WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |

Состояние здоровья добровольцев оценивали по данным анамнеза (отсутствие острых и хронических заболеваний), субъективным показателям (отсутствию жалоб на состояние здоровья), в ходе физикального клинического (термометрия, показатели артериального давления, пульса, тоны сердца, частота дыхания и др.) и лабораторного исследования. Общеклиническое лабораторное исследование крови включало определение общего количества лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов и ретикулоцитов, изучение лейкоцитарной формулы, оценку абсолютного и относительного содержания лимфоцитов и гранулоцитов, выявление уровня гемоглобина, гематокрита и СОЭ. С помощью биохимического анализатора оценивали содержание в крови общего белка, альбуминов, глобулинов, глюкозы, билирубина, активность АЛТ, АСТ, ЛДГ, ЩФ, тимоловую пробу, уровень мочевины, креатинина, холестерина, триглицеридов, бета-липопротеидов, С-реактивного белка, протромбина, время рекальцификации, каолиновое время, индекс коагуляции, этаноловый тест, фибриноген, толерантность к гепарину, тромботест.

Иммунологические исследования включали оценку количества и функциональной активности иммунокомпетентных клеток. Абсолютное число и относительное содержание CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+, CD25+, CD95+ и HLA II оценивали с помощью соответствующих моноклональных антител методом проточной цитометрии [Summer H., Abraham D., 1997]. Пролиферативную активность лимфоцитов изучали в реакции бласттрансформации путем определения ответа на фитогемагглютинин (ФГА) в дозах 2,5 мкг/мл или 15,0 мкг/мл и митоген лаконоса (PWM) в дозе 5,0 мкг/мл [Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1998]. Способность мононуклеаров синтезировать и продуцировать интерлейкин-1, интерлейкин-4, фактор некроза опухолей- и интерферон- определяли по F.H. Krouwels с соавт. (1997).

Эффекторные свойства нейтрофильных гранулоцитов оценивались по спонтанной и индуцированной форболмиристатацетатом (ФМА) адгезивной способности [Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1998], а также по спонтанной и направленной миграционной активности под агарозой к N-формил-лейцин-метионил-пролину и к интерлейкину-8 [Nelson R.D., 1975]. Функциональный потенциал нейтрофилов изучали в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ-тест), который проводился в спонтанном и стимулированном зимозаном вариантах [Rook G.A. еt аl., 1985]. Функциональную активность нейтрофилов оценивали хемилюминесцентным методом [Muto S., 1986]. Способность нейтрофилов к завершенному фагоцитозу изучали в тесте с дрожжами, определяя число поглощающих дрожжи клеток и фагоцитарный индекс [Root R.К. еt аl., 1975]. Кроме того, в нейтрофилах периферической крови цитохимическими методами определяли содержание катионных белков [Пигаревский В.Е., 1988], липидов [Sheehan H.L., Storey G.W., 1947], миелопероксидазы [Меньшиков В.В. и др., 1987], щелочной фосфатазы [Kaplow L.S., 1955].

Полученные в ходе исследований данные подвергали обработке методами вариационной статистики с использованием пакета программ «Statistica» с расчетом среднего значения, ошибки средней и среднего квадратического отклонения. Для оценки значимости межгрупповых различий по критериям выжи­ваемости пользовались точным методом Фишера. Оценку различий средних значений в экспериментах с большим количеством лабораторных животных и нормальным распределением средних величин проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Оценку различий данных, полученных при анализе выборок малого объема, проводили непараметрическими методами с использованием критерия Вилкоксона-Манна-Уитни. Обработка результатов, представленных в относительных единицах, осуществлялась с использованием таблиц В.С. Генеса (1967), основанных на точном методе Фишера для четырехпольной таблицы. Вероятность p<0,05 и выше считали достаточной для вывода о статистической достоверности различий полученных данных.

Данные в таблицах представлены в виде X ± mx. Различия по t-критерию Стьюдента обозначены звездочкой (*), различия по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни – решеткой (#).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние интерлейкина-1 на выживаемость и среднюю продолжительность жизни экспериментальных животных

при различных вариантах радиационных воздействий

Целью первого раздела исследования явилась экспериментальная оценка радиозащитной эффективности рекомбинантного интерлейкина-1 (ИЛ-1) при профилактическом и раннем лечебном применении для различных вариантов внешнего, внутреннего и сочетанного радиационного воздействия. Для реализации цели были проведены экспериментальные исследования на мышах и крысах, в ходе которых изучалось влияние ИЛ-1 на показатели выживаемости и средней продолжительности жизни облученных лабораторных животных.

Определение оптимальных сроков профилактического и лечебного применения ИЛ-1 для достижения максимального радиозащитного эффекта препарата проводилось в экспериментах на 120 белых мышах-самцах, подвергнутых внешнему -облучению в дозе 6 Гр с мощностью дозы 130 Р/мин.

В результате проведенных исследований было установлено, что ИЛ-1 при введении за 24 ч до облучения и через 1 ч после радиационного воздействия обладает выраженным радиозащитным эффектом, что позволяет рассматривать его в качестве нового лечебно-профилактического средства обеспечения безопасности при чрезвычайных ситуациях радиационного характера (табл. 1).

Таблица 1

Зависимость выраженности радиозащитного эффекта интерлейкина-1, оцененного по показателям выживаемости (%) и средней продолжительности жизни (сут) белых беспородных мышей-самцов, подвергнутых острому однократному -облучению в дозе 6 Гр, от сроков применения препарата (n = 10 в каждой группе)

Условия эксперимента

Сроки введения ИЛ-1, ч

Выживаемость, %

СПЖ, сут

Облучение на фоне применения ИЛ-1

– 72

60 ± 16

14,1 ± 1,6 *

– 24

80 ± 13 *

14,6 ± 1,5 *

+ 1

70 ± 16 *

13,0 ± 0,9 *

+ 24

40 ± 17

10,2 ± 1,2

+ 72

10 ± 5

9,1 ± 0,9

Контроль (облучение)

30 ± 15

8,8 ± 1,3

* – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с контролем (облучением)

Так, однократное внутрибрюшинное введение ИЛ-1 за 72 ч до облучения увеличивало выживаемость мышей практически в 2 раза. Наибольшая эффективность ИЛ-1, как средства профилактики острого радиационного поражения, отмечена при его введении за 24 ч до облучения. В этом случае удавалось обеспечить выживаемость 80 % животных, облученных в дозе СД70/30, а «процент защиты» составил 50% по сравнению с контрольной группой. Применение препарата в качестве средства профилактики радиационного поражения приводило и к увеличению средней продолжительности жизни погибших мышей, в среднем на 5,3 – 5,8 сут.

Применение ИЛ-1 через 1 ч после облучения также приводило к повышению выживаемости на 40 % и увеличению на 4,2 сут средней продолжительности жизни облученных животных. Введение препарата через 24 ч после облучения обеспечивало увеличение выживаемости облученных животных лишь на 10 %, а его инъекция через 72 ч после облучения, напротив, приводила к снижению выживаемости животных на 20 %.

В результате исследований, выполненных на следующем этапе, было установлено, что лечебно-профилактическая эффективность ИЛ-1, оцененная по критериям выживаемости облученных животных, проявлялась при различных вариантах радиационного воздействия: остром и пролонгированном внешнем облучении, при сочетанном внешнем и внутреннем облучении от инкорпорации радионуклидов, характерных для раннего периода радиационной аварии.

Наибольшую радиозащитную эффективность препарат проявлял в условиях острого -облучения с мощностью дозы 130 р/мин (рис. 1).

Рис. 1. Выживаемость белых беспородных мышей-самцов, подвергнутых острому -облучению с мощностью дозы 130 Р/мин, при профилактическом (за 24 ч) и лечебном (через 1 ч) применении интерлейкина-1 в дозе 50 мкг/кг, % (n = 10 в каждой группе)

* – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с контролем (облучением)

Как видно из данных, представленных на рисунке 1, после облучения в дозе 5,5 Гр выживаемость животных при профилактическом применении ИЛ-1 увеличивалась на 16,7 %, при его использовании в качестве средства ранней терапии радиационных поражений – на 5,6 %. Прирост выживаемости облученных в дозе 6,0 Гр животных составил 27,8 % при применении ИЛ-1 в качестве радиопротектора и 5,5 % при его использовании с лечебной целью.

Радиопротекторный эффект препарата при облучении мышей в дозах 6,5; 7,0 и 7,5 Гр проявлялся в увеличении выживаемости более чем на 20 % (рис. 1). Лечебная эффективность ИЛ-1 была особенно высока при радиационном воздействии в дозах СД70-90/30: выживаемость животных при облучении в дозе 7,0 Гр увеличивалась в 2 раза, а при облучении в дозе 7,5 Гр – в 4 раза. Расчетное значение ФИД препарата при его применении в качестве радиопротектора составило 1,18, а при использовании ИЛ-1 в качестве средства ранней патогенетической терапии радиационных поражений – 1,16.

Рекомбинантный ИЛ-1 обладал противолучевыми свойствами при профилактическом и при раннем лечебном применении и в условиях однократного рентгеновского воздействия с мощностью дозы 54 Р/мин.

Рис. 2. Выживаемость белых беспородных мышей-самцов, подвергнутых острому рентгеновскому облучению с мощностью дозы 54 Р/мин, при профилактическом (за 24 ч) и раннем лечебном (через 1 ч) применении интерлейкина-1 в дозе 50 мкг/кг, % (n = 20 в каждой опытной группе, n = 40 в каждой контрольной группе)

* – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с контролем (облучением)

Как видно из данных, представленных на рисунке 2, при облучении в дозе 5,5 Гр гибель животных контрольной группы составила 80 %, а применение ИЛ-1 с профилактическими или лечебными целями позволяло увеличить выживаемость облученных животных до 90 %. Введение препарата за 24 ч до облучения в дозе 6,5 Гр увеличивало выживаемость мышей на 17,5 %, а его использование через 1 ч после радиационного воздействия защищало от лучевой гибели на 7,5 % больше животных, чем в контроле. При облучении в дозе 7,5 Гр профилактическое применение препарата позволяло спасти от лучевой гибели почти в 3 раза больше животных, а эффективность его лечебного использования проявлялась в 2-х кратном увеличении выживаемости. При облучении в дозе 8,5 Гр выживаемость в контроле составила 2,5 %, в то время как при использовании ИЛ-1 за 24 ч до радиационного воздействия – в 8 раз больше, а при его применении через 1 ч после облучения – в 6 раз больше, чем в контроле. Расчетное значение ФИД при дозах СД50/30 составило 1,20 для радиопротекторного эффекта препарата и 1,18 для его лечебной активности.

Результаты оценки радиозащитной эффективности ИЛ-1 в условиях пролонгированного -облучения представлены в таблице 2.

Таблица 2

Выживаемость (%) и средняя продолжительность жизни (сут) белых беспородных крыс, подвергнутых внешнему -облучению в дозе 10 Гр с мощностью дозы 1 Р/мин, при профилактическом (за 24 ч) и раннем лечебном (через 1 ч) применении интерлейкина-1 в дозе 1 мкг/кг (n = 10 в каждой группе)

Показатель

Группы

контроль (облучение)

ИЛ-1 за 24 ч до облучения

ИЛ-1 через 1 ч после облучения

Выживаемость, %

30 ± 10

90 ± 20*

80 ± 20*

СПЖ, сут

16,0 ± 1,6

25,0 ± 1,2*

27,5 ± 1,2*

* – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с контролем (облучением)

Установлено, что в условиях пролонгированного -облучения с мощностью дозы 1 Р/мин применение ИЛ-1 за 24 часа до облучения позволяет увеличить выживаемость облученных крыс в 3 раза, а при использовании препарата через 1 ч после лучевого воздействия – в 2,6 раза. Кроме того, при профилактическом применении ИЛ-1 средняя продолжительность жизни погибших животных возрастала на 8,4 сут, а при лечебном – на 10,9 сут.

Как видно из данных, представленных на рисунке 3, в условиях сочетанного радиационного воздействия гибель животных контрольной группы составила 70 %, а средняя продолжительность жизни погибших крыс 19,6 ± 2,1 сут. Профилактическое применение ИЛ-1 на 40 % снижало показатели смертности облученных животных и на 8 сут увеличивало среднюю продолжительность жизни погибших от радиационной травмы крыс. Еще более эффективным было использование ИЛ-1 в качестве средства ранней терапии: выживаемость облученных животных увеличивалась на 50 %, а средняя продолжительность жизни погибших особей возрастала на 8,4 сут.

Рис. 3. Выживаемость (%) и средняя продолжительность жизни (сут) белых беспородных крыс-самцов, подвергнутых сочетанному внешнему и внутреннему облучению в дозе 10 Зв, при профилактическом (за 24 ч) и раннем лечебном (через 1 ч) применении интерлейкина-1 в дозе 1 мкг/кг (n = 10 в каждой группе)

* – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с контролем (облучением)

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»