия позволяет повысить антиоксидантную активсформированы теоретические представления о структуре золя водного ность получаемых ПФК в 3, 1,5 и 1,4 раза по сравнению с антиоксиизвлечения чаги и раскрыты практические аспекты применения объек- дантной активностью ПФК, выделенного из водного извлечения чаги.

тов, полученных при его модификации. 5. Применение в экстракции чаги микробиологических ферментных На основании сопоставления структуры наноразмерных биологиче- препаратов, содержащих гидролазы некрахмалистых полисахаридов, ских объектов с мицеллами ПФК/меланина показано, что при компо- изменяет дисперсионную среду образуемых золей, способствуя форминовке глобулы его структурной единицей являются частицы с диамет- рованию более крупных мицелл ПФК (Rэфф около 100-125нм) и больром 8-20 нм (и более мелкие). Это позволяет объяснить лабильность шего количества субмицелл по сравнению с водным извлечением дисперсной фазы (изменение четвертичной структуры ПФК/меланина) чаги(Rэфф около 60 - 100нм). ПФК, выделенные из этих коллоидных как коллоидной системы водного извлечения чаги, так и золей форми- систем, обладают низкой антиоксидантной активностью (18,63 и 17,руемых на её основе при химическом, физическом и биотехнологиче- кКл/100 г ПФК) в сравнении с ПФК, полученным из водного извлеческом воздействии. Использование химического воздействия на колло- ния чаги (29,61кКл/100 г ПФК).

идную систему водного извлечения чаги при обработке его этилацета- 6. Применение разработанной методики для изучения протеолиза в том приводит к изменению вторичной структуры дисперсных фаз кол- коллоидной системе водного извлечения чаги (in vitro) показало, что лоидных систем (1) и (2) - ПФК1 и ПФК2 - по отношению к ПФК вод- под действием ферментов желудочно-кишечного тракта происходит деного извлечения чаги, что показано с помощью ЭПР и РСА. градация белка. Это приводит к формированию наноразмерных мицелл Приведены схемы по комплексной переработке сырья чаги, в кото- ПФК(Rэфф=50 нм) и мелких субмицелл (8нм), что обеспечивает высорых использованы разработанные перспективные методы повышения кую терапевтическую эффективность водных извлечений чаги.

АОА извлечений и ПФК, получаемых на основе чаги. Показана воз7. Установлено, что коллоидные системы с наноразмерными мицеллами можность использования их в практических целях.

ПФК (Rэфф = 58 нм - 96 нм), полученные на основе водного извлечения чаги после его обработки органическими растворителями (петролейный ВЫВОДЫ эфир и этилацетат) имеют более высокую антиоксидантную активность по сравнению с водным извлечением чаги (в два - пять раз), а также 1. Установлено, что водные извлечения чаги относятся к высокодисболее низкую токсичность. Антиоксидантная активность ПФК, выдеперсным коллоидным системам. Диаметр частиц дисперсной фазы соленных из этих коллоидных систем, в среднем в два раза превышает эту ставляет: для крупных мицелл - 120-320нм (с колебаниями от 100 до характеристику для ПФК водного извлечения чаги.

400нм), для мелких, субмицелл - 60нм (и более мелкие).

8.Установлено, что фильтрат (после осаждения ПФК хлористоводо2. Показано, что коллоидная система водного извлечения чаги имеет родной кислотой) является высокодисперсной коллоидной системой, легко перестраивающуюся дисперсную фазу (ПФК/меланин): при раздисперсную фазу которой можно выделить с помощью спиртового расбавлении водного извлечения, смене способа его получения, обработке твора щёлочи, а полученный из него ПФК имеет антиоксидантную ак 25 бибрахманова, В. С. Гамаюрова, Д. В. Муллина, О.Ю. Кузнецова, Г. К. Зиятдитивность в четыре раза выше, чем ПФК, выделенный из водного извленова, Г. К. Будников // Бутлеровские сообщения. - 2005. - т. 7. - 4. – С. 33- 35.

чения с помощью хлористоводородной кислоты.

7. Сысоева, М.А. Исследование липидного состава водных извлечений чаги. I.

9. Определён состав веществ, находящихся в золе водного извлечения Липиды извлекаемые этилацетатом / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, О. Ю.

чаги и фильтрате в свободном и слабосвязанном с дисперсной фазой Кузнецова, В. С. Гамаюрова // Новые лекарственные средства: Успехи и перспекзоля состоянии. Показано присутствие биологически активных липитивы. - Уфа: Гилем, 2005 – С. 133-дов (стерины и их эфиры, моно- и полиненасыщенные высшие жирные 8. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги V. Электрофорез в кислоты, витамины К и Е, кофермент Q, глико- и фосфолипиды), терпекислых средах. Использование муравьиного буфера / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибнов (азулены и иридоиды), и фенольных соединений (фенолкарбоновые рахманова, В. С. Гамаюрова, Г.И. Халиуллина, А.С. Опарина // Вестник Казанкислоты, фенолы и флавоноиды). Состав этих веществ в водном извлеского технологического университета. – 2006. - 4. - С. 143-147.

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»