WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||

Изучение молекулярных механизмов нейропротекторного действия SkQRИзвестно, что свободные радикалы принимают участие не только в патологических каскадах, но и обладают сигнальными функциями, которые вовлечены в регулирование выживаемости клеток (Thannickal and Fanburg, 2000). К настоящему времени накоплено значительное количество данных, свидетельствующих о роли активных форм кислорода (АФК), как сигнальных молекул, причем зачастую эти сигналы приводят к протективному и антиапоптотическому эффекту в клетке. В частности, одними из важнейших сигнальных молекул, как в условиях окислительного стресса, так и при АФК-сигнализации, являются эритропоэтин (ЭПО) и киназа гликоген синтазы 3 (GSK-3), поскольку эти белки принимают непосредственное участие в регуляции апоптотической гибели клетки. Роль GSK-3 заключается в регуляции неспецифической проницаемости митохондрий, и последующего апоптоза, причем если GSK-3 фосфолирирована, то она неактивна и не активирует апоптоз. ЭПО также оказывает противоапоптотическое действие через ряд сигнальных путей (Ghezzi and Brines, 2004).

Очевидно, что митоходриально-направленные антиоксиданты могут изменять редоксстатус клетки и в результате влиять на связанные с АФК сигнальные пути. Действительно, было показано, что SkQR1 влияет на синтез ЭПО и фосфолирирование GSK-3 в почке (Плотников, 2009). Считается, что почка является основным источником синтеза ЭПО во взрослом организме (Tan et al., 1991), но в мозге также может происходить его синтез (Noguchi et al., 2007). Однако остается неизвестным, насколько важен эритропоэтин, синтезированный в почке, для поддержания пластичности мозга. В ряде исследований было показано, что введение экзогенного эритропоэтина вызывает выраженную нейропротекцию в моделях ишемии головного мозга (Grasso et al., 2007; McPherson and Juul, 2008; McPherson and Juul, 2008). Поэтому, мы решили проверить, как SkQR1 будет влиять на уровень ЭПО и фосфорилированной изоформы GSK-3 в мозге и сопоставить эти данные с результатами, полученными на почке.

Рис. 9. Репрезентативный иммуноблоттинг гомогенатов почки и мозга с денситометрическим анализом пятен после в/б введения SkQR1 в дозе 1 мкмоль/кг.

А – изменения эритропоэтина в мозге через 3ч после введения SkQR1;

Б – изменения фосфорилированной формы GSK-3 в мозге через 3ч после введения SkQR1;

В – изменения эритропоэтина в почке через 24ч после введения SkQR1.

Для изучения изменения уровня ЭПО в ткани почки SkQR1 в дозе 1 мкмоль/кг вводили внутрибрюшинно за 1 сутки. Анализ содержания этого белка, а также pGSK-3 в мозге проводили через 3 ч после введения SkQR1 в дозе 1 мкмоль/кг.

Полученные с помощью иммуноблотинга данные показали, что в почке через сутки после введения SkQR1 увеличивается содержания ЭПО в 2,2 раза по сравнению с животными, получавшими физиологический раствор. В мозге через 3 ч после введения SkQR1 также происходило увеличение содержания ЭПО в 1,8 и 2,4 раза фосфорилированной формы GSK-3 (Рис. 9).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что нейропротекторное свойство SkQR1, основанное на антиоксидантном действии, может быть усилено за счет увеличения содержания ЭПО в почке и в мозге, а также pGSK-3 в мозге.

ВЫВОДЫ 1. Отработана методика воспроизведения фокального очага ишемического повреждения головного мозга, вызванного перекрытием средней мозговой артерии нитью.

Показано, что ишемическое повреждение захватывает область коры, включая сенсомоторную область, а также стриатум и вызывает стойкие нарушения сенсомоторных функций мозга.

2. Изучена динамика формирования ишемического инфаркта с помощью метода магнитно-резонансной томографии на модели фокальной ишемии головного мозга крыс.

Очаг ишемического повреждения полностью формировался к 24 ч после индукции ишемии.

3. Введение LiCl в дозе 3 мМ сразу после начала реперфузии уменьшало более чем в 2 раза зону ишемического поражения и способствовало восстановлению неврологических функций.

4. Показано, что введение пептидов PGP и ГК-2 в постишемическом периоде уменьшает объем инфаркта и снижает неврологический дефицит, что свидетельствует о наличии у данных пептидов нейропротекторного эффекта.

5. Митохондриально-адресованный антиоксидант SkQR1 проявляет ярковыраженный нейропротекторный эффект при введении за 1 сутки до индукции ишемии, а также сразу после начала реперфузии. Показано, что одним из механизмов нейропротекторного действия SkQR1 может быть повышение содержания эритропоэтина и фосфолирированной GSK-3 в мозге.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Силачев Д.Н., Учеваткин А.А., Пирогов Ю.А., Зоров Д.Б., Исаев Н.К. Сравнение магнитно-резонансной томографии и трифенилтетразолиевого выявления повреждений головного мозга как методов исследования экспериментальной фокальной ишемии.

Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2009, Том 147, №2, стр. 232-237.

2. Исаев Н.К., Стельмашук Е.В., Плотников Е.Ю., Хряпенкова Т.Г., Лозиер Е.Р., Долудин Ю.В., Силачев Д.Н., Зоров Д.Б. Роль ацидоза, NMDA-подтипа глутаматных рецепторов и кислоточувствительных ионных каналов (ASIC1a) в развитии нейрональной гибели при ишемии. Биохимия, 2008, №73, стр. 1461-1466.

3. Silachev D.N., Uchevatkin A.A., Doludin Yu.V., Levina S.V., Pirogov Yu.A., Zorov D.B., Isaev N.K. (2008) Use intraluminal suture МСАo model and magnetic resonance imaging for development of new approaches of diagnostics and treatment of ischemic stroke. International Multidisciplinary Symposium “From experimental biology to preventive and integrative medicine”, Sudak, Crimea, Ukraine, p. 119.

4. Силачев Д.Н., Учеваткин А.А., Зоров Д.Б., Левина С., Исаев Н.К. (2008) Сопоставление магнитно-резонансной томографии и трифенилтетразолиевого выявления повреждения головного мозга, как методов исследования ишемического очага.

Конференция с международным участием «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга», Санкт-Петербург, Россия, с. 127.

5. Силачев Д.Н., Учеваткин А.А., Исаев Н.К., Зоров Д.Б. (2008) Кратковременная окклюзия средней мозговой артерии крысы как модель оценки нейропротекции с помощью неинвазивных методов. XY Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», Москва, Россия, с. 221.

6. Силачев Д.Н., Шрам С.И., Мясоедов Н.Ф. (2007) Оценка нейропротективной активности фармакологических веществ с использованием модели ишемии/реперфузии головного мозга, вызванной временной окклюзией средней мозговой артерии. III Российский симпозиум "Белки и пептиды", Пущино, Россия, с. 117.

7. Silachev D.N., Shram S.I., Jolkkonen J. (2007) Evaluation of the neuroprotective potential of a long-life product of collagen degradation – peptide Pro-Gly-Pro (PGP). Kuopio Stroke Symposium 2007, Kuopio, Finland, p. 62.

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»