WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Активность фосфогексоизомеразы определяли по методу Р.Ф. Езерского (1960) в описании З.И. Микашинович и соавторов (2004). Активность фосфорилазы определяли по принципу метода Д.Л. Фердмана и Е.Ф.Сонина, описанному З.И. Микашинович и соавторами (2004). Активность глутатионпероксидазы определяли по методу, описанному А.И.Карпищенко и др. (1999). Активность глутатионредуктазы определяли по скорости окисления НАДФН+Н методом Юсуповой Л.Б. (1989). Активность ферментов выражали в мкмоль/г Нв или мкмоль/мг белка. Определение активности супероксиддисмутазы проводили по методу Misra H.P. и Fridovich J. (1972), в модификации Саркисяна О.Г. (2000). Результат выражали в условных единицах на 1 г Нв или мг белка в мин. Активность каталазы определяли методом, предложенным Королюк и др. (1988). Определение концентрации восстановленного глутатиона проводили методом Ellman G.L.(1959). Результаты выражали в мкмоль/ г НЬ или мг белка. Определение концентрации мочевины проводили унифицированным методом по реакции с диметилмонооксимом с использованием набора регентов «ЭКОлаб» (Санкт-Петербург). Концентрацию внеэритроцитарного гемоглобина определяли спектрофотометрическим методом, описанным Каракшевым А.В., Вечевым В.П. (1968). Полученные результаты выражали в ммоль/л.

Определение количества церулоплазмина проводилось по методу Ревина, описанному Кольб В.Г., Камышниковым B.C. (1982), который базируется на окислении п-фенилендиамина при участии церулоплазмина. Результат выражали в мкмоль/л.

Для изучения состояния газотранспортной функции эритроцитов определяли концентрацию 2,3-дифосфоглицерата методом Dyse, Bessman в модификации Лугановой И.С, Блиновым М.Н. (1975), пировиноградной кислоты по Фридеману и Хаугену в модификации П.М. Бабаскина (А.С.

СССР №877436, 1981), молочной кислоты по реакции с параоксидифенилом, описанной В.В. Меньшиковым (1987).

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили согласно общепринятым методам с определением средней арифметической ошибки с использованием программы STATISTICA, версия 6.0. О достоверности отличий учитываемых показателей сравниваемых групп судили по величине t-критерия Стьюдента после проверки распределения на нормальность. Статистически достоверными считали отличия, соответствующие оценке ошибки вероятности р < 0,05.

Результаты работы и их обсуждение.

Результаты исследования отражают особенности кислородтранспортной функции эритроцитов, углеводного обмена и антиоксидантнои защиты у больных с острым нарушением мозгового кровообращения до и после воздействия СКЭНАР.

Эритроциты.

В эритроцитах больных в острый период заболевания было выявлено достоверное увеличение активности фосфорилазы на 167,82% (р<0,001) по сравнению с контрольной группой, что указывает на необходимость быстрой мобилизации глюкозы из «резервного фонда». Однако активность одного из ферментов гликолиза - фосфогекосизомеразы - достоверно не изменилась относительно контрольной группы, что указывает на сохранение скорости включения глюкозы в окислительные процессы в физиологических границах.

Установлено, что острый период заболевания характеризуется значительным увеличением концентрации 2,3-дифосфоглицерата на 188,42% (р<0,001) в эритроцитах данной категории больных, что свидетельствует о конформационных изменениях структуры гемоглобина (переход из R- в жёсткую Т-конформацию) и приводит к снижению сродства гемоглобина к кислороду. Подобные изменения принято рассматривать как адаптационный механизм, направленный на улучшение снабжения тканей кислородом (Олемпиева Е.В., 2004).

В то же время отмечена тенденция к увеличению концентрации метаболитов гликолиза - лактата и пирувата - на 10,39% (0,05<р<0,1) и 36% (р<0,05) соответственно относительно контрольной группы.

Согласно данным литературы, истощение внутренних энергетических резервов при недостаточной оксигенации приводит к замедлению дальнейшего окисления лактата и пирувата и накоплению их в клетках и тканях. Это способствует развитию метаболического ацидоза, что представляет собой дополнительный повреждающий фактор при гипоксии (Rovetto et al., 1975; Sutton J.R. et al., 1990).

Повреждающее действие гипоксии во многом определяется значительным усилением реакций свободно-радикального окисления (Пшенникова, 2002). В связи с этим представлялось перспективным оценить состояние антиоксидантнои системы в эритроцитах и плазме крови больных.

Установлено, что острый период заболевания сопровождается значительным увеличением активности супероксиддисмутазы на 79,93% (р<0,001) на фоне достоверного снижения активности каталазы на 18,52% (р<0,05) по сравнению с контрольной группой.

Согласно современным представлениям, тезис о важнейшей защитной роли супероксиддисмутазы не столь очевиден, так как токсичность её субстрата - супероксидного анион-радикала не очень высока. Гораздо более опасен образующийся в результате супероксиддисмутазной реакции пероксид водорода, обладающий цитотоксическим действием, механизмы которого весьма разнообразны. В частности, под действием Н2О2 может наблюдаться инактивация каталазы и глутатионпероксидазы (Pigeolet E. et al., 1990). В присутствии миелопероксидазы, пероксидазы эозинофилов и лактопероксидазы пероксид водорода может быть источником гипогалогенных кислот (HOCl, НОВr и т.д.), которые также обладают цитотоксическим эффектом (McKeena S.M., Weiss S.J., 1989; Lovaas Е., 1992). Кроме того, пероксид водорода даёт начало чрезвычайно агрессивному гидроксильному радикалу, поэтому при дефиците ГПО и каталазы высокая активность СОД служит дополнительным повреждающим фактором (Koningsberger J.S. et al., 1994).

В то же время в эритроцитах больных обсуждаемой группы не обнаружено достоверного изменения концентрации GSH относительно контрольной группы. Можно предположить, что такая тенденция связана с высокой активностью супероксиддисмутазы, которая образует с глутатионом своеобразную систему. По данным Munday R., Winterboume С, (1989), СОД обеспечивает защиту от окисления внутриклеточного восстановленного глутатиона, который в восстановленном состоянии является эффективной ловушкой свободных радикалов. С другой стороны, такая ситуация может отражать снижение активности глутаонзависимого звена антиоксидантной защиты, которое является наиболее эффективным механизмом защиты от окислительного повреждения.

В плазме крови пациентов клинической группы в остром периоде инсульта выявлено значительное увеличение концентрации церуло-плазмина на 552,54% (р<0,001) по сравнению с контрольной группой. Церулоплазмин считается одним из самых эффективных антиоксидантов плазмы крови, так как способен окислять ионы Fe2+ и тем самым ингибировать образование АКМ в реакции Фентона. Кроме того, церулоплазмин обладает супероксиддисмутазно-подобной активностью и способен эффективно взаимодействовать с супероксидным анион-радикалом. Однако высказывается предположение, что церулоплазмин выступает скорее прооксидантом, нежели антиоксидантом, так как эффективно индуцирует окисление липопротеинов низкой плотности (Ehrenwald E. et al., 1994).

Согласно полученным нами данным, острый период инсульта характеризуется достоверным повышением уровня внеэритро-цитарного гемоглобина на 92,14% (р<0,001) относительно контрольной группы. Внеэритроцитарный гемоглобин служит своеобразным маркером для оценки «биологической состоятельности» мембран эритроцитов при нарушениях мозгового кровообращения, и увеличение его концентрации является косвенным проявлением усиления липидной пероксидации и свидетельствует об увеличении деструкции и проницаемости мембран эритроцитов (Хозин А.А., 2002).

При определении концентрации мочевины в плазме крови пациентов достоверных изменений не обнаружено. Мочевина, с одной стороны, является показателем интенсивности деградации аминокислот и белков, и сохранение её физиологической концентрации может указывать на сохранение фонда тканевых белков. С другой стороны, мочевина может выступать эффективным антиоксидантом.

После СКЭНАР-воздействия в эритроцитах больных активность фосфорилазы достоверно не изменилась относительно показателей до коррекции, относительно контрольной группы активность фермента была увеличена на 147,30% (р<0,001). В то же время было выявлено значительное увеличение активности фосфогекосизомеразы на 173,45% (р<0,001) по сравнению с показателями у пациентов до корригирующего влияния. По сравнению с контрольной группой активность фосфогексоизомеразы была увеличена на 136,61 % (р<0,001).

Высокая активность ферментов углеводного обмена после воздействия СКЭНАРом может указывать на формирование компенсаторных механизмов, обеспечивающих поддержание функциональной целостности самих эритроцитов для адекватного выполнения основной их функции - транспорта кислорода. Наиболее полное представление может дать определение параметров, характеризующих кислородтранспортную функцию крови.

Как следует из полученных данных, после воздействия СКЭНАРом в эритроцитах пациентов выявлено снижение концентрации 2,3дифосфоглицерата на 31,09% (р<0,05) по сравнению с исходным показателем до лечения. Относительно контрольной группы данный показатель был увеличен на 98,74% (р<0,001). Согласно представлениям Marti H.H. et al.

(1997), характер изменения уровня 2,3-дифосфоглицерата является информативным показателем «надёжности» адаптационных механизмов, связанных с повышением эффективности функции системы транспорта и утилизации кислорода, а также залогом сохранения структурно-функциональной целостности эритроцитов. Несмотря на сохраняющийся анаэробный характер обменных процессов, снижение уровня 2,3-дифосфогилцерата указывает на уменьшение тяжести гипоксии.

Проводимое воздействие способствовало увеличению концентрации пирувата на 40% (р<0,001) и лактата на 134,35% (р<0,001) по сравнению с исходными показателями в клинической группе. В совокупности с увеличением активности фосфогексо-изомеразы такие изменения могут свидетельствовать об увеличении мощности гликолиза. При этом относительно контрольной группы уровень пирувата и лактата повышен на 90,91% (р<0,001) на 158,70% соответственно.

После курса СКЭНАР-воздействия выявлено увеличение активности гликолитических ферментов и концентрации метаболитов гликолиза, что указывает на повышение функциональной активности эритроцитов.

На этом фоне активность супероксиддисмутазы достоверно не изменилась, активность каталазы ещё больше снизилась на 15,15% (0,05<р<0,1) относительно показателей клинической группы до воздействия. При этом относительно контрольной группы активность супероксиддисмутазы оставалась повышенной на 81,66% (р<0,001), активность каталазы, напротив, была снижена на 30,86% (р<0,05). Для многих ферментов, в том числе и для супероксиддисмутазы и каталазы, характерно явление перекрёстной регуляции активности (Marklund S.,L, 1984; 1990). Для каталазы супероксидный анион-радикал является отрицательным эффектором, а Н2О2 положительным, для СОД - наоборот (Дубинина Е.Е., 1998).

Вместе с тем после применения СКЭНАРа в эритроцитах выявлено достоверное снижение концентрации GSH на 24,72 % (р<0,05) по сравнению с показателями до воздействия. Соответственно, по сравнению с контрольной группой данный показатель был снижен на 30,86% (р<0,001).

Комплекс выявленных нами изменений, с одной стороны, может указывать на усугубление деструктивных окислительных процессов, с другой стороны, снижение концентрации GSH может свидетельствовать о вовлечении низкомолекулярных неферментативных антиоксидантов в осуществление защитных реакций. Кроме того, в исследовании, проведённом Хозиным А.А., (2002), отмечено важное патогенетическое значение системы обмена глутатиона в поддержании гомеостаза в системе антиоксидантыпрооксиданты и снижение уровня GSH может быть связано с растормаживанием глутатионового звена при преходящих нарушениях мозгового кровообращения.

Вместе с тем в плазме крови выявлено достоверное снижение концентрации церулоплазмина на 39,39% (р<0,001) относительно показателей до воздействия. Относительно контрольной группы данный показатель оставался увеличенным на 295,48% (р<0,001).

Необходимо отметить, что уровень мочевины в плазме крови после курса СКЭНАР-воздействия достоверно не изменился и оставался в пределах физиологической нормы. Однако обращает на себя внимание увеличение концентрации внеэритроцитарного гемоглобина на 17,78% (0,05<р<0,1) относительно исходных показателей клинической группы. По сравнению с контрольной группой данный показатель был увеличен на 126,07% (р<0,001).

Такой характер изменений в плазме крови после курса СКЭНАРвоздействия свидетельствует о сохранении процессов окислительной деструкции и усилении прооксидантной активности гемоглобина. С другой стороны, нельзя не отметить положительные стороны проводимой коррекции обменных сдвигов. Обращает на себя внимание снижение уровня церулоплазмина и сохранение фонда мочевины плазмы крови в физиологической концентрации. Последний факт свидетельствует о сохранении фонда тканевых белков и антиоксидантного потенциала организма (Виноградов А.Ю., 1994).

Ротовая жидкость.

Выявлено, что острый период инсульта характеризуется значительным увеличением в слюне обследуемых больных активности фосфорилазы на 540,91% (р<0,001) относительно контрольной группы, что свидетельствует об активном обеспечении мозга резервными полисахаридами для анаэробной ориентации метаболизма в целом. Повышение активности гликолитических процессов документируется и выраженным увеличением одного из ферментов гликолиза - фосфогексоизомеразы на 516,61% (р<0,001) относительно контрольной группы. Тем не менее, концентрация лактата и пирувата достоверно не изменилась, что может рассматриваться как демонстрация ограниченной способности мозга к анаэробному гликолизу (таб. 3; рис. 5).

По данным Хозина А.А. (2002), проводившего исследование в более поздние сроки, в слюне больных ИИ наблюдается значительное увеличение уровня лактата и снижение концентрации пирувата. Такая ситуация, повидимому, связана с особенностями энергетических процессов в головном мозге, отличительной чертой которых является преимущественное окисление глюкозы в реакциях аэробного гликолиза. В условиях острой гипоксии, сопровождающей манифестацию инсульта, происходит постепенная блокада аэробных путей утилизации пирувата и его окисление в лактат. Лактатный метаболический ацидоз обуславливает рост концентрации Н+ и сдвиг рН, что затормаживает активность ферментов аэробного биологического окисления и активирует анаэробный гликолиз (Шевченко Ю.Л., 2000).

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»