WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 |

Таким образом, наиболее выраженный нейропротекторный эффект PGP был выявлен для дозы 0,1 мг/кг, который проявлялся как в снижении объема ишемического повреждения коры, так и в значительном уменьшении неврологического дефицита у животных, оцененного во всех использованных поведенческих тестах. PGP в дозе 0,5 мг/кг снижал выраженность неврологического дефицита, но не оказывал влияние на объем ишемического повреждения. На основании полученных данных мы предполагаем, что PGP может являться новым низкомолекулярным фармакологическим агентом с выраженными нейрозащитными свойствами.

Исследование нейропротекторной активности пептида ГК-В ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН был синтезирован NGFподобный пептид ГК-2, являющийся аналогом фрагмента 4-й петли NGF.

Пептид ГК-2 исследовали в двух сериях экспериментов, отличающихся продолжительностью введения препарата. Для обеих серий экспериментов поведенческое тестирование крыс проводили за 1 сутки до операции. В первой серии ГК-2 вводили в/б в дозе 1 мг/кг через 1 ч после начала реперфузии, а далее на 1 и 2 сутки после операции (всего 3 инъекции). Исследование неврологического дефицита проводили на 4-е и 7-е сутки в тесте «Стимулирования конечностей» и на 7-е сутки в тесте «Цилиндр». Во второй серии ГК-2 вводили в/б в дозе 1 мг/кг через 1 ч после начала реперфузии и на 1-5 сутки после операции (всего 6 инъекций). В ходе экспериментов проводили мониторинг степени нарушения неврологического дефицита в тесте «Стимулирования конечностей» в течение семи суток, а также в тесте «Цилиндр» на 7-е сутки после операции. МРТ исследование головного мозга животных (для 1-й серии) и ТТС-окрашивание (для 2-й серии) выполняли на 7-е сутки после ишемии.

Для 1-й серии по результатам морфометрического анализа МР-изображений размер ишемического очага у животных, которым инъецировали только физиологический раствор, был равен 26620 мм3 (n=12). При лечении ГК-2 наблюдалась хорошая тенденция уменьшения очага повреждения, в этом случае его объем был 22216 мм3 (n=12). По усредненным данным объем очага уменьшался на 16,5%. В тесте «Стимулирования конечностей» животные контрольной группы набирали 30,4 и 4,50,4 на 4-й и 7-й день после ишемии, соответственно. Трехкратное введение ГК-2 позволило достоверно улучшить эти показатели до 5,90,6 для 4-го дня после ишемии и 7,70,8 для 7-го дня (Р<0,01). В тесте «Цилиндр» на 7-е сутки после операции у крыс контрольной группы частота использования передней поврежденной лапы и одновременное использование двух передних лап снижалось в 5 и 1,8 раз соответственно по сравнению с дооперационным уровнем. Это снижение было гораздо менее выражено у крыс, которым после ишемии вводили ГК-2. В этом случае использование передней поврежденной лапы статистически значимо уменьшалось всего в 1,6 (P<0,05), а одновременное использование в 1,2 раза.

Во 2-й серии экспериментов морфометрический анализ срезов, окрашенных ТТС, выявил, что объем инфаркта у животных, получавших физиологический раствор, был равен 298,513,9 мм3 (n=10). При лечении ГК-2 наблюдалось статистически значимое уменьшение очага повреждения, в этом случае его объем был 251,918,7 мм3 (n=12) (P<0,05). По усредненным данным объем очага уменьшался на 15,6%. Тест «Стимулирования конечностей» показал, что лечение в послеишемический период препаратом ГК-2 достоверно снижает неврологический дефицит у ишемизированных животных. Начиная с 4-го послеоперационного дня у животных, получавших ГК-2, наблюдалось быстрое восстановление сенсомоторных функций конечностей по сравнению с контрольной группой, получавшей только физиологический раствор в постишемический период (рис. 4).

Ишемия+физ р-р Ишеми+ГК-Ишемия+ГК-ЛО *** ** * 1 2 3 4 5 6 День тестирования Рис. 4. Влияние в/б инъекций пептида ГК-2 в течение 6 дней после ишемии на снижение неврологического дефицита в тесте «Стимулирования конечностей».

*P<0,05, **P<0,01, ***P<0,001 – (U-тест Манна Уитни) по сравнению с группой «Ишемия+физ. р-р».

Условные обозначения: ЛО – ложнооперированные животные.

Анализ асимметрии использования передних конечностей в тесте «Цилиндр» показал, что на 7-е сутки после операции у крыс контрольной группы использование поврежденной лапы снижалось на 60%, а одновременное использование двух лап – на 67% по сравнению с ложнооперированными крысами. Это снижение было гораздо менее выражено у крыс, которым после ишемии в течение 6 дней вводили ГК-2. Так, использование поврежденной конечности уменьшалось только на 27%, а одновременное использование двух лап – на 34% (P<0,05).

Таким образом, более длительное введение ГК-2 сопровождалось и более выраженным снижением неврологического дефицита. Полученные данные говорят о значительном влиянии ГК-2 на пластические процессы, происходящие в мозге, связанные с восстановлением сенсомоторных функций в постишемический период. Эти результаты хорошо согласуются с данными о роли NGF в нейропластичности и репарации мозга (Varon and Conner, 1994; Alleva and Francia, 2009; Spedding and Gressens, 2008; Frade and Barde, 1998; Lessmann, 1998; Hefti, 1994).

По результатам данного исследования препарат ГК-2 проявлял ярко выраженную антиишемическую активность, которая выражается как в снижении объема пораженного участка головного мозга, так и в достоверном снижении неврологического дефицита у животных, которым в послеишемический период инъецировали препарат.

Баллы Исследование нейропротекторной активности митохондриально-направленных антиоксидантов При выборе концентраций и схем введения препаратов мы исходили из результатов, полученных ранее на крысиных моделях инфаркта миокарда и ишемии почки, где наибольший эффект проявлялся при предварительном введении препарата до индукции повреждения (Bakeeva et al., 2008).

Исследование SkQ1. Эксперименты проводилась по двум схемам. В первой схеме за 5 дней до ишемии проводили исследование базового уровня неврологического статуса животных в батарее поведенческих тестов, далее за 4 дня до моделирования ишемии животным однократно вводили SkQ1 в/б в дозе 1 мкмоль/кг. Во второй схеме за 6 дней до ишемии проводили исследование базового уровня неврологического статуса животных, в последующие 3 суток животным вводили SkQ1 в/б в дозе 0,1 мкмоль/кг ежедневно. Далее для обеих схем на 4-й и 7-й день после ишемии исследовали неврологический дефицит в тесте «Стимулирование конечностей» и только на 7-й день в тесте «Цилиндр». МРТисследование головного мозга животных выполняли на 7-е сутки после ишемии.

Результаты морфометрического анализа полученных с МРТ цифровых изображений ишемических очагов показали, что как в первой, так и во второй схеме экспериментов предварительное введение SkQ1 не влияло на объем ишемического повреждения коры головного мозга и стриатума. Исследование животных в тесте «Стимулирования конечностей» на 4-й день выявило тенденцию к восстановлению неврологического дефицита для обеих схем эксперимента, однако к 7-му дню разница между контрольной и экспериментальными группами не была выявлена. Тест «Цилиндр» на 7-й день после индукции ишемии не выявил различий между контрольной группой и группами, получавшими SkQ1 по разным схемам.

Исследование SkQRB. SkQRB вводили в/б за 1 сутки до индукции ишемии в дозах 1 и 2 мкмоль/кг. Через 1 сутки после индукции ишемии крыс подвергали тесту «Стимулирования конечностей» и проводили МРТ-исследование головного мозга.

Результаты морфометрического анализа полученных с помощью МРТ цифровых изображений ишемических очагов показали, что предварительное введение SkQRB не влияло на размер области ишемического повреждения головного мозга. Объем повреждения составил в среднем 30730, 31727 и 31721 мм3 для групп леченых 2 и мкмоль/кг SkQRB и для контрольной группы, соответственно.

Проверка животных в тесте «Стимулирования конечностей» выявила, что SkQRB только в дозе 1 мкмоль/кг снижал неврологический дефицит. Крысы контрольной группы набирали в тесте 3,70,6 баллов, а животные, получавшие SkQRB в дозах 2 и 1 мкмоль/кг, имели по 4,81,6 и 70,9 (P<0,01) баллов соответственно.

Исследование SkQR1. SkQRвводили в/б за 1 сутки до индукции ишемии в дозах 0,5, 1 и 2 мкмоль/кг.

Через 1 сутки после операции крыс подвергали тесту «Стимулирования конечностей» и срезы их мозга окрашивали ТТС.

Морфометрический анализ ишемической области по ТТСРис. 5. Влияние в/б введения SkQR1 за 1 сутки до индукции ишемии на объем инфаркта изображениям показал головного мозга (мм3), который определяли с помощью морфометрического анализа дозозависимый нейропротекторный окрашенных ТТС срезов через 1 сут. после эффект SkQR1 (рис. 5). При лечении перекрытия СМА. Количество животных указано в каждом столбике. **P<0,01, ***P<0,001 (Т-тест) SkQR1 в дозе 0,5 мкмоль/кг по сравнению с группой «Ишемия+физ. р-р».

Данные представлены в виде: среднееошибка ишемический очаг уменьшался в среднего.

среднем на 26% (Р=0,069). Лечение более высокими дозами приводило к статистически значимому снижению ишемической области по усредненным данным на 46% и 65% для доз 1 и 2 мкмоль/кг, соответственно.

Количественные результаты, указывающие на уменьшение объема очага у животных, которым инъецировали SkQR1, полностью коррелировали с данными о сенсомоторных нарушениях конечностей этих животных и также имели дозо-зависимый характер.

Полученные в тесте «Стимулирования конечностей» данные показали, что внутрибрюшинное введение за 1 сутки до индукции ишемии SkQR1 во всех дозах достоверно уменьшало неврологический дефицит у ишемизированных животных. Если крысы до индукции ишемии набирали в тесте 14 баллов, а ложнооперированные в среднем 13,50,5 баллов, то после ишемии этот показатель составлял 1,40,2 балла для ишемической группы, получавшей физиологический раствор вместо тестируемого вещества. Однократное введение препарата позволило статистически значимо улучшить эти показатели до 4,90,7, 5,50,7 и 6,51,3 для доз 0,5, 1 и 2 мкмоль/кг, соответственно (рис. 6).

Следующим этапом данной работы являлось изучение нейропротекторной активности SkQR1, который вводили интраназально (и/н) после индукции ишемии.

Известно, что наиболее предпочтительным способом доставки исследуемого соединения непосредственно к структурам мозга является интраназальное введение (Vyas et al., 2005).

SkQR1 вводили и/н в дозах нмоль/кг и 1 мкмоль/кг сразу после наступления реперфузии. Через сутки после индукции ишемии крыс подвергали тесту «Стимулирования Рис. 6. Влияние в/б введения SkQR1 за 1 сутки конечностей» и срезы их мозга до индукции ишемии на снижение неврологического дефицита через 1 сутки после окрашивали ТТС.

ишемии в тесте «Стимулирования Морфометрический анализ конечностей». Данные представлены в виде:

среднееошибка среднего.

ишемической области по ТТС***P<0,001 (U-тест Манна Уитни) по сравнению с группой «Ишемия+физ. р-р». изображениям выявил, что SkQR1 в дозе 20 нмоль/кг уменьшал объем очага ишемического поражения в среднем на 20%, а в дозе 1мкмоль/кг – на 36% (P<0,01) по сравнению с контрольной группой, получавшей физиологический раствор (рис. 7).

Рис. 7. Влияние и/н инстилляции SkQR1, произведенной сразу после начала реперфузии, на объем инфаркта головного мозга (мм3), который определяли с помощью морфометрического анализа окрашенных ТТС срезов через 1 сутки после перекрытия СМА.

Количество животных указано в каждом столбике.

Данные представлены в виде: среднееошибка среднего.

**P<0,01 (Т-тест Манна Уитни) по сравнению с группой «Ишемия+физ. р-р».

Как и в эксперименте с предварительным введением SkQR1 до ЛО Ишемия+физ р-р индукции ишемии, полученные данные Ишемия+SkQR1 20 нМ Ишемия+SkQR1 1 мкМ по уровню неврологического дефицита при и/н введении SkQR1 сразу после наступления реперфузии коррелировали с данными по уменьшению объема инфарктной зоны.

Базовая День линия В контрольной группе в тесте Рис. 8. Влияние и/н инстилляции SkQR1, «Стимулирования конечностей» произведенной сразу после начала реперфузии, на снижение неврологического дефицита через животные набирали в среднем 2,20,1 сутки в тесте «Стимулирования конечностей».

Данные в виде: среднееошибка среднего. балла. Введение SkQR1 сразу после *P<0,05 (U-тест Манна Уитни) по сравнению с реперфузии в дозе 20 нмоль/кг группой «Ишемия+физ. р-р».

повышало количество полученных баллов до 3,51,8. Более высокая доза SkQR1 1мкмоль/кг вызывала статистически значимое снижение неврологического дефицита в 2 раза (P<0,05), что соответствовало набранным 4,81,4 баллам (рис. 8).

Таким образом, введение SkQR1 до и после индукции фокальной ишемии головного мозга крыс достоверно снижает объем ишемического повреждения и вызывает восстановление неврологического дефицита.

Исследование С12R19. Молекула SkQR1 является сложно устроенной и состоит из двух составных частей: антиоксидантной «головы» и «хвоста», отвечающего за проникновение молекулы в митохондрию. Хотя в системах in vitro было показано, что ее антиоксидантная активность напрямую связана с наличием антиоксидантной «головы», мы не исключали, что на более высоком уровне организации живого активность могла проявлять и «хвостовая» часть молекулы. В связи с этим мы изучили возможность нейропротекторного действия препарата С12R19, представляющего собой конъюгат родамина 19 с цепочкой из 12 углеродных атомов, служащим линкером для соединения катионного остатка с антиоксидантной «головой», но не имеющего такой «головы».

Препарат вводили в/б в дозе 1 мкмоль/кг за 1 сутки до индукции ишемии.

Морфометрический анализ МР-изображений, полученных через 1 сутки после операции, не выявил различий между объемом инфаркта у крыс, получавших физиологический Баллы * раствор или С12R19. Также не было обнаружено восстановления неврологического дефицита в тесте «Стимулирования конечностей» через 1 сутки после индукции ишемии.

Таким образом, можно заключить, что SkQR1 обладает уникальными свойствами, присущими этой молекуле в комбинации всех ее составных частей.

Pages:     | 1 | 2 || 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»