WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 | 4 |

На правах рукописи

Ведь Вера Владимировна

ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОК С ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ И ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У ДЕТЕЙ С ЛИМФОАДЕНОПАТИЕЙ

14.00.36 – Аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва – 2008

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Сотникова Н.Ю.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Козлов И.Г.

ГОУ ВПО РГМУ Росздрава

доктор медицинских наук, профессор Тупицын Н.Н.

ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН;

Ведущее учреждение:

ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии Росздрава

Защита диссертации состоится «15» декабря 2008 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.072.05 при Российском государственном медицинском университете по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, дом 1.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке университета по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, дом 1.

Автореферат разослан «14» ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук, доцент Кузнецова Т.Е.

Актуальность работы

Лимфоаденопатия (ЛАП) представляет системное увеличение лимфатических узлов, не связанное с воспалением [Румянцев А.Г. и др., 1998], являющееся результатом пролиферации, метастазирования, воздействия факторов экзогенного и эндогенного характера [Баранов А.А. и др., 1998]. Больные с ЛАП составляют 40% всех пациентов детских онкогематологов в связи с необходимостью исключения онкогематологического заболевания [Чернов В.М. и др., 1992]. Однако причиной увеличения ЛУ в большинстве случаев являются процессы, не связанные с гемобластозами: чаще всего это общепедиатрические, инфекционные, иммунные и другие состояния [Румянцев А.Г. и др., 1998].

В работах отечественных и зарубежных ученых показано, что инфекционный синдром играет ведущую роль в развитии ЛАП, при этом особое значение имеют вирусы герпетической группы [Краснов В.В.,2003; Уразова О.И., 2004; Shizuma T., 2005]. Клинически герпес-вирусная инфекция чаще всего проявляется лимфоаденопатией, субфебрилитетом и лейкемоидной реакцией [Стюф И.Ю. и др. 2007; Учайкин В.Ф., 2001]. Наиболее изучена лейкемоидная реакция при острой VEB-инфекции, проявляющаяся в абсолютном лимфоцитозе и наличии атипичных лимфоцитов [Воробьев А.И., 1985; Hoffbrand A.V., et al., 1993]. Менее изучена реакция со стороны крови при других герпетических (в том числе микст) инфекциях. Остальные параметры крови также изучены в меньшей степени.

Наличие дефектов в звеньях иммунной противовирусной защиты определяет особенности течения заболевания, прогноз и качество жизни конкретного человека [Шульженко А.Е., 2005]. Герпетическая инфекция сочетается с изменениями популяционного состава лимфоцитов, показателей гуморального и клеточного звена [Александровский А.В. и др., 2000]. Особую роль в защите организма против вирусной инфекции играют цитотоксические Т-клетки [Ярилин А.А., 1999]. Однако количество проведенных в данной области исследований при лимфоаденопатии крайне незначительно, особенно в отношении детей раннего возраста, и находится в настоящее время на стадии накопления данных [Пичугина Л.В., 2006]. Иммунные нарушения часто ассоциируются с гематологическими нарушениями [Караулов А.В., 2002], однако при ЛАП взаимосвязи между иммунологическими и гематологическими параметрами остаются практически неизученными.

В патогенезе инфекционных заболеваний важную роль играют нарушения апоптоза, основной физиологической функцией которого является защита от патогенов [Самуилов В.Д., 2001]. В связи с этим, особую актуальность приобретает изучение характера цитотоксического ответа и апоптоза иммунокомпетентных клеток у детей с ЛАП на фоне инфекции. Анализ взаимосвязей между гематологическими показателями и характером цитотоксического Т-клеточного иммунного ответа поможет уточнить патогенез ЛАП и разработать новые методы ранней диагностики и прогнозирования нарушений функции иммунной системы у детей с ЛАП.

Цель работы

Установить особенности состояния клеток с цитотоксической активностью у детей с лимфоаденопатией с учетом возраста, инфекционного фона и гематологических параметров, на основании чего разработать новые способы прогнозирования нарушений функции иммунной системы у данной группы больных.

Задачи исследования

  1. Установить возрастные особенности распространенности ЛАП и инфекционного фона у детей с лимфоаденопатией.
  2. Дать характеристику состояния цитотоксических Т-клеток у детей с лимфоаденопатией.
  3. Установить особенности ранних и поздних этапов апоптоза лимфоцитов у детей с лимфоаденопатией.
  4. Дать характеристику лейкемоидной реакции и выявить взаимосвязи между гематологическими показателями, характером Т-клеточного иммунного ответа и параметрами апоптоза у детей с лимфоаденопатией.
  5. Разработать новые способы ранней диагностики нарушений функции иммунной системы у детей с лимфоаденопатией.

Научная новизна исследования

Установлено, что формирование лимфоаденопатии сопровождается высокой частотой вирусных ассоциаций во все возрастные периоды и выявлением маркеров активной ВЭБ-инфекции у детей младше 6 лет.

Впервые установлено, что иммунные механизмы участвуют в патогенезе ЛАП, проявляясь у детей с ЛАП нарушением баланса наивных и коммитированных ЦТЛ, а также увеличением количества различных популяций лимфоцитов с TCR типа.

Установлено, что развитие ЛАП у детей 3-14 лет ассоциируется с нарушением апоптоза, что проявляется в увеличении уровня клеток на ранних этапах и снижении уровня клеток на поздних необратимых его этапах.

Впервые установлено, что ЛАП у детей ассоциируется со снижением апоптоз-индуцирующей способности лимфоцитов, а также угнетением готовности лимфоцитов к апоптозу у детей младше 6 лет и повышением готовности ЦТЛ к апоптозу у детей старше 6 лет.

Установлено, что развитие ЛАП сопровождается лейкемоидной реакцией со стороны трех ростков кроветворения: красного, белого и тромбоцитарного. Ведущим гематологическим проявлением у детей с ЛАП 3-14 лет является наличие атипичных лимфоцитов.

Показано, что при формировании ЛАП изменяются количество, характер и сила корреляционных взаимосвязей между иммунологическими, а также иммунологическими и гематологическими параметрами.

Впервые установлено, что нарушение соотношения наивных CD45RA+ и коммитированных CD45RO+ лимфоцитов у детей с ЛАП позволяет прогнозировать частую и длительную заболеваемость.

Практическая значимость работы

Разработан прогностический критерий развития длительной и частой заболеваемости у детей, основанный на определении соотношения наивных CD45RA+ и коммитированных CD45RO+ лимфоцитов в периферической крови у детей с ЛАП (Патент №2317549 от 20.02.2008).

Реализация результатов работы

Результаты диссертационной работы внедрены в практику отделения детской гематологии ОГУЗ «Ивановская областная клиническая больница» Департамента здравоохранения Ивановской области, а также в практику педиатрического и пульмонологического отделений ГУЗ «Областная детская клиническая больница» Департамента здравоохранения Ивановской области.

Апробация работы

Диссертация прошла апробацию на объединенной научной конференции ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» 4 апреля 2008 года. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Республиканской конференции «Иммунология репродукции» (Иваново, 2005), на X Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006), на 2-ой Республиканской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты» (Сочи, 2007).

Основные положения, выносимые на защиту

Формирование лимфоаденопатии у детей ассоциируется с иммунными и гематологическими нарушениями, которые зависят от возраста и инфекционного фона. Лимфоаденопатия у детей сопровождается нарушением количества, дифференцировки и апоптоза клеток с цитотоксической активностью. Гематологические нарушения характеризуются развитием лейкемоидной реакции со стороны всех трех ростков кроветворения. Между иммунологическими и гематологическими параметрами выявляются корреляционные взаимосвязи, которые у детей с ЛАП характеризуются, меньшей силой, увеличением числа и изменением характера.

Нарушение соотношения наивных (CD45RA+) и коммитированных (CD45RО+) лимфоцитов может использоваться для прогнозирования частой и длительной заболеваемости у детей с лимфоаденопатией.

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены на 164 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 4 глав собственного исследования, главы «Обсуждение результатов», выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 241 источник. Работа иллюстрирована рисунками и таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на базе ФГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова Росмедтехнологий» (директор – Засл. деятель науки РФ, д.м.н., проф. Л.В. Посисеева). На базе ОГУЗ «Ивановская областная клиническая больница» Департамента здравоохранения Ивановской области (главный врач - к.м.н. И.Е.Волков) было проведено комплексное (клиническое, функциональное, лабораторное) обследование 89 детей. Формирование клинических групп было основано на наличии или отсутствии у детей ЛАП. В группу с ЛАП включались дети при наличии у них одного и более увеличенных ЛУ и исключались дети с наличием у них первичной опухолевой ЛАП и специфического поражения ЛУ. Дети основной и контрольной групп были разделены на три подгруппы в зависимости от возраста: младшая – 3-6, средняя – 7-11 и старшая – 12-14 лет.

Материалом для гематологического исследования служила периферическая капиллярная кровь из пальца обследуемого. Детям обследуемых групп был выполнен развернутый анализ крови, в состав которого входило стандартное определение показателей, характеризующих красный, белый и тромбоцитарный ростки кровотворения.

Иммунологическое обследование детей проводилось на базе лаборатории клинической иммунологии (зав.лаб. – д.м.н., проф. Н.Ю. Сотникова) на 3-й день поступления больного в отделение детской гематологии Ивановской областной клинической больницы. Материалом для исследования служила периферическая венозная кровь. У всех детей определяли содержание клеток с цитотоксической активностью, параметры их дифференцировки и апоптоза.

Определение содержания антител к инфекционным агентам проводили в сыворотке периферической венозной крови методом ИФА на микропланшетном ридере Multiscan EX Labsystems (Финляндия) с использованием коммерческих систем ЗАО «Вектор-Бест». Определяли уровень IgM и IgG АТ к HSV, CMV, IgG-NA, IgG-EA и IgM АТ к VEB, содержание IgM и IgG АТ к Chlamydia trachomatis, Toxoplasma gondii, а также IgG + IgM АТ к Toxocara canis.

Выделение иммунокомпетентных клеток из периферической крови осуществляли традиционным методом скоростного центрифугирования при 1500 об/мин в градиенте плотности фиколл-урографина (d-1,114) (Upsala, Sweden).

Поверхностный фенотип клеток периферической крови детей и параметры аннексинового теста определяли с помощью моноклональных антител (МАТ) методом двухцветной проточной цитофлюориметрии на приборе FACScan (Becton Dickinson, USA). В качестве флюорохромных меток использовали флюоресцеин изотиоционат (FITC) и фикоэритрин (РЕ). Фирма-производитель и клон используемых в исследовании МАТ указаны в таблице 1.

Статистическая обработка данных проводилась с расчетом среднего арифметического и ошибки среднего арифметического с использованием программы Microsoft Excel Version: 7.0 из комплекта Microsoft Office 2000. Достоверность различий сравниваемых показателей определялась по t-критерию Стьюдента. Корреляционные связи между иммунологическими, а также гематологическими и иммунологическими параметрами определяли методом множественного регрессионного анализа.

Таблица 1. Панель МАТ, использованных в исследовании

п/п

МАТ

Клон

Фирма-производитель

Флюорохромная метка

1.

CD8

ICO-31

КЛОНОСПЕКТР, Москва

FITC, PE

2.

CD95, Fas

ICO-160

КЛОНОСПЕКТР, Москва

FITC

3.

CD45

ICO-46

КЛОНОСПЕКТР, Москва

FITC

4.

CD14

ICO-174

КЛОНОСПЕКТР, Москва

PE

5.

CD45RA

ICO-166

КЛОНОСПЕКТР, Москва

FITC

6.

CD45RO

UCHL-1

Becton Dickinson, USA

PE

7.

TCR /1

11F2

Pages:     || 2 | 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»