WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 ||

12, д). Таким образом, сферические структуры, по данным флуоресценции DCF генерирующие H2O2 (рис. 12, а, б), представляют собой митохондрии; снятие разобщителем окислительного фосфорилирования полностью тушит флуоресценцию TMRE. TMRE не вызывал свечения хлоропластов.

1 Рис. 12. Флуоресценция DCF, TMRE и хлорофилла (Хл) в устьичных клетках в эпидермисе из листьев гороха: а, б – а флуоресценция хлорофилла и DCF; два оптических среза, различающиеся глубиной в 2 мкм; инкубация с 20 мкМ DCF – 5 мин;

в, г – флуоресценция хлорофилла в б хлоропластах и TMRE в сферических структурах; два оптических среза, различающиеся глубиной в 2 мкм;

инкубация с 2 мкМ TMRE – 1 ч; д – в протонофор ХКФ подавляет накопление флуоресцирующего TMRE в сферических структурах, и они становятся невидимыми. – изображение в проходящем свете, 2 – флуоресценция хлорофилла в хлоропластах, г 3 – флуоресценция DCF или TMRE, 4 – наложение изображений 2 и 3. Стрелкой показана область клеточного ядра.

Масштабная линейка – 5 мкм.

д Менадион и Н2О2: действие на рост и на состояние нуклеоидов А. variabilis.

Флуоресцентная микроскопия показала, что добавление Н2О2 вызывает разрушение нуклеоидов в клетках А. variabilis (рис. 13 а) и лизис клеток цианобактерии (рис.13 б, в). Н2О2 и менадион вызывали рост выхода флуоресценции DCF (рис. 13 г), который подавлялся антиоксидантами NAC и тролоксом. Н2О2 и менадион укорачивали нити клеток трихома А. variabilis.

Рис. 13. Действие Н2О2 и менадиона на клетки А.variabilis. а – разрушение нуклеоидов (данные флуоресцентной микроскопии). Инкубация на свету с менадионом и Н2О2 – 20 ч. ДНК в клетках окрашивали 20 мкМ DAPI (инкубация – 1 ч). Стрелками показаны безнуклеоидные клетки. Маркер – 2 мкм. Добавки: 100 мкМ менадиона, 10 мМ Н2О2; б, в – влияние Н2О2 и менадиона на рост клеток. В контроле (без добавок) по данным спектрофотометрии при 540 нм наблюдался рост клеток. Исходная величина D540 0,46. Представлены данные о величинах D540, через 19 и 41,5 ч инкубации Н2О2 и менадионом; г (1, 2, 3) – влияние антиоксидантов на образование DCF из DCFH, вызванное Н2О2 и менадионом. Добавки: 1 мМ NAC, 100 мкМ тролокса, 100 мкМ менадион; 1 мМ Н2О2.

Влияние ингибитора синтеза белка линкомицина на клетки А.variabilis.

Общим механизмом ПКС бактерий является автолиз, распад клеток с участием гидролаз пептидогликана (автолизинов) (Самуилов, 2000; Lewis, 2000). Лизис клеток бактерий, вызванный антибиотиками осуществляется по программируемому механизму. При действии антибиотиков (пенициллина, ванкомицина) происходит индукция автолиза. Снижение активности муреиновых гидролаз, напротив, предотвращает автолиз, индуцированный пенициллином (Lewis, 2000; Rice, Bayles, 2003). Линкомицин вызывал гибель клеток А. variabilis с признаками автолиза.

Выводы 1. По флуоресценции дихлорфлуоресцеина (DCF) зарегистрировано образование Н2О2 в пленках эпидермиса из листьев гороха, кукурузы и клетках цианобактерии А. variabilis.

2. Цианид вызывал апоптозное разрушение ядер замыкающих клеток устьиц в эпидермисе, изолированном из листьев гороха. Действие СN– усиливалось Н2О2. Нитросиний тетразолий, окисляющий О2·, предотвращал разрушение ядер УК, вызванное СN– или СN– + Н2О2.

Катионное производное убихинона 10-(6-убихинолил)децилтрифенилфосфоний, избирательно аккумулирующееся в митохондриях, предотвращало СN– –индуцированное разрушение ядер устьичных клеток и подавляло Н2О2-зависимое образование 2,7дихлорфлуоресцеина в эпидермисе из листьев гороха, вызванное менадионом. Маннитол и этанол, ловушки ·ОН, уменьшали CN– -индуцированный апоптоз. Н2О2, ·ОН, а также ресурсы О2·, используемые для генерации H2O2, участвуют в СN–-индуцированном апоптозном распаде ядер устьичных клеток.

3. Хинакрин, ингибитор флавиновых ферментов, подавлял флуоресцентный ответ DCF на добавление Н2О2 или менадиона. Хинакрин не влиял на дыхание и фотосинтетическое выделение О2 насечками листьев гороха. Возможно, NADPH-оксидаза плазматической мембраны функционирует в качестве источника АФК в программированной гибели клеток.

4. Краситель бенгальский розовый (БР), фотосенсибилирующий образование синглетного кислорода (1O2) в сочетании с NADH, окисляемым 1O2 с образованием О2·, на свету вызывал рост выхода флуоресценции DCF, чувствительный к НСТ. Эти результаты позволяют предполагать функционирование пероксидазы клеточной стенки в качестве источника активных форм кислорода.

5. БР и этиловый эфир тетраметилродамина, ингибиторы фотосистемы II диурон и бромоксинил, фотосенсибилизирующие генерацию синглетного кислорода, подавляли СN– -индуцированное разрушение клеточных ядер на свету. Это подавление предотвращалось добавленным NADH, субстратом пероксидазы. Инкубация насечек листьев с БР на свету снижала скорость фотосинтетического выделения О2 и создавала проницаемость устьичных клеток для иодистого пропидия. Синглетный кислород, генерируемый БР на свету, повидимому, вызывает некроз устьичных клеток, выводя из строя фотосистему II хлоропластов.

6. Н2О2 и менадион вызывали увеличение флуоресценции DCF в клетках А. variabilis и разрушение нуклеоидов клеток. Линкомицин, ингибитор синтеза белка у бактерий, вызывал разрушение клеток А. variabilis с признаками автолиза.

7. Активные формы кислорода участвуют в программированной гибели клеток растений и разрушении нуклеоидов клеток А. variabilis. Источниками АФК в ПКС клеток растений, повидимому, являются NADPH-оксидаза плазматической мембраны, хлоропласты, митохондрии, ядро устьичных клеток, а также апопластная пероксидаза.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Самуилов В.Д., Киселевский Д.Б., Синицын С.В., Шестак А.А., Лагунова Е.М., Несов А.В. (2006) Н2О2 усиливает CN- –индуцированный апоптоз в листьях гороха. Биохимия, 71, с.481–492.

2. Дзюбинская Е.В., Киселевский Д.Б., Лобышева Н.В., Шестак А.А., Самуилов В.Д.

(2006). Гибель устьичных клеток в эпидермисе листьев при нарушении энергообеспечения.

Биохимия, 71, с.1383–1391.

3. Васильев Л.А., Воробьев А.А., Дзюбинская Е.В., Несов А.В., Шестак А.А., Самуилов В.Д. (2007). Вызванная CN- гибель клеток в листьях растений. Биохимия, 72, с.707–713.

4. Шестак А.А., Молчанова Д.В. Флуориметрическое изучение образования АФК в клетках листьев гороха. Молодые исследователи – регионам: Материалы всероссийской научной конференции студентов и аспирантов. Тезисы докладов в 2-х томах.- Вологда: ВоГТУ, 2005.-Т.I. – с. 5. Шестак А.А., Молчанова Д.В. Образование АФК при воздействии на электронтранспортные цепи митохондрий и хлоропластов. Тезисы докладов международной конференции «Физиологические и молекулярно-генетические аспекты сохранения биоразнообразия», Вологда, 2005. с. 187–188.

6. Nesov A.V., Kuznetsova J.E., Shestak А.А., Kiselevsky D.B. Reactive oxygen species and their sources in programmed death of pea guard cells. Тезисы докладов международной конференции «Российская биоэнергетика: от молекул к клетке», Москва, МГУ, 2005. с.54.

7. Шестак А.А., Булахов А.В. Флуориметрическое определение образования активных форм кислорода в эпидермальных пленках из листьев гороха. Тезисы докладов XIII международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов -2006», Москва, 2006, с.250.

8. Киселевский Д.Б., Шестак А.А., Несов А.В., Кузнецова Ю.В. Влияние ингибиторов флавиновых ферментов и Са2+ на индуцируемую цианидом гибель устьичных клеток гороха.

Международная научная конференция “Физиология микроорганизмов в природных и экспериментальных экосистемах” 16–19 мая 2006 г, Москва. Сборник тезисов, с.78–79.

9. Булахов А.В., Молчанова Д.В., Шестак А.А, Киселевский Д.Б. Разрушение нуклеоидов в клетках Anacystis nidulans при окислительной обработке. Тезисы докладов XIV международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов -2007», Москва, 2007, с. 3–4.

10. Киселевский Д.Б., Васильев Л.А., Дзюбинская Е.В., Шестак А.А., Самуилов В.Д.

Программируемая гибель клеток растений: действие производного убихинона mitoQ, избирательно аккумулируемого митохондриями. Тезисы международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация», Пущино, 2007, с. 261–11. Шестак А.А., Киселевский Д.Б., Самуилов В.Д. Образование синглетного кислорода в фотосистеме II хлоропластов и его участие в программируемой гибели устьичных клеток гороха. Материалы докладов международной конференции (в трех частях). Часть 2.

«Современная физиология растений: от молекул до экосистем», Сыктывкар, 2007, с. 434.

12. Nesov A.V., Shestak А.А., Kiselevsky D.B., Samuilov V.D. Effect of qunacrine and diphenylene iodonium, flavin enzymes inhibitors, on programmed cell death of pea guard cells.

Proceedings of the I (IX) conference of young botanists in Saint-Petersburg. St.Petersburg, 2006, р.228–229.

13. Kuznetsova J.E., Shestak А.А., Kiselevsky D.B., Samuilov V.D. The role of Са 2+ in the generation of reactive oxygen species and programmed cell death induced in plants. Proceedings of the I (IX) conference of young botanists in Saint-Petersburg. St.Petersburg, 2006, р.226–227.

14. Kiselevsky D.B., Shestak A.A., Sinitsyn S.V., Nesov A.V., Samuilov V.D. Cyanideth induced apoptosis in pea leafs. 14 European Bioenergetics Conference EBEC, Moscow State University, Moscow, 22–27 July 2006.

Abstract

book, p. 499.

Pages:     | 1 | 2 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»